芋頭脫毒快繁技術(shù)規(guī)程

張培通，殷劍美，王 立，韓曉勇，劉水東，吳 薇，常 蕾，羅 敏

（1.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，江蘇 南京 210014；2.江蘇沿江地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，江蘇 南通 226541；3.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院泰州農(nóng)科所，江蘇 泰州 225300）

江蘇省泰州、南通、常州等地是長江下游芋頭重要產(chǎn)區(qū)，品種以多子芋為主，具有香、糯、嫩、滑的特征，這些地方特色品種各具獨(dú)特風(fēng)味和優(yōu)良特性，是當(dāng)?shù)剞r(nóng)家特產(chǎn)。然而長期的無性繁殖導(dǎo)致了芋頭植株病毒嚴(yán)重、種性退化。目前國內(nèi)報(bào)道發(fā)現(xiàn)的以芋為寄主的病毒有芋花葉病毒（Dasheen mosaic virus，DMV）和黃瓜花葉病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）[1-2]，其中芋花葉病毒（DMV）分布最廣，危害最大。芋花葉病毒侵染天南星科植物并引起系統(tǒng)性癥狀或隱狀，伴隨產(chǎn)生羽狀花葉、葉片皺縮向上卷曲、葉面褪綠黃斑等癥狀[3]，田間調(diào)查可見，江蘇省沿江地區(qū)優(yōu)質(zhì)多子芋花葉病毒感病植株達(dá)63.3%，芋頭田間較普遍的花葉病毒感病癥狀為葉片皺縮卷曲[4]。利用組織培養(yǎng)方法獲得無毒或少毒再生植株，切斷病毒感染途徑，是解決芋頭病毒嚴(yán)重問題的有效途徑[5]。芋頭誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)技術(shù)對芋頭品種進(jìn)行脫毒，脫毒率可達(dá)48.0%，并將脫毒組培苗進(jìn)行快速擴(kuò)繁，可獲得大批量芋頭脫毒組培苗，為脫毒種芋擴(kuò)繁體系建設(shè)奠定了基礎(chǔ)[6]。通過與靖江市綠禾蔬菜專業(yè)合作社協(xié)作建設(shè)“靖江香沙芋脫毒快繁體系”，為靖江香沙芋產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供了有力支撐。為了推進(jìn)江蘇省各地方特色芋頭脫毒種芋的擴(kuò)繁體系建設(shè)，根據(jù)多年研究結(jié)果和脫毒種芋集中快繁生產(chǎn)實(shí)踐，總結(jié)出芋頭脫毒快繁技術(shù)體系，可為全省各地區(qū)建立優(yōu)質(zhì)特色芋頭脫毒種芋提供幫助和指導(dǎo)。

1 種芋生產(chǎn)基礎(chǔ)條件

1.1 產(chǎn)地要求

脫毒種芋繁殖基地應(yīng)符合《中華人民共和國種子法》規(guī)定，灌溉水源符合《無公害蔬菜產(chǎn)地環(huán)境要求》（GB/T 18407.1）所規(guī)定的水源條件。

1.2 生產(chǎn)企業(yè)要求

符合《中華人民共和國種子法》和《農(nóng)作物種子生產(chǎn)經(jīng)營許可管理辦法》規(guī)定要求。

1.3 脫毒種芋繁殖基地

1.3.1 基地構(gòu)成

主要包括：組織培養(yǎng)室、脫毒核心種芋繁殖圃、脫毒原種芋繁殖田和脫毒種芋繁殖田。一般脫毒核心種芋繁殖圃、脫毒原種芋繁殖田、脫毒種芋繁殖田面積比為1∶12∶200。

1.3.2 組織培養(yǎng)室要求

組培室配套組成應(yīng)包括準(zhǔn)備室、接種室、培養(yǎng)室。

培養(yǎng)室須與脫毒核心種芋繁殖圃面積相匹配，按照每萬株脫毒組培苗20 m2建設(shè)。

1.3.3 繁殖田塊要求

田塊選擇：靠近水源，排灌方便。

田塊要求：田間灌排溝渠配套，水利設(shè)施齊全，達(dá)到“旱能灌、澇能排”，還要根據(jù)不同等級(jí)脫毒種芋擴(kuò)繁要求，建設(shè)配套的防蟲防護(hù)設(shè)施。

田塊土質(zhì)：宜選擇土層深厚、土壤肥沃的偏砂性壤土。

茬口要求：未種植芋頭及甘薯、馬鈴薯、山藥等地下根莖類作物1年以上。

2 芋頭脫毒組培苗培育

2.1 外植體培養(yǎng)和處理

以芋頭莖尖為外植體。選取保存完好、無病斑的芋頭，經(jīng)芋頭質(zhì)量0.2%的高錳酸鉀（KMnO4）液消毒5min，用滅菌后的細(xì)沙覆蓋整個(gè)芋頭的2/3，放置于光照培養(yǎng)箱中促其萌發(fā)。當(dāng)幼芽生長到1～3cm時(shí)切取莖尖，剝除莖尖外表2～3層葉片，流水沖洗10min，在超凈工作臺(tái)上用75%酒精浸泡30 s，用3%次氯酸鈉（NaClO）溶液滅菌10～15min，無菌水漂洗5～7次。剝離莖尖外層葉鞘，在解剖鏡下剝?nèi)?.4～0.8mm大小莖尖作為外植體。

2.2 愈傷組織誘導(dǎo)和組培苗芽形成

將剝?nèi)〉耐庵搀w接種在MS+2,4-D 2.0 mg/L的培養(yǎng)基中，在溫度（25±2）℃、光照度2 000～2 500 lx的培養(yǎng)室內(nèi)無菌培養(yǎng)50～60 d，誘導(dǎo)形成愈傷組織。芋愈傷組織在上述培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下再經(jīng)60 d左右培養(yǎng)，形成芋組培苗芽。

2.3 病毒鑒定

將組培苗芽切下，接種在MS+TDZ 1.0 mg/L的培養(yǎng)基中，長出2片葉以上時(shí)（20 d左右），取部分葉片利用酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）[4]進(jìn)行芋頭花葉病毒（DMV）的檢測。保留無病毒組培苗進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

2.4 繼代培養(yǎng)

將無病毒組培苗繼續(xù)培養(yǎng)。當(dāng)植株萌發(fā)出的不定芽達(dá)2.0cm時(shí)，切下不定芽接種在MS+TDZ 1.0 mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)。一般連續(xù)繼代培養(yǎng)不超過4次。

2.5 誘導(dǎo)生根

將高2.0cm以上、帶有2片葉的健壯小苗切下，轉(zhuǎn)入含0.02%活性炭的MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.1 mg/L培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)生根，形成脫毒組培苗。脫毒組培苗培養(yǎng)30～40 d（根長3～5cm）后，可以移栽田間擴(kuò)繁脫毒核心種芋。

3 脫毒核心種芋繁殖

3.1 基本要求

需在專業(yè)化種芋生產(chǎn)單位進(jìn)行，應(yīng)在架設(shè)防蟲網(wǎng)的大棚內(nèi)種植，由專業(yè)技術(shù)人員負(fù)責(zé)田間管理和去雜汰劣操作。

3.2 防蟲網(wǎng)棚建設(shè)

防蟲網(wǎng)選用0.30～0.45mm孔徑的優(yōu)質(zhì)尼龍紗網(wǎng)，種芋大棚應(yīng)空間充裕（棚高2 m以上，寬6～8 m），結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，利于田間作業(yè)，具有較強(qiáng)的抗風(fēng)能力。

3.3 煉苗處理

最佳栽植時(shí)間為4月下旬—5月上旬。移栽前1周將脫毒組培苗置于常溫環(huán)境中煉苗，避免陽光直射。移栽前1 d打開瓶蓋煉苗。

3.4 移栽種植

防蟲網(wǎng)大棚內(nèi)縱向筑畦作為苗床，畦面寬1.2 m，畦高6～7cm，畦溝寬60cm，每畦種2行。按行距50cm在苗床上開寬15cm、深10cm的移栽行溝，溝內(nèi)填充中性（pH 6.8～7.3）的常規(guī)蔬菜育苗基質(zhì)，并澆透水。將煉苗后的脫毒組培苗洗凈基部培養(yǎng)基，按株距30cm栽入移栽行溝。栽后及時(shí)噴水保濕，搭小拱棚并加蓋遮陽網(wǎng)。移栽后的前2周每天早晚各澆水1次，第2周開始10：00前和16：00后打開遮陽網(wǎng)，第3周開始揭掉遮陽網(wǎng)，注意勤澆水。苗期保持棚內(nèi)溫度15～25 ℃、基質(zhì)含水量80%～90%。

3.5 病蟲害控制

3.5.1 控制病害

每隔15 d左右，于晴天選用符合《農(nóng)藥安全使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 4285）和《農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則》（GB/T 8321）規(guī)定的廣譜保護(hù)性殺菌劑噴霧。

3.5.2 防治害蟲

主要害蟲為蚜蟲、斜紋夜蛾和蠐螬，具體防治方法為：（1）蚜蟲和斜紋夜蛾。根據(jù)預(yù)測預(yù)報(bào)，使用符合《農(nóng)藥安全使用標(biāo)準(zhǔn)》和《農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則》規(guī)定的適宜殺蟲劑進(jìn)行化學(xué)噴霧防治。噴藥時(shí)間掌握在傍晚。（2）蠐螬。采用灌水滅蟲或毒餌誘殺方法。根據(jù)蟲害發(fā)生情況，選擇晴天15：00左右開始灌水，保持淺水層至次日早晨，然后晾田2～3 d。

3.6 苗床管理

3.6.1 控制溫度

生長前期溫度控制在25 ℃以下，后期溫度控制在25～30 ℃。當(dāng)溫度過高（30 ℃以上）時(shí)，應(yīng)覆蓋遮陽網(wǎng)或采取噴水降溫。

3.6.2 水分管理

晴天早晚可輕澆小水各1次，陰天根據(jù)土壤溫度、水分情況3～4 d澆水1次，保證基質(zhì)不過干或過濕，以植株不出現(xiàn)缺水癥狀為宜。

3.6.3 肥料管理

全生育期只施肥1次。于7月下旬每667 m2苗床施硫酸鉀復(fù)合肥（45%濃度，15-15-15）30 kg，或施用符合《肥料合理使用準(zhǔn)則通則》（NY/T 496）規(guī)定的氮磷鉀等量的其他肥料，忌用含氯肥料。

3.6.4 保留分株

全生育期不除邊萌、不去分株。

3.7 收獲保存

3.7.1 適時(shí)收獲

11月上中旬收獲為宜。收獲前20 d不澆水，保持土壤干爽，確保種芋干燥。

3.7.2 種芋處理

收獲芋盤，不應(yīng)掰下子孫芋，保持芋盤完整；清理芋盤上的泥土，晾曬1～2 d；用25%阿米西達(dá)懸浮液800倍液均勻噴霧，之后再晾曬1～2 d；用生石灰粉均勻包裹，入庫保存。

3.7.3 越冬儲(chǔ)存

將處理后的種芋盤擺放在倉庫內(nèi)，先鋪1層稻草，然后擺1層種芋盤，再均勻撒1層干生石灰粉。如此擺放多層，堆高不宜超過1 m。庫內(nèi)溫度控制在5～8 ℃，相對濕度維持在80%～90%，定期通風(fēng)，保持倉庫內(nèi)清潔衛(wèi)生。貯藏期間及時(shí)剔除爛芋。

4 脫毒原種芋繁殖

4.1 脫毒原種芋繁殖田要求

繁殖田要求同脫毒核心種芋繁殖圃。

4.2 脫毒種芋繁殖田防蟲網(wǎng)棚建設(shè)

防蟲網(wǎng)棚建設(shè)要求同脫毒核心種芋繁殖圃。

4.3 整地做畦

冬前深耕曬垡，每667 m2施入腐熟的牛羊糞2 000 kg，春季再次施牛羊糞1 000 kg。播種前筑畦，畦寬1.0 m，畦高6～7cm，畦溝寬40cm。

4.4 高質(zhì)量播種

4.4.1 適期播種

適宜播期為4月上旬。

4.4.2 適量播種

每畦2行，行距40cm，株距30cm，每667 m2種植量約為2 500株。

4.4.3 播種要求

開溝播種，播種溝深度10cm，種芋均勻擺放于溝內(nèi)，及時(shí)覆土。

4.4.4 除草覆膜

覆土后全田均勻噴灑96%精都爾乳油800倍液，并及時(shí)加蓋黑色地膜。地膜必須貼緊畦面，四周用土封好。

4.4.5 促進(jìn)出苗

播種出苗期間，土壤含水量以70%～80%為宜。若遇長期干旱，要及時(shí)澆水。發(fā)芽后及時(shí)破膜引苗。

4.5 足水促苗

苗期保持田間土壤含水量不低于60%。

4.6 病蟲害控制

主要病蟲害及防治方法同脫毒核心種芋繁殖。

4.7 膨大期管理

4.7.1 水分管理

保持土壤含水量在70%左右，干旱時(shí)及時(shí)澆水。7月份在缺乏有效降水的情況下，每隔5～7 d灌水1次，要“溝灌洇水，夜灌晨排”，不能大水漫灌，也不能長期淹水。8月上旬以后，灌水次數(shù)可減少，土壤偏干應(yīng)及時(shí)灌水，灌水方法同7月份。

4.7.2 肥料管理

當(dāng)幼苗達(dá)到8～9葉時(shí)（一般在7月中旬）及時(shí)追肥。每667 m2撒施菜餅60 kg+硫酸鉀復(fù)合肥（45%濃度，15-15-15）30 kg，或施用符合《肥料合理使用準(zhǔn)則通則》（NY/T 496）規(guī)定的滿足氮磷鉀含量的其他肥料。

4.7.3 壅根培土

7月中下旬進(jìn)行壅根培土。挖取畦間溝內(nèi)泥土，培于芋頭行上，壅土高度10cm以上。

4.8 保留分株

全生育期不要去除分株。

4.9 收獲保存

收獲方法及保存措施同核心脫毒種芋。

5 脫毒種芋繁殖

選擇有經(jīng)驗(yàn)的芋頭種植農(nóng)戶或?qū)I(yè)合作社，利用脫毒原種芋在大田進(jìn)行擴(kuò)繁，生產(chǎn)管理、保存方法同脫毒原種芋。

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