麻黃—附子藥對(duì)提取物中麻黃類生物堿的溶解性能考察

王艷宏 劉書(shū)博 關(guān)楓 陳大忠

摘要：目的 測(cè)定麻黃-附子藥對(duì)提取物中麻黃類生物堿平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)，為經(jīng)皮給藥研究提供依據(jù)。方法 采用70%乙醇提取、D101大孔吸附樹(shù)脂純化方法，制備麻黃-附子藥對(duì)提取物。采用沉淀法聯(lián)合HPLC，測(cè)定麻黃-附子藥對(duì)提取物中主要有效成分麻黃堿和偽麻黃堿在各類溶劑中的平衡溶解度。采用搖瓶法，測(cè)定麻黃-附子藥對(duì)中麻黃堿和偽麻黃堿在正辛醇-水中的表觀油水分配系數(shù)。結(jié)果 提取物在甲醇和乙腈中的溶解度較大，麻黃堿和偽麻黃堿在pH 7.4磷酸鹽緩沖液中的溶解度最大。麻黃堿、偽麻黃堿在正辛醇-水中的表觀油水分配系數(shù)分別為0.101（lgP=-0.99）、0.076（lgP=-1.12）。提取物中麻黃生物堿類成分的油水分配系數(shù)受pH值影響較大。結(jié)論 提取物在極性大的溶劑中溶解性較好，適宜的pH值可在一定范圍內(nèi)改善其有效成分的水溶性和脂溶性，從而有利于透皮吸收。

關(guān)鍵詞：麻黃-附子藥對(duì)；麻黃類生物堿；平衡溶解度；表觀油水分配系數(shù)；高效液相色譜法

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.01.022

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2017）01-0091-04

Investigation of Dissolvability of Ephedra Alkaloid in Compatibility Ephedrae Herba- Aconiti Lateralis Radix Praeparata WANG Yan-hong， LIU Shu-bo， GUAN Feng， CHEN Da-zhong （Heilongjiang University of Chinese Medicine， Harbin 150040， China）

Abstract： Objective To determine equilibrium solubility and apparent oil/water partition coefficient of ephedra alkaloid in the compatibility Ephedrae Herba-Aconiti Lateralis Radix Praeparata； To provide a basis for transdermal delivery. Methods The extract was prepared by 70% ethyl alcohol and D101 macroporous absorbent resins. Dissolvability of its main effective components （ephedrine and pseudoephedrine） in the compatibility Ephedrae Herba-Aconiti Lateralis Radix Praeparata was determined by precipitation method and HPLC method； the oil/water partition coefficient of ephedrine and pseudoephedrine in n-octanol-water buffer solution system were determined by shaking flask method. Results The extract had optimum solubility in methyl alcohol and acetonitrile， and ephedrine and pseudoephedrine had optimum solubility in buffered solution of pH 7.4. Oil/water partition coefficient of ephedrine and pseudoephedrine in n-octanol-water system was 0.101 with lgP=-0.99 and 0.076 with lgP=-1.12. Oil-water partition coefficients of ephedrine and pseudoephedrine in the extract were affected by pH. Conclusion The extract has optimum solubility in high polar solvents. Ephedrine and pseudoephedrine have certain fatsoluble and water-soluble in suitable pH， which was beneficial for transdermal absorption.

Key words： compatibility Ephedrae Herba-Aconiti Lateralis Radix Praeparata； ephedra alkaloid； equilibrium solubility； apparent oil/water partition coefficient； HPLC

麻黃-附子為臨床常用藥對(duì)，在《傷寒論》的麻黃附子湯、麻黃附子細(xì)辛湯、麻黃附子甘草湯、烏頭湯等方劑中均有應(yīng)用。麻黃辛溫，具有發(fā)汗解表、宣肺平喘、利水消腫功效；附子辛熱，具有回陽(yáng)救逆、

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（81473359）；黑龍江省科技廳青年基金項(xiàng)目（QC07C107）；黑龍江省自然科學(xué)基金（H201472）；黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（11531357）

通訊作者：陳大忠，E-mail：799378826@qq.com

補(bǔ)火助陽(yáng)、散寒止痛功效。兩藥配伍能夠取長(zhǎng)補(bǔ)短、相輔相成。近年來(lái)有關(guān)麻黃-附子藥對(duì)的研究多集中在口服煎煮給藥方式，經(jīng)皮應(yīng)用的報(bào)道較少[1-2]。經(jīng)皮制劑以其安全性高、不良反應(yīng)小、避免藥物首過(guò)效應(yīng)的特點(diǎn)，逐漸成為常用藥物應(yīng)用形式。藥物的理化性質(zhì)是影響經(jīng)皮吸收的關(guān)鍵因素。本試驗(yàn)以麻黃生物堿類成分為考察指標(biāo)，測(cè)定其平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)，以期明確其理化性質(zhì)，為藥對(duì)中有效成分的膜透過(guò)性的預(yù)測(cè)及中藥復(fù)方經(jīng)皮給藥提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

AB265-S電子天平，梅特勒公司；HZS-HA水浴振蕩器，哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司；LC-20AT型高效液相色譜儀，日本島津公司。

麻黃、黃附子均購(gòu)自哈藥集團(tuán)世一堂中藥飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室孫慧峰副教授鑒定，分別為麻黃科植物草麻黃Ephedra sinica Stapf的干燥草質(zhì)莖和毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaelii Debx.的母根炮制加工品；乙腈（色譜純），美國(guó)迪馬公司；鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)171241-201508）、偽麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)171237-201208），中國(guó)食品藥品檢定研究院；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 麻黃-附子藥對(duì)提取物的制備

取麻黃、黃附子，按2∶3比例混合，加入pH 2的70%乙醇提取溶劑，回流提取2次（2、1.5 h）。減壓回收乙醇后，加水配成濃度為0.4 g/mL的上樣液，通過(guò)D101大孔樹(shù)脂，水洗除雜質(zhì)后，收集70%乙醇洗脫液，揮干乙醇，真空干燥，得麻黃附子干浸膏提取物（以麻黃堿計(jì)14 mg/g、偽麻黃堿計(jì)6 mg/g）[2]。

2.2 麻黃生物堿類成分含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Diamonsil C18（5 ?m，250 mm×4.6 mm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（2∶98，每100 mL中加入0.04 mL三乙胺），檢測(cè)波長(zhǎng)為190 nm，流速為1 mL/min，柱溫為30 ℃。

2.2.2 混合對(duì)照品溶液的配制 分別精密稱取鹽酸麻黃堿、偽麻黃堿對(duì)照品25.14、12.52 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的配制 稱取提取物0.2 g左右，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取一定量上述麻黃堿和偽麻黃堿對(duì)照品溶液，按倍數(shù)關(guān)系稀釋成8種不同質(zhì)量濃度的溶液，分別吸取10 ?L進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸處理，得回歸方程Y=76 152X+1E+06，r=0.999 4和Y=87 629X+129 116，r=0.999 6。結(jié)果表明，麻黃堿在0.02～10.06 ?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，偽麻黃堿在0.01～5.01 ?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10 ?L，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算峰面積，結(jié)果鹽酸麻黃堿峰面積RSD=0.45%（n=6）；鹽酸偽麻黃堿峰面積RSD=0.88%（n=6）。表明精密度良好，符合含量測(cè)定基本要求。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，于0、6、12、18、24 h精密吸取10 ?L注入高效液相色譜儀，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算峰面積，麻黃堿峰面積RSD=1.58%（n=5），偽麻黃堿峰面積RSD=1.96%（n=5）。表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3 平衡溶解度試驗(yàn)

2.3.1 沉淀法 稱取提取物0.2 g左右，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入不同溶劑（水、甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、正辛醇）及不同pH值（2.25、4.99、6.8、7.4、8.98）緩沖液各5 mL，放入恒溫水浴振蕩器中，溫度保持在37 ℃，振搖24 h，使其達(dá)到充分溶解。將藥液連同殘留的固體藥物一同轉(zhuǎn)移至已經(jīng)恒定質(zhì)量的離心管中，12 000 r/min離心10 min，傾出上清液，殘?jiān)碗x心管在70 ℃真空干燥箱中烘干并稱定質(zhì)量，計(jì)算提取物在不同溶劑中的溶解度[3]。溶解度=（m加入量-m未溶解量）÷溶劑體積。結(jié)果測(cè)得平衡溶解度分別為31.8、35.78、25.94、0.42、33.14、11.3、10.4、7.44、40.16、36.66、34.94、31.3、21.88 mg/mL，說(shuō)明不同溶劑中提取物的溶解度依次為甲醇>乙腈>水>乙醇>三氯甲烷>正辛醇>丙酮>乙酸乙酯。不同pH值磷酸緩沖液中的平衡溶解度見(jiàn)圖1 。

2.3.2 指標(biāo)成分法 分別精密吸取上述離心后的各溶液上清液3 mL置5 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度。經(jīng)0.45 ?m濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液10 ?L，采用HPLC測(cè)定溶液中麻黃堿和偽麻黃堿（色譜圖見(jiàn)圖2），并計(jì)算指標(biāo)藥效成分的溶解量。結(jié)果表明，37 ℃條件下，麻黃堿在水中的平衡溶解度為275.19 ?g/mL，偽麻黃堿在水中的平衡溶解度為132.31 ?g/mL，在有機(jī)溶劑中的平衡溶解度見(jiàn)表1，在磷酸緩沖體系中的平衡溶解度見(jiàn)圖3。由結(jié)果可知，37 ℃時(shí)麻黃堿和偽麻黃堿在甲醇中的溶解度最大，在乙醇中的溶解度相對(duì)較大，在三氯甲烷中的溶解度最小。指標(biāo)成分麻黃堿類在磷酸鹽緩沖液中的溶解度均隨pH值的增大呈現(xiàn)先緩慢減小后增大然后再減小的變化趨勢(shì)。麻黃堿和偽麻黃堿在pH 7.4磷酸鹽緩沖液中的溶解度最大，分別為344.27 ?g/mL和162.22 ?g/mL。

2.4 表觀油水分配系數(shù)的測(cè)定

選擇正辛醇為油相，pH值分別為2.25、4.99、6.8、7.4、8.98的磷酸鹽緩沖液及蒸餾水為水相。取提取物0.2 g左右，精密稱定后置5 mL量瓶中，加入被正辛醇飽和的水和系列pH值的磷酸鹽緩沖液，超聲30 min，12 000 r /min離心10 min，取上清液2 mL，用甲醇稀釋至5 mL，取上清液過(guò)0.45 ?m濾膜，取20 ?L，經(jīng)HPLC測(cè)定其中指標(biāo)成分的濃度（C0）。再取上清液2 mL置具塞錐形瓶中，分別加入2 mL被水飽和過(guò)的正辛醇溶液，加塞，置于37 ℃恒溫水浴振蕩器中，振蕩24 h，靜止后取上層油相2 mL，用甲醇稀釋至5 mL，混勻，過(guò)0.45 ?m 濾膜，取20 ?L，經(jīng)HPLC測(cè)定其中指標(biāo)成分的濃度（C1）。按公式計(jì)算表觀油水分配系數(shù)（P）：P=C1/（C0-C1）[3]。結(jié)果表明，37 ℃時(shí)麻黃堿、偽麻黃堿的正辛醇/水分配系數(shù)分別為0.101（lgP=-0.99）、0.076（lgP=-1.12）。麻黃堿和偽麻黃堿的lgP值受pH值影響較大，在pH 6.8時(shí)lgP值達(dá)到最大，pH 7.4時(shí)為最低。之后隨pH值的增加lgP值有所降低。結(jié)果見(jiàn)圖4。

3 討論

油水分配系數(shù)是影響藥物胃腸吸收和經(jīng)皮吸收的重要因素。文獻(xiàn)報(bào)道，藥物吸收的最佳范圍是-1

麻黃堿和偽麻黃堿的lgP值受pH值影響較大：在pH 6.8時(shí)lgP值達(dá)到最大，分別為1.336、0.923；pH 7.4時(shí)lgP值最低，分別為0.884、0.01。說(shuō)明藥物所處的酸堿環(huán)境能夠影響生物膜透過(guò)性，可以考慮通過(guò)調(diào)整pH值來(lái)改變膜透過(guò)性，增加透皮吸收。對(duì)提取物中主要有效成分研究結(jié)果也表明，溶解度的變化趨勢(shì)受到pH值影響，故在提取制劑工藝和控制指標(biāo)成分供藥體系時(shí)應(yīng)注意選擇合適的pH值，以提高有效成分的溶解效果。

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（收稿日期：2016-06-02；編輯：陳靜）