免疫熒光法檢測(cè)B群鏈球菌方法的建立及性能評(píng)價(jià)*

樊尚榮 蔣濟(jì)陽(yáng) 劉小平△ 黃榮 唐盛 龔海濤

(1.北京大學(xué)深圳醫(yī)院婦產(chǎn)科，深圳 518036；2.北京大學(xué)深圳醫(yī)院檢驗(yàn)科，深圳 518036；3.深圳市邁科龍生物技術(shù)有限公司，深圳 518055)

免疫熒光法檢測(cè)B群鏈球菌方法的建立及性能評(píng)價(jià)*

樊尚榮1蔣濟(jì)陽(yáng)2劉小平2△黃榮2唐盛3龔海濤3

(1.北京大學(xué)深圳醫(yī)院婦產(chǎn)科，深圳 518036；2.北京大學(xué)深圳醫(yī)院檢驗(yàn)科，深圳 518036；3.深圳市邁科龍生物技術(shù)有限公司，深圳 518055)

目的：建立免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)方法并評(píng)價(jià)其性能，確定免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑的最佳反應(yīng)條件；了解免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)方法的局限及改進(jìn)措施。方法：雙盲法。采集103例產(chǎn)檢孕婦陰道分泌物標(biāo)本，分離培養(yǎng)、鑒定，免疫熒光法對(duì)分離的疑似B群鏈球菌菌落免疫熒光法檢測(cè)；248例孕婦陰道拭子直接涂片免疫熒光檢測(cè)進(jìn)行雙盲法平行檢測(cè)，以分離培養(yǎng)、鑒定結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計(jì)免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑與分離培養(yǎng)鑒定法檢測(cè)結(jié)果的總符合率及陰、陽(yáng)性符合率，計(jì)算一致性系數(shù)；設(shè)計(jì)干擾試驗(yàn)，研究與其他細(xì)菌抗原交叉反應(yīng)的可能。結(jié)果：試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析顯示，103例免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)菌落涂片與分離培養(yǎng)鑒定法檢測(cè)結(jié)果的總符合率為94.17%，陰性符合率為92.41%，陽(yáng)性符合率為100%，Kappa值為0.85。對(duì)248例臨床孕婦陰道分泌物涂片檢測(cè)，免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑與分離培養(yǎng)鑒定法檢測(cè)結(jié)果的總符合率為95.16%，陰性符合率為96.48%，陽(yáng)性符合率為80.95%，Kappa值為0.71。結(jié)論：免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑檢測(cè)分離菌落涂片、與分離培養(yǎng)鑒定法的檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差異，陰道分泌物直接涂片的結(jié)果與分離培養(yǎng)鑒定法的檢測(cè)結(jié)果一致。免疫熒光B群鏈球菌檢測(cè)方法具有快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的特性，可用于產(chǎn)前孕婦陰道分泌物分離的疑似B群鏈球菌菌落直接鑒定。

B群鏈球菌；免疫熒光技術(shù)免疫熒光分析；干擾試驗(yàn)

B群鏈球菌(Group B strcptococcus，GBS)即無(wú)乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)，以其細(xì)胞壁多糖類C物質(zhì)屬于Lancefield抗原結(jié)構(gòu)分類中的B群而得名。B群鏈球菌正常寄居于陰道和直腸，屬于條件致病菌。在20世紀(jì)70年代，B群鏈球菌被證實(shí)為圍產(chǎn)期母嬰感染的主要致病菌之一，在圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)中占有重要地位，母嬰傳播是新生兒GBS感染的主要途徑，發(fā)生在分娩過(guò)程中，新生兒暴露于GBS存在的產(chǎn)道，可能吞進(jìn)和吸入細(xì)菌，導(dǎo)致新生兒感染[1-5]。早發(fā)型GBS感染(生產(chǎn)后7天以內(nèi))主要引起肺炎和敗血癥，是新生兒死亡的主要原因之一。而晚發(fā)型GBS感染(生產(chǎn)后7天-3個(gè)月)主要引起腦膜炎(占新生兒腦膜炎的31%)，嚴(yán)重者致神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥及聽(tīng)力喪失等不可逆損害[6]。目前常用的GBS臨床實(shí)驗(yàn)室診斷方法為GBS分離培養(yǎng)鑒定法，美國(guó)CDC、美國(guó)婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)以及美國(guó)兒科協(xié)會(huì)推薦用選擇性培養(yǎng)基對(duì)孕產(chǎn)婦和新生兒進(jìn)行GBS感染篩查，因其操作過(guò)程相對(duì)繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)，醫(yī)療機(jī)構(gòu)未能普遍開(kāi)展。為尋求能夠滿足孕婦GBS快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法，研發(fā)了免疫熒光法(Immunofluorescence assay，IFA)B群鏈球菌檢測(cè)試劑并評(píng)價(jià)其性能。報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑及質(zhì)控體系的建立

1.1.1 材料

B群鏈球菌單克隆抗體，異硫氰酸熒光素標(biāo)記。分裝成0.5 mL一支。儲(chǔ)存溫度2-8℃。有效期6個(gè)月。Zeiss AXIOSKOP-PLUS熒光顯微鏡。陽(yáng)性質(zhì)控片：自制。陰性質(zhì)控片：上皮細(xì)胞(Epithelial cells)：用美國(guó)ATCC CCL-2標(biāo)準(zhǔn)上皮細(xì)胞、大腸埃希菌 ATCC29213、ATCC35218、金黃色葡萄球菌ATCC25923傳代菌株。

1.1.2 免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑最佳反應(yīng)條件

運(yùn)用單一變量法，分別評(píng)價(jià)B群鏈球菌涂片介質(zhì)類型、試劑用量、反應(yīng)時(shí)間、孵育溫度、孵育濕度、沖洗用水對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。質(zhì)控涂片檢測(cè)采用已確定的最佳反應(yīng)條件。試驗(yàn)用菌株為混合B群鏈球菌菌株。

1.1.2.1 涂片介質(zhì)的選擇

試驗(yàn)菌株為自制陽(yáng)性質(zhì)控菌株，介質(zhì)類型包括生理鹽水、營(yíng)養(yǎng)肉湯、乙醇或丙酮。分別用生理鹽水、營(yíng)養(yǎng)肉湯作為涂片介質(zhì)蘸取菌落滾動(dòng)制片各10張，自然干燥，加入B群鏈球菌免疫熒光試劑。

涂片介質(zhì)pH值：用1M乙酸稀釋溶液、生理鹽水、1 M碳酸氫鈉溶液用于涂片介質(zhì)調(diào)整試驗(yàn)pH，在pH值<7.0 、pH值等于7.0和 pH值>7.0時(shí)制備GBS混合菌株涂片各10片，自然干燥，加入B群鏈球菌免疫熒光試劑。

試劑用量：制備1麥?zhǔn)蠁挝籊BS混合菌株涂片30片，自然干燥分別5 μL、10 μL、20 μLB群鏈球菌免疫熒光試劑。

反應(yīng)時(shí)間：制備1麥?zhǔn)蠁挝籊BS混合菌株涂片30片，自然干燥加入10 μLB群鏈球菌免疫熒光試劑分別作用15 min、30 min和45 min，觀察結(jié)果。

孵育溫度和濕度：制備1麥?zhǔn)蠁挝籊BS混合菌株涂片各10片，加入B群鏈球菌免疫熒光試劑后分別放置在26-30℃、37℃、干燥37℃、保濕暗盒，30 min后沖洗、晾干、觀察結(jié)果。

沖洗用水：制備1麥?zhǔn)蠁挝籊BS混合菌株涂片各10片，加10 μLB群鏈球菌免疫熒光試劑后分別放置在保濕暗盒37℃，30 min后分別用自來(lái)水、去離子水和PBS+吐溫沖洗，觀察結(jié)果。

1.2 免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑性能評(píng)價(jià)

1.2.1 菌落涂片免疫熒光B群鏈球菌檢測(cè)與分離、鑒定等效性驗(yàn)證

1.2.1.1 主要儀器

細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀MicroScan walkAway40及96孔鑒定/藥敏板，Zeiss AXIOSKOP-PLUS熒光顯微鏡。

1.2.1.2 主要試劑

哥倫比亞血瓊脂平板(型號(hào)：LS0109)、麥康凱平板，廣州市迪景微生物科技有限公司生產(chǎn)；乳膠凝集試劑(LA)-B生物梅里埃公司生產(chǎn)，有效期內(nèi)、自制的B群鏈球菌熒光標(biāo)記抗體。

1.2.1.3 標(biāo)本處置

在2013年6月至9月期間共對(duì)北京大學(xué)深圳醫(yī)院103例產(chǎn)前檢查孕婦陰道分泌物標(biāo)本，標(biāo)本在患者簽知情同意書后采集并采用無(wú)菌容器保存。編號(hào)后送至微生物室分離培養(yǎng)。

將標(biāo)本接種于平板上，在37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24-48 h，觀察結(jié)果。GBS菌落在血瓊脂平板上呈灰白、透光、濕潤(rùn)、光滑、凸起，選取可疑菌落涂片革蘭染色鏡檢，顯微鏡下可見(jiàn)革蘭染色陽(yáng)性鏈球菌，觸酶實(shí)驗(yàn)陰性、鏈球菌乳膠凝集試驗(yàn)陽(yáng)性者進(jìn)一步生化鑒定。挑取血平板上疑似B群鏈球菌的菌落涂片，干燥后加5 μL B群鏈球菌免疫熒光試劑，置密閉、濕潤(rùn)暗盒中，置于37℃溫箱孵育30 min，用去離子水緩緩沖洗載玻片30 sec，晾干，用熒光顯微鏡閱片，在油鏡下發(fā)現(xiàn)一個(gè)以上蘋果綠色熒光、典型空心圓球顆粒狀B群鏈球菌則為陽(yáng)性，未發(fā)現(xiàn)可定義為陽(yáng)性的典型特異染色時(shí)即為陰性。

1.2.1.4 檢測(cè)下限的確定

免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)的靈敏度即確定試劑檢出B群鏈球菌的最低濃度(檢出陽(yáng)性的菌液最低濃度下限)。

用GBS菌株配制0.5麥?zhǔn)蠞舛染鷳乙?1.5×108cfu·mL-1)，倍比稀釋至1:256，形成8個(gè)濃度的菌懸液，1.5×108、7.5×107、3.75×107、1.88×107、9.38×106、4.69×106、2.34×106、1.17×106、5.86×105。制備涂片、干燥后進(jìn)行B群鏈球菌免疫熒光染色，顯微鏡觀察并記錄結(jié)果。每一稀釋濃度的菌懸液制備3張涂片。

1.2.2 陰道分泌物涂片熒光B群鏈球菌檢測(cè)與分離、鑒定的等效性評(píng)價(jià)

取248例產(chǎn)前檢查孕婦陰道拭子，每例2支，1支接種血平板、麥康凱平板37℃孵育24-48 h，分離、鑒定。載玻片標(biāo)記標(biāo)本信息，在陰道拭子直接或滴加0.1 mL生理鹽水后滾動(dòng)涂片，自然干燥，免疫熒光法檢測(cè)陰道分泌物B群鏈球菌，記錄結(jié)果。

1.3 干擾試驗(yàn)

用免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑對(duì)有明確鑒定結(jié)果的A群鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌、淋病奈瑟菌等18種臨床分離菌株及標(biāo)準(zhǔn)菌株菌落涂片檢測(cè)，涂片介質(zhì)為生理鹽水。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件比對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)算免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑與分離培養(yǎng)法檢測(cè)結(jié)果的總符合率和陰、陽(yáng)符合率，并計(jì)算一致性系數(shù)Kappa(K)值。規(guī)定若K值>0.8，則表明兩種檢測(cè)方法有一致性，在臨床應(yīng)用中有等效性；0.75>Kappa≥0.4兩者一致性一般，Kappa<0.4兩者一致性較差[7]。

2 結(jié)果

2.1 免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑質(zhì)控體系的建立

陽(yáng)性質(zhì)控結(jié)果：顯微鏡下清晰、易辨，B群鏈球菌單個(gè)或成鏈狀排列，熒光集中在菌體膜上，其他部位熒光強(qiáng)度弱鏡下可顯示中空現(xiàn)象。

上皮細(xì)胞陰性質(zhì)控片 采用與細(xì)菌不同生物類型的上皮細(xì)胞制成，鏡下陰性、效果良好，大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC29213、ATCC35218、金黃色葡萄球菌ATCC25923制備的陰性質(zhì)控片，鏡下檢測(cè)陰性效果良好。

2.2 免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑最佳反應(yīng)條件的確立

用GBS混合菌株制成的內(nèi)控品進(jìn)行檢測(cè)，運(yùn)用單一變量法，研究改變一項(xiàng)反應(yīng)條件對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，確定該方法的最佳反應(yīng)條件。試驗(yàn)結(jié)果如下表1，“-”代表檢測(cè)結(jié)果陰性，“±”代表檢測(cè)結(jié)果弱陽(yáng)性，“+”代表檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，“++”代表檢測(cè)結(jié)果強(qiáng)陽(yáng)性。

表1 免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑最佳反應(yīng)條件試驗(yàn)結(jié)果

由上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以確定免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑的最佳反應(yīng)條件為：生理鹽水作為涂片介質(zhì)、 pH值7.0，試劑量10 μL，孵育時(shí)間30 min，孵育溫度37℃，孵育環(huán)境濕潤(rùn)，PBS+吐溫洗劑、去離子水均可作為沖洗用水。當(dāng)菌量少時(shí)選用營(yíng)養(yǎng)肉湯作為涂片介質(zhì)效果更好，當(dāng)缺乏去離子水時(shí)選用自來(lái)水作為沖洗用水也能達(dá)到同等效果。簡(jiǎn)要流程如圖1，整個(gè)反應(yīng)過(guò)程避光。

涂片固定→5 μL熒光抗體，37℃溫箱孵育30 min→洗滌、晾干、鏡檢圖1 免疫熒光檢測(cè)原理及流程圖

2.2 免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑性能評(píng)價(jià)

2.2.1 103例樣本免疫熒光法檢測(cè)與分離培養(yǎng)法結(jié)果比較

以分離培養(yǎng)作為金標(biāo)準(zhǔn)，免疫熒光檢測(cè)疑似B群鏈球菌結(jié)果與之對(duì)比，103例樣本檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 免疫熒光法檢測(cè)與分離培養(yǎng)法結(jié)果對(duì)比

統(tǒng)計(jì)分析顯示，103例臨床標(biāo)本分離的疑似菌落免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)與鑒定結(jié)果的總符合率為95.16%，陰性符合率為96.48%，陽(yáng)性符合率為80.95%，Kappa值為0.85，大于0.8。

2.2.2 248例樣本免疫熒光法與分離培養(yǎng)法檢測(cè)結(jié)果比較

采用分離培養(yǎng)鑒定法與免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)法對(duì)248例臨床孕婦陰道拭子進(jìn)行雙盲法平行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 免疫熒光法與分離培養(yǎng)法檢測(cè)結(jié)果

248例孕婦陰道拭子直接涂片，免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)與分離、培養(yǎng)、鑒定結(jié)果的總符合率為95.16%，陰性符合率為96.48%，陽(yáng)性符合率為80.95%，Kappa值為0.7126，接近0.8。兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果一致。

2.2.3 免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)的靈敏度

用陽(yáng)性菌株配制0.5麥?zhǔn)蠞舛?相當(dāng)于1.5×108cfu·mL-1)菌懸液，倍比稀釋至1:256，用滅菌拭子蘸取少量菌懸液涂片干燥后進(jìn)行免疫熒光染色，顯微鏡鏡檢(100 X10)并記錄結(jié)果，見(jiàn)表4。

表4 免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑的靈敏度

陰性對(duì)照 用大腸埃希菌ATCC35218標(biāo)準(zhǔn)株配制0.5麥?zhǔn)蠞舛葐挝患?xì)菌菌液，倍比稀釋，配制成不同濃度的菌液，用滅菌拭子蘸取涂片、晾干后免疫熒光染色，結(jié)果均為陰性。

本研究檢出陽(yáng)性菌液最低可檢測(cè)下限為5.86×105cfu·mL-1，免疫熒光法敏感度較高，能夠檢出較低濃度菌液中的B群鏈球菌。陽(yáng)性質(zhì)控片和陰性質(zhì)控片上的菌量均高于5.86×105cfu·mL-1，質(zhì)控結(jié)果可信，檢出最低下限的研究為后續(xù)開(kāi)展的臨床檢測(cè)提供了支持。

2.3 干擾試驗(yàn)

表5 干擾試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果

注：細(xì)菌總株數(shù)90株，檢測(cè)陽(yáng)性6株，檢測(cè)陰性84株。

由上述干擾試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果可以看出，免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑中的熒光標(biāo)記抗體與6株臨床分離的金黃色葡萄球菌抗原相結(jié)合，有可能存在交叉抗原。

3 討論

3.1 B群鏈球菌目前常用檢驗(yàn)方法

目前臨床實(shí)驗(yàn)室常用的GBS檢測(cè)方法為分離培養(yǎng)、鑒定，美國(guó)CDC、美國(guó)婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)以及美國(guó)兒科協(xié)會(huì)已推薦用選擇性培養(yǎng)基對(duì)孕產(chǎn)婦和新生兒進(jìn)行GBS感染篩查。除此之外，還有涂片革蘭染色顯微鏡檢查、GBS分子生物學(xué)診斷、VITEK MSTM和布魯克全自動(dòng)飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF mass spectrometry)鑒定菌種等[8-9]。

GBS顯微鏡檢查：常用的方法是通過(guò)對(duì)腦脊液或血培養(yǎng)標(biāo)本濃縮涂片、革蘭染色、顯微鏡檢查，B群鏈球菌為革蘭陽(yáng)性雙球菌，鏈狀排列。其診斷準(zhǔn)確率主要取決于標(biāo)本質(zhì)量、顯微鏡分辨率及檢驗(yàn)人員的技術(shù)水平。

GBS的分離培養(yǎng)和鑒定：對(duì)GBS的診斷主要是通過(guò)對(duì)孕產(chǎn)婦直腸或陰道拭子、新生兒的血液或腦脊液進(jìn)行培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，但發(fā)現(xiàn)普通培養(yǎng)在檢測(cè)孕婦GBS定植方面的假陰性率。應(yīng)用選擇性培養(yǎng)基可以抑制其他微生物的生長(zhǎng)，因此美國(guó)CDC、美國(guó)婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)以及美國(guó)兒科協(xié)會(huì)推薦用選擇性培養(yǎng)基對(duì)孕產(chǎn)婦和新生兒GBS感染進(jìn)行篩查。分離培養(yǎng)、鑒定是檢測(cè)GBS的金標(biāo)準(zhǔn)。選擇性培養(yǎng)得出陰性結(jié)果要72 h，陽(yáng)性結(jié)果至少也要48 h才能得出。GBS菌落在羊血平板上呈灰白、透光、濕潤(rùn)、光滑、凸起。可疑菌落進(jìn)行生化鑒定：GBS觸酶實(shí)驗(yàn)陰性， CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性，馬尿酸試驗(yàn)陽(yáng)性?；|(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)也有著與PCR類似的局限性，通常兩者都是批量測(cè)定，難以滿足孕婦GBS門診篩查個(gè)體化快速、準(zhǔn)確檢測(cè)的要求。目前大陸地區(qū)使用的儀器和試劑來(lái)自法國(guó)梅里埃bioMériux、美國(guó)BD及西門子公司的產(chǎn)品。

3.2 疑似B群鏈球菌菌落初篩的方法

在臨床微生物室也普遍應(yīng)用血清學(xué)檢測(cè)方法，如B鏈球菌乳膠凝集實(shí)驗(yàn)，作為鑒定前初篩或補(bǔ)充、快速驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。

本研究建立的方法可用以直接檢測(cè)疑似菌落和孕婦陰道分泌物涂片，與分離培養(yǎng)鑒定等效，可以部分替代進(jìn)口試劑用于GBS鑒定。

3.3 熒光素標(biāo)記GBS抗體檢測(cè)GBS的方法和意義

熒光素標(biāo)記GBS抗體直接檢測(cè)疑似的菌落是否是GBS，或檢測(cè)陰道分泌物樣本中是否存在GBS。在堿性條件下，F(xiàn)ITC的異硫氰基(-N=C=S)與抗體上的賴氨酸的ε氨基結(jié)合，形成FITC-抗體耦合物，即熒光標(biāo)記抗體。異硫氰酸熒光素(Flourescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC)標(biāo)記抗B群鏈球菌抗體可與B群鏈球菌發(fā)生特異性結(jié)合，所形成的熒光素結(jié)合物在熒光顯微鏡495納米波段激發(fā)光照射下發(fā)出亮綠色熒光。由于在反應(yīng)中只有抗原、抗體兩種因子參與，判讀簡(jiǎn)單；特異性強(qiáng)，與其他抗原交叉染色較少，一種標(biāo)記抗體只能鑒定含有相應(yīng)抗原的細(xì)菌；操作簡(jiǎn)便、省時(shí)[10]。

通過(guò)對(duì)免疫熒光法檢測(cè)B群鏈球菌的臨床檢測(cè)效果評(píng)價(jià)，確定了該試劑的最佳反應(yīng)條件并建立起質(zhì)控體系。免疫熒光試劑檢測(cè)與分離培養(yǎng)法檢測(cè)的總符合率為94.17%，陽(yáng)性符合率為100%，陰性符合率為92.41%，Kappa值為0.85，免疫熒光法鑒定GBS與金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果一致；對(duì)陰道分泌物標(biāo)本進(jìn)行雙盲法平行檢測(cè)，總符合率95.16%，陰性符合率為96.48%，陽(yáng)性符合率為80.95%，Kappa值為0.71，接近0.8。兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果一致。在臨床應(yīng)用中暫不具備等效性，尚待改進(jìn)。

3.4 局限及改進(jìn)

干擾試驗(yàn)結(jié)果顯示，免疫熒光法B群鏈球菌檢測(cè)試劑與部分臨床分離金黃色葡萄球菌菌株存在交叉抗原。B群鏈球菌免疫熒光法檢測(cè)試劑與金黃色葡萄球菌表面抗原交叉的問(wèn)題將進(jìn)一步研究并降低金黃色葡萄球菌對(duì)試劑的反應(yīng)性。

通過(guò)建立免疫熒光法檢測(cè)B群鏈球菌的方法及性能評(píng)價(jià)，對(duì)產(chǎn)檢孕婦GBS篩查，為國(guó)產(chǎn)試劑在免疫熒光法檢測(cè)B群鏈球菌領(lǐng)域的應(yīng)用提供了支持，部分滿足了孕婦GBS篩查個(gè)體化檢測(cè)的要求，臨床醫(yī)生對(duì)產(chǎn)前孕婦B群鏈球菌篩查多了一項(xiàng)選擇。

1 馬延敏,吳連方. B族鏈球菌對(duì)母嬰健康的影響及診斷和防治[J]. 中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志, 1998, 2(1): 121-156.

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Establishment and performance evaluation of groupBStrcptococcuswith immunofluorescence detection*

Fan Shang-rong1, Jiang Ji-yang2, Liu Xiao-ping2△, Huang Rong2, Tang Sheng3, Gong Hai-tao3

(1.Department of Gynaecology and Obstetrics, Peking University Shenzhen Hospital, Shenzhen 518036;2.Department of Clinical Laboratory, Peking University Shenzhen Hospital, Shenzhen, 518035;3.Shenzhen Microprofit Biological Technology Co., Ltd, Shenzhen 518055)

Objective：To establish and evaluate performance of immunofluorescence detection of group B Streptococcus (GBS), to grope best reaction conditions and to understand the application value and limitations of immunofluorescence detection. Methods: One hundred and three pregnant women′s vaginal samples from the Peking University Shenzhen Hospital were identified by MicroScan walkAway 40. Furthermore, suspected colony was detected by GBS immunofluorescence. Two hundreds and forty-eight pregnant women′s vaginal swabs were identified and another vaginal swab smear was detected with GBS immunofluorescence. Above two parts of clinical trials were all used double-blind parallel controlled. The results of identification were as standard. Overall coincidence rate, negative coincidence rate, positive coincidence rate and the Kappa value of the two methods were calculated. And interference test were designed to research the cross reaction possibilities with other bacterial antigens in vaginal specimens. Results: According to the statistical analysis of the 103 vaginal samples suspected colony immunofluorescence detection compared with identification, the overall coincidence rate was 94.17%, the negative coincidence rate was 92.41%, and the positive coincidence rate was 100% and the Kappa value was 0.85. Two hundreds and forty-eight pregnant woman′s vaginal swabs smear immunofluorescence Group B strcptococcus detection compared with identification, which overall coincidence rate was 95.16%, the negative coincidence rate was 96.48%, the positive coincidence rate was 80.95% and the Kappa value was 0.71. The cross reaction possibilities can be eliminated by blocking the antibody combining to the bacterial antigen-binding site. Conclusion: There was no significant difference between suspected colony immunofluorescence detection and identification, the results of vaginal swabs smear by immunofluorescence GBS detection and isolated and identification tend to be consistent. The experimental process of GBS immunofluorescence detection is simple, the result reports are fast and accurate. That can be used for direct identification of suspected GBS colony from the vaginal secretion of pregnant women.

Group B streptococcus; Immunofluorescence; Identification; Cross reaction

深圳市科技創(chuàng)新委員會(huì)基金課題(編號(hào)：100314037)

樊尚榮，男，主任醫(yī)師/教授，主要從事婦產(chǎn)科臨床工作，Email：fanshangrong@21cn.com。

△通訊作者：劉小平，女，主任技師，主要從事臨床檢驗(yàn)工作，Email：xpliu0101@sohu.com。

2016-10-13)