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      微生物抗菌肽及其在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用

      2017-01-19 12:57:38李瑞靜秦素雅
      中國(guó)畜牧雜志 2017年2期
      關(guān)鍵詞:脂肽抗菌肽肉雞

      陳 亮,李瑞靜,黃 亮,秦素雅

      (河南工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院,河南鄭州 450001)

      微生物抗菌肽及其在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用

      陳 亮*,李瑞靜,黃 亮,秦素雅

      (河南工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院,河南鄭州 450001)

      “后抗生素時(shí)代”,安全高效的抗生素替代物成為研發(fā)熱點(diǎn)之一,具有諸多優(yōu)點(diǎn)的抗菌肽有望成為抗生素理想替代物之一。近年來(lái),微生物源抗菌肽在動(dòng)物生產(chǎn)中的研究應(yīng)用不斷深入,并獲得大量研究成果。本文就微生物抗菌肽及其在防控動(dòng)物疫病、增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫水平、提高動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力、提高動(dòng)物生產(chǎn)性能等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述,以期為微生物抗菌肽的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供參考。

      微生物抗菌肽;抗生素替代物;動(dòng)物生產(chǎn);生長(zhǎng)性能;應(yīng)用

      抗生素濫用帶來(lái)致病菌抗藥性增強(qiáng)、畜禽產(chǎn)品抗生素殘留超標(biāo)等嚴(yán)重問(wèn)題,引發(fā)社會(huì)各界的廣泛關(guān)注和對(duì)畜禽產(chǎn)品安全的憂慮,研發(fā)綠色安全的抗生素替代物迫在眉睫[1-2]。安全高效、不產(chǎn)生抗藥性、無(wú)殘留和可體內(nèi)降解的抗菌肽被認(rèn)為是抗生素的理想替代品之一[1-3],其中易于規(guī)?;l(fā)酵生產(chǎn)、種類多、結(jié)構(gòu)獨(dú)特、功能多樣的微生物源抗菌肽更具優(yōu)勢(shì),尤其是本身就是益生菌的微生物菌株產(chǎn)生的抗菌肽更具市場(chǎng)前景[2,4-5]。

      相對(duì)于動(dòng)植物源抗菌肽而言,微生物源抗菌肽的研究應(yīng)用相對(duì)滯后。近年來(lái),在動(dòng)物生產(chǎn)中添加微生物抗菌肽的報(bào)道才逐漸增多,然而微生物抗菌肽在動(dòng)物生產(chǎn)中研究應(yīng)用進(jìn)展的報(bào)道鮮見(jiàn)[6-7]。本文將具體綜述微生物抗菌肽及其在防控動(dòng)物疫病、增強(qiáng)機(jī)體免疫水平、提高機(jī)體抗氧化能力和提高生產(chǎn)性能等方面的研究應(yīng)用進(jìn)展,以期為微生物抗菌肽的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用提供參考。

      1 微生物抗菌肽

      微生物種類繁多、基因豐富,其產(chǎn)生的抗菌肽也是多種多樣。目前,在動(dòng)物生產(chǎn)中應(yīng)用的主要是細(xì)菌抗菌肽,按照合成途徑可分為非核糖體[8]和核糖體合成抗菌肽[9]。前者不依賴于核糖體,由非核糖體多肽合成酶基因編碼合成,是一種由脂肪酸鏈和肽鏈形成的結(jié)構(gòu)獨(dú)特的兩親結(jié)構(gòu),統(tǒng)稱為抗菌脂肽,因脂肪酸類型或長(zhǎng)度、氨基酸序列、成環(huán)方式等不同而不同[8],如Surfactin、Subtilin、Bacitracin等,產(chǎn)生菌株以枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis))、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)等益生芽孢桿菌為主[8]??咕囊驯话l(fā)現(xiàn)具有抗細(xì)菌、抗真菌、抗病毒、抗支原體、抗炎和表面活性等多種生物學(xué)功能,通過(guò)與細(xì)胞膜磷脂互作而形成離子通道,或者螯合陽(yáng)離子而抑制酶活性來(lái)發(fā)揮作用。后者合成依賴核糖體,統(tǒng)稱為細(xì)菌素,如Plantaricin、Pediocin、Sakacin和Lactococcin等,產(chǎn)生菌株以乳酸鏈球菌(Streptococcus lactis)、植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)等益生乳酸菌為主[9-10]。細(xì)菌素作用方式主要有兩種:一種是依賴于膜電位,直接吸附于敏感菌細(xì)胞膜而形成膜內(nèi)通透孔道,導(dǎo)致胞內(nèi)K+、H+、PO43+和ATP等泄露和膜去極化,最終細(xì)胞自溶死亡[3,11];另一種是不依賴于膜電位,通過(guò)與敏感菌細(xì)胞膜上的受體蛋白結(jié)合形成親水通道,細(xì)胞膜完整性被破壞而導(dǎo)致細(xì)胞死亡[3,11]。

      最初,人們對(duì)于微生物抗菌肽的研究主要集中在其抑菌殺菌活性上,后來(lái)才發(fā)現(xiàn)抑菌殺菌活性僅僅是其諸多生物學(xué)功能的一方面。下面將具體綜述近年來(lái)微生物抗菌肽在動(dòng)物生產(chǎn)中所展現(xiàn)出的諸多生物學(xué)功能。

      2 微生物抗菌肽在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用

      2.1 防控動(dòng)物疫病 微生物抗菌肽在此方面的研究和應(yīng)用最多。研究表明,Bacillus subtilis抗菌肽Sublancin對(duì)雞壞死性腸炎病原菌產(chǎn)氣莢膜梭菌的最小抑制濃度(MIC)為8 μmol/L,5.76 mg/L的Sublancin試驗(yàn)組雞的小腸壞死指數(shù)、盲腸食糜中產(chǎn)氣莢膜梭菌數(shù)量均顯著低于對(duì)照組,有效控制壞死性腸炎的發(fā)生[12]。一種由21個(gè)氨基酸組成的腸桿菌肽對(duì)6株臨床型大腸桿菌的MIC均小于0.5 μg/mL,300 mg/kg腸桿菌肽組肉雞的病死率為0.66%(21 d)、4.95%(42 d),分別是對(duì)照組的22.37%、31.49%[13]。在斷奶仔豬日糧中添加Bacillus subtilis抗菌脂肽后,4 000 U/kg的抗菌肽組仔豬的前期腹瀉率(14 d)、后期腹瀉率(28 d)分別較空白對(duì)照組下降35.48%、23.42%[14];以150 mg/kg 、300 mg/kg抗菌脂肽替代抗生素后,抗菌肽組仔豬腹瀉率分別較抗生素組顯著降低38.18%和64.64%[15];表明Bacillus subtilis抗菌脂肽可有效控制斷奶仔豬腹瀉[14-15]。在凡納濱對(duì)蝦日糧中添加100 mg/kg的Bacillus subtilis抗菌脂肽后,自然養(yǎng)殖水體中副溶血弧菌、溶藻弧菌等的數(shù)量明顯降低,抗菌肽組對(duì)蝦的攻毒存活率(44.45%)顯著高于對(duì)照組(22.22%)[17]。利用乳酸乳球菌抗菌肽lacticin 3147封口處理奶牛乳頭后,奶牛乳腺炎感染率由對(duì)照組的60.6%顯著下降到抗菌肽組的5.7%,成功防控乳腺炎[18]。新型微生物抗菌肽還在不斷被發(fā)現(xiàn)。Teixeira等[4]從Bacillus subtilis ATCC 6633發(fā)酵液中得到一個(gè)分子量1 083 ku的抗菌肽,20 μg/mL的濃度即可完全抑制豬格氏病病原菌副豬嗜血桿菌的生長(zhǎng);Varella等[19]從Staphylococcus aureus發(fā)酵液中發(fā)現(xiàn)2種新型抗菌肽A70和A53,Lee等[20]從Produced By Lactococcus Lactis中分離得到抗菌肽Lacticin Nk34,均可有效控制由金黃色葡萄球菌、無(wú)乳鏈球菌等導(dǎo)致的奶牛乳腺炎;諾維信公司從假黑盤菌中發(fā)現(xiàn)第一個(gè)真菌抗菌肽菌絲霉素,其可抑制多種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌,0.05%的劑量灌注奶牛乳腺即可有效控制乳腺炎的發(fā)生[21]。

      微生物抗菌肽主要通過(guò)以下2種方式達(dá)到防控疫病的目的:一是直接抑制或者殺死致病菌或有害菌;二是抑制腸道有害菌生長(zhǎng),促進(jìn)有益菌生長(zhǎng),維護(hù)腸道菌群平衡[16]。另外,微生物抗菌肽還被發(fā)現(xiàn)能有效抑殺飼料中的霉菌,從而促進(jìn)動(dòng)物健康生長(zhǎng)。

      2.2 增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫水平 微生物抗菌肽在此方面的研究和應(yīng)用很少,目前僅在肉雞[22]、吉富羅非魚(yú)[23]、凡納濱對(duì)蝦[24]等動(dòng)物有相關(guān)研究。在肉雞日糧中添加4 000 U/kg的Bacillus subtilis抗菌脂肽后,肉雞中樞免疫器官指數(shù)的法氏囊指數(shù)(21 d)和胸腺指數(shù)(45 d)分別較空白對(duì)照組提高41.48%和69.91%,而外周免疫器官指數(shù)未出現(xiàn)顯著性差異,說(shuō)明抗菌脂肽可以通過(guò)促進(jìn)肉雞中樞免疫系統(tǒng)功能來(lái)增強(qiáng)其免疫水平[22]。在日糧中添加50 mg/kg的Bacillus subtilis抗菌脂肽后,吉富羅非魚(yú)血清中溶菌酶(LZM)活性、堿性磷酸酶(AKP)活性、血清白蛋白水平和免疫球蛋白水平等非特異性免疫指標(biāo)顯著提高,說(shuō)明抗菌脂肽可以通過(guò)提高吉富羅非魚(yú)非特異性免疫能力來(lái)增強(qiáng)其免疫水平[23];納豆芽孢桿菌抗菌脂肽被證實(shí)能顯著提高凡納濱對(duì)蝦的非特異性免疫能力,100 mg/kg抗菌肽組凡納濱對(duì)蝦的血清LZM活性、肝胰腺LZM活性顯著提高[24];納豆芽孢桿菌抗菌脂肽還被證實(shí)能顯著提高斷奶仔豬的血清IgG水平[25]。

      總體而言,關(guān)于微生物抗菌肽提高動(dòng)物機(jī)體免疫力的研究非常有限,有待深入。根據(jù)現(xiàn)有報(bào)道,微生物抗菌肽提高動(dòng)物免疫力的方式因動(dòng)物種類而異,當(dāng)病原菌入侵時(shí),抗菌肽可以直接激活動(dòng)物自身免疫系統(tǒng)來(lái)增強(qiáng)其免疫力,也可以通過(guò)誘導(dǎo)提高SOD、LZM、AKP等非特異性免疫因子來(lái)提高其免疫能力[22-23]。也有報(bào)道顯示,抗菌肽也可以通過(guò)提高抗氧化能力而保護(hù)免疫器官、免疫細(xì)胞,從而改善免疫功能[25]。

      2.3 提高動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力 關(guān)于微生物抗菌肽提高動(dòng)物抗氧化能力的報(bào)道集中在凡納濱對(duì)蝦[24]、肉雞[26]、吉富羅非魚(yú)[27]和花鰻鱺僵苗[28]等動(dòng)物。添加100 mg/kg的納豆芽孢桿菌抗菌脂肽顯著提高凡納濱對(duì)蝦的血清總抗氧化能力(T-AOC)水平、血清過(guò)氧化物酶活性和血清超氧化物歧化酶(SOD)活性等[24];抗菌脂肽Surfactin被證實(shí)能顯著提高吉富羅非魚(yú)的腸道抗氧化能力[27]和花鰻鱺僵苗腸道的T-AOC水平、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、SOD的活性[28];添加4 000 U/kg的Bacillus subtilis抗菌脂肽顯著提高肉雞的血清T-AOC水平,較對(duì)照組提高57.87%(42 d)[26];添加100 mg/kg乳酸菌素的抗菌肽組肉雞的血清SOD活性顯著高于空白對(duì)照組和抗生素組,同時(shí)血清T-AOC水平也極顯著高于空白對(duì)照組[29]。

      有報(bào)道顯示,有害微生物侵染會(huì)產(chǎn)生肉毒素、過(guò)氧化物、自由基等,會(huì)造成機(jī)體損傷和抗氧化能力降低[30]。微生物抗菌肽能夠提高動(dòng)物抗氧化能力,分析認(rèn)為是其具有抑殺致病菌、有害菌或飼料腐敗菌等有害微生物的間接作用。而動(dòng)物機(jī)體抗氧化能力的提高將有助于消除機(jī)內(nèi)自由基和提高抗損傷能力,從而有利于提高動(dòng)物生產(chǎn)性能、緩解應(yīng)激和提高存活率等[24]。

      2.4 提高動(dòng)物生產(chǎn)性能 在仔豬[14-15]、肉雞[12,22,29,31]、蛋雞[32]、牛[9]和水產(chǎn)動(dòng)物[6,17,23]等日糧中添加微生物抗菌肽可以改善或提高其生產(chǎn)性能。喻紅波等[15]發(fā)現(xiàn),與抗生素組相比,300 mg/kg的Bacillus subtilis抗菌脂肽組斷奶仔豬的日增重提高14.36%、采食量提高8.25%、耗料增重比降低5.26%。都海明等[14]發(fā)現(xiàn),4 000 U/kg的Bacillus subtilis抗菌脂肽組仔豬的終體重(28 d)、平均日增重(28 d)均較空白對(duì)照組、抗生素組顯著增加;同等劑量下抗菌脂肽組肉雞的平均日增重(45 d)也較空白對(duì)照組和抗生素組顯著增加,耗料增重比較空白對(duì)照組和抗生素組顯著降低[22]??咕腟ublancin被證實(shí)不僅能防治肉雞的壞死性腸炎,還能夠改善其生產(chǎn)性能[12]。抗菌脂肽Surfactin被證實(shí)可顯著提高中華鱉稚鱉[6]、吉富羅非魚(yú)[23,27]的生長(zhǎng)性能,終體重顯著提高、耗料增重比顯著降低。納豆芽孢桿菌抗菌脂肽被證實(shí)可顯著促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng),100 mg/kg抗菌肽組對(duì)蝦的增重率高達(dá)451.79%、相對(duì)增重率達(dá)58.13%,對(duì)蝦成活率和特定生長(zhǎng)率均明顯提高,同時(shí)對(duì)蝦肌肉品質(zhì)也有一定程度的提高[17]。添加細(xì)菌素類抗菌肽也表現(xiàn)出同樣的促生長(zhǎng)作用。李偉等[9]發(fā)現(xiàn),添加40 g/d的乳酸菌素可顯著提高5月齡黑白花公犢牛對(duì)飼料的消化利用率和生長(zhǎng)性能;王全溪等[29]證實(shí),添加乳酸菌素可顯著促進(jìn)肉雞生長(zhǎng),100 mg/kg乳酸菌素組肉雞的增重較空白對(duì)照組顯著提高、耗料增重比顯著降低;Chen等[31]發(fā)現(xiàn),添加0.25%細(xì)菌素的肉用仔雞試驗(yàn)組的飼料利用率和日增重顯著提高,同時(shí)雞肉中甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇的含量和盲腸中的氨濃度顯著降低。韓冰等[32]發(fā)現(xiàn),添加500 AU/kg植物乳桿菌細(xì)菌素可顯著提高蛋雞的產(chǎn)蛋能力,產(chǎn)蛋率為94.26±1.25%、平均蛋重為63.48±1.14g,均顯著高于空白對(duì)照組和其他組。Nguyen等[33]發(fā)現(xiàn),在大鰲蝦日糧中添加Bacillus pumilus細(xì)菌素發(fā)酵物可顯著提高大鰲蝦的生長(zhǎng)性能,其中增重(60 d)、特定生長(zhǎng)率均較對(duì)照組有顯著提高。

      動(dòng)物生產(chǎn)性能的提高是一個(gè)綜合效應(yīng)。微生物抗菌肽之所以能夠提高動(dòng)物生產(chǎn)性能,與其抑制殺死病原菌、維護(hù)腸道健康和平衡、增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫力和抗氧化能力等諸多生物學(xué)功能直接或間接相關(guān)。除此之外,微生物抗菌肽還被發(fā)現(xiàn)可以增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體內(nèi)相關(guān)消化酶的活性,從而促進(jìn)動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收和生產(chǎn)性能的提高。研究發(fā)現(xiàn),Surfactin可顯著提高稚鱉腸道脂肪酶、蛋白酶的活性[6]和吉富羅非魚(yú)腸道脂肪酶、肝胰臟肝脂酶、脂蛋白脂酶的活性[23],石廣舉等[24]發(fā)現(xiàn),納豆芽孢桿菌抗菌脂肽能顯著提高凡納濱對(duì)蝦肝胰腺中AKP活性。另外,Bacillus subtilis抗菌脂肽還被發(fā)現(xiàn)能顯著降低吉富羅非魚(yú)血清中尿素氮(BUN)水平,而血清BUN水平降低代表著機(jī)體蛋白質(zhì)合成轉(zhuǎn)化效率增高,說(shuō)明抗菌脂肽具有促進(jìn)動(dòng)物對(duì)蛋白質(zhì)消化利用的作用[23];Surfactin被發(fā)現(xiàn)可以顯著增加吉富羅非魚(yú)腸道皺襞高度和腸道內(nèi)益生乳酸菌的數(shù)量,說(shuō)明其可以促進(jìn)腸道健康[27];Lee等[34]發(fā)現(xiàn),牛瘤胃內(nèi)生菌抗菌肽Bovicin Hc5能有效抑制瘤胃產(chǎn)甲烷細(xì)菌生長(zhǎng),128 AU/mL的添加量即可使甲烷產(chǎn)生量減少50%,從而顯著提高了牛的能量利用率;Rychlik等[35]則發(fā)現(xiàn),類細(xì)菌素抗菌肽BLIS能顯著減少瘤胃中氨的產(chǎn)生,從而有效提高牛的飼料利用率。

      3 結(jié)論與展望

      綜上,微生物抗菌肽被證實(shí)具有防控動(dòng)物疫病、增強(qiáng)機(jī)體免疫水平、提高機(jī)體抗氧化能力、提高生產(chǎn)性能等諸多生物學(xué)功能。隨著研究的不斷深入,微生物抗菌肽必將在動(dòng)物生產(chǎn)中發(fā)揮更大的作用,未來(lái)微生物抗菌肽研發(fā)具有重要的社會(huì)、環(huán)境效益和巨大的市場(chǎng)前景。

      目前,微生物抗菌肽研發(fā)雖然取得一定的進(jìn)展,但要真正大規(guī)模使用還存在諸多問(wèn)題,比如微生物抗菌肽的科學(xué)使用、有效性評(píng)價(jià)、規(guī)模化生產(chǎn)等,隨著這些問(wèn)題的逐步解決,微生物抗菌肽勢(shì)必會(huì)成為“后抗生素時(shí)代”保障畜禽產(chǎn)品安全的重要途徑之一。

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      Microorganism Antimicrobial Peptides and Their Application in Animal Production

      CHEN Liang*, LI Rui-jing, HUANG Liang, QIN Su-ya
      (College of Bioengineering, Henan University of Technology, Henan Zhengzhou 450001, China)

      In the post-antibiotic era, the exploitation of e ff ective antibiotic alternatives becomes one of global the hot spots. Antimicrobial peptides were considered as one of excellent antibiotic alternative. Recently the research and application of microorganism antimicrobial peptides in animal production were constantly deepening, and lots of research achievement were obtained. Therefore, the progress of microorganism antimicrobial peptides and these applications on the prevention and treatment of animal epidemic, the improvement of the immunity levels and antioxidant ability, and the improvement of animal growth performance were summarized in detail in order to provide reference for the exploration of microorganism antimicrobial peptides in animal production.

      Microorganism antimicrobial peptides; Antibiotic alternatives; Animal production; Growth performance; Application

      S816.7

      :A

      :10.19556/j.0258-7033.2017-02-015

      2016-09-17;

      2016-10-03

      國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(U1304332、3140154 3);河南省重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目(162102210043);河南工業(yè)大學(xué)科技創(chuàng)新人才培育計(jì)劃項(xiàng)目(2013CXRC07)

      陳亮(1982-),男,副教授,博士,碩士生導(dǎo)師,主要從事應(yīng)用微生物研究,E-mail: chen_liang.cl@163.com

      * 通訊作者

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