艾蒿水提物對(duì)肉仔雞血清細(xì)胞因子含量及小腸誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶mRNA表達(dá)量的影響

趙 飛 史彬林 陳宏燕 佟滿滿 孫登生 張鵬飛 金 曉 閆素梅

(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，呼和浩特010018)

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艾蒿水提物對(duì)肉仔雞血清細(xì)胞因子含量及小腸誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶mRNA表達(dá)量的影響

趙 飛 史彬林*陳宏燕 佟滿滿 孫登生 張鵬飛 金 曉 閆素梅

(內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，呼和浩特010018)

本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加不同水平的艾蒿水提物對(duì)肉仔雞血清細(xì)胞因子含量及小腸誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)mRNA表達(dá)量的影響。選取192只健康的1日齡愛拔益加(AA)肉仔雞，隨機(jī)分為4個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只雞。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加500、1 000、2 000 mg/kg艾蒿水提物的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)期42 d。結(jié)果表明：1)與對(duì)照組相比，21日齡時(shí)，2 000 mg/kg添加組的血清白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-2(IL-2)和白細(xì)胞介素-4(IL-4)的含量顯著升高(P<0.05)，500 mg/kg添加組的血清IL-4含量和1 000 mg/kg添加組的血清IL-2含量極顯著升高(P<0.01)；42日齡時(shí)，500 mg/kg添加組的血清IL-2含量顯著升高(P<0.05)。2)與對(duì)照組相比，21日齡時(shí)，500 mg/kg添加組的血清一氧化氮(NO)含量和iNOS活性及十二指腸、空腸和回腸的iNOSmRNA表達(dá)量差異不顯著(P>0.05)，1 000 mg/kg添加組的血清NO含量和回腸iNOSmRNA表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，2 000 mg/kg添加組的回腸iNOSmRNA表達(dá)量極顯著升高(P<0.01)；42日齡時(shí)，500、1 000和2 000 mg/kg添加組血清NO含量和iNOS活性及空腸iNOSmRNA表達(dá)量顯著或極顯著升高(P<0.05或P<0.01)。由此可見，飼糧中添加艾蒿水提物可以促進(jìn)肉仔雞免疫細(xì)胞因子的分泌和NO的生成，且與iNOSmRNA的表達(dá)增強(qiáng)有關(guān)。

艾蒿水提物；肉仔雞；細(xì)胞因子；誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶；mRNA

肉雞養(yǎng)殖是我國畜禽養(yǎng)殖業(yè)的重要組成部分，飼料營(yíng)養(yǎng)和生產(chǎn)環(huán)境是生產(chǎn)健康優(yōu)質(zhì)雞肉的重要保障。隨著肉雞養(yǎng)殖業(yè)規(guī)?；图s化的快速發(fā)展，飼用抗生素因其促生長(zhǎng)作用而一度受到養(yǎng)殖戶的喜愛。然而，抗生素在提高畜禽生長(zhǎng)性能的同時(shí)，也帶來了許多的負(fù)面效應(yīng)，如藥物殘留和病原微生物的耐藥性，還會(huì)導(dǎo)致環(huán)境污染等問題。因此，開發(fā)無毒、無殘留、可提高機(jī)體免疫力的新型綠色添加劑成為研究的焦點(diǎn)和新方向。

艾蒿水提物(Artemisiaargyiaqueous extract，AAE)是從天然中草藥艾蒿中提取的一類含有多糖等生物活性物質(zhì)的提取物[1]，具有抗菌、抗病毒、抗氧化和抗瘧疾等作用，且安全無毒、無耐藥性[2-3]。AAE作為飼料添加劑能改善動(dòng)物的生長(zhǎng)性能、屠宰性能和肉品質(zhì)[4]，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化和免疫功能[5]。尹美珍等[6]通過體外培養(yǎng)小鼠脾細(xì)胞和腹腔巨噬細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)艾葉多糖顯著提高了脾細(xì)胞分泌的腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細(xì)胞介素-2(IL-2)的含量。隆雪明[7]采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法發(fā)現(xiàn)艾葉揮發(fā)油能顯著提高小鼠脾臟IL-2和白細(xì)胞介素-4(IL-4)mRNA的表達(dá)量。體外試驗(yàn)結(jié)果表明，艾蒿(艾葉)的免疫增強(qiáng)作用可能與作為免疫調(diào)節(jié)因子的一氧化氮(NO)有關(guān)[11]。NO是誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)催化L-精氨酸生成，它可調(diào)節(jié)多種免疫活性介質(zhì)的合成，進(jìn)而影響機(jī)體的免疫功能[8]。NO對(duì)巨噬細(xì)胞、噬中性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞、肥大細(xì)胞和自然殺傷(NK)細(xì)胞等均具有調(diào)節(jié)作用[9]。iNOS在活化的巨噬細(xì)胞中最先被發(fā)現(xiàn)，且在巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞中均有表達(dá)[10]。劉晴雪等[11]研究發(fā)現(xiàn)，一定濃度的水溶性苜蓿多糖能夠促進(jìn)體外培養(yǎng)的肉仔雞外周血、胸腺、脾臟和法氏囊淋巴細(xì)胞的NO含量以及iNOS活性。薩仁娜[12]通過體內(nèi)、體外試驗(yàn)也表明，海帶巖藻聚糖可顯著提高肉雞腹腔巨噬細(xì)胞的NO含量和iNOS活性。而從已有的研究可以發(fā)現(xiàn)，關(guān)于AAE對(duì)肉仔雞細(xì)胞免疫功能及NO免疫途徑影響的研究鮮有報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加不同水平的AAE對(duì)肉仔雞血清中免疫細(xì)胞因子、NO含量和iNOS活性及小腸iNOSmRNA表達(dá)量的影響，來探討AAE對(duì)肉仔雞免疫功能的影響機(jī)制，從而為AAE在肉仔雞飼糧中的應(yīng)用提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

AAE：7月初，試驗(yàn)用艾蒿在和林格爾縣大紅城鄉(xiāng)境內(nèi)采集，將其在室溫下陰干后切成小段，加適量蒸餾水煮沸30 min，共3次(加水比例分別為1∶20、1∶16、1∶12)，然后經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，并用凍干機(jī)凍干成粉，每千克艾蒿得灰黑色提取物150 g左右。試驗(yàn)所用劑量均以風(fēng)干粉劑計(jì)算。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼糧組成

試驗(yàn)采用單因子隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取體重相近的健康1日齡愛拔益加(AA)肉仔雞192只，隨機(jī)分為4個(gè)組，每個(gè)組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只雞(公母各占1/2)。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加500、1 000、2 000 mg/kg AAE的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)期42 d，分為前期(1～3周齡)和后期(4～6周齡)，各21 d。試驗(yàn)基礎(chǔ)飼糧營(yíng)養(yǎng)水平參照我國《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。各組飼糧營(yíng)養(yǎng)水平一致。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供 The premix provided the following per kg of diets：VA 6 141.5 IU，VD31 789.2 IU，VE 7.99 mg，VK 1.82 mg，VB10.65 mg，VB23.93 mg，VB62.08 mg，VB120.01 mg，煙酸 nicotinic acid 18.06 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 6.65 mg，葉酸 folic acid 0.59 mg，生物素 biotin 0.07 mg，膽堿 choline chloride 332.28 mg，F(xiàn)e 60.91 mg，Cu 6.01 mg，Zn 65.75 mg，Mn 62.3 mg，I 0.9 mg，Se 0.21 mg。

2)粗蛋白質(zhì)為實(shí)測(cè)值，其余均為計(jì)算值。CP was a measured value, while the others were all calculated values.

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物生產(chǎn)雞舍進(jìn)行，試驗(yàn)前對(duì)雞舍及周邊環(huán)境和試驗(yàn)用具進(jìn)行嚴(yán)格的清洗消毒。試驗(yàn)雞進(jìn)行籠養(yǎng)，試驗(yàn)期間控制溫度、濕度、光照和通風(fēng)，具體方法參照《AA肉雞飼養(yǎng)管理手冊(cè)》。同時(shí)，免疫程序如下：1日齡對(duì)試驗(yàn)雞進(jìn)行新城疫滴鼻點(diǎn)眼首免；7日齡對(duì)試驗(yàn)雞進(jìn)行新城疫+傳染性支氣管炎弱毒苗滴鼻點(diǎn)眼免疫；14日齡對(duì)試驗(yàn)雞進(jìn)行法氏囊飲水免疫。此外，試驗(yàn)是按照內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物保護(hù)和使用委員會(huì)的指導(dǎo)原則進(jìn)行的。

1.4 樣品采集

在試驗(yàn)第21、42天，每個(gè)重復(fù)分別選取2只體重相近的健康雞。頸靜脈采血，室溫靜置1 h，3 000 r/min離心10 min，將上層血清分裝入1 mL離心管中，于-20 ℃冰柜中冷凍保存，用于血清中白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、IL-2、IL-4、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、干擾素-γ(IFN-γ)、TNF-α、NO含量和iNOS活性的測(cè)定；然后宰殺，于冰浴上迅速剪取小腸(十二指腸、空腸和回腸)組織，用生理鹽水沖洗干凈，分裝于1.5 mL EP管中，迅速投入液氮，冷凍后轉(zhuǎn)入-80 ℃低溫冰箱凍存，用于總RNA的提取。

1.5 測(cè)試指標(biāo)與方法

1.5.1 血清中細(xì)胞因子含量的測(cè)定

血清IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α含量采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELLSA)試劑盒測(cè)定，測(cè)定儀器為全功能酶標(biāo)儀(美國伯騰儀器有限公司)，試劑盒由碧迪醫(yī)療器械(上海)有限公司提供。

1.5.2 血清中NO含量和iNOS活性的測(cè)定

血清NO含量和iNOS活性采用試劑盒法測(cè)定，測(cè)定儀器為全功能酶標(biāo)儀(美國伯騰儀器有限公司)，試劑盒由南京建成生物生物工程研究所提供。

1.5.3 肝臟、脾臟和小腸組織中iNOSmRNA表達(dá)量的測(cè)定

1.5.3.1 總RNA提取及反轉(zhuǎn)錄

小腸總RNA提取按照Trizol總RNA提取試劑(Takara，日本)說明書進(jìn)行。RNA的濃度和純度用2%凝膠電泳和全功能酶標(biāo)儀檢測(cè)，所有樣品吸光度比值(260/280 nm)在1.8～2.1之間。然后，按照Prime ScriptRTMaster Mix試劑盒要求，將RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA于-80 ℃保存，反應(yīng)體系為20 μL。

1.5.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

根據(jù)GenBank中雞iNOS和β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)基因序列，由北京六合華大基因科技有限公司合成。采用SYBR Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增的檢測(cè)。PCR反應(yīng)體系為20 μL：SYBR Premix Ex TaqTMⅡ 10 μL，上、下游引物各0.4 μL，cDNA模板2 μL和雙蒸水7.2 μL。選用β-肌動(dòng)蛋白基因作為內(nèi)參。引物序列及參數(shù)見表2。實(shí)時(shí)定量PCR的反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，退火溫度30 s，72 ℃ 20 s，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)反應(yīng)；72 ℃ 7 min；熔解曲線程序?yàn)?0～95 ℃，監(jiān)測(cè)系統(tǒng)每0.5 ℃讀取熒光值1次，自動(dòng)生成熔解曲線。反應(yīng)結(jié)束后，PCR產(chǎn)物于-80 ℃保存?zhèn)溆?。采?-ΔΔCt法進(jìn)行基因相對(duì)定量分析[13]。

表2 引物序列及參數(shù)

F=上游引物，R=下游引物。

F=forward primer; R=reverse primer.

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用SAS 2000軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。方差分析使用單因素方差分析(one-way ANOVA)，多重比較采用Duncan氏法，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 AAE對(duì)肉仔雞血清中細(xì)胞因子含量的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，21日齡時(shí)，500 mg/kg添加組血清IL-2含量顯著升高(P<0.05)，且血清IL-4含量極顯著升高(P<0.01)；1 000 mg/kg添加組血清IL-2含量極顯著升高(P<0.01)，且血清IL-4含量顯著升高(P<0.05)；2 000 mg/kg添加組血清IL-1β、IL-2和IL-4含量均顯著升高(P<0.05)；42日齡時(shí)，500 mg/kg添加組血清IL-2含量顯著升高(P<0.05)。

表3 AAE對(duì)肉仔雞血清中細(xì)胞因子含量的影響

同行數(shù)據(jù)無肩標(biāo)字母或肩標(biāo)含相同字母者表示差異不顯著(P>0.05)，肩標(biāo)為相鄰字母者表示差異顯著(P<0.05)，肩標(biāo)為相間字母者表示差異極顯著(P<0.01)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same superscript letters mean no significant difference (P>0.05), while adjacent different letters mean significant difference (P<0.05), and the interphase letters mean extremely significant difference (P<0.01). The same as below.

2.2 AAE對(duì)肉仔雞血清NO含量及iNOS活性的影響

由表4可知，與對(duì)照組相比，21日齡時(shí)，500和2 000 mg/kg添加組血清NO含量和iNOS活性差異不顯著(P>0.05)，1 000 mg/kg添加組血清NO含量顯著升高(P<0.05)；42日齡時(shí)，500 mg/kg添加組的血清NO含量顯著升高(P<0.05)，1 000和2 000 mg/kg添加組的血清NO含量極顯著升高(P<0.01)，500和1 000 mg/kg添加組的血清iNOS活性顯著升高(P<0.05)，2 000 mg/kg添加組的血清iNOS活性極顯著升高(P<0.01)。

表4 AAE對(duì)肉仔雞血清NO含量及iNOS活性的影響

2.3 AAE對(duì)肉仔雞小腸iNOSmRNA表達(dá)量的影響

由表5可知，與對(duì)照組相比，21日齡時(shí)，500 mg/kg添加組十二指腸、空腸和回腸的iNOSmRNA表達(dá)量差異不顯著(P>0.05)，1 000 mg/kg添加組回腸iNOSmRNA表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，2 000 mg/kg添加組十二指腸iNOSmRNA表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，2 000 mg/kg添加組回腸iNOSmRNA表達(dá)量極顯著升高(P<0.01)；42日齡時(shí)，500、1 000和2 000 mg/kg添加組空腸iNOSmRNA表達(dá)量顯著升高(P<0.05)，而十二指腸和回腸的iNOSmRNA表達(dá)量差異不顯著(P>0.05)。

表5 AAE對(duì)肉仔雞小腸iNOS mRNA表達(dá)量的影響

3 討 論

3.1 AAE對(duì)肉仔雞血清中細(xì)胞因子含量的影響

細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞(如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等)和某些非免疫細(xì)胞(內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等)經(jīng)刺激而合成、分泌的一類生物活性物質(zhì)，可以作為細(xì)胞間信號(hào)傳遞分子介導(dǎo)和調(diào)節(jié)慢性炎癥反應(yīng)[14]。目前研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ和TNF-α均有不同程度的佐劑作用[15-16]。在免疫反應(yīng)過程中，IL-1是由活化的單核/巨噬細(xì)胞分泌的一種能刺激T淋巴細(xì)胞分泌IL-2的多功能細(xì)胞因子，并可協(xié)同IL-2促進(jìn)淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)的產(chǎn)生[8]。IL-2由活化的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，因此又稱T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，是具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子。IL-4是Th2細(xì)胞亞群產(chǎn)生的具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，能增強(qiáng)免疫球蛋白E(IgE)介導(dǎo)的體液免疫并具有殺傷細(xì)胞的能力[17]，但可被IFN-γ拮抗[18]。IL-6由Th2細(xì)胞亞群分泌，對(duì)B細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化起關(guān)鍵作用，又被稱為B細(xì)胞生長(zhǎng)因子。IFN-γ主要介導(dǎo)Th1型反應(yīng)，促進(jìn)IL-2的分泌和釋放以及T細(xì)胞的分化增殖[19]。TNF-α是活化的巨噬細(xì)胞分泌的另一細(xì)胞因子，對(duì)抗腫瘤、免疫和炎癥反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞都有調(diào)節(jié)作用[8]。本試驗(yàn)測(cè)定了肉仔雞血清IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ和TNF-α含量，結(jié)果顯示，在試驗(yàn)21和42日齡，添加AAE組的IL-1β和IL-2含量均高于對(duì)照組，雖然AAE添加組的IL-6和TNF-α的含量與對(duì)照組相比差異不顯著，但也有一定程度提高，與此同時(shí)，IL-4與IFN-γ表現(xiàn)出一定的拮抗關(guān)系。這與尹美珍等[6]、隆雪明[7]和Lan[20]等的研究結(jié)果基本一致。這也表明在飼糧中添加AAE可促進(jìn)肉仔雞免疫細(xì)胞因子的分泌，刺激機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，究其原因，可能是由于AAE中含有的多糖可以激活T/B淋巴細(xì)胞[21]、巨噬細(xì)胞[22]、NK細(xì)胞[23]等免疫細(xì)胞以及補(bǔ)體系統(tǒng)[24]等；也有可能是因?yàn)槎嗵悄軌蚪閷?dǎo)細(xì)胞信號(hào)通路而調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)基因的表達(dá)[25]，但其確切的機(jī)制還需更深入的研究。

3.2 AAE對(duì)肉仔雞血清NO含量、iNOS活性和小腸iNOSmRNA表達(dá)量的影響

NO是由巨噬細(xì)胞分泌并存在于動(dòng)物機(jī)體細(xì)胞中的另一種具有生物活性的細(xì)胞信使因子。它是L-精氨酸經(jīng)NO合成酶(nitrick oxide synthases，NOS)催化而成的一種短期生物活性自由基，即可作用于自身，也能擴(kuò)散到鄰近細(xì)胞并結(jié)合到轉(zhuǎn)錄因子、蛋白激酶等受體上而發(fā)揮一系列免疫調(diào)節(jié)作用。iNOS為非鈣離子(Ca2+)依賴型，一些外來刺激如干擾素、細(xì)菌、病毒以及TNF-α、IL-1、IL-6等都會(huì)激活iNOS。在與NO受體結(jié)合后會(huì)觸發(fā)蛋白激酶的磷酸化，最終使編碼iNOS的mRNA增多而合成大量的“誘導(dǎo)型”NO[26]。

已有研究表明，多糖作為免疫增強(qiáng)劑和促進(jìn)劑，能刺激巨噬細(xì)胞NO生成和iNOSmRNA的表達(dá)[27]，且主要采用體外法進(jìn)行。Lee等[28]發(fā)現(xiàn)茯苓多糖能激活核轉(zhuǎn)錄因子-kB(NF-kB)而促進(jìn)iNOSmRNA的表達(dá)及NO的生成。張莘莘等[29]研究不同濃度的黑林芝多糖對(duì)正常和脂多糖(LPS)活化的腹腔巨噬細(xì)胞時(shí)表明，多糖有效地促進(jìn)了正常巨噬細(xì)胞分泌NO、TNF-α和IL-1β，并呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系；與此同時(shí)，多糖又不同程度地抑制了LPS活化巨噬細(xì)胞對(duì)NO、TNF-α和IL-1β的過量分泌。楊興斌等[30]也發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸多糖能促進(jìn)巨噬細(xì)胞釋放NO、TNF-α及活性氧(ROS)等細(xì)胞效應(yīng)分子。許金霞[31]的研究結(jié)果也表明，枸杞多糖能促進(jìn)巨噬細(xì)胞NO生成和iNOSmRNA的表達(dá)。然而，僅有極少數(shù)資料表明艾葉多糖能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞生成NO的能力，并在試驗(yàn)劑量范圍內(nèi)有劑量依賴效應(yīng)[32]。

目前，關(guān)于AAE對(duì)肉仔雞iNOSmRNA表達(dá)量及其活性影響的報(bào)道還尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AAE能提高肉仔雞血清NO含量和iNOS的活性，提高小腸iNOSmRNA表達(dá)量，并且，從整個(gè)試驗(yàn)期發(fā)現(xiàn)，1 000和2 000 mg/kg添加組較好地提高了iNOSmRNA表達(dá)量及其活性。由此結(jié)果可以推測(cè)，AAE中含有的多糖等生物活性物質(zhì)在一定程度上能夠調(diào)控iNOS的合成和iNOSmRNA的表達(dá)，進(jìn)而影響NO的分泌，而其具體的原因和作用機(jī)制仍需進(jìn)一步探究。

4 結(jié) 論

① 飼糧中添加1 000 mg/kg的AAE可較好地提高肉仔雞21日齡時(shí)血清IL-1β、IL-2和IL-4含量；42日齡時(shí)，飼糧中添加500 mg/kg的AAE顯著提高了血清IL-2的含量。

② 飼糧中添加1 000和2 000 mg/kg的AAE能夠提高肉仔雞血清NO含量和iNOS活性，并促進(jìn)小腸iNOSmRNA表達(dá)。

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*Corresponding author, professor, E-mail： shibinlin@yeah.net

(責(zé)任編輯 武海龍)

Effects of Artemisia argyi Aqueous Extract on Serum Cytokines Contents and Small Intestine Inducible Nitric Oxide Synthase mRNA Expression Level of Broilers

ZHAO Fei SHI Binlin*CHEN Hongyan TONG Manman SUN Dengsheng ZHANG Pengfei JIN Xiao YAN Sumei

(CollegeofAnimalScienceandTechnology,InnerMongoliaAgriculturalUniversity,Huhhot010018,China)

This experiment was conducted to study the effects of dietary different supplementation ofArtemisiaargyiaqueous extract (AAE) on serum cytokines contents and small intestine inducible nitric oxide synthase (iNOS) mRNA expression level of broilers. A total of 192 one-day-old Arbor Acre (AA) broilers were randomly divided into four groups with six replicates per group and eight chickens per replicate. Broilers in the control group were fed a basal diet, and the others in the experimental groups were fed the basal diet supplemented with 500, 1 000 and 2 000 mg/kg AAE, respectively. The experiment lasted for 42 days. The results showed as follows: 1) compared with the control group, at 21 days of age, the contents of interleukin-1β (IL-1β), interleukin-2 (IL-2) and interleukin-4 (IL-4) in serum of 2 000 mg/kg supplementation group were significantly improved (P<0.05), and the serum IL-4 content of 500 mg/kg supplementation group and the serum IL-2 content of 1 000 mg/kg supplementation group were significantly improved (P<0.01); at 42 days of age, the serum IL-2 content of 500 mg/kg supplementation group was significantly increased (P<0.05). 2) Compared with the control group, at 21 days of age, the nitric oxide (NO) content and iNOS activity in serum andiNOSmRNA expression level in duodenum, jejunum and ileum of 500 mg/kg supplementation group had no significant difference (P>0.05); the serum NO content and the ileumiNOSmRNA expression level of 1 000 mg/kg supplementation group were significantly increased (P<0.05); the ileumiNOSmRNA expression level of 2 000 mg/kg supplementation group was significantly increased (P<0.01); at 42 days of age, the NO content and iNOS activity in serum and the jejunumiNOSmRNA expression level of 500, 1 000 and 2 000 mg/kg supplementation groups were significantly improved (P<0.05 orP<0.01). The results suggest that dietary supplementation of AAE can improve the secretion of cytokines and the production of NO, and it is related to the expression enhancement ofiNOSmRNA.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(1)：290-297]

Artemisiaargyiaqueous extract; broilers; cytokines; inducible nitric oxide synthase; mRNA

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.01.033

2016-07-18

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31660674)

趙 飛(1989—)，男，山西河曲人，碩士研究生，研究方向?yàn)閯?dòng)物環(huán)境與營(yíng)養(yǎng)。E-mail： 15124706840@163.com

*通信作者：史彬林，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail： shibinlin@yeah.net

S831

A

1006-267X(2017)01-0290-08