吡啶甲酸鉻對產(chǎn)蛋雞的生物安全性評價

王 鋼 孫效名 廖秀冬 張麗陽 呂 林* 蘭云賢** 羅緒剛

(1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)，重慶462460；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所礦物元素營養(yǎng)研究室，北京100193)

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吡啶甲酸鉻對產(chǎn)蛋雞的生物安全性評價

王 鋼1孫效名2*廖秀冬2張麗陽2呂 林2**蘭云賢1**羅緒剛2

(1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)，重慶462460；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所礦物元素營養(yǎng)研究室，北京100193)

本試驗旨在研究飼糧添加不同水平吡啶甲酸鉻對北京紅商品產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋性能、血液生理生化指標(biāo)、器官發(fā)育和主要臟器組織病理學(xué)變化的影響，進而評價吡啶甲酸鉻對產(chǎn)蛋雞的生物安全性。試驗采用單因子完全隨機設(shè)計，選用360只23周齡北京紅商品產(chǎn)蛋雞，按產(chǎn)蛋率和體重一致的原則隨機分為4個組，每個組6個重復(fù)，每個重復(fù)15只雞。各組分別在玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧中添加0、0.6、4.0和6.0 mg/kg(以鉻計)的吡啶甲酸鉻。預(yù)試期21 d，正試期70 d。結(jié)果表明：1)飼糧鉻添加水平對試驗全期產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋性能和器官指數(shù)無顯著影響(P>0.05)。2)飼糧鉻添加水平除顯著提高試驗第35天產(chǎn)蛋雞血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶活性(P<0.05)外，對其他血漿生化指標(biāo)和血液常規(guī)生理指標(biāo)均無顯著影響(P>0.05)。3)飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞主要內(nèi)臟器官的發(fā)育均無明顯影響，同時均未觀測到產(chǎn)蛋雞的心臟、肝臟、腎臟、卵巢和輸卵管組織出現(xiàn)明顯的病理學(xué)變化。以上結(jié)果表明，產(chǎn)蛋雞玉米-豆粕型飼糧中吡啶甲酸鉻的推薦添加水平為0.6 mg/kg時，具有10倍的安全系數(shù)，即飼糧中以吡啶甲酸鉻形式添加6.0 mg/kg鉻對產(chǎn)蛋雞是安全的。

吡啶甲酸鉻；生物安全評價；產(chǎn)蛋雞

鉻(chromium,Cr)是動物必需的微量元素之一，其生理作用日益受到研究者的重視。鉻在體內(nèi)的生物活性形式有3種：葡萄糖耐受因子(glucose tolerance factor, GTF)、吡啶甲酸鉻(chromium picolinate, Cr-Pic)和低分子質(zhì)量鉻結(jié)合物(low molecular weight chromium-binding substance, LMWCr)[1]。Cr-Pic作為有機三價鉻，對GTF的生物活性有重要意義，并被作為營養(yǎng)性添加劑而廣泛應(yīng)用于食品和畜禽生產(chǎn)。一些研究表明，補充適宜濃度的Cr-Pic可以促進畜禽生長，改善胴體品質(zhì)，緩解環(huán)境應(yīng)激，增強畜禽自身抵抗力，并可以降低血液葡萄糖和脂肪水平，緩解糖代謝和脂肪代謝紊亂的有關(guān)癥狀[2-6]。然而，目前對Cr-Pic安全性的研究已得到一些數(shù)據(jù)，但結(jié)論不盡相同。如Anderson等[7]向小鼠飼糧中添加100 mg/kg的Cr-Pic，飼喂24周后發(fā)現(xiàn)Cr-Pic具有急性毒性。超量添加Cr-Pic引起細胞毒性和基因毒性也有報道。Cr-Pic細胞毒性主要體現(xiàn)在線粒體損傷和細胞凋亡上。如Manygoats等[8]研究表明，添加1.0 mmol/L的Cr-Pic(125倍于適宜量)可導(dǎo)致線粒體損傷和細胞凋亡。Cr-Pic基因毒性主要表現(xiàn)在DNA堿基氧化、DNA鏈斷裂和基因突變上。Bagchi等[9]研究發(fā)現(xiàn)，50 mg/mL(120 mmol/L)的Cr-Pic處理巨噬細胞J774A.1 24 h后，造成DNA鏈斷裂，細胞中存在DNA碎片。但是，目前關(guān)于Cr-Pic對蛋雞的飼用安全性評價研究尚未見報道。本試驗通過測定蛋雞產(chǎn)蛋性能、血液生理生化指標(biāo)、器官發(fā)育和主要臟器組織病理學(xué)變化，以評價玉米-豆粕型飼糧添加Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞的的生物安全性，為確定Cr-Pic在蛋雞飼糧中最高添加水平的安全系數(shù)提供科學(xué)依據(jù)，以確保其在蛋雞生產(chǎn)中的安全應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計與處理

試驗采用單因子完全隨機設(shè)計。根據(jù)國內(nèi)外鉻在產(chǎn)蛋雞上的飼養(yǎng)試驗數(shù)據(jù)結(jié)果，即常規(guī)飼養(yǎng)條件下鉻發(fā)揮作用的有效劑量為0.4～1.6 mg/kg[10-11]，將0.4 mg/kg看作是產(chǎn)蛋雞飼糧鉻的最低有效推薦量，以及根據(jù)農(nóng)業(yè)部頒布的《飼料和飼料添加劑畜禽靶動物耐受性評價試驗指南(試行)》中的有關(guān)規(guī)定，設(shè)置4個組，即不添加鉻的對照組、鉻使用劑量組(為最低有效推薦量的1.5倍)及分別為最低有效推薦量和使用劑量組的10倍的2個多倍劑量添加組，即Cr-Pic的添加水平分別為0、0.6、4.0、6.0 mg/kg(以鉻計)。

1.2 試驗動物與飼糧

選用20周齡的北京紅商品開產(chǎn)蛋雞400只，按產(chǎn)蛋率和體重相近的原則從中選取產(chǎn)蛋雞360只，隨機分為4個組，每個組6個重復(fù)，每個重復(fù)15只雞。其中每個組90只雞，分6個重復(fù)籠飼養(yǎng)，每個重復(fù)籠15只雞(每個重復(fù)籠由5個小單元籠組成，每個小單元籠3只雞)，然后開始預(yù)飼21 d。第23周齡末產(chǎn)蛋率已達到高峰期(產(chǎn)蛋率>85%)，按產(chǎn)蛋率和體重相近的原則對各組產(chǎn)蛋雞進行微調(diào)，即進入正式試驗，為期70 d，到33周齡結(jié)束。飼養(yǎng)管理和常規(guī)免疫按《北京紅雞父母代、商品代飼養(yǎng)管理手冊》進行。雞只自由采食和飲水。試驗期每天觀察并記錄臨床癥狀、發(fā)病和死亡雞只，如有雞只死亡，解剖觀察病理學(xué)變化。分別于試驗第35天(28周齡)和第70天(33周齡)，雞只禁食過夜后，以小單元籠為單位稱雞空腹體重。

參照NRC(1994)[12]家禽營養(yǎng)需要量中推薦的褐殼蛋雞飼糧營養(yǎng)水平配制玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧(表1)。按試驗設(shè)計共配制3種試驗飼糧，Cr-Pic在拌入基礎(chǔ)飼糧前用玉米淀粉稀釋。Cr-Pic由四川尚元公司提供，實測鉻含量為12.24%。飼糧以粉料形式喂給。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(飼喂基礎(chǔ))

1)微量成分為每千克飼糧提供 Micronutrients provided the following per kg of the diet：VA 14 711 IU，VD31 409 IU，VE 16 IU，VB11.1 mg，VB28.1 mg，VB64 mg，VB122 mg，葉酸 folic acid 1 mg，泛酸 pantothenic acid 11.3 mg，煙酸 nicotinic acid 60 mg，生物素 biotin 10 mg，Mn (as manganese sulfate) 65 mg，Zn (as zinc sulfate) 55 mg，F(xiàn)e (as ferrous sulfate) 40 mg，Cu (as copper sulfate) 6 mg，I (as potassium iodide) 1 mg，Se (as sodium selenite) 0.3 mg。

2)粗蛋白質(zhì)、鈣和鉻為實測值，其余均為計算值。CP, Ca and Cr were analyzed values, while the others were calculated values.

1.3 樣品采集與制備

配合試驗飼糧時現(xiàn)場采樣，粉碎過200目篩后置于自封袋中低溫干燥保存，以備分析試驗飼糧中粗蛋白質(zhì)、鈣和鉻含量。分別于試驗中間的第35天(28周齡)和試驗結(jié)束的第70天(33周齡)，所有雞只禁食12 h而不禁水，于第2天08:00以小單元籠為單位稱重，從每個重復(fù)籠中按籠平均體重選取2只雞，分別個體稱重后，翅靜脈采血3～4 mL。其中，取一份全血(肝素鈉抗凝)測血液常規(guī)生理指標(biāo)；取另一份全血離心(3 000 r/min)獲得血漿，于-20 ℃保存，以備分析血漿生化指標(biāo)。試驗各重復(fù)籠2只雞的全血或血漿合為1個分析樣品。

于第70天(33周齡)試驗結(jié)束采血后，每個重復(fù)籠取1只雞屠宰，迅速剖開腹腔，取出心臟、肝臟、腎臟、卵巢、輸卵管，分別稱重，計算器官指數(shù)，并觀察記錄各個臟器的形態(tài)變化。

臟器指數(shù)(%)=(器官重量/活體體重)×100。

各器官稱重后，從0、4.0和6.0 mg/kg鉻組每個重復(fù)籠中各取1只雞的部分心臟、肝臟、腎臟、卵巢和輸卵管子宮部，放入裝有4%福爾馬林溶液的棕色瓶中固定，待做石蠟切片，以備觀測其組織病理學(xué)變化。

1.4 樣品分析

1.4.1 粗蛋白質(zhì)含量

用凱氏定氮法[13]測定飼料原料及飼糧中粗蛋白質(zhì)含量。

1.4.2 鈣含量

用全譜直讀型等離子體發(fā)射光譜儀(IRIS Intrepid Ⅱ,Thermal Jarrell Ash, Waltham, MA, USA)測定飼料原料和飼糧中鈣含量。

1.4.3 鉻含量

用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)聯(lián)用法[14]測定Cr-Pic及各組飼糧中的鉻含量。

1.4.4 血液指標(biāo)

用全自動血液分析儀(Sysmtx XE-2100)測定全血紅細胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)含量和紅細胞壓積(HCT)；用Unicel DxC 800 Synchron全自動生化分析系統(tǒng)(Beckman coulter，USA)測定血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)和堿性磷酸酶(AKP)活性及白蛋白(TP)、總蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TCHO)、尿素氮(UN)和肌酐(CRE)的含量。

1.4.5 組織病理學(xué)檢測

取心臟、肝臟、腎臟、卵巢和輸卵管子宮部做石蠟切片，進行組織病理形態(tài)學(xué)觀察。石蠟切片的制作過程包括：取材、固定、沖洗、脫水(70%酒精4 h→80%酒精4 h→90%酒精4 h→100%酒精1 h)、透明(無水乙醇與二甲苯溶液1∶1體積15 min→二甲苯15 min)、浸蠟、包埋、切片、粘片、烤片、蘇木精-伊紅染色(脫蠟：將烤干的切片放入二甲苯Ⅰ 10 min→二甲苯 Ⅱ10 min；復(fù)水：將脫蠟后的切片移入100%酒精5 min→90%酒精5 min→80%酒精5 min→70%酒精5 min→蒸餾水5 min)及顯微鏡下觀察，并用圖像采集系統(tǒng)采集相應(yīng)組織圖像。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

所有數(shù)據(jù)均用SAS 9.0[15]軟件中的一般線性模型(GLM)程序進行方差分析，差異顯著者，以最小顯著差異(LSD)法比較平均值間的差異顯著性。以P<0.05作為本研究中各項數(shù)據(jù)的差異顯著性檢驗水平。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

由表2可知，飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋高峰全期產(chǎn)蛋率、平均蛋重、日產(chǎn)蛋重、軟破畸形蛋率、平均日采食量及料蛋比均無顯著影響(P>0.05)。整個試驗期間，各組無雞只出現(xiàn)毒性反應(yīng)和死亡。

以上結(jié)果表明，在本試驗條件下，飼糧添加各水平Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋性能無明顯影響。

2.2 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞血液常規(guī)生理指標(biāo)的影響

由表3可知，飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞28和33周齡血液紅細胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細胞積壓均無顯著影響(P>0.05)。

以上結(jié)果表明，飼糧添加鉻水平Cr-Pic不影響產(chǎn)蛋雞的主要血液常規(guī)生理指標(biāo)。

2.3 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞器官指數(shù)的影響

由表4可知，飼糧鉻添加水平對試驗第70天產(chǎn)蛋雞心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)、卵巢指數(shù)和輸卵管指數(shù)均無顯著影響(P>0.05)，且未觀測到以上臟器外觀任何異常變化。

以上結(jié)果表明，在本次試驗條件下，飼糧添加各水平Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞主要內(nèi)臟器官的發(fā)育均無不良影響。

表2 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。表3、表4同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as Table 3 and Table 4.

表3 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞血液常規(guī)生理指標(biāo)的影響

表4 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞器官指數(shù)的影響

2.4 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞血漿生化指標(biāo)的影響

由表5可知，飼糧鉻添加水平對試驗第35天產(chǎn)蛋雞血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶活性有顯著影響(P<0.05)，對其他血漿生化指標(biāo)均無顯著影響(P>0.05)。與對照組相比，飼糧添加0.6、4.0和6.0 mg/kg Cr-Pic顯著提高了試驗第35天產(chǎn)蛋雞血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶活性(P<0.05)，但各添加組間無顯著差異(P>0.05)。

以上結(jié)果表明，飼糧添加各水平Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞大多數(shù)血漿生化指標(biāo)無顯著影響。

2.5 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞主要臟器組織病理學(xué)的影響

由圖1可見，飼糧鉻添加組產(chǎn)蛋雞心臟未見組織病理學(xué)變化。各組均表現(xiàn)為心臟被膜光滑；心肌細胞排列緊密、整齊，細胞染色均勻；潤盤及橫紋間質(zhì)無炎性細胞浸潤；細胞核呈圓形或橢圓形，位于肌細胞的中央。

圖1 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞心臟組織病理變化的影響

由圖2可見，飼糧鉻添加組產(chǎn)蛋雞肝臟未見組織病理學(xué)變化。各組均表現(xiàn)為肝小葉呈多角棱柱體，結(jié)構(gòu)完整；肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，界限清晰，呈均勻的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；肝索和肝竇結(jié)構(gòu)完整清晰。

圖2 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞肝臟組織病理變化的影響

由圖3可見，飼糧鉻添加組產(chǎn)蛋雞腎臟未見組織病理學(xué)變化。各組均表現(xiàn)為腎臟皮質(zhì)部腎小球體積適中，結(jié)構(gòu)正常，囊腔清晰；腎小管上皮細胞胞漿均質(zhì)紅染；髓質(zhì)小體的集合管上皮細胞胞漿較均質(zhì)。

圖3 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞腎臟組織病理變化的影響

由圖4可見，飼糧鉻添加組產(chǎn)蛋雞卵巢未見組織病理學(xué)變化。各組均表現(xiàn)為卵巢組織層次分明、結(jié)構(gòu)完整，間質(zhì)細胞結(jié)構(gòu)正常，在間質(zhì)細胞間有不同發(fā)育階段的生長卵泡。

圖4 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞卵巢組織病理變化的影響

由圖5可見，飼糧鉻添加組產(chǎn)蛋雞輸卵管未見組織病理學(xué)變化。各組黏膜細胞、肌層細胞以及漿膜層細胞均較為完整。

以上結(jié)果表明，在本次試驗條件下，飼糧鉻添加組產(chǎn)蛋雞主要臟器均未觀察到其顯微結(jié)構(gòu)和形態(tài)的組織病理學(xué)變化。

圖5 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞輸卵管子宮部組織病理變化的影響

3 討 論

3.1 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

本試驗期間，飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋率、平均日采食量以及料蛋比等指標(biāo)均無顯著影響。從目前國內(nèi)外的研究結(jié)果來看，飼糧鉻添加水平對蛋雞產(chǎn)蛋性能影響的研究結(jié)果不一致。汪莉等[16]在飼糧中添加0、0.1、0.3、0.6和1.0 mg/kg的鉻(煙酸鉻)時發(fā)現(xiàn)，添加1.0 mg/kg的鉻可提高蛋雞產(chǎn)蛋率7%和平均日采食量6.61%，提高凈蛋白利用率12.93%。蘇祥等[14]等在玉米-豆粕基礎(chǔ)飼糧(含鉻0.25 mg/kg)中以Cr-Pic形式添加0.4、0.8、1.6和3.2 mg/kg鉻，結(jié)果表明，0.4～1.6 mg/kg鉻水平降低料蛋比和軟破蛋率，而3.2 mg/kg鉻水平則顯著提高料蛋比和軟破蛋破蛋率。Kim等[17]發(fā)現(xiàn)，在高蛋白質(zhì)水平下(16%)，添加0.8 mg/kg鉻(Cr-Pic)可顯著提高36周齡褐殼蛋雞產(chǎn)蛋率和產(chǎn)蛋量，這提示適宜的飼糧鉻水平可改善提高產(chǎn)蛋率和產(chǎn)蛋量，可能是禽類與哺乳動物一樣也存在下丘腦-垂體-性腺軸，加鉻后通過此性腺軸提高禽類的繁殖性能。Uyanik等[18]在基礎(chǔ)飼糧中添加高劑量(20 mg/kg)三氯化鉻，結(jié)果顯示，試驗組采食量下降，料蛋比升高了4.28%，但對產(chǎn)蛋雞體重、蛋重和全期產(chǎn)蛋量均無影響。飼糧添加鉻對產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響尚無一致結(jié)果，可能與產(chǎn)蛋雞品種、添加劑量及飼喂條件有關(guān)。本試驗結(jié)果表明，飼糧添加Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋性能沒有產(chǎn)生顯著影響，同時，均未造成明顯的毒性反應(yīng)。

3.2 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞血液常規(guī)指標(biāo)的影響

血液常規(guī)指標(biāo)是衡量動物機體營養(yǎng)平衡的一個重要指標(biāo)，是評價動物本身健康狀態(tài)的重要指標(biāo)。正常情況下，健康動物血液中的某些化學(xué)成分往往保持動態(tài)平衡，只有當(dāng)出現(xiàn)代謝機能障礙或組織器官發(fā)生病變時，血液成分才會出現(xiàn)相應(yīng)的改變。本研究結(jié)果表明，飼糧中添加Cr-Pic不影響血液中紅細胞數(shù)、血紅蛋白含量和紅細胞積壓，這表明飼糧中添加Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞血液生理指標(biāo)無明顯影響。

3.3 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞血漿生化指標(biāo)的影響

血清總蛋白和白蛋白的含量在一定程度上可以反映機體蛋白質(zhì)的合成和代謝狀況[19]。尿素氮是機體蛋白質(zhì)分解代謝的主要終末產(chǎn)物，其在一定程度上可以反映機體對蛋白質(zhì)的利用程度。研究報道，血清尿素氮含量與動物蛋白質(zhì)代謝和氨基酸平衡有關(guān)，并在一定程度上可以反映動物體內(nèi)蛋白質(zhì)的代謝和飼糧氨基酸的平衡情況[20]。本試驗中，飼糧添加Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞血漿總蛋白、白蛋白和尿素氮含量均無顯著影響，說明Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞蛋白質(zhì)代謝無任何不良影響。

血清中總膽固醇、甘油三酯等含量反映了脂類物質(zhì)代謝狀況，血清膽固醇含量可近似代表體內(nèi)膽固醇合成情況，血清甘油三酯含量的高低反映了脂類在體內(nèi)的吸收利用狀況。本試驗中，飼糧中添加0.6、4.0、6.0 mg/kg鉻對產(chǎn)蛋雞血清總膽固醇和甘油三酯的含量無明顯影響，說明飼糧添加Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞脂類代謝無任何不良影響。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶是肝功能損害最敏感的檢測指標(biāo)，可反映肝臟的功能。肝細胞受損會導(dǎo)致血漿谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性升高，也會引起肝臟代謝和解毒能力降低，從而使身體毒素不能及時排出。而谷草轉(zhuǎn)氨酶則是肝臟細胞中存在的并參與氨基酸代謝的一種轉(zhuǎn)氨基活性最高的酶，也可作為判斷肝臟功能正常與否的依據(jù)之一[21]。本試驗中，飼糧中添加0.6、4.0、6.0 mg/kg 鉻可顯著提高試驗第35天產(chǎn)蛋雞血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶活性，同時有降低產(chǎn)蛋雞前期血漿谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的趨勢，說明Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞前期肝臟有一定的保護作用，但這種作用在后期不再體現(xiàn)，具體原因有待進一步研究。這說明飼糧添加Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞肝臟無不良影響。

總膽紅素是機體血紅蛋白分解代謝的產(chǎn)物，常作為肝、膽疾病的診斷指標(biāo)。血漿中肌酐濃度能夠較準(zhǔn)確地反映腎臟實質(zhì)受損的情況。堿性磷酸酶在機體的磷酸基團代謝和轉(zhuǎn)化中發(fā)揮著重要作用，常將其作為診斷肝臟類疾病的重要指標(biāo)。本試驗中，飼糧中添加0.6、4.0、6.0 mg/kg鉻對產(chǎn)蛋雞血漿中總膽紅素、肌酐含量以及堿性磷酸酶活性均無顯著影響，這說明飼糧添加Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞肝臟、膽以及腎臟無毒副作用，對肝臟和腎臟功能無不良影響。

3.4 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞臟器指數(shù)的影響

正常情況下各臟器與體重的比值較為恒定，只有在動物組織發(fā)生病變或損傷后，受損的臟器重量可以發(fā)生改變，臟器指數(shù)也隨之改變。本試驗中，飼糧中添加0.6、4.0、6.0 mg/kg 鉻對產(chǎn)蛋雞心臟指數(shù)、肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)、卵巢指數(shù)和輸卵管指數(shù)均沒有顯著影響，這說明飼糧添加Cr-Pic對產(chǎn)蛋雞的內(nèi)臟器官和生殖器官均無不良影響。

3.5 飼糧鉻添加水平對產(chǎn)蛋雞重要組織病理變化的影響

目前，有少量研究報道，高劑量的Cr-Pic可導(dǎo)致中國倉鼠的卵巢細胞發(fā)生畸變，并明確指出飼糧的三價鉻累積會造成人或動物DNA的損傷[22]。但丁雙陽等[23]用Cr-Pic喂養(yǎng)Wistar大鼠，研究大鼠的遺傳毒理學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)其對母鼠的生殖機能和胎鼠的生長發(fā)育無明顯影響，對胎鼠未產(chǎn)生致畸作用。Anderson等[7]給大鼠飼喂含有Cr-Pic形式的鉻(5、25、50和100 μg/g)飼糧20周，觀察Cr-Pic的毒性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各試驗組大鼠生長發(fā)育良好，病理組織學(xué)檢查也未見異常。而在本試驗中同樣未觀測到飼喂添加Cr-Pic飼糧的產(chǎn)蛋雞肝臟和腎臟等主要內(nèi)臟器官以及卵巢等生殖器官組織顯微結(jié)構(gòu)和形態(tài)的組織病理學(xué)變化，表明飼糧添加Cr-Pic不會引起產(chǎn)蛋雞重要組織的病理變化。

4 結(jié) 論

飼糧添加0.6、4.0和6.0 mg/kg的Cr-Pic形式鉻對產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋性能、血液主要生理指標(biāo)、多數(shù)血漿生化指標(biāo)和主要臟器發(fā)育均無不良影響，4.0和6.0 mg/kg鉻組雞的主要內(nèi)臟均未觀測到組織病理學(xué)變化，所有雞只未出現(xiàn)毒理反應(yīng)。因此，產(chǎn)蛋雞在玉米-豆粕型飼糧中鉻的推薦添加水平為0.6 mg/kg時，具有10倍的安全系數(shù)，即飼糧中以Cr-Pic形式添加6.0 mg/kg 鉻對產(chǎn)蛋雞是安全的。

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*Contributed equally

**Corresponding authors: LYU Lin, associate professor, E-mail: lulin1225@163.com; LAN Yunxian, associate professor, E-mail: 417920691@qq.com

(責(zé)任編輯 武海龍)

Evaluation of Biological Safety of Chromium Picolinate for Laying Hens

WANG Gang1SUN Xiaoming2*LIAO Xiudong2ZHANG Liyang2LYU Lin2**LAN Yunxian1**LUO Xugang2

(1.SouthwestUniversityRongchangCapmus,Chongqing402460,China; 2.MineralNutritionResearchDivision,InstituteofAnimalScience,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100193,China)

This experiment was conducted to investigate the effects of dietary different supplemental levels of chromium picolinate (Cr-Pic) on laying performance, physiological and biochemical parameters in blood, organs indices and histopathological changes of laying hens, so as to evaluate the biological safety of Cr-Pic for laying hens. A total of 360 twenty three-week-oldBeijingred commercial laying hens with similar laying rate and body weight were randomly allocated to 4 groups with 6 replicates per group and 15 chicks per replicate in a completely randomized design. Hens were fed a corn-soybean meal basal diet and the basal diet supplemented with 0.6, 4.0 or 6.0 mg/kg Cr-Pic (as chromium), respectively. The preliminary trial period was 21 days and the experimental period was 70 days. The results showed as follows: 1) dietary chromium supplemental level did not affect the laying performance and organ indices of laying hens (P>0.05). 2) Dietary chromium supplemental level significantly increased the plasma glutamic-oxalacetic transaminase (GOT) activity of laying hens at the 35th days (P<0.05), but dietary chromium supplemental level did not affect the blood physiological parameters and other plasma biochemical parameters (P>0.05). 3) Dietary chromium supplemental level had no significant influence on the development of major visceral organs, and had no histopathological changes in the heart, liver, kidney, ovary and uterus part of the uterine tube. In conclusion, the current dietary allowance for chromium is 0.6 mg/kg, therefore, the addition of 6.0 mg/kg chromium (as Cr-Pic) to diet which is 10 times of the allowance is safe for laying hens.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2017, 29(1)：214-223]

chromium picolinate; biological safety evaluation; laying hen

10.3969/j.issn.1006-267x.2017.01.024

2016-07-14

農(nóng)業(yè)部飼料資源質(zhì)量安全監(jiān)管項目；中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程專項經(jīng)費(ASTIP-IAS08)

王 鋼(1991—)，男，江西上饒人，碩士研究生，從事動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)研究。E-mail: crazygang@126.com

S831

A

1006-267X(2017)01-0214-10

*同等貢獻作者

**通信作者：呂 林，副研究員，碩士生導(dǎo)師，E-mail： lulin1225@163.com；蘭云賢，副教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail: 417920691@qq.com