兩性霉素B聚乳酸普魯蘭納米膠束的制備及評價

黃 俊, 唐曉嬌, 馬 悅, 宋 娟, 楊 麗

?

兩性霉素B聚乳酸普魯蘭納米膠束的制備及評價

黃 俊, 唐曉嬌, 馬 悅, 宋 娟, 楊 麗*

(沈陽藥科大學藥學院，遼寧沈陽 110016)

目的制備兩性霉素B聚乳酸普魯蘭（PLA-pullulan）納米膠束，并進行體外評價。方法以新型兩親性高分子PLA-pullulan為載體材料，采用薄膜水化法制備兩性霉素B納米膠束，并分別采用透射電鏡、激光粒徑儀和zeta電位分析儀對膠束的形態(tài)、粒徑和表面電位進行表征，測定其包封率、載藥量和體外釋放動力學，考察其藥物分散狀態(tài)和溶血毒性。結果所制備的兩性霉素B聚乳酸普魯蘭納米膠束溶液外觀透明，電鏡下呈圓整的球形，平均粒徑為152.1 nm，包封率為71.1%，載藥量達10.9%，24 h的累積釋放量為10.01%，溶血毒性低于兩性霉素B去氧膽酸鈉膠束。結論聚乳酸普魯蘭膠束是兩性霉素B潛在的優(yōu)良納米載體，具有良好的應用價值。

藥劑學；膠束；薄膜水化法；兩性霉素B；聚乳酸普魯蘭；體外評價

近年來，深部真菌感染的發(fā)病率在侵入性診斷、免疫缺陷和器官移稙的患者身上呈增長趨勢[1-3]。由于這類疾病早期臨床診斷困難以及常見的抗真菌藥治療起效慢而導致死亡率較高[4]。盡管真菌的種類在不斷地增加，但注射用兩性霉素B依然是臨床上治療真菌感染的一線用藥[5]。然而，其較大的毒性及不良反應限制了它的應用[6]，其中，80%以上的患者出現(xiàn)了腎功能不全[7]。20世紀90年代，兩性霉素B的三種脂質制劑相繼上市，雖然大大降低了其腎毒性，但是同等劑量下的藥物抗菌活性下降[8]，臨床上通常使用比注射用兩性霉素B 高4到10倍的劑量[9]。另外對于發(fā)展中國家來說，其價格較昂貴[10]。因此更加迫切地需要發(fā)現(xiàn)新的、更價廉的藥物傳遞系統(tǒng)。

聚合物膠束是近年來作為一種新的傳遞BCS IV類藥物（如兩性霉素B）的載體而被廣泛研究。聚合物膠束具有熱力學和動力學穩(wěn)定；粒度較小，對于存在滲漏的脈管具有更強的滲透能力；疏水性內核可以增加難溶性藥物的溶解性，而親水性外殼可以將藥物與體內環(huán)境更好地隔離，改變藥動學和藥物在體內的分布等優(yōu)點。目前，國內外已有大量關于兩性霉素B（amphotericin B, AmB）聚合物膠束的報道，楊卓理等采用透析法制備了兩性霉素B的聚乙二醇-聚乳酸膠束[11]。朱麗君等利用透析法制備了兩性霉素B聚乙二醇-聚谷氨酸芐酯膠束[12]。然而，采用透析法備膠束時，DMSO不易除盡，且藥物易在透析袋DMSO與水交換處析出。Glen S. Kwon等制備了聚乙氧基聚已基天冬氨酸[13]、聚乙氧基聚芐基天冬氨酸[14]和聚乙氧基聚已基天冬氨酸系列烷基衍生物用以裝載兩性霉素B，然而其聚乙氧基聚已基天冬氨酸和聚乙氧基聚芐基天冬氨酸膠束仍然具有較強的溶血毒性。雖然聚乙氧基聚已基天冬氨酸系列烷基衍生物溶血性降低，但是材料需要多步合成，較為復雜。

普魯蘭是一種新型的微生物水溶性多糖，具有良好的安全性、生物相容性和肝靶向性，而且還具有長循環(huán)特性，是良好的載體材料[15]。聚乳酸安全、可降解、具有溫敏性，被廣泛用于接枝多糖，構建兩親性載體。因此，作者通過微波輔助的開環(huán)聚合反應合成了兩親性材料聚乳酸普魯蘭（poly(-lactide)-pullulan, PLA-pullulan）[16]，通過控制投料比，合成了最佳比例的聚乳酸普魯蘭，在水中可自組裝形成核-殼型的納米膠束。親水性的普魯蘭外殼可以將兩性霉素B與體內環(huán)境有效地隔離，影響藥物的體內分布，減少兩性霉素B在腎臟的聚集。疏水性的內核成為藥物的臨時儲庫，在具有很好的增溶能力的同時，減緩了兩性霉素B的釋放，使體內的兩性霉素B以單體的形式存在，而單體形態(tài)的兩性霉素B對真菌細胞具有更大的親和力[17]，從而降低兩性霉素B的毒性。目前，有關兩性霉素B聚乳酸普魯蘭納米膠束的研究未見文獻報道。

作者以兩親性材料聚乳酸普魯蘭，利用薄膜水化法制備兩性霉素B膠束，并對其制劑學特性進行評價，為后期研究奠定基礎。

1 儀器與材料

UV-2000紫外可見分光光度計、4802H UV/VIS 紫外掃描儀(上海 Unico儀器有限公司)，NanoZS90 粒度分析儀(英國Malvern儀器公司)，RE5298A旋轉蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），JY92-2D超聲波細胞粉碎儀（寧波新芝生物科技股份有限公司），JEM 2100 透射電子顯微鏡(日本JEOL 公司)。

兩性霉素B(華北制藥集團華勝有限公司)，透析袋(上海綠鳥公司，截留分子質量 1.2×104～ 1. 5×104u)，聚乳酸普魯蘭(自制)。

新西蘭大耳兔，雌性，體質量2.5 kg，沈陽藥科大學動物實驗中心提供。

2 方法與結果

2.1 兩性霉素B聚乳酸普魯蘭載藥膠束的制備

采用薄膜水化法制備兩性霉素B膠束，具體過程如下：稱取處方量的兩性霉素B和聚乳酸普魯蘭加入適量的甲醇使其溶解后，減壓旋轉蒸發(fā)除去有機溶劑，直至在瓶底形成一層透明的薄膜，繼續(xù)旋蒸除去殘留的有機溶劑。加入適量水化介質水化，探頭超聲，將得到的制劑以5 000 r·min-1離心10 min，過0.22 μm微孔濾膜，即得。

2.1.1 有機溶劑的選擇

按照有機試劑即能溶解藥物，又具有較低沸點的要求，選擇了甲醇、乙腈、二氯甲烷、氯仿等有機溶劑進行實驗，結果顯示兩性霉素B僅在甲醇中微溶，在其他有機溶劑中不溶。因此選擇甲醇為成膜溶劑。

2.1.2 成膜溫度的選擇

實驗中考察了成膜溫度對膠束外觀及包封率的影響。當成膜溫度分別為30、40和50 ℃時，按“2.1”條方法制備膠束，并按“2.4”條方法測定包封率，結果見表1。

結果表明，30 ℃時制得的制劑透明，包封率最高，為65.5%。所以選擇30 ℃為成膜溫度。

Table1 Effect of film forming temperature on appearance, entrapment efficiency of micelle

2.1.3 水化介質的選擇

實驗中考察了水化介質對膠束外觀及包封率的影響。分別用去離子水、質量分數(shù)5%葡萄糖水溶液和質量分數(shù)0.9%氯化鈉水溶液為水化介質，按“2.1”條方法制備膠束，并按“2.4”條方法測定包封率，結果見表2。

結果表明，以水為水化介質時包封率最高，為71.1%，所以選擇水作為水化介質。

Table 2 Effect of water phase on appearance, entrapment efficiency of micelle

2.1.4 水化溫度的選擇

實驗中考察了不同的水化溫度對膠束的外觀及包封率的影響。當水化溫度分別為0、25和37 ℃時，按“2.1”條方法制備膠束，并按“2.4”條方法測定膠束的包封率，結果見表3。

結果表明，當水化溫度為25 ℃即室溫時，所制得的膠束的包封率最高，為71.1%。所以水化溫度選擇25 ℃。

Table 3 Effect of hydration temperature on appearance, entrapment efficiency of micelle

2.1.5 超聲時間的選擇

實驗中考察了超聲時間對膠束外觀、粒度、粒度分布和包封率的影響。當以超聲功率為200 W、超聲時間分別為2、6和12 min時，按“2.1”條方法制備膠束，并按“2.3”條方法測定膠束的粒度及粒度分布，按“2.4”條方法測定包封率，結果見表4。

結果表明，當以超聲功率為200 W、超聲12 min時，所制備的膠束粒度最小為152.1 nm，粒度分布較窄，PDI為0.207，包封率為71.1%。所以超聲時間確定為12 min。

Table 4 Effect of ultrasound time on appearance, size, entrapment efficiency of micelle

2.1.6 藥脂質量比的選擇

實驗中考察了藥脂質量比對膠束的外觀、粒度、粒度分布和包封率的影響。固定加入材料的量，以藥脂質量比分別為0.077∶1、0.154∶1和0.231∶1時，按“2.1”條方法制備膠束，并按“2.3”條方法測定膠束的粒度及粒度分布，按“2.4”條方法測定包封率，結果見表5。

結果表明：藥脂質量比為0.154∶1時，膠束的外觀、粒度和包封率較好；藥脂質量比為0.231∶1時，制劑外觀渾濁，粒度明顯增大。所以藥脂質量比選擇0.154∶1。

Table 5 Effect of weight ratio of drug to polymer on appearance, size, entrapment efficiency of micelle

2.1.7 材料質量濃度的選擇

實驗中考察了材料的質量濃度對外觀、粒度、粒度分布和包封率的影響。固定藥物的量，材料質量濃度分別為16、26和46 g·L-1時，按“2.1”條方法制備膠束，按“2.3”條方法測定膠束的粒度及粒度分布，按“2.4”條方法測定包封率，結果見表6。

結果表明：材料的質量濃度為16 g·L-1時，制得的制劑出現(xiàn)雙峰，粒度較不均勻；而材料的質量濃度為46 g·L-1時，制得的制劑外觀渾濁。綜合考慮選擇材料的質量濃度為26g·L-1，其膠束的外觀、粒度和包封率較好。

Table 6 Effect of polymer concentration on appearance, size, PDI and entrapment efficiency of micelle

Note: *—Means double peaks appeared in the particle size spectrum

2.1.8 最優(yōu)處方和工藝

經(jīng)過篩選，得到的最優(yōu)處方和工藝為：稱取兩性霉素B 20 mg、聚乳酸普魯蘭130 mg加入適量甲醇使其溶解后，30 ℃減壓旋轉蒸發(fā)除去有機溶劑，直至在瓶底形成一層透明的薄膜，繼續(xù)旋蒸10 min除去殘留的有機溶劑。加入5 mL蒸餾水25 ℃水化30 min，200 W探頭超聲12 min，將得到的制劑以5 000 r·min-1離心10 min，過0.22 μm的微孔濾膜，即得。

2.2 形態(tài)觀察

采用透射電鏡觀察兩性霉素B PLA-pullulan膠束的形態(tài)。方法如下：室溫條件下用蒸餾水將載藥膠束稀釋至適當濃度，滴加到覆有支持膜的銅網(wǎng)上，用質量濃度10 g·L-1磷鎢酸進行負染，室溫下自然晾干，透射電鏡進行觀察。由圖1可知，制備的載藥膠束呈球形，粒度圓整，分散性較好。

Fig. 1 TEM photograph of AmB loaded micelles

2.3 膠束粒度和zeta電位測定

采用馬爾文粒度儀測定兩性霉素B膠束的粒徑，測定條件為：測定溫度25 ℃，檢測器角度為90°，檢測池平衡時間3 min，結果見圖2。由圖2可知，測得兩性霉素B膠束的平均粒徑為152.1 nm，多分散指數(shù)為0.207，粒度分布較均勻。

Fig. 2 The size distribution of AmB loaded micelles

Zeta電位是微粒表面荷電大小和荷電性質的標志，是影響微粒分散制劑穩(wěn)定性和體內分布的重要因素。作者采用馬爾文粒度儀對膠束的zeta電位進行測定。結果表明兩性霉素B膠束的zeta電位為-0.167 mV。

2.4 包封率和載藥量的測定

由于兩性霉素B在水中的溶解度很低，因此采用過膜法測定載藥膠束的包封率和載藥量。取過0.22 μm濾膜的制劑適量，按“2.5”條方法測定膠束的含量。按下面的公式計算包封率（entrapment efficiency，EE）和載藥量（loading content，LC）：

EE=1/2?100%;LC=1/3?100%。

其中，EE表示載藥膠束的包封率，LC表示膠束的載藥量，1為膠束內包封的藥物質量，2為投藥量；3為載體材料質量。測得的最優(yōu)處方和工藝的包封率和載藥量分別為71.1%和10.9%。

2.5 含量測定方法的建立

由紫外掃描結果可知，AmB在體積分數(shù)50% DMSO的甲醇溶液中于411 nm處有吸收峰，而聚合物在此位置無吸收，確定411 nm為AmB的特征吸收波長。配制質量濃度分別為：1.2、2.4、3.6、4.8和6.0 g·L-1AmB的體積分數(shù)50%DMSO的甲醇溶液，在波長411 nm處分別測定吸光度值（），以對質量濃度（）進行回歸得標準曲線方程= 1.750?10-2+0.126 8(＝0.999)，兩性霉素B質量濃度在1.2～6.0 g·L-1內與吸光度呈良好的線性關系。測得最優(yōu)處方和工藝制備的兩性霉素B載藥膠束的藥物含量為2.84 g·L-1。

2.6 體外釋放試驗

取兩性霉素B膠束溶液置于透析袋內，將其放置于盛有100 mL釋放介質(pH值7.4、質量分數(shù)2％的十二烷基硫酸鈉磷酸鹽緩沖液)的容器中，然后置于(37±0.5) ℃、100 r·min-1的恒溫震蕩器中，分別于0.5、1、2、4、 8、12、18和24 h取樣，每次取出5 mL釋放介質，并同時補加同體積的新鮮釋放介質。將所取的樣品按“2. 5”條方法測定其含量，并計算其累積釋放百分率。由圖3可知，膠束24 h的累積釋放量為10.01%。

Fig. 3 Drug release profile in vitro from micelle

2.7 兩性霉素B紫外-可見吸收光譜的測定

文獻報道，兩性霉素B在膠束內的聚集狀態(tài)可以用紫外-可見吸收光譜中320～330和410～420 nm處吸收峰的比值來衡量。當比值小于0.25時，兩性霉素B以單體的形式存在，此時藥物與材料有很強的相互作用，藥物很好地分散在膠束的內核中；高于2.0時，主要以聚集體的形式存在[18]，此時藥物與材料的相互作用較弱，藥物在材料內聚集。

將所制備兩性霉素B普魯蘭膠束和兩性霉素B脫氧膽酸鈉膠束用純化水稀釋適宜倍數(shù)，采用紫外掃描儀進行掃描，記錄在波長300～500 nm內的色譜圖，結果見圖4。

結果表明，兩性霉素B脫氧膽酸鈉膠束在320～330 nm時峰形較寬，Ⅰ/Ⅳ的比值為1.95。而所制備兩性霉素B普魯蘭膠束Ⅰ/AⅣ的比值為1.59。表明藥物在膠束中以部分聚集的狀態(tài)存在，藥物聚集程度低于兩性霉素B脫氧膽酸鈉膠束。

Fig. 4 Absorption spectra of AmB in sodium deoxycholate(A)and PLA-pullulan(B)

2. 8 溶血實驗

取兔血數(shù)毫升，放入含玻璃珠的三角燒瓶中振搖10 min，除去纖維蛋白，使成脫纖血液。加入約10倍量的生理鹽水，1 000 r·min-1離心15 min，除去上清液。沉淀的紅細胞再用生理鹽水按上述方法重新洗滌2、3次，直至上清液不顯紅色。將所得的紅細胞用生理鹽水配成體積分數(shù)為2%的紅細胞混懸液，備用。將所制備的聚乳酸普魯蘭空白膠束、兩性霉素B聚乳酸普魯蘭膠束和兩性霉素B脫氧膽酸鈉膠束分別與紅細胞懸液37 ℃孵育，測定其溶血百分率。

結果表明，質量濃度為2～10 mg·L-1的兩性霉素B脫氧膽酸鈉膠束溶液37 ℃孵育2 h，100%溶血，而聚乳酸普魯蘭空白膠束和兩性霉素B聚乳酸普魯蘭膠束未發(fā)生溶血。

3 討論

3.1 制備方法的選擇

目前，膠束制備常用的方法有透析法、乳化溶劑揮發(fā)法、反溶劑沉淀法和薄膜水化法。透析法是將藥物和材料同時溶解于與水相溶的有機溶劑中，然后透析除去有機溶劑。由于兩性霉素B僅在DMSO中有較好的溶解性，所以選擇DMSO作為溶劑。然而在透析袋的水和DMSO交換處，兩性霉素B易析出沉淀，且DMSO不易除盡。乳化溶劑揮發(fā)法需要藥物溶解于與水不互溶且沸點低的有機試劑中（如乙醚、氯仿、二氯甲烷等），但兩性霉素B在這些溶劑中不溶。使用反溶劑法制備的膠束載藥量較低。因此，結合藥物與材料的性質，最終選用薄膜水化法作為兩性霉素B膠束的制備方法。

3.2 處方和制備工藝的考察

不同的水化介質對膠束形成具有重要影響，其中用質量分數(shù)5%葡萄糖水和純化水制得的膠束外觀較好，而用生理鹽水進行水化時，制得的膠束渾濁，可能是因為NaCl與藥物相互作用，使藥物沉淀析出。超聲時間對藥物粒度有很大的影響，當超聲時間為12 min時，粒度和粒度分布明顯降低，較小的粒度可以影響藥物的體內分布，而較小的粒度分布對膠束的穩(wěn)定性有很大的影響。

藥脂質量比對包封率和載藥量均有影響。當藥脂質量比為0.077∶1和0.154∶1時，包封率和粒度沒有發(fā)生太大的變化。當藥脂質量比增加到0.231∶1時，包封率和載藥量略有增加，然而制得的制劑渾濁，粒度增加了一倍，可能是膠束之間發(fā)生了聚集。

3.3 載藥膠束的體外釋放、紫外掃描和溶血性

AmB膠束在pH值7.4、質量分數(shù)2%SDS的PBS緩沖液中釋放緩慢?？赡茉蚴茿mB被材料包埋于膠束內部，需要克服與材料聚乳酸酯鏈的相互作用力，透過親水性的外殼才能釋放。紫外掃描圖譜中，Ⅰ/Ⅳ的比值為1.59，藥物以部分聚集狀態(tài)的形式存在，兩性霉素B的峰位從408 nm紅移至414 nm，表明藥物分子與材料產(chǎn)生了較強的相互作用。

脫氧膽酸鈉是陰離子表面活性劑，其本身就具有溶血毒性。而且它的臨界膠束濃度較高，大量稀釋后可迅速解離，使得兩性霉素B快速的釋放和聚集，產(chǎn)生較強的溶血毒性，這也是市售兩性霉素B注射劑毒性較大的原因之一。而作者所制備聚乳酸普魯蘭載藥膠束，因材料本身無溶血性，且臨界膠束質量濃度較低（1.02 g·L-1），具有良好的穩(wěn)定性和耐稀釋性，可使藥物更緩慢地釋放，濃度低于溶血域值，所以未產(chǎn)生溶血。從而降低了藥物毒性，提高了制劑的安全性。

4 結論

作者通過薄膜水化法制備了兩性霉素B聚乳酸普魯蘭膠束，并對其處方和工藝進行了篩選。所制得的載藥膠束粒度小，分布均勻，包封率為71.1%，載藥量高達10.9%。藥物在膠束中以部分聚集的狀態(tài)存在，載藥膠束釋藥緩慢，溶血毒性低于兩性霉素B脫氧膽酸鈉膠束，是兩性霉素B的優(yōu)良的載體，具有良好的應用價值。

[1] KUMAR L, VERMA S, BHARDWAJ A, et al. Eradication of superficial fungal infections by conventional and novel approaches: a comprehensive review[J]. Artificial Cells Nanomedicine and Biotechnology, 2014, 42(1): 32-46.

[2] VIRAGH M, VOROS D, KELE Z, et al. Production of a defensin-like antifungal protein NFAP from Neosartorya fischeri in pichia pastoris and its antifungal activity against filamentous fungal isolates from human infections[J]. Protein Expression and Purification, 2014, 94: 79-84.

[3] WASAN K M, SIVAK O, ROSLAND M, et al. Assessing the antifungal activity, pharmacokinetics, and tissue distribution of amphotericin B following the administration of Abelcet (R) and AmBisome (R) in combination with caspofungin to rats infected with[J]. Journal of Pharmaceutical Sciences, 2007, 96(7): 1737-1747.

[4] MOZAFFARPUR S A, NASERI M, ESMAEILIDOOKI M R, et al. The effect of cassia fistula emulsion on pediatric functional constipation in comparison with mineral oil: a randomized, clinical trial[J]. Daru-Journal of Pharmaceutical Sciences, 2012, 20(12): 1-9.

[5] GIRMENIA P, MARTINO P. New antifungal drugs and new clinical trials: Interpreting results may be difficult [J].

Curr Opin Oncol, 2003, 15(4): 283–288.

[6] HARBARTH S, PESTOTNIK S L, LLOYD J F, et al. The epidemiology of nephrotoxicity associated with conventional amphotericin B therapy [J]. Am J Med, 2001, 111: 528–534.

[7] SABRA R, BRANCH R A. Amphotericin-B nephrotoxicity[J]. Drug Safety, 1990, 5: 94–108.

[8] GALLIS H A, DREW R H, PICKARD W W. Amphotericin B: 30 years of clinical experience[J]. Rev Infect Dis, 1990, 12: 308–329.

[9] DIEZI T A, TAKEMOTO J K, DAVIES N M, et al. Pharmacokinetics and nephrotoxicity of amphotericin B-incorporated poly(ethylene glycol)-block-poly(-hexyl stearate l-aspartamide) micelles[J]. Journal of Pharmaceu- tical Sciences, 2011, 100(6): 2064-2070.

[10] TOLLEMAR J, ANDERSSON S, RINGDEN O, et al. A retrospective clinical comparison between antifungal treatment with liposomal amphotericin B (AmBisome) and conventional amphotericin B in transplant recipients[J]. Mycoses, 1992, 35: 215-220.

[11] JAIN J P, KUMAR N. Development of amphotericin B loaded polymersomes based on (PEG)(3)-PLA co-polymers: factors affecting size andevaluation[J]. European Journal of Pharmaceutical Sciences, 2010, 40(5): 456-465.

[12] 朱麗君，潘仕榮. 兩性霉素B/聚乙二醇－聚天冬氨酸芐酯嵌段共聚物納米粒膠束的制備與性能[J]. 中國藥學雜志, 2010, 45(5): 359-365.

[13] 楊卓理，楊可偉，李馨儒, 等. 兩性霉素B的聚乙二醇一聚乳酸膠束的制備及其體外釋放動力學[J]. 中國藥學雜志, 2007, 42(7): 519-526.

[14] LAVASANIFAR A, SAMUEL J, GLEN S, et al. self-assembled from poly(ethylene oxide)-block-poly(-hexyl stearate-aspartamide) by a solvent evaporation method: effect on the solubilization and haemolytic activity of amphotericin B[J]. Journal of Controlled Release, 2001, 77: 155–160.

[15] YAN Wang, LIU Yuanyuan, LIU Yang, et al. A polymeric prodrug of cisplatin based on pullulan for the targeted therapy against hepatocellular carcinoma[J].International Journal of Pharmaceutics, 2015, 483(1/2): 89-100.

[16] TANG Xiaojiao, HUANG Jun, XU Liangyu, et al. Microwave-assisted rapid synthesis, characterization and application of poly(-lactide)-graft-pullulan[J]. Carbohydrate Polymers, 2014, 107: 7–15.

[17] LEGRAND P, ROMERO E A, COHEN B E, et al. Effects of aggregation and solvent on the toxicity of amphotericin B to human erythrocytes[J]. Antimicrob Agents Chemother, 1992, 36: 2518–2522.

[18] BAＲWICZ J，CHＲISTIAN S，GＲUDA I．Effects of the aggregation state of amphotericin B on its toxicity to mice[J]. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1992, 36(10): 2310-2315.

(本篇責任編輯：趙桂芝)

Preparation andcharacterization of amphotericin B poly(-lactide)-pullulan micelles

HUANG Jun, TANG Xiaojiao, MA Yue, SONG Juan, YANG LiPPPPPPP*

(,,110016,)

Objective To prepare and characterize the amphotericin B(AmB) loaded poly(-lactide) pullulan(PLA-pullulan) nanomicelles.Methods PLA-pullulan, a new amphiphilic polymer, was used for loading AmB with thin film dispersion method. The morphology, diameter and surface potential of the micelles were characterized by transmission electron microscopy, size and zeta potential analyzer. The drug loading content, entrapment efficiency andrelease of AmB loaded micelles were determined. The relative aggregation state of the encapsulated AmB and hemolytic toxicity were studied. Results The micelle was clear and transparent, globular shaped. The average particle size, drug loading content and entrapment efficiency were 152.1 nm with narrow distribution, 71.1% and 10.9%, respectively. The cumulative release amount of micelle within 24 h is 10.01%. AmB loaded micelles showed lower hemolysis than AmB solutions. Conclusions PLA-pullulan micelles, used as nanocarrier of amphotericin B, has a very good application prospect.

pharmaceutics; micelles; thin film dispersion method; amphotericin B; poly(-lactide)-pullulan;characterization

（2016）02–0033–10

10.14146/j.cnki.cjp.2016.02.001

R 94

A

2015-03-31

黃俊(1990-), 男(漢族), 湖北隨州人, 碩士研究生, E-mail 834861227@ qq.com;

楊麗(1966-), 女(漢族), 吉林集安人, 教授, 博士, 博士生導師, 主要從事生物技術藥物制劑學研究, Tel. 024-23986349, E-mail pharm305@126.com。