甲基化在肺癌研究領(lǐng)域的相關(guān)進(jìn)展

張少偉 薛志強(qiáng)

包括肺癌在內(nèi)的絕大部分疾病的發(fā)生、發(fā)展甚至預(yù)后、轉(zhuǎn)歸都與遺傳因素息息相關(guān),然而經(jīng)典的遺傳學(xué)說(shuō)--DNA決定一切,或者說(shuō)基因決定表型--并不能圓滿地解釋人類(lèi)對(duì)于疾病在這些方面的困惑.隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃的完成,令人困惑的諸多問(wèn)題并沒(méi)有如事先預(yù)料的那樣得到完美的解答[1,2],遑論解決臨床棘手問(wèn)題了.挑戰(zhàn)隨之而來(lái),表觀遺傳學(xué)說(shuō)不依賴DNA序列改變而又可遺傳的基因表達(dá)改變[3,4],因此得到研究人員的重視并有了更大的發(fā)展.事實(shí)上,早在1942年Waddington就提出了Epigenetics一詞并給出了其含義[5,6],然而由于技術(shù)及后續(xù)遺傳領(lǐng)域?qū)Ｗ⒂贒NA方面的經(jīng)典遺傳學(xué)研究等原因,表觀遺傳的研究并沒(méi)有很大的發(fā)展.2003年人類(lèi)表觀基因組計(jì)劃(Human Epigenome Project, HEP)開(kāi)始實(shí)施[6,7].其中DNA甲基化與組蛋白的甲基化修飾是其兩項(xiàng)重要內(nèi)容.尤其DNA甲基化作為表觀遺傳學(xué)研究的熱門(mén)領(lǐng)域,隨著甲基化特異性PCR(methylation-specif i c PCR, MS-PCR)技術(shù)的開(kāi)發(fā),其發(fā)展得到極大助力,在肺癌相關(guān)領(lǐng)域,涉及到基于特定基因DNA甲基化的早期診斷、分期分級(jí)診斷、化療藥物的個(gè)體化篩選、預(yù)后判斷的研究日益增多;針對(duì)甲基化轉(zhuǎn)移酶的藥物已開(kāi)始進(jìn)行臨床試驗(yàn)并取得了良好療效.組蛋白修飾是表觀遺傳學(xué)的另一重要內(nèi)容,其中的甲基化修飾近年來(lái)也取得了重要進(jìn)展[8,9].

1 DNA甲基化

DNA甲基化是指甲基供體(S-腺苷甲硫氨酸,SAM)在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferases, DNMT)的作用下,將甲基添加到DNA分子的堿基上,以胞嘧啶-鳥(niǎo)嘌呤二核苷酸(CpG)中的胞嘧啶5位碳原子和甲基間的共價(jià)結(jié)合最常見(jiàn)[10,11],CpG中胞嘧啶由此被修飾為5甲基胞嘧啶(5mC).DNA甲基化修飾后在離體狀態(tài)表現(xiàn)出更強(qiáng)的惰性,如亞硫酸氫鈉可使非甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏?而不能改變甲基化的CpG中的胞嘧啶;在活體狀態(tài)表現(xiàn)為基因表達(dá)活性的降低.因此,高甲基化狀態(tài)意味著基因表達(dá)的失活/抑制/沉默[12],而低甲基化狀態(tài)意味著基因表達(dá)的激活/活化.早期的研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞的DNA甲基化狀態(tài)在全基因組水平上是廣泛的低甲基化,導(dǎo)致原癌基因的活化,基因組不穩(wěn)定性增加.后期研究發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞在抑癌基因、修復(fù)基因等啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)是升高的,即高甲基化,從而導(dǎo)致了相應(yīng)抑癌基因等的表達(dá)受到抑制[13,14].且發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的高甲基化基因多發(fā)生于啟動(dòng)子區(qū)的CpG島,而正常細(xì)胞啟動(dòng)子區(qū)的CpG島多處于非甲基化狀態(tài).

在包括肺癌在內(nèi)的絕大多數(shù)腫瘤以及諸如阿爾茲海默病、心衰等非腫瘤性疾病的患者的基因組水平均發(fā)現(xiàn)了DNA甲基化的異常[15].由于人類(lèi)基因組包含近四萬(wàn)個(gè)基因,大量研究發(fā)現(xiàn)許多疾病均可能存在特異性的甲基化譜,甚至在疾病的不同階段甲基化譜也不盡相同;此外,據(jù)研究腫瘤細(xì)胞發(fā)生CpG島高甲基化的頻率遠(yuǎn)高于基因突變[16].因此,通過(guò)對(duì)患者樣本進(jìn)行特定一組基因或全基因組的甲基化水平檢測(cè),理論上可以診斷疾病、輔助進(jìn)行分級(jí)分期的判斷甚至篩選敏感化療藥物.

1.1 DNA甲基化與肺癌診斷(早期診斷、分型、分級(jí)分期)早在2005年,德國(guó)海涅大學(xué)的Schmiemann V等在發(fā)現(xiàn)肺癌患者中存在APC、p16(INK4a)、RASSF1A等基因的甲基化狀態(tài)異常后,就提出了利用通過(guò)甲基化檢測(cè)來(lái)進(jìn)行肺癌的早期診斷[17].

之后,借助于以MS-PCR為代表的檢測(cè)技術(shù)發(fā)展,類(lèi)似的研究迅猛增加,同時(shí)發(fā)現(xiàn)了更多的具有相對(duì)特異性的基因,如P16、RASSF1A、APC、MGMT等[18,19].一項(xiàng)基于痰液樣本的RASSF1A、PRDM14和3OST2聯(lián)合檢測(cè)研究,用于區(qū)分無(wú)瘤吸煙者和I期非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC),結(jié)果顯示敏感性達(dá)82.9%,特異性達(dá)76.4%[20].Kikuchi等研究發(fā)現(xiàn),DAL-1基因的甲基化隨著肺癌分期的進(jìn)展而出現(xiàn)變化[21].隨著研究的深入,發(fā)現(xiàn)基因組的低甲基化隨著細(xì)胞惡性度的增加而愈加明顯,有作為病情變化的判斷指標(biāo)的潛力[22].有meta分析表明常見(jiàn)于NSCLC的WIF-1基因高甲基化不僅更傾向發(fā)生于鱗癌,而且其表達(dá)與較差的臨床預(yù)后同樣相關(guān)[23].在小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)的研究上,Saito Y等通過(guò)對(duì)28例手術(shù)的SCLC患者病理組織進(jìn)行檢測(cè)分析,發(fā)現(xiàn)CpG島甲基化表型(CpG island methylator phenotype, CIMP)是切除后SCLC的不良預(yù)后的預(yù)測(cè)因子[24].這些研究表明,通過(guò)對(duì)特定基因的DNA甲基化的結(jié)果進(jìn)行分析,有望為臨床醫(yī)生提供早期診斷、病情分期等有益的信息.不僅如此,基于hOGG1基因啟動(dòng)子甲基化在NSCLC中頻繁發(fā)生的情況,有研究人員通過(guò)檢測(cè)外周血單核細(xì)胞的hOGG1基因甲基化水平,發(fā)現(xiàn)甲基化的hOGG1基因攜帶者發(fā)展為NSCLC的幾率是非甲基化hOGG1基因攜帶者的2.25倍,作者認(rèn)為此研究可以在將來(lái)為特定人群提供肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)有較大益處[25].

但是,另一方面,對(duì)于同一種基因的甲基化狀態(tài)在同一種疾病或者細(xì)胞系的檢測(cè)結(jié)果,不同研究人員提供的數(shù)據(jù)差異很大[26].例如,NSCLC中ATM甲基化陽(yáng)性率在三個(gè)研究中的分別是47%(49/105)、0(0/37)、19%(34/180)[26-29];因預(yù)測(cè)神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者對(duì)烷化劑敏感性而成為明星基因的MGMT,針對(duì)其在NSCLC患者的甲基化狀態(tài)進(jìn)行的4項(xiàng)研究[30-33]中,陽(yáng)性率分別為50.4%(111/220)、30.3%(37/122)、17%(12/72)、16.6%(33/199).關(guān)于檢測(cè)結(jié)果變異較大的原因,Hongdo等[26]認(rèn)為需要強(qiáng)調(diào)甲基化檢測(cè)技術(shù)重要性以保證檢測(cè)結(jié)果的可重復(fù)性及信度,同時(shí)提及種族差異的潛在影響.但是,作者認(rèn)為MS-PCR等技術(shù)的改進(jìn)使得檢測(cè)的靈敏度及特異度大大提升的同時(shí),也降低了檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)/陰性率,最終使得結(jié)果可重復(fù)性與信度得到提高.2015年,霍普金斯大學(xué)一個(gè)研究團(tuán)隊(duì)就開(kāi)發(fā)了一種新技術(shù)--DREAMing[34],該技術(shù)可以定量分析存在于NSCLC患者諸如血漿等液基標(biāo)本中的極微量(0.005%的單拷貝水平)的異質(zhì)性表觀等位基因,這也為更為深入的科學(xué)研究及臨床應(yīng)用打下了良好的基礎(chǔ).

總之,DNA甲基化檢測(cè)為解決這些棘手的臨床問(wèn)題提供了新的思路與方向,但針對(duì)特定基因的測(cè)定、具體基因與疾病相關(guān)性的分析及其意義的確定,可能還有相當(dāng)長(zhǎng)的路要走.檢測(cè)技術(shù)的不斷發(fā)展,測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的嚴(yán)格控制或許會(huì)加快DNA甲基化檢測(cè)技術(shù)實(shí)際應(yīng)用于臨床的步伐.

1.2 DNA甲基化與肺癌治療方案的選擇 眾所周知,傳統(tǒng)的肺癌化療或輔助化療方案的制定多是基于患者腫瘤的病理分型及化療方案實(shí)施后患者和腫瘤反應(yīng)情況來(lái)確定,但是同一病理類(lèi)型的患者接受同一種化療方案獲得的實(shí)際療效差異卻很大,而且在一部分患者身上可能僅僅表現(xiàn)出了化療的副作用.因此,針對(duì)具體病患的個(gè)體化醫(yī)療得到越來(lái)越多患者及醫(yī)療人員的支持.隨著表觀遺傳相關(guān)研究的深入,人員發(fā)現(xiàn)了某些基因與特定藥物治療反應(yīng)的敏感性.例如有研究發(fā)現(xiàn)MGMT甲基化導(dǎo)致的基因表達(dá)失活發(fā)生在很多神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者瘤內(nèi),它的發(fā)生與患者對(duì)烷化劑的敏感程度密切相關(guān),并能提高患者的總體生存率及疾病進(jìn)展時(shí)間[18,35].

這個(gè)發(fā)現(xiàn)引起了科研人員的極大興趣,在肺癌的相關(guān)領(lǐng)域,Hsu等[36]發(fā)現(xiàn)術(shù)后NSCLC患者的CpG島甲基化是導(dǎo)致的抑癌基因p14ARF的表達(dá)失活和p53過(guò)表達(dá)降低的原因.后續(xù)研究中發(fā)現(xiàn)RASSF1A甲基化可作為評(píng)估NSCLC患者使用吉西他濱(gemcitabine)取得較好療效一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因子[37];而在針對(duì)靶向藥物吉非替尼(geftinib)耐藥機(jī)制的研究中,發(fā)現(xiàn)可能會(huì)使p14ARF表達(dá)增加的肺腺癌患者受益[34,38].相信這些研究結(jié)果會(huì)使更多的患者因更為精準(zhǔn)的治療而受益.在一個(gè)基于mRNA、microRNA和DNA甲基化標(biāo)記物聯(lián)合應(yīng)用分析I期肺腺癌預(yù)后的隊(duì)列研究中,發(fā)現(xiàn)HOXA9啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化意味著更糟糕的總體生存率和更高的腫瘤復(fù)發(fā)率;三種標(biāo)記物的聯(lián)合應(yīng)用可以更為明確地將兩個(gè)隊(duì)列中的高復(fù)發(fā)危險(xiǎn)的患者識(shí)別出來(lái)[39].作者認(rèn)為如果這個(gè)研究能進(jìn)一步得到驗(yàn)證,那無(wú)疑是對(duì)肺癌傳統(tǒng)TNM分期的挑戰(zhàn),未來(lái)TNM分期可能需要把患者的表觀遺傳變異指標(biāo)納入考慮范圍.

1.3 DNA去甲基化藥物與肺癌治療 如前所述,傳統(tǒng)針對(duì)肺癌的化療效果并不令人滿意,即使有了更為先進(jìn)的辦法去預(yù)測(cè)患者對(duì)于某種具體藥物是否敏感或耐藥,也并不能在很大程度上提高患者的長(zhǎng)期生存率,況且到目前為止也只能給部分具有特定表觀遺傳改變的某些腫瘤亞組的患者指導(dǎo)治療,尤其是當(dāng)檢測(cè)結(jié)果提示是耐藥時(shí),可能會(huì)給患者帶來(lái)更多的擔(dān)憂而非希望.然而,與經(jīng)典遺傳學(xué)研究的DNA序列改變具有的不可逆性不同的是,包括DNA甲基化及組蛋白甲基化修飾在內(nèi)的多數(shù)表觀遺傳學(xué)改變是可逆的[40],通過(guò)逆轉(zhuǎn)DNA甲基化治療疾病的思路為疾病治療描繪了樂(lè)觀的藍(lán)圖.

DNA甲基化的形成與維持均在DNMT作用下實(shí)現(xiàn)的.DNMT共3個(gè)家族,即Dnmt1、Dnmt2、Dnmt3,其中Dnmt3包括Dnmt3a、Dnmt3b、Dnmt3L.人類(lèi)體內(nèi)有Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b[41].其中Dnmt1在DNA半保留復(fù)制時(shí)催化并維持新生鏈的DNA甲基化狀態(tài);而Dnmt3a與Dnmt3b在胚胎發(fā)育期間發(fā)揮主要作用,催化從頭甲基化.三種DNMT共同維持DNA甲基化狀態(tài),并表現(xiàn)為正常組織低表達(dá)與腫瘤組織中的高表達(dá)[42].以DNMT為作用靶點(diǎn)成為藥物研發(fā)的新方向.有研究發(fā)現(xiàn),HOXA1甲基化在SCLC耐藥細(xì)胞中表達(dá)增加,并有望成為逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥的新靶點(diǎn)[43].

然而,最先應(yīng)用于臨床的去甲基化藥物--氮雜胞苷與地西他濱--最初的研發(fā)并不是基于DNMT的,后來(lái)發(fā)現(xiàn)其去甲基化作用而分別在2004年和2006年被FDA批準(zhǔn)用于惡性血液系統(tǒng)的治療并取得了較為理想的療效[44,45].而針對(duì)諸如肺癌等實(shí)體腫瘤的研究仍處于臨床試驗(yàn)階段,且主要與其他藥物聯(lián)合進(jìn)行,如小劑量的氮雜胞苷與恩替諾特聯(lián)合應(yīng)用治療晚期NSCLC不僅增加患者的生存期,同時(shí)提高腫瘤對(duì)化療藥物的反應(yīng)[46].而單獨(dú)應(yīng)用去甲基化藥物受限的原因在于其大劑量應(yīng)用時(shí)的細(xì)胞毒性和較短的半衰期導(dǎo)致的難以長(zhǎng)期維持低濃度持續(xù)發(fā)揮作用.Guadecitabine(SGI-110)作為新的去甲基化藥物,是地西他濱的前提物,其水溶液更為穩(wěn)定,目前正在進(jìn)行惡性血液系統(tǒng)疾病的臨床試驗(yàn),Kuang等還發(fā)現(xiàn)其誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞對(duì)奧沙利鉑敏感[47].2011年進(jìn)入I期臨床試驗(yàn)的RRx-1是一種新的表觀遺傳藥物,可同時(shí)抑制DNMT1、DNMT3a和HDACs(histone deacetylases)表達(dá).2015年I期臨床試驗(yàn)結(jié)束證明了其具有較寬安全治療窗和良好的耐受性,目前正在招募包括罹患SCLC和NSCLC在內(nèi)的受試者進(jìn)行II期臨床試驗(yàn)[48,49].其他進(jìn)展主要是與其他抗腫瘤方式聯(lián)合進(jìn)行治療研究[50].

總之,在表觀遺傳其他方面迅猛發(fā)展的大背景下,對(duì)于針對(duì)肺癌等實(shí)體腫瘤的表觀藥物研發(fā)進(jìn)展情況并不理想.對(duì)現(xiàn)有藥物的進(jìn)一步修飾以提高藥物的靶向性而降低藥物不良反應(yīng)是下一步需要做的工作[45].作者認(rèn)為藥物研發(fā)的思路也許需要做一個(gè)轉(zhuǎn)換,針對(duì)腫瘤全基因組水平低甲基化狀態(tài)與局部基因啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化狀態(tài),我們不能只針對(duì)高甲基化狀態(tài)去開(kāi)發(fā)去甲基化藥物,針對(duì)低甲基化狀態(tài)去開(kāi)發(fā)促甲基化藥物也是一個(gè)需要研究的方向,甚至對(duì)甲基化進(jìn)行雙向調(diào)節(jié)維持平衡藥物進(jìn)行研發(fā)也是一個(gè)方向.而且去甲基化機(jī)制的研究很可能會(huì)促使新的藥物靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)與開(kāi)發(fā).原癌基因啟動(dòng)子區(qū)被誘導(dǎo)為高甲基化狀態(tài)后基因表達(dá)失活同樣可以抑制腫瘤生長(zhǎng),當(dāng)然進(jìn)一步的研究仍需要大量困難需要克服.目前,表觀遺傳研究領(lǐng)域前沿的某些專家也在呼吁關(guān)注并研究以前忽視的非編碼序列[51].或許,我們?cè)诩谆幬镅邪l(fā)上也該轉(zhuǎn)換思路了.

2 組蛋白的甲基化修飾在肺癌領(lǐng)域的應(yīng)用

組蛋白修飾是表觀遺傳學(xué)研究的另一重要內(nèi)容,不同的組蛋白因?yàn)槠淠┒税被岵煌霈F(xiàn)不同類(lèi)型的修飾,包括乙?；?、甲基化、磷酸化、泛素化等[8,52].其中組蛋白的乙?；土姿峄揎検强赡娴?而且對(duì)基因轉(zhuǎn)錄的作用相互拮抗.組蛋白甲基化是由組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶(histonemethyl transferase, HMT)完成的.不同于DNA甲基化所導(dǎo)致的基因表達(dá)沉默的是,組蛋白甲基化對(duì)基因表達(dá)可產(chǎn)生激活/抑制的作用,如H3-K9、H3-K27、H4-K20甲基化會(huì)抑制基因表達(dá),而H3-K4、H3-K36、H3-K79甲基化則具有激活效應(yīng)[53,54];而且不同類(lèi)型(單/雙/三甲基化)的甲基化作用也不一樣.此外,組蛋白甲基化和DNA甲基化可能共同參與基因表達(dá)過(guò)程[55,56].

2.1 組蛋白甲基化與肺癌診斷 目前關(guān)于組蛋白甲基化的研究主要集中在基礎(chǔ)機(jī)制領(lǐng)域,與臨床應(yīng)用相關(guān)的研究涉及相對(duì)較少,而且多是與其它相關(guān)研究共同進(jìn)行.比如,基于H4KA16乙?；笔Ш虷4KM20三甲基化是腫瘤普遍特點(diǎn)的特性,Li等研究了H4KA16、H4KM20及Ki67在肺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤特點(diǎn),發(fā)現(xiàn)H4KA16與H4KM20的進(jìn)行性損失與腫瘤級(jí)別有關(guān),并反映了腫瘤細(xì)胞的分化和增殖活性的程度.認(rèn)為這些組蛋白修飾可以作為腫瘤生物標(biāo)志物幫助臨床診斷和預(yù)后評(píng)估[57].H3-K9的組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶KMT1E/SETDB1協(xié)同TGFβ調(diào)節(jié)復(fù)合物SMAD2/3在肺癌轉(zhuǎn)移上發(fā)揮抑制作用[58].ávila-Moreno等研究發(fā)現(xiàn)MEOX2和TWIST1的過(guò)表達(dá)與H3K27me3和H3K4me3水平相關(guān),在前者低表達(dá)而在后者高表達(dá),進(jìn)一步研究證實(shí)可依此幫助判斷NSCLC患者的化療藥物耐藥性和預(yù)后[59].在診斷、預(yù)后評(píng)估等方面的研究應(yīng)用與DNA甲基化所做工作類(lèi)似,只是研究工作沒(méi)有DNA甲基化廣泛.

2.2 與肺癌相關(guān)的調(diào)節(jié)組蛋白甲基化藥物 與DNA甲基化修飾及組蛋白乙?；?磷酸化修飾不同的是,組蛋白甲基化一度被認(rèn)為是不可逆的,這就降低了其在藥物開(kāi)發(fā)領(lǐng)域的應(yīng)用價(jià)值,直到2004年LSD-1(lysine specific demethylase 1)的發(fā)現(xiàn)證實(shí)存在組蛋白去甲基化酶(histone demethylase, HDM)后[60].有研究提示抑制LSD1在SCLC臨床前研究模型中顯示出細(xì)胞增殖減少、腫瘤干細(xì)胞維持降低,同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞分化并抑制腫瘤生長(zhǎng).因此LSD1有望成為SCLC的治療靶點(diǎn)以改善其不良預(yù)后[61].

目前針對(duì)HDM及HMT的藥物研發(fā)工作已大量開(kāi)展,現(xiàn)主要有三類(lèi)藥物:第一類(lèi)是EZH2(enhancer of zeste homolog 2)抑制劑,EZH2是多梳家族蛋白(polycomb-group proteins)中PRC2的催化核心的亞基;PRC2具有HMT活性,對(duì)X染色體的失活具有作用[62].EZH2在包括肺癌在內(nèi)的多種實(shí)體腫瘤表達(dá)過(guò)度,從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的遷移、聚集,相反在正常組織極少表達(dá),因此還有作為腫瘤標(biāo)志物的潛能[63].Fillmore等研究發(fā)現(xiàn),通過(guò)抑制EZH2可以使具有BRG1和EGFR突變的NSCLC對(duì)依托泊苷敏化[64].最近,Eric E. Gardner等利用EZH2抑制劑--EPZ011989,在小鼠PDX模型(patient-derived xenograft models)上成功地預(yù)防了SCLC獲得性耐藥的發(fā)生,并在耐藥和敏感模型上均提高了療效[65].第二類(lèi)是DOT1L抑制劑,DOT1L同樣是一種HMT,催化H3K79的甲基化,同樣有針對(duì)血液系統(tǒng)腫瘤的藥物進(jìn)入臨床試驗(yàn)[66].第三類(lèi)是HDM抑制劑,如上一段提及的抑制LSD-1,現(xiàn)已研發(fā)出作用于LSD-1的抑制劑GSK2879552,已作為一種新的有效的高選擇性可口服的藥物進(jìn)入SCLC的臨床試驗(yàn),并在體內(nèi)和體外均顯示出抗腫瘤活性,且DNA低甲基化特征可作為其生物活性的預(yù)測(cè)因子[67].未來(lái)可能同樣會(huì)根據(jù)表觀遺傳標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行藥物選擇并聯(lián)合傳統(tǒng)化療藥物進(jìn)行抗腫瘤治療.

3 展望

表觀遺傳學(xué)研究近十余年來(lái)蓬勃發(fā)展,尤其在腫瘤研究領(lǐng)域進(jìn)展迅速.但仍有一些問(wèn)題需要去解決:從基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)角度來(lái)講,腫瘤與甲基化因果關(guān)系的闡明需要有效的動(dòng)物模型,動(dòng)物模型建立后對(duì)腫瘤的發(fā)生機(jī)制認(rèn)識(shí)與抗腫瘤藥物的研發(fā)大有裨益.從流行病學(xué)角度來(lái)講,飲食與基因組甲基化水平的關(guān)系需要得到進(jìn)一步研究,低/高甲基化飲食對(duì)體內(nèi)基因組甲基化水平的是否有直接影響,已經(jīng)有研究團(tuán)隊(duì)對(duì)比了孕期高甲基化攝入孕婦與正常飲食孕婦生產(chǎn)后子代體內(nèi)甲基化水平并得到陽(yáng)性結(jié)果[68],這對(duì)指導(dǎo)具有表觀遺傳變異患者的飲食大有裨益,當(dāng)然這仍需要更為深入的研究.從肺癌的高危因素吸煙角度,已經(jīng)有團(tuán)隊(duì)做了吸煙與特定基因甲基化水平的隊(duì)列研究[69],這對(duì)揭示DNA甲基化、吸煙、肺癌三者之間關(guān)系的研究以及肺癌的早診與治療均能提供很好的線索.從臨床流行病學(xué)角度來(lái)講,患有與低甲基化攝入有關(guān)的疾病(比如巨幼細(xì)胞性貧血)的患者在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、病理類(lèi)型或表觀遺傳改變是否與其他人群有差異,同樣需要大量工作要做.隨著認(rèn)識(shí)的深入,結(jié)合精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)的概念,從甲基化角度出發(fā),人類(lèi)有希望取得更大的突破,使得包括肺癌在內(nèi)的廣大病患的病痛得以緩解甚至根除.