中西醫(yī)對阿霉素腎病模型的研究進展

徐靜，李霄，王斌，匡海學，王秋紅

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040；2.廣東藥科大學中藥學院，廣東 廣州 510006)

綜 述

中西醫(yī)對阿霉素腎病模型的研究進展

徐靜1，李霄1，王斌1，匡海學1，王秋紅2*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040；2.廣東藥科大學中藥學院，廣東 廣州 510006)

腎小球疾病是泌尿系統(tǒng)較為常見的疾病，是指以腎小球損害為主的變態(tài)反應性炎癥。在實驗研究過程中，阿霉素腎病模型能代替腎小球疾病的病理及生理的改變。中西醫(yī)治療阿霉素腎病通過抑制免疫反應、減輕炎癥損傷、延緩腎纖維化、保護足細胞和腎小管上皮細胞等機制，改善其臨床表癥?，F(xiàn)將中西醫(yī)治療阿霉素腎病的藥理作用研究進展進行綜述，為臨床用藥提供科學理論依據(jù)。

腎小球；阿霉素腎??；足細胞；生長因子;綜述

腎小球疾病是指以腎小球損害為主的變態(tài)反應性炎癥，是泌尿系統(tǒng)較為常見的疾病。其臨床表現(xiàn)為蛋白含量降低，腎小球濾過功能下降，血脂含量升高等腎病綜合征。阿霉素腎病模型病理及生理改變類似于人類的微小病變型腎病，且模型制備簡單方便，所以研究中常用阿霉素腎病模型復制腎小球疾病[1]。現(xiàn)代醫(yī)學認為腎小球疾病形成的因素主要有血流動力學改變、炎性介質、生長因子、腎小球過濾障礙、足細胞損傷等[2]。中西醫(yī)治療阿霉素腎病通過抑制免疫反應、減輕炎癥損傷、延緩腎纖維化、保護足細胞和腎小管上皮細胞等機制，改善其臨床表癥，為臨床用藥提供科學理論依據(jù)。

1 西藥研究

西醫(yī)治療腎小球腎炎常依照常規(guī)檢查指標的異常，針對其癥狀給予藥物治療。比如尿蛋白多常用ACEI、ARB治療，水腫則用利尿劑治療，不同的癥狀需要不同的藥物治療。

1.1 組蛋白去乙?；敢种苿?/p>

丙戊酸鈉是典型的組蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制劑，具有良好的抗炎癥及抗纖維化作用。戴芹等[3]研究發(fā)現(xiàn),VPA可以改善阿霉素大鼠低蛋白、高血脂等腎病綜合征，同時下調纖維細胞活化標志蛋白α-SMA，腎臟組織中的ColⅠ、ColⅢ和α-SMA mRNA 的表達也顯著降低。

1.2 血管緊張素轉化酶抑制劑

王軍建等[4]研究發(fā)現(xiàn),培哚普利可以減少尿中蛋白的排泄，上調阿霉素大鼠腎臟Nephrin的表達，抑制TGF-β1的表達，減輕腎臟足細胞損害。楊沿浪等[5]研究血管緊張素轉化酶抑制劑貝那普利和螺內酯聯(lián)合應用對阿霉素大鼠腎小管的保護作用，通過觀察尿蛋白、尿RBP、血壓、轉化生長因子-β等指標，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合應用比單用任何一個作用效果都要明顯?？ㄍ衅绽山档桶⒚顾啬I病大鼠慢性腎功能衰竭[6]。吳仁勝等[7-8]研究發(fā)現(xiàn),卡托普利與洛伐他汀聯(lián)用可以降低阿霉素大鼠血清IL-6、TNF-α、膽固醇、甘油三酯含量，升高血漿白蛋白濃度，聯(lián)用可以更有效地保護阿霉素腎臟功能。

1.3 腎上腺皮質激素

張文曉等[9]研究發(fā)現(xiàn),潑尼松通過IL-17、IL-6參與阿霉素腎病免疫發(fā)病機制，可改善蛋白尿、低白蛋白血癥和高脂血癥，降低血清IL-17、IL-6水平抑制Th17細胞的過度分化。陳小英等[10]通過研究潑尼松對阿霉素大鼠腎臟組織FAK/Pyk2表達的影響，發(fā)現(xiàn)構成足突間裂孔隔膜關鍵成分Nephrin在模型組表達減少，給予藥物治療后明顯回調；潑尼松能抑制FAK和Pyk2激活，降低蛋白尿，改善足突病變，保護腎小球過濾屏障。

1.4 免疫抑制劑

來氟米特是一種新型的免疫抑制劑，常用于自身免疫性疾病、腎小球疾病及臟器移植后排異反應等。LEF能有效減低患者蛋白尿作用。鄒艷紅等[11]研究發(fā)現(xiàn),降低蛋白尿改善腎小球病變的作用機制可能與腎臟血管內皮生長因子的表達有關，LEF能顯著降低血管內皮生長因子VEGF。

2 中藥研究

近年來，中醫(yī)藥通過多途徑、多靶點針對腎小球疾病的干預與調節(jié)進行了多方面研究，發(fā)現(xiàn)中藥不僅可以改善其蛋白尿、低白蛋白血癥、高脂血癥等臨床癥狀，還可以延緩腎臟損傷。治療腎小球腎炎通常采用補腎活血、祛風通絡、補益脾腎、利水消腫等方法。

2.1 復方制劑

1)腎炎康復片(西洋參、人參、生地黃、杜仲、山藥、白花蛇舌草、黑豆、土茯苓、益母草、丹參、澤瀉、白茅根、桔梗)是中藥復方制劑，具有健脾補腎、清化濕熱、活血化瘀等功效。王朝俊等[12]研究發(fā)現(xiàn),腎炎康復片可以通過調節(jié)p38MAPK信號通路，減少腎小球內TGF-β1表達和巨噬細胞的浸潤，從而改善阿霉素腎病模型腎炎組織炎癥損傷。

2)當歸芍藥散(當歸：芍藥：川芎：白術：茯苓：澤瀉=3:16:8:4:4:8)具有活血利水之功效。楊明月等[13]通過研究當歸芍藥散對腎病綜合征大鼠電解質紊亂的作用，得出該方可以通過改變血清和尿液的鈉離子、鉀離子、氯離子濃度，調節(jié)體內電解質平衡，改善電解質紊亂，達到利水消腫功效。

3)加味當歸補血湯(黃芪：當歸：川芎：懷牛膝=1:1:1:1)是《內外傷辨惑論》中經典名方。黃芪補氣益腎，當歸補血通絡，二者合用達到益氣補血之功。在當歸補血湯中加入川芎和懷牛膝，川芎牛膝活血養(yǎng)陰，利尿通淋，改善血液循環(huán)，防止硬化。魏明剛等[14]利用阿霉素腎病模型研究加味當歸補血湯的作用機制，發(fā)現(xiàn)該方可上調足細胞標志蛋白Nephrin、Podocin的表達，間接減輕足細胞的損傷，保持足細胞的完整性，延緩腎臟纖維化的速度。

4)五味子復方(五味子為主藥，輔以黃芪、丹參等)以補腎活血為原則。左春霞等[15]研究發(fā)現(xiàn)五味子復方可以減輕阿霉素腎病小鼠尿蛋白含量，其作用機制可能與腎皮質WT1蛋白、Nephrin和 Podocin mRNA表達有關，實驗結果表明治療組Nephrin mRNA和Podocin mRNA表達高于模型組，模型組腎小球熒光染色WT1成節(jié)段性缺失，治療組較輕。即SM通過上調WT1、Nephrin、Podocin mRNA表達，減少尿蛋白生成，保護足細胞病變。

5)補益脾腎方(由黃芪、山茱萸、白術、三七、川芎等藥物組成)具有補腎健脾、益氣活血等作用。陳彤等[16]研究發(fā)現(xiàn),補益脾腎方可以下調腎間質TGF-β1、結締組織生長因子CTGF的表達，抑制細胞外基質合成，減輕腎臟纖維化，延緩腎臟衰竭。

6)柴苓歸芪湯(由柴胡、黃芩各10 g,黃芪30 g,當歸、茯苓各15 g,豬苓、地龍各12 g等組成)具有補腎益氣，瀉火解毒，利水消腫等功效。ZHANG等[17]研究發(fā)現(xiàn),柴苓歸芪湯能降低蛋白尿及血清TC、TG、LDL、Cr、BUN水平，而血清TP、ALB、HDL水平顯著升高。即歸芪湯能夠降低尿蛋白，調節(jié)脂質代謝，保護腎功能，延緩大鼠腎臟損害。

7)祛風通絡：祛風通絡方(青風藤20 g，海風藤20 g，桑寄生30 g，烏梢蛇15 g，黃芪30 g，生地黃20 g)在臨床上治療腎性蛋白尿取得了較好的效果。王娟等[18-19]通過觀察腎小球內皮細胞VEGF及其受體FLK-1的表達、細胞骨架蛋白Desmin及裂孔隔膜蛋白CD2AP的表達，探討祛風通絡方對阿霉素大鼠腎臟保護的作用機制，研究發(fā)現(xiàn)祛風通絡方可以下調VEGF及其受體FLK-1的表達、下調Desmin及CD2AP基因及蛋白的表達，在降低阿霉素大鼠尿蛋白含量的同時，改善腎小球內皮細胞的損傷，對細胞骨架重塑以及足細胞形態(tài)的完整也起著一定作用。

8)清熱解毒消腫：黃葵膠囊HKC是以黃葵總黃酮為主要成分的提取物制劑，臨床廣泛應用治療各類慢性腎臟病CKD，如腎病綜合征、糖尿病腎病、膜性腎病等。通過研究發(fā)現(xiàn),HKC能降低蛋白尿、保護腎功、減輕腎小管損傷、清除自由基、減輕腎小球炎癥反應等。趙青等[20]研究發(fā)現(xiàn),HKC改善了阿霉素大鼠奶蛋白及血清白蛋白含量，抑制系膜細胞MC增生，細胞外基質ECM及膠原成分的沉積，降低腎小球α-SMA和I型膠原水平，下調腎組織TGF-β1和磷酸化p38MAPK蛋白的表達。即改善腎臟炎性損傷的機制是HKC干預了腎組織炎癥信號通路p38MAPK。

2.2 單味中藥及其提取物

目前，對于單味中藥及提取物的研究也越來越多，主要研究其物質基礎、藥理功效及作用機制等。研究后發(fā)現(xiàn)許多單味中藥及其提取物對血脂、腎功、蛋白含量等具有明顯改善作用。

2.2.1 利水消腫藥

1)車前草：陳蘭英等[21]通過實驗發(fā)現(xiàn),車前草水提物能不僅能升高阿霉素大鼠血清TP、ALB，還能降低丙二醛MDA、轉化生長因子TGF-β1，增加超氧化物歧化酶SOD含量，可能通過清除氧自由基和抑制脂質過氧化反應改善腎病綜合征。2)白茅根：陳蘭英等[22]針對白茅根不同提取物對阿霉素大鼠腎臟保護進行研究，研究發(fā)現(xiàn)白茅根乙酸乙酯部位可通過降低NF-κB的上游分子TNF-α和TGF-β1、抑制了NF-κB p65的活性，從而減少尿蛋白的排泄，減輕腎臟組織的炎癥，抑制腎小球纖維化，改善腎臟病理損害。3)黃芪：WANG等[23]研究發(fā)現(xiàn),黃芪甲苷可降低尿蛋白水平， Nephrin和Podocin mRNA蛋白的表達水平明顯高于模型組，從而維持裂隙膜的完整。4)苦參:Xu等[24]研究發(fā)現(xiàn)，苦參堿能降低IL-6、IL-10、TGF-β含量，升高Foxp3水平，改善Foxp3和RORγT的表達，苦參堿通過抑制腎臟炎癥和調節(jié)Treg/Th1改善腎病綜合征，修復腎臟損傷。

2.2.2 補腎活血藥

1)紅景天：苗里寧等[25]研究發(fā)現(xiàn)紅景天苷除了能有效減少阿霉素腎病大鼠尿蛋白，提高血漿蛋白，改善脂質代謝；還能抑制纖維連接蛋白FN、層黏連蛋白LN的表達;抑制細胞外基質ECM的合成，通過降低外周血TGF-β水平，下調大鼠腎組織纖溶酶原激活物抑制劑PAT-1、上調基質金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9的水平，從而減少細胞外基質ECM在腎小球中的積聚,從而促進腎臟病理損害的修復。2)丹參：呂波等[26]通過研究丹參酮ⅡA磺酸鈉對阿霉素腎病大鼠腎臟損傷的干預機制，實驗結果表明丹參酮ⅡA磺酸鈉可能通過降低血漿黏度，抑制凝血與纖溶所造成的腎損傷，抑制腎臟組織TGF-β、PAI-1的表達，從而對腎臟起到保護作用。3)三七：吳金玉等[27]研究三七注射液對阿霉素大鼠TGF-β1/p38MAPK信號通路的影響，三七注射液可以下調TGF-β1和p38MAPK蛋白的表達，阻斷腎組織炎癥信號通路，降低腎間質纖維化損傷。鐘丹等[28]通過觀察三七總皂苷對阿霉素大鼠血液流變學影響，發(fā)現(xiàn)三七總皂苷通過擴張腎動脈及小血管，降低血液高凝狀態(tài)，改善腎臟循環(huán)。

2.2.3 祛風除濕藥

雷公藤：曹英杰等[29]研究發(fā)現(xiàn)雷公藤甲素對阿霉素大鼠作用可能通過抑制乙酰肝素酶Hpa的含量而減少HSPG的表達，從而對腎小球基底膜的電荷屏障起到保護作用。

3 小結與展望

由以上論述可知，阿霉素腎病是最經典的腎病病理模型，主要表現(xiàn)為蛋白尿、足細胞損害、高血脂的腎病綜合征[30-32]。隨著病情的發(fā)展出現(xiàn)腎小球硬化、腎臟纖維化，最嚴重可導致腎功能衰竭。大量實驗研究發(fā)現(xiàn),治療阿霉素腎病可從幾方面入手。1)蛋白尿與足細胞：蛋白尿是阿霉素腎病模型的最常見的癥狀，也是臨床比較難解決的問題之一。腎小球過濾屏障破壞與蛋白尿密切相關。足細胞的足突分為3個膜性結構域：頂膜區(qū)，裂孔隔膜SD和域腎小球基底膜GBM相連的基膜區(qū)[33]。腎小球內皮細胞、基底膜及足細胞等共同構成了腎小球濾過膜。FAK/Pyk2蛋白的高表達可以導致尿蛋白水平增加，敲除或降低其蛋白可降低尿蛋白的排泄。VEGF及其受體FLK-1不僅參與濾過膜的形成，對腎臟微血管結構改變也起著重要作用。腎臟足細胞裂孔隔膜SD上有很多蛋白，CD2AP、Nephrin表達異常與蛋白尿的發(fā)生緊密相關。足細胞標志蛋白Nephrin、Podocin和足細胞骨架蛋白Desmin等是過濾屏障的結構基礎。這些蛋白參與并維持正常足細胞的生理功能以及信號的傳遞，在修復足細胞損傷及重塑足細胞完整上起到了重要的作用。2)腎臟纖維化：轉化生長因子-β1是導致腎臟纖維化重要細胞因子，它在細胞外基質代謝、促進腎小球硬化病變過程中起著關鍵作用。TGF-β1和p38MAPK蛋白參與阻斷腎組織炎癥信號通路，降低腎間質纖維化損傷[34]。α-SMA蛋白也是纖維細胞活化標志蛋白，下調α-SMA也可降低腎間質纖維化損傷[35]。3)改善血液循環(huán)：擴張腎動脈及小血管，降低血漿黏度，降低血液高凝狀態(tài)，抑制凝血與纖溶所造成的腎損傷，改善腎臟循環(huán)。但是阿霉素腎病模型腎炎仍有不足之處，所涉及的機制研究僅僅是一些單個指標、蛋白、基因的觀察，沒有一個完整而系統(tǒng)的體系。未來可以利用代謝組學、蛋白組學、基因組學等系統(tǒng)生物學方法對阿霉素腎病模型進行整體研究，全面揭示阿霉素腎病模型的機制[36]。

[1] Bertani T,Poggi A,Pozzoni R,et al.Adrimyoin induced nephritic syndrome in rays[J].Laboratory Investigation,1982,46(50):16-18.

[2] Floege J,Bienert A.Glomerulonephritis[J].Dtsch med Wochenschr,2013,138(30):1515-1528.

[3] 戴芹,劉劍,郝旭,等.丙戊酸鈉對阿霉素腎病大鼠的腎保護作用[J].上海交通大學學報,2014,34(5):573-577.

[4] 王軍建,王列,蘇宇飛,等.培哚普利對阿霉素腎病大鼠腎臟的保護作用[J].山東醫(yī)藥,2013,53(35):26-28.

[5] 楊沿浪,鄒和群,張道友,等.貝那普利、螺內酯聯(lián)用對阿霉素腎病大鼠腎小管保護作用的研究[J].中國臨床藥理學與治療學,2012,17(4):381-386.

[6] Jovanovi Dijana B,Jovovic curcica,Varagic Jasmina,et al.Slowing down of chronic renal failure progression with captopril in spontaneously hypertensive rats with adriamycin nephropathy[J].Srpski Arhiv za Celokupno Lekarstvo,2002,130(3):73-80.

[7] 吳仁勝,張道友,陳忠輝,等.卡托普利與洛伐他汀聯(lián)用對阿霉素腎病大鼠血清IL-6的影響[J].實用藥物與臨床,2008,11(2):65-67.

[8] 張道友,吳仁勝,陳忠輝,等.卡托普利與洛伐他汀聯(lián)用對阿霉素腎病大鼠血清TNF-α的影響[J].放射免疫學雜志,2007,20(6):488-490.

[9] 張文曉,張碧麗.阿霉素腎病大鼠血清IL-17、IL-6的動態(tài)變化及其意義[J].天津醫(yī)科大學學報,2016,22(3):204-207.

[10] 陳小英,王菊霞,鄭京,等.潑尼松對阿霉素腎病大鼠腎組織FAK/Pyk2表達的影響[J].南方醫(yī)科大學學報,2014,34(8):1149-1153.

[11] 鄒艷紅,遲瑛嬌,趙塔娜,等.來氟米特對阿霉素腎病大鼠尿、腎臟VEGF表達的影響[J].黑龍江醫(yī)藥科學,2013,36(1):48-49.

[12] 王朝俊.腎炎康復片改善阿霉素腎病模型腎組織炎癥損傷的分子機制[D].南京:南京中醫(yī)藥大學,2011:12.

[13] 楊明月,岳曉莉,周敏,等.基于電解質研究當歸芍藥散對腎病綜合征大鼠作用[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報,2017,19(1):39-41.

[14] 魏明剛,張玲,倪莉,等.加味當歸補血湯對阿霉素腎病大鼠腎臟足細胞保護機制的研究[J].中國中西醫(yī)結合雜志,2012,32(8):1077-1082.

[15] 左春霞,譚小月,張勉之.五味子復方減輕阿霉素腎病小鼠尿蛋白的實驗研究[J].天津中醫(yī)藥,2014,31(1):33-35.

[16] 陳彤,舒惠醛,易曉穎.補益脾腎方對阿霉素腎病大鼠腎間質轉化生長因子-β1和結締組織生長因子表達的影響[J].四川中醫(yī),2012,30(8):53-55.

[17] ZHANG Fen-Fang,CHEN Zhi-Qiang.Protective effects of Chailing Guiqi Decoction combined with lumbrukinase on renal function in rats with adriamycin nephropathy[J].Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao,2005,3(4):294-298.

[18] 王娟,崔志軍,馬巧亞,等.祛風通絡方對阿霉素大鼠腎小球內皮細胞VEGF及其受體FLK-1表達的影響[J].長春中醫(yī)藥大學學報,2015,35(5):897-900.

[19] 王竹,劉俊田,孫萬森,等.祛風通絡方對阿霉素腎病大鼠足細胞Desmin及CD2AP蛋白的影響[J].中國中西醫(yī)結合雜志,2014,34(2):203-208.

[20] 趙青,萬毅剛,孫偉,等.黃葵膠囊對阿霉素腎病腎組織炎癥信號通路p38MAPK的干預作用[J].中國中藥雜志,2012,37(19):2926-2934.

[21] 陳蘭英,王昌芹,羅園紅,等.車前草水提物對腎小球腎炎大鼠的保護作用[J].時珍國醫(yī)國藥,2015,26(12):2874-2877.

[22] 陳蘭英,陳卓,王昌芹,等.白茅根不同提取物對阿霉素腎病大鼠的保護作用及對TGF-β1、NF-κB p65分子表達的影響[J].中藥材,2015,38(11):2342-2347.

[23] Na WANG,Ri-Bao WEI,Qing-Ping LI,et al.Protective effects of astragaloside in rats with adriamycin nephropathy and underlying mechanism[J].Chinese Journal of Natural Medicines,2016,14(4):270-277.

[24] Yixiao Xu. Matrine ameliorates adriamycin-induced nephropathy in rats by enhancing renal function and modulating Th17/Treg balance[J].European journal of pharmacology,2016,791(15):491-501.

[25] 苗立寧.高山紅景天苷對阿霉素大鼠腎小球硬化防治作用研究[D].北京:中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院,2005:19.

[26] 呂波,楊茂波,肖洪彬.丹參酮IIA磺酸鈉針對阿霉素腎病大鼠腎損傷的干預機制研究[J].中華中醫(yī)藥學刊，2015,33(10):2470-2471.

[27] 吳金玉,周倍伊,唐宇,等.三七注射液對阿霉素腎纖維化大鼠TDF-β1/P38MAPK信號通路的影響[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2015,25(10):1-5.

[28] 鐘丹,劉明平,鄒亦平,等.三七總皂苷對系膜增生腎小球腎炎模型大鼠血液流變學的影響[J].中國老年學雜志，2010,30(7):958-959.

[29] 曹英杰,陳曉嵐,范亞萍,等.雷公藤甲素對阿霉素腎病大鼠腎臟乙酰肝素酶表達及蛋白尿的影響[J].長江大學學報,2014,11(36):110-115.

[30] 喬鐵,馬進,劉麗,等.防己黃芪湯對阿霉素腎病大鼠蛋白尿及水通道蛋白2的影響[J].中醫(yī)藥信息,2015,32(4):17-19.

[31] 范穎,喬鐵,劉麗,等.防己黃芪湯對阿霉素腎病大鼠蛋白尿及炎性因子的影響[J].中醫(yī)藥信息,2014,31(6):47-49.

[32] 黃雯靜,劉娜,楊馨,等.腎炎消白顆粒對阿霉素腎病大鼠Podocin、α-actinin-4蛋白的影響[J].中醫(yī)藥學報,2015,43(5):44-47.

[33] 龔雪,吳少波,陳明.足細胞并的研究進展[J].湖南中醫(yī)藥雜志,2017,33(1):171-174.

[34] 辛冰牧,楊紅振,胡卓偉.腎纖維化發(fā)病機制及治療學研究進展[J].國際藥學研究雜志,2008,35(5):349-354.

[35] 張均.Snail及α-SMA在IgA腎病中的表達及意義[D].重慶:重慶醫(yī)科大學,2015.

[36] 羅國安,梁瓊麟,王義明,等.中醫(yī)藥系統(tǒng)生物學發(fā)展及展望[J].中國天然藥物,2009,7(4):242-248.

國家重點基礎研究發(fā)展計劃(973計劃)項目(No.2013CB531801)

徐靜(1986-)，女，黑龍江中醫(yī)藥大學2014級中藥學博士研究生。

王秋紅*(1969-)，女，教授，博士研究生導師，主要從事中藥炮制研究、中藥藥效物質基礎研究和新藥開發(fā)工作。

2016-12-15

R285

A

1002-2406(2017)03-0110-03

修回日期：2016-12-30