Ⅰ群禽腺病毒的流行病學(xué)和防控研究現(xiàn)狀

（青島易邦生物工程有限公司，山東青島 266114）

Ⅰ群禽腺病毒的流行病學(xué)和防控研究現(xiàn)狀

楚電峰，劉相娥，薄智勇，劉秋云，馮嫣芳，劉文亭

（青島易邦生物工程有限公司，山東青島 266114）

近年來，I群禽腺病毒在多國引發(fā)疫情，主要引起禽的心包積水-肝炎綜合征和雞包涵體肝炎，給養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本文介紹了I群禽腺病毒的血清型分類和流行病學(xué)研究概況，闡述了I群禽腺病毒綜合防控措施，介紹了滅活疫苗、活疫苗和基因工程疫苗的研究進(jìn)展，以期為該病的防控提供參考。

I群禽腺病毒；心包積水-肝炎綜合征；雞包涵體肝炎；肉仔雞；防控；疫苗

禽腺病毒（Fowl adenovirus，F(xiàn)AdV）是禽體內(nèi)的一種條件性病原體，一般情況下不表現(xiàn)臨床癥狀，但在某些條件下，特別是并發(fā)感染時(shí)，腺病毒會(huì)表現(xiàn)嚴(yán)重的致病性[1]。根據(jù)不同的特異性抗原，將禽腺病毒分為3個(gè)群：I群禽腺病毒可引起心包積水、包涵體肝炎、再生障礙性貧血、出血、輕度呼吸道疾病和產(chǎn)蛋量減少等病癥；II群禽腺病毒主要引起火雞出血性腸炎；Ⅲ群禽腺病毒主要引起減蛋綜合征[2]。2014—2015年，我國多個(gè)省份暴發(fā)了由I群禽腺病毒引 發(fā)的疫病，給養(yǎng)殖生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

1 I群禽腺病毒的血清型分類

I 群禽腺病毒（Fowl adenovirus，F(xiàn)AdV-I）根據(jù)分子結(jié)構(gòu)可分為 A、B、C、D、E 5個(gè)種，基于交叉中和試驗(yàn)和限制性內(nèi)切酶消化分析，又分為A（血清1型）、B（血清5型）、C（血清4、10型）、D（血清2、3、9、11型）、E（血清6、7、8a、8b型）等12個(gè)血清型[3]。利用12個(gè)血清型之間的Hexon全基因序列，可以評(píng)價(jià)FAdV-I家族的種系發(fā)育關(guān)系[4]。

2 I群禽腺病毒流行病學(xué)

近年來，F(xiàn)AdV-I所引起的心包積水綜合征和包涵體肝炎的臨床病例數(shù)量在世界各地明顯增加，給許多國家 造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，如印度、美國、加拿大、日本和韓國[2]。FAdV-I廣泛存在于多種禽類的消化道和呼吸道中，可保持潛伏感染，在雞群中至少潛伏1個(gè)代次，而用雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測不到，但在一定條件下，將作為繼發(fā)病原引起雞群發(fā)病和死亡[5-6]。FAdV-I主要侵害幼齡雞群，特別是3～8周齡的育雛、育成期肉雞，病死率最高可達(dá)80%。FAdV既可通過孵化種蛋垂直傳播，又可通過病雞向健康雞水平傳播，但以垂直傳播為主[7]。

2015年以來，我國多地區(qū)雞群暴發(fā)由FAdV-I引起的心包積液綜合征和雞包涵體肝炎疫情，從高發(fā)病地區(qū)血清型分析來看，主要為 C（血清4型）和E（血清8型）[8]。FAdV-I的12種血清型均可以引起包涵體肝炎，但目前以FAdV-8a/b為主，而引起心包積水綜合征只有FAdV-4型[2]。

2.1 心包積水-肝炎綜合征（Hydropericardiumhepatitis syndrome，HHS）

本病主要發(fā)生于3～5周齡的肉雞，也可發(fā)生于相似的日齡段種雞和蛋雞，肉雞的病死率高達(dá)80%，而蛋雞的病死率僅在10%以下[9，21]。心包積水綜合征在初期診斷較為困難，無明顯的臨床癥狀，發(fā)病7天后，日死亡量突然上升，維持1～2周后，死亡率逐漸下降，病雞精神萎靡不振，排黃綠色糞便，解剖死亡雞組織臟器可見有明顯的心包積水，腎臟和肺臟腫大，肝臟腫大、變色、壞死，肝細(xì)胞內(nèi)有嗜堿性包涵體[10]。

2.2 雞 包 涵 體 肝 炎（Avian Inclusion Body Hepatitis，I BH）

又稱貧血綜合征（Anemia Syndrome），目前常見于3～7周齡的肉雞。感染本病的雞群初期無明顯癥狀，個(gè)別雞會(huì)突然死亡，3～4 d后死亡率達(dá)到頂峰，6～7 d后返回到正常范圍內(nèi)，一般病死率在10%～30%之間。IBH的病理解剖變化表現(xiàn)為肝臟蒼白、腫大、質(zhì)脆，表面有不同程度的點(diǎn)狀和斑狀出血點(diǎn)，伴發(fā)局部灶性壞死，肝細(xì)胞核內(nèi)可見嗜酸性或嗜堿性包涵體，法氏囊萎縮有出血點(diǎn)，骨髓呈灰白或黃色病變[11]。

3 I群禽腺病毒防控現(xiàn)狀

3.1 綜合防控措施

首先，F(xiàn)AdV-I 對(duì)外界環(huán)境抵抗力弱，所以只需做好雞舍衛(wèi)生消毒工作，就可減少病原體的數(shù)量，防止病毒水平傳播[1]。其次，補(bǔ)充微量元素和維生素B、C、K及魚肝油等，提高雞群免疫力[12]，增強(qiáng)雞群抗病力。成年雞盡管未表現(xiàn)明顯臨床癥狀，但由于垂直傳播將導(dǎo)致后代感染和死亡，因此，引進(jìn)種蛋和種雞的病原檢測和凈化，對(duì)防止原種雞腺病毒感染十分重要[13-14]。研究表明，傳染性法氏囊病毒（IBDV）和雞傳染性貧血病毒（CAA）等免疫抑制性病原可增強(qiáng)FAdV-I的致病性，產(chǎn)生協(xié)同作用，因此控制IBDV和CAA的傳播是預(yù)防FAdV-I感染的重要手段[15-16]。有研究發(fā)現(xiàn)，腺病毒與黃曲霉菌混合感染后，也可以引起典型的心包積液綜合征，甚至與單獨(dú)感染 FAdV-4 和單獨(dú)飼喂黃曲霉毒素相比出現(xiàn)更嚴(yán)重的免疫器官損傷[17]，因此做好雞群疫病的全面防控，減少協(xié)同致病病原體種類和數(shù)量，對(duì)增強(qiáng)雞群對(duì)抗FAdV的能力十分重要。

3.2 疫苗研究進(jìn)展

FAdV-I目前分離到至少12個(gè)血清型，血清型的復(fù)雜增加了疫苗研制的難度。國內(nèi)至今無商品化的疫苗來防控FAdV-I感染，但近年來國內(nèi)外有報(bào)道，滅活疫苗、減毒活疫苗及基因亞單位疫苗等可用于該病的免疫預(yù)防。

3.2.1 滅活疫苗。滅活疫苗具有成本低、安全、易于儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)葍?yōu)勢。劉聚祥等[18]利用血清 8型的FAdV-I制備了雞包涵體肝炎油乳劑滅活苗，通過免疫試驗(yàn)和安全性試驗(yàn)證實(shí)，對(duì)血清8型病毒引起的感染具有良好的保護(hù)效果，而該疫苗對(duì)其他血清型病毒的交叉保護(hù)性如何，需進(jìn)一步研究。Kim等[13]研究表明，滅活油乳劑FAdV-4疫苗可以有效預(yù)防各種血清型的FAdV-I的傳播，其中對(duì)FAdV-5、FAdV-8a和 FAdV-11可起到完全保護(hù)的作用，并且對(duì)免疫禽類后代同樣起到了保護(hù)作用。Junnu等[19]針對(duì)引起泰國IBH的血清型FAdV-2，制備了雙乙烯亞胺FAdV-2滅活苗，并證明其對(duì)胚蛋及雞的保護(hù)率分別達(dá)到了90%和100%，此疫苗可有效預(yù)防當(dāng)?shù)豂BH的發(fā)生。Ahmad等[20]制備了不同濃度的甲醛滅活HPS病變雞肝組織勻漿液，獲得5%的甲醛滅 活苗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該種疫苗制備成本低、免疫后保護(hù)效果好。Chandra等[9]用制備的滅活肝組織疫苗和滅活的細(xì)胞培養(yǎng)物疫苗，分別對(duì)10～15日齡育雛雞皮下免疫0.25 mL/只和103.5LD50/只，結(jié)果均使育雛雞死亡率大大降低。而Mehmood等[21]研究表明，在免疫過當(dāng)?shù)豀PS病死雞肝勻漿疫苗的肉雞中，HPS的發(fā)病仍常見，說明在HPS滅活苗生產(chǎn)的過程中，很多因素（如抗原來源及其含量、佐劑類型）會(huì)影響疫苗的免疫效果，雖其可廣泛用于控制肉雞IBH-HPS的發(fā)生，但存在一些缺陷：一是誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)水平較低，對(duì)不同抗原成分影響不同；二是可引起不可預(yù)知的疫苗免疫反應(yīng)[22]。青島易邦生物工程有限公司根據(jù)疫病流行特點(diǎn)，自2012年起開始跟蹤研究禽腺病毒的發(fā)展與變化，從全國眾多發(fā)病雞場篩選出具有代表性的毒株，用于疫苗開發(fā)。結(jié)合病毒的血清型、增殖效率、免疫原性以及病毒效價(jià)等特點(diǎn)，目前已成功研制出適于疫苗生產(chǎn)的病毒株，經(jīng)農(nóng) 業(yè)部審批，于2016年獲得臨床試驗(yàn)許可并取得臨床批件。該產(chǎn)品通過細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)，免疫效果良好，將會(huì)在我國的禽腺病毒疫病防控中發(fā)揮重要作用。

3.2.2 活疫苗。由于滅活的肝臟疫苗未能保護(hù)巴基斯坦肉雞行業(yè)，Mansoor等[22]通過在雞胚上盲傳4代后得到1株雞胚適應(yīng)毒，通過連續(xù)傳代12次得到弱毒活疫苗株。將傳16代的弱毒苗與商品化肝組織甲醛滅活疫苗進(jìn)行免疫攻毒對(duì)比發(fā)現(xiàn)，弱毒苗達(dá)到了94.73%的保護(hù)率，市售滅活疫苗僅有65%的保護(hù)率，并且肝臟和心臟的病變損傷率更小，證明這種新開發(fā)的疫苗可以更好地控制雞心包積水綜合征的發(fā)生。Ali等[23]通過在雞胚上盲傳3代后得到1株雞胚適應(yīng)毒，通過連續(xù)傳代9次得到1株弱毒活疫苗株，通過試驗(yàn)對(duì)比不同制備方法的疫苗保護(hù)率，結(jié)果顯示，IBH-HPS弱毒活疫苗保護(hù)率達(dá)100%，β-丙內(nèi)酯滅活疫苗保護(hù)率為70%，原油乳化滅活疫苗保護(hù)率為80%。結(jié)果表明，弱毒活疫苗具有更好的保護(hù)效果，但也存在生產(chǎn)成本高、可能發(fā)生毒力返強(qiáng)等缺點(diǎn)。

3.2.3 基因工程疫苗。FAdV-4病毒粒子呈20面體對(duì)稱結(jié)構(gòu)，具有12個(gè)五鄰體（penton）、240個(gè)六鄰體（hexon）及纖絲蛋白。六鄰體是FAdV的主要結(jié)構(gòu)蛋白，病毒感染主要由六鄰體和纖絲蛋白介導(dǎo)，六鄰體蛋白帶有特異性抗原決定簇，可以引發(fā)極強(qiáng)的中和反應(yīng)，纖絲與細(xì)胞受體結(jié)合、病毒的組織嗜性密切相關(guān)[24]。這些基因的分子特征將為基因疫苗開發(fā)提供依據(jù)。重組亞單位疫苗因具有安全、高效等特點(diǎn)，在未來具有良好的開發(fā)和應(yīng)用前景。Shah等[25]將大腸埃希菌原核表達(dá)HPS病毒的五鄰體核衣殼蛋白制成亞單位疫苗，用于免疫肉雞，通過免疫原性測定和強(qiáng)毒攻毒保護(hù)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該疫苗保護(hù)率達(dá)90%以上，證明重組五鄰體核衣殼蛋白亞單位疫苗可以作為預(yù)防HPS的備選疫苗。唐熠等[26]將FAdV-ICELO株的hexon基因與雞IL-2基因連接，構(gòu)建了pc DNA3.1-hexon-Linker -Ch IL2融合基因重組真核表達(dá)載體，免疫后檢測抗體水平，攻毒后檢測排毒情況。結(jié)果顯示，重組基因的抗體水平要明顯高于對(duì)照組，而且能更好地抑制排毒。Rai等[27]構(gòu)建含有hexon基因的重組pcDNA3.1/ V5-His-TOPO，通過對(duì)3日齡雞肌肉注射50 mg重組質(zhì)粒DNA，接種21天后進(jìn)行10 000 ID50肝勻漿攻毒，對(duì)照組出現(xiàn)疾病感染和死亡，而接種組安全有效。研究表明，此疫苗可以作為候選DNA疫苗，來保護(hù)禽類的FAdV-4感染。Schachner等[28]通過桿狀病毒表達(dá)，系統(tǒng)表達(dá)FAdV-4衣殼蛋白fi ber-1、fi ber-2和hexon loop-1蛋白，分別用3種純化蛋白免疫1日齡SPF雞，免疫21天后攻毒檢測其對(duì)試驗(yàn)雞的保護(hù)力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，fi ber-2蛋白表現(xiàn)出很好的保護(hù)力，攻毒后雞死亡率僅為3.5%，fi ber-1表現(xiàn)出中等保護(hù)率，雞死亡率為38%，而hexon loop-1未對(duì)雞群起到保護(hù)作用，雞死亡率為78%，與陰性對(duì)照組無明顯差異；重組fi ber-2在該研究中被認(rèn)定為保護(hù)性免疫原，可作為有吸引力的候選亞基疫苗來預(yù)防雞的心包積綜合癥。上述研究表明，基因疫苗能夠激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，使抗體產(chǎn)生特異性和非特異性免疫應(yīng)答，具備了弱毒疫苗的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)沒有逆轉(zhuǎn)的危險(xiǎn)。

4 小結(jié)

近年來，F(xiàn)AdV-I所引起的心包積水-肝炎綜合征和雞包涵體肝炎是引起畜禽養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)巨大損失的重要原因，由于FAdV血清型較多，國內(nèi)目前尚缺少商業(yè)化疫苗以及診斷試劑盒，因此除加強(qiáng)日常管理、防止并發(fā)感染外，應(yīng)盡快加速交叉保護(hù)疫苗的研制。研究表明，組織滅活苗、減毒活疫苗及新型基因疫苗對(duì)雞群抵御FAdV-I能起良好的保護(hù)效果，但保護(hù)效果差異較大。因此應(yīng)盡快研制穩(wěn)定有效的、針對(duì)FAdV-I復(fù)雜血清型的廣譜商品化疫苗，這樣才能實(shí)現(xiàn)對(duì)該病的有效防控。

[1] 王慧，程小果，郭建友，等. 近期雞群I群禽腺病毒的流行與防治[J]. 上海畜牧獸醫(yī)通訊，2016（2）：62-63.

[2] PANIGRAHI S，SWAIN K，ROUTRAY A，et al. Inclusion Body Hepatitis and Hydropericardium Syndrome in Poultry：A Brief Review[J]. ARC Journal of Animal and Veterinary Sciences，2016（4）：12-16.

[3] MITTAL D，JINDAL N，TIWARI A K，et al. Characterization of fowl adenoviruses associated with hydropericardium syndrome and inclusion body hepatitis in broiler chickens[J]. Virus Disease，2014，25（1）：114-119.

[4] ZHANG T，JIN Q，DING P，et al. Molecular epidemiology of hydropericardium syndrome outbreakassociated serotype 4 fowl adenovirus isolates in central China[J]. Virology Journal，2016，13（1）：1.

[5] CARWRIGHT S F，HUCK A L. Viruses isolated in association with herd，infertility，abortious and stillbirths inpig[J]. Vet Res，1967，81：196-197.

[6] FADLY A，RIEGLE ，NAZERIAN K，et al. Some observations on an adenovirus isolated from specifi c pathogen free chickens[J]. Poultry Science，1980，59：21-27.

[7] MUHAMMAD K S，張賢群. 預(yù)防心包積水綜合征所造成的損失[J]. 國外畜牧學(xué)：豬與禽，2010，30（5）：29-31.

[8] 牛登云，沈元，王蕊，等. 2015年我國I群禽腺病毒分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 中國家禽，2016，38（9）：65-68.

[9] CHANDRA R，SHUKLA S K，KUMAR M. The hydropericardium syndrome and inclusion body hepatitis in domestic fowl[J]. Tropical animal health and production，2000，32（2）：99-111.

[10] ASTHANA M，CHANDRA R，KUMAR R. Hydropericardium syndrome：current state and future developments[J]. Archives of virology，2013，158（5）：921-931.

[11] 郝東敏. 山東地區(qū)I群禽腺病毒的分離鑒定及多價(jià)油乳劑滅活疫苗的研制[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014.

[12] 李佳，文鵬程，韓振海，等. 新發(fā)雞心包積液綜合征研究進(jìn)展[J]. 中國獸醫(yī)雜志，2016（8）：65-67.

[13] KIM M S，LIM T H，LEE D H，et al. An inactivated oil-emulsion fowl Adenovirus serotype 4 vaccine provides broad cross-protection against various serotypes of fowl Adenovirus[J]. Vaccine，2014，32（28）：3564-3568.

[14] 崔治中. 種源凈化是實(shí)現(xiàn)家禽規(guī)?；B(yǎng)殖業(yè)生物安全最基本的核心措施[J]. 中國家禽，2016，34（2）：4-8.

[15] FADLY A，WINTERFIELD R，OLANDER H. Role of the bursa of Fabricius in the pathogenicity of inclusion body hepatitis and infectious bursal disease viruses[J]. Avian diseases，1975，20（3）：467-477.

[16] 劉東，劉紅祥，于靜，等. I亞群腺病毒在我國雞群的流行病學(xué)調(diào)查[J]. 中國家禽，2015，37（15）：70-73.

[17] SHIVACHANDRA S B，SAH R L，SINGH S D，et al. Immunosuppession in Broiler Chicks Fed Aflatox and Inoculated with Fowl Adenovi-rus Serotype-4（FADV-4）Associated with Hydropericardium Syn-drom[J]. Division of Avian Diseases，2003，27：39-51.

[18] 劉聚祥，楊慶華. 雞包涵體肝炎油乳劑滅活苗的研制（簡報(bào)）[J]. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，23（3）：86-87.

[19] JUNNU S. An inactivated vaccine for prevention and control of inclusion body hepatitis in broiler breeders[J]. Thai Veterinary Medicine，2015，45（451）：55-62.

[20] AHMAD K，HASAN S. The efficacy of experimental Angara disease vaccines[J]. Pakistan Veterinary Journal，2004，24（2）：101-103.

[21] MEHMOOD M D，MUHAMMAD K，RABBANI M，et al. In process quality control factors affecting efficacy of Hydropericardium syndrome virus vaccine[J]. Pakistan J Zool，2011，43（1）： 73-77.

[22] MANSOOR M K，HUSSAIN I，ARSHAD M，et al. Preparation and evaluation of chicken embryo-adapted fowl adenovirus serotype 4 vaccine in broiler chickens.[J]. Tropical Animal Health & Production，2011，43（2）：331-338.

[23] ALI S，MAHMOOD M S，HUSSAIN I，et al. Preparation and Evaluation of Lyophilized Live Attenuated Vaccine of Inclusion Body Hepatitis Hydro-pericardium Syndrome（IBH-HPS） against Challenge in Broiler Chickens[J]. International Journal of Agriculture & Biology，2015，17（3）.

[24] PARK H S，LIM I S，KIM S K，et al. Molecular analysis of the hexon，penton base，and fiber-2 genes of Korean fowl adenovirus serotype 4 isolates from hydropericardium syndrome-affected chickens[J/OL]. Virus Genes，2016：1-6[2015-04-01]. https://link.springer.com/ article/10.1007/s11262-016-1393-z

[25] SHAH M S，ASHRAF A，RAHMAN M，et al. A subunit vaccine against hydropericardium syndrome using adenovirus penton capsid protein[J]. Vaccine，2012，30（50）：7153-7156.

[26] 唐熠，謝芝勛，熊文婕，等. I群禽腺病毒環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測方法的建立[J]. 中國獸醫(yī)科學(xué)，2010，40（7）：713-716.

[27] RAI A，BARUA S，RAI N. Induction of immune response in chicken vaccinated with a plasmid DNA encoding fowl adenovirus 4 hexon gene[J]. Public Health Reports，2005，113（6）：533-534.

[28] SCHACHNER A，MAREK A，JASKULSKA B，et al. Recombinant FAdV-4 fi ber-2 protein protects chickens against hepatitis-hydropericardium syndrome（HHS）[J]. Vaccine，2014，32（9）：1086-1092.

（責(zé)任編輯：杜憲）

Research Progress on the Epidemiology and Prevention and Control of Fowl Adenovirus Group I

Chu Dianfeng，Liu Xiang′e，Bo Zhiyong，Liu Qiuyun，F(xiàn)eng Yanfang，Liu Wenting
（YEBIO Bio-engineering Co.，Ltd of Qingdao，Qingdao，Shandong 266114）

In recent years，the outbreaks of Fowl adenovirus group I（Fadv）were found in many countries. Clinically，F(xiàn)adv mainly caused Hydropericardium-hepatitis syndrome（HHS）and Inclusion body hepatitis（IBH），resulting in great economic loss in the poultry industry. In this article，the classifi cation of its serotypes and research situation on epidemiology were introduced，the comprehensive measures of prevention and control for FadV group I were clarifi ed，and research progress on inactivated vaccine，live vaccine and genetic engineering vaccine was also introduced，hoping to offer reference for its prevention and control.

Fowl adenovirus group I；Hydropericardium-hepatitis syndrome；Inclusion body hepatitis；broiler chicken；prevention and control；vaccine

S852.65

：B

：1005-944X（2017）05-0086-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.05.024

雞重要疫病免疫防控新技術(shù)研究（2017YFNC020029）