蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺方法對卒中后抑郁模型大鼠的影響

李學勇，烏蘭

(1.北京中醫(yī)藥大學，北京 100029；2.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065)

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針 灸 推 拿

蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺方法對卒中后抑郁模型大鼠的影響

李學勇1,2，烏蘭2*

(1.北京中醫(yī)藥大學，北京 100029；2.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065)

目的:觀察蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺對卒中后抑郁(PSD)模型大鼠的影響。方法：32只SD雄性大鼠，隨機分為假手術(shù)組、模型組、蒙醫(yī)針刺組、鹽酸氟西汀組，自由飼養(yǎng)。用栓線法實施形成局灶性腦缺血再灌注損傷，7天后實施結(jié)合慢性不可預見性刺激與孤養(yǎng)至第14天，建立PSD模型。模型成立后實施治療14天。在實驗過程中觀察大鼠體質(zhì)量變化，并采用敞箱實驗和糖水偏愛實驗來進行行為學評價，酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測大鼠前額葉皮質(zhì)的5-羥色胺含量。結(jié)果：造模14天后，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠的體質(zhì)量增加緩慢，糖水消耗量、敞箱試驗的水平活動和垂直運動次數(shù)均明顯下降(P<0.05)。治療14天后，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠的體質(zhì)量、糖水消耗量、敞箱試驗的水平活動和垂直運動次數(shù)均明顯下降(P<0.05)，前額葉皮質(zhì)5-HT含量也明顯降低(P<0.05)。與模型組大鼠比較，針刺組和鹽酸氟西汀組大鼠的體質(zhì)量、糖水消耗量、敞箱實驗的水平活動和垂直運動次數(shù)均明顯增加(P<0.05)，前額葉皮質(zhì)5-HT含量明顯增加(P<0.05)。針刺組和鹽酸氟西汀組之間比較，無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論：蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺可改善大鼠的腦卒中后抑郁樣行為，明顯增加腦組織的5-HT的含量。因此，蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺對卒中后抑郁癥可能是一種有效的治療策略。

蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺；腦卒中后抑郁癥；行為學；皮質(zhì)5-HT

腦卒中是威脅人類身心健康及生命的一種嚴重的腦血管疾病。近年來，隨著人口老齡化問題不斷加劇，我國腦卒中患者數(shù)量不斷增加，其中每年新發(fā)的腦卒中病例約為120～150萬[1]。腦卒中后抑郁(post stroke depression,PSD)是腦卒中最常見的并發(fā)癥，是指有明顯臨床癥狀的卒中后繼發(fā)的抑郁癥，患者常表現(xiàn)出郁悶、憂郁情緒低落[2]等癥狀。目前治療除了家庭社會的支持、心里治療，藥物治療之外[3]，針刺作為一種安全、有效的治療方法，越來越多地被醫(yī)者與患者接受[4]。目前，尚未有蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺對PSD模型大鼠行為及大腦皮質(zhì)5-HT影響的報道。因此，本實驗研究初步探討蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺對PSD大鼠模型的行為及前額葉皮質(zhì)5-羥色胺含量的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

SPF級的雄性SD大鼠32只，體質(zhì)量280～300 g，由北京市海淀區(qū)興隆實驗動物養(yǎng)殖廠提供，許可證號：SCXK-(軍)2012-0004。實驗前大鼠適應性飼養(yǎng)1周后隨機分為假手術(shù)組、蒙醫(yī)針刺組、模型組、鹽酸氟西汀組,每組8只大鼠。

1.2 主要儀器及試劑

Multiskan MK3-型全自動多功能酶標儀(美國Thermo公司)；OFT-100型自主活動視頻分析系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)；YLS-19A型大鼠電動斷頭器(濟南益延科技發(fā)展有限公司)；Thermo-991型超低溫冰箱(美國Thermo公司)；BSA124S-CW型電子天秤(賽多利斯科學儀器有限公司)；國華牌SHA恒溫電振器(常州國華電器有限公司)；5-HT試劑盒(武漢華美生物工程有限公司)；鹽酸氟西汀分散片(生產(chǎn)廠家：PATHEON FRANCE法國，分包裝廠：禮來蘇州制藥有限公司，分包裝藥品批準文號：國藥準字J20120001)；針灸針：華佗牌0.40 mm×13 mm毫針(中國·蘇州醫(yī)療用品廠有限公司)。

1.3 模型制備

1.4 干預方法

應激結(jié)束后開始對蒙醫(yī)針刺組采用蒙醫(yī)頂會穴、額葉組穴進行針刺治療，使用華佗牌0.40 mm×13 mm毫針均為斜刺，深度約為0.2 mm左右，每次留針20 min，每日1次連續(xù)治療14天。鹽酸氟西汀組用蒸餾水配成氟西汀懸浮液，按4.06 mg/kg給藥，每日1次，共14天。模型組經(jīng)胃灌注蒸餾水14天。假手術(shù)組不做任何干預。

1.5 行為學觀察

卒中后抑郁大鼠見精神萎靡、毛色晦暗、規(guī)定時間內(nèi)水平活動和垂直活動次數(shù)明顯減少、糖水消耗量降低、飲食減少等即為造模成功標志[7]。

1.5.1 大鼠體質(zhì)量變化

分別在造模前、造模后(腦卒中后抑郁模型)、治療后共3次觀察體質(zhì)量變化。

1.5.2 糖水消耗實驗

造模前、造模后、治療后共3次，測每只大鼠糖水消耗量。將大鼠禁水24 h后給予1%蔗糖水溶液150 ml，1 h后計算每只大鼠1%蔗糖水的飲用量。該實驗觀測大鼠的快感反應。

簫聲流淌，四小姐進入樂音營造的世界。她仿佛看見，一只哀鴻在寒潭照影，在青霄孤鳴，心中突如其來涌上陣陣感動，再看面前的臘梅，仿佛也跟著顫動。

1.5.3 敞箱實驗

造模前、造模后、治療后共3次進行敞箱實驗。實驗所用敞箱是立柱體，四壁黑色，地等面積劃分9塊，上方放置攝像機。將大鼠放置于底面中心方格，記錄5 min內(nèi)水平活動和垂直運動次數(shù)。大鼠穿越敞箱底面格數(shù)為水平活動得分，垂直活動得分以兩前肢離地1 cm以上為準。

1.6 取樣品及檢測

實驗結(jié)束后，10%水合氯醛腹腔注射麻醉。將大鼠斷頭快速取腦，在冰盤上剪去前額葉皮質(zhì)后置于速凍管，用液氮快速冷凍并放入-80℃冰箱保存待測。用ELISA檢測技術(shù)，按試劑盒說明進行檢測大鼠前額葉皮質(zhì)5-HT的含量。

1.7 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 對大鼠體質(zhì)量變化的影響

各組大鼠造模前的體質(zhì)量無顯著性差異(P>0.05)。造模后與假手術(shù)組比較，模型組、蒙醫(yī)針刺組、鹽酸氟西汀組3個組的體質(zhì)量增加緩慢(P<0.05)。治療后與假手術(shù)組比較，模型組大鼠體質(zhì)量增加明顯差異(P<0.01)。與模型組比較，蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組大鼠體質(zhì)量明顯增加(P<0.05)。蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組之間比較，無顯著性差異(P>0.05)，見表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量變化比較

注：與假手術(shù)組比較，*P<0.05,**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05。

2.2 對糖水消耗量的影響

各組大鼠造模前的糖水消耗量無顯著性差異(P>0.05)。造模后與假手術(shù)組比較，模型組、蒙醫(yī)針刺組、鹽酸氟西汀組3個組的糖水消耗量降低(P<0.01)。治療后與假手術(shù)組比較，模型組大鼠糖水消耗量明顯降低(P<0.01)。與模型組比較，蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組大鼠糖水消耗量明顯增加(P<0.05)。蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組之間比較，無顯著性差異(P>0.05)，見表2。

表2 各組大鼠糖水消耗量的比較

注：與假手術(shù)組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05。

2.3 對敞箱實驗水平活動次數(shù)的影響

各組大鼠造模前水平活動次數(shù)無顯著性差異(P>0.05)。造模后與假手術(shù)組比較，模型組、蒙醫(yī)針刺組、鹽酸氟西汀組3個組的水平活動次數(shù)下降(P<0.05)。治療后與假手術(shù)組比較，模型組大鼠水平活動次數(shù)明顯下降(P<0.01)。與模型組比較，蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組大鼠水平活動次數(shù)明顯增加(P<0.05)。蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組之間比較，無顯著性差異(P>0.05)，見表3。

表3 各組大鼠水平活動次數(shù)比較

注：與假手術(shù)組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05。

2.4 對敞箱實驗垂直運動次數(shù)的影響

各組大鼠造模前垂直運動次數(shù)無顯著性差異(P>0.05)。造模后與假手術(shù)組比較，模型組、蒙醫(yī)針刺組、鹽酸氟西汀組3個組的垂直運動次數(shù)下降(P<0.01)。治療后與假手術(shù)組比較，模型組大鼠垂直運動次數(shù)明顯下降(P<0.01)。與模型組比較，蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組大鼠垂直運動次數(shù)明顯增加(P<0.05)。蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組之間比較，無顯著性差異(P>0.05)，見表4。

2.5 對前額葉皮質(zhì)5-HT含量影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠前額葉皮質(zhì)5-HT顯著降低(P<0.01)。與模型組比較，蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組大鼠前額葉皮質(zhì)5-羥色胺含量增加顯著(P<0.05)。蒙醫(yī)針刺組和鹽酸氟西汀組之間比較，無顯著性差異(P>0.05)，見表5。

表4 各組大鼠垂直運動次數(shù)比較

注：與假手術(shù)組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05。

表5 各組大鼠腦皮質(zhì)的5-HT含量變化比較

注：與假手術(shù)組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05。

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學認為，PSD是以精神和軀體癥狀相結(jié)合的復雜的神經(jīng)情感障礙性疾病,是各種神經(jīng)生物學和社會心理因素綜合作用的結(jié)果，其發(fā)病符合生物-心理-社會醫(yī)學模式，即PSD的發(fā)生既是卒中后出現(xiàn)了顱內(nèi)特定部位損傷的直接結(jié)果，又是卒中這一突發(fā)應激事件給患者帶來各種心理反應及社會因素影響的結(jié)果[8]。腦卒中后抑郁的發(fā)生機制尚不清楚，有5-羥色胺假說、多巴胺假說、去甲腎上腺素假說等，主要與神經(jīng)遞質(zhì)的功能紊亂有關(guān)[9-10]。卒中病變直接或間接損壞NE和5-HT遞質(zhì)的合成、代謝及傳到通路，使NE和5-HE遞質(zhì)減少及信息傳遞障礙，從而導致抑郁發(fā)生[11]。由于腦血管病變導致腦內(nèi)5-羥色胺和去甲腎上腺素之間的平衡失調(diào)及其通路被破壞，因而影響腦功能的調(diào)節(jié)作用而導致抑郁的發(fā)生[12]。

蒙醫(yī)學認為腦卒中屬“薩病”范疇。薩病是眾多外因所致體內(nèi)氣血運行、流通障礙，三根(赫依、希拉、巴達干)失調(diào)，赫依與琪素(血)相搏及運行失調(diào)而損傷腦部的黑脈繼而引起白脈之海-腦之受損而致病[13]。在蒙醫(yī)典籍中尚未見到關(guān)于“抑郁癥”的記載。但近代一些蒙醫(yī)學者研究認為，抑郁癥的主要原因是體內(nèi)三根失去平衡，侵襲心臟和白脈系統(tǒng)，導致以情緒顯著而持續(xù)低落、興趣缺乏、樂趣喪失為核心癥狀的一系列病癥[14]。心臟受赫依的支配，是正常赫依的依存部位和病變赫依的竄行之道。當“赫依”功能紊亂時，影響心主精神、意志、思維活動等正常生理功能[15]?！睹舍t(yī)藥選編》中記載，心“赫依”者出現(xiàn)記憶力減退，思維遲鈍等抑郁癥狀[16]。當“巴達干”功能紊亂時，臨床上可見反應遲鈍，意識模糊等“巴達干”異常的癥狀，這與抑郁癥的臨床表現(xiàn)一致[15]。心和腦主要以兩條赫依白脈互相連接，因此PSD屬蒙醫(yī)心和腦因性疾病范疇。卒中直接損傷腦部，腦部的病變以赫依白脈影響心臟而發(fā)生卒中后抑郁癥。這與現(xiàn)代流行病學研究PSD的發(fā)病機制比較吻合。長期的臨床工作中，發(fā)現(xiàn)應用蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺可明顯改善抑郁狀態(tài)，提高卒中后抑郁患者生活質(zhì)量。蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺是按大腦皮層功能分區(qū)進行區(qū)域性頭皮針治療(主要有運動區(qū)、感覺區(qū)平衡區(qū)，足運感區(qū)、語言區(qū)等)和根據(jù)白脈走形級支配肌群選擇相應的穴位進行痙攣體針針刺治療。

本實驗采用局灶性腦缺血再灌注大鼠模型進行慢性溫和刺激制造PSD模型，觀察蒙醫(yī)針灸對腦卒中后抑郁大鼠的行為及額葉5-HT影響。檢測結(jié)果顯示，PSD模型大鼠體質(zhì)量增長緩慢，糖水消耗量，水平活動和垂直運動次數(shù)及前額葉皮質(zhì)5-HT含量明顯低于假手術(shù)組，而針刺組和藥物組可不同程度改善抑郁行為，并明顯提高前額葉皮質(zhì)5-HT含量。綜上所述蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺能有效改善PSD模型大鼠的行為，具有一定的治療PSD的效果。機體內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量減少被認為是抑郁癥發(fā)病機制之一，在抑郁癥患者以及抑郁癥動物模型的研究均能看到5-HT含量減少表現(xiàn)[17-18]。因此，增加大鼠前額葉皮質(zhì)5-HT含量是蒙醫(yī)腦-白脈調(diào)控針刺對PSD大鼠發(fā)揮抗抑郁作用機制之一。

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Effect of Acupuncture of Mongolian Medicine on Post-stroke Depression Rat Models

LI Xue-yong1,2，WU Lan2*

(1.BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China;2.InternationalMongolianMedicineHospitalofInnerMongolia,Hohhot010065,China)

Objective：To study the effect of acupuncture of mongolian medicine on post-stroke depression (PSD) of rat models.Methods:32 male SD rats were randomly divided into four groups:sham surgery group, model group, acupuncture group and fluoxetine hydrochloride group (n=8).7 days after cerebral ischemia reperfusion in rats by using the brain artery occlusion method,chronic non predictable stimulation and isolated feeding were combined for 14 days to establish the PSD models.Except for the sham surgery group and model group, the rats were treated for 14 days after model establishment.The body weights of rats were recorded at regular intervals.Open field test and sucrose preference test were performed to evaluate the behavioral changes in rats.Prefrontal cortex 5-serotonin of rats was detected by enzyme linked immunosorbent assay.Results:After 14 days of model establishment, the body weights of rats in the model group were increased slowly compared with those in the sham surgery group(P<0.05). Similarly, compared with those in the sham surgery group, the sugar water consumption, locomotor activity and rearing activity in open field test were significantly decreased in the model group (P<0.05).After 14 days of the treatment, the body weights of rats in the model group were also increased slowly compared with those in the sham surgery group(P<0.05), and sugar water consumption, locomotor activity and rearing activity in open field test were as significantly decreased as level of 5-serotonin (P<0.05).Compared with those in the model group, the body weights of rats, sugar water consumption, level of 5-serotonin, locomotor activity and rearing activity in open field test were obviously increased in the acupuncture and fluoxetine hydrochloride groups after 14 days of the treatment (P<0.05).There was no significant difference between acupuncture group and fluoxetine hydrochloride group(P>0.05).Conclusion:The results suggest that acupuncture of Mongolian medicine can improve the depression like behavior of PSD rat models, and can significantly increase the level of 5-HT in brain tissue.Therefore, acupunctureof Mongolian medicine may be an effective treatment strategy for patients with PSD.

Acupuncture of Mongolian medicine; Post-stroke depression; Behavior;5-HT

國家自然科學基金項目(No.81360577)

李學勇(1978-)，男，博士研究生，主要研究方向：蒙醫(yī)傳統(tǒng)療法。

烏蘭*(1963-)，女，教授，博士研究生導師，主要研究方向：蒙醫(yī)傳統(tǒng)療法。

2016-06-21

R246

A

1002-2406(2017)01-0088-04

修回日期：2016-07-01