腎陰虛證模型的構(gòu)建及實驗研究進展

黃文慧，張莉莉，郭伊霖，王冰

（1.上海中醫(yī)藥大學中藥學院，上海201203；2.上海中醫(yī)藥大學教學實驗中心，上海201203）

·專論·

腎陰虛證模型的構(gòu)建及實驗研究進展

黃文慧1，張莉莉1，郭伊霖1，王冰2

（1.上海中醫(yī)藥大學中藥學院，上海201203；2.上海中醫(yī)藥大學教學實驗中心，上海201203）

為更好地了解中藥治療腎陰虛證的作用機制，對國內(nèi)近20年有關(guān)腎陰虛證的實驗研究文獻進行分類總結(jié)，在系統(tǒng)歸納腎陰虛模型構(gòu)建方法的同時，結(jié)合中藥介入治療后相關(guān)指標變化進行系統(tǒng)綜述，為中藥治療腎陰虛證提供了一定的實驗研究方法。

腎陰虛證；動物模型；中藥；研究進展

腎陰虛是指由于腎陰不足，失于滋養(yǎng)，陽亢內(nèi)生，虛熱內(nèi)擾所表現(xiàn)的證候。腎氣不足多由先天腎氣不足、久病耗傷、房勞過度、食溫燥劫陰之品所致。證見腰膝酸痛、頭暈耳鳴、失眠多夢、五心煩熱、潮熱盜汗、遺精早泄等。腎陰虛證與糖尿病、憂郁癥、原發(fā)性高血壓、骨質(zhì)疏松、紫癜等其他疾病有著密切聯(lián)系，還會誘發(fā)口腔潰瘍、引起生精障礙或少精、學習記憶障礙，影響聽力和免疫功能等。

查閱近20年的文獻，腎陰虛證的動物實驗造模方法很多，主要分為以下4種：甲狀腺功能亢進(簡稱甲亢)腎陰虛證模型、腎上腺皮質(zhì)功能亢進腎陰虛證模型、高血壓腎陰虛證模型、過量使用熱性中藥致腎陰虛證模型。不同動物模型建立方法各有優(yōu)缺點，其中甲亢模型是目前陰虛造模最常用的方法?，F(xiàn)有相關(guān)文獻大多總結(jié)歸納了腎陰虛證實驗動物的模型建立方法，而筆者在系統(tǒng)歸納腎陰虛證模型構(gòu)建方法的同時，對結(jié)合中藥介入治療后的相關(guān)指標變化進行系統(tǒng)綜述，為中藥治療腎陰虛證提供了一定的實驗研究方法。

1 甲亢腎陰虛證模型

1.1 概述

臨床中，大多數(shù)甲亢患者均屬腎陰虛證候，故通過向?qū)嶒瀯游锎髣┝渴褂眉谞钕偌に?，形成外源性甲狀腺素水平升高，?fù)制出甲亢的動物模型[1]。甲狀腺激素在體內(nèi)促進物質(zhì)代謝，增加耗氧量，使產(chǎn)熱增加。造模周期6～21 d。根據(jù)造模藥物的不同可分為甲狀腺素造模腎陰虛證法和甲狀腺素加利血平造模腎陰虛證法。

1.2 方法

1.2.1 甲狀腺素造模腎陰虛證法

通過給予大劑量甲狀腺素建立腎陰虛證模型，是目前陰虛造模常用的方法。造模成功后，模型動物會出現(xiàn)毛無光澤，形體消瘦，體質(zhì)量下降或增長緩慢，多動易驚，心率加快，體溫升高，飲水量、食量增加，大便干結(jié)等基本的腎陰虛證癥狀。根據(jù)動物模型結(jié)合病證的不同，可將腎陰虛證分為甲亢型、糖尿病型、憂郁型和其他類型。

1)甲亢型腎陰虛證

采用灌胃甲狀腺片混懸液的方法復(fù)制出甲亢型腎陰虛證模型，造模周期多為21 d。此造模方法得到的實驗動物除了表現(xiàn)出腎陰虛證基本癥狀外，還會出現(xiàn)豎毛、脫毛、汗多、呼吸急促、大便形小色黑、小便短小色赤、煩躁易怒等現(xiàn)象。

沃興德等[2]每天給予雄性W istar大鼠灌胃3m L甲狀腺片混懸液，正常對照組每天灌胃3m L生理鹽水，造模周期21 d。結(jié)果表明，甲亢型腎陰虛組大鼠出現(xiàn)上述癥狀，且灌胃時反抗掙扎較正常對照組多，血清三碘甲狀腺原氨酸(T3)水平較正常對照組顯著升高，同時雌二醇(E2)、睪酮(T)水平較正常對照組也有不同程度下降，由此得知腎陰虛大鼠能量代謝較活躍。

鐘杰敏等[3]選取清潔級雄性SD大鼠實驗，除正常組外每只大鼠連續(xù)21 d每日按30 mg／kg灌胃甲狀腺素片混懸液造模，模型組大鼠除呈上述癥狀外還常有打斗行為，皮膚含水量顯著降低，腎組織水通道蛋白（AQP1）和水通道蛋白（AQP2）水平異常升高等現(xiàn)象，在給藥六味地黃丸后大鼠狀態(tài)有改善，腎組織AQP1和AQP2水平也較模型組顯著降低；各組大鼠體質(zhì)量均增長但模型組大鼠增長明顯緩慢，六味地黃丸組與正常組相比無統(tǒng)計學差異?？梢?，六味地黃丸能有效改善甲亢型腎陰虛模型大鼠水液代謝相關(guān)指標的紊亂，糾正其腎組織AQP1和AQP2含量的異常升高。

桂常青等[4]選取SD大鼠，雌雄各半，實驗前禁食不禁水12 h，每日灌胃給藥甲狀腺素2.5mg／kg制備腎陰虛證模型，灌胃21 d后造模成功。模型對照組大鼠除呈上述癥狀外，還出現(xiàn)了痛閾值降低，甲狀腺質(zhì)量顯著降低，血糖水平降低，血漿黏度增高，血清T3和四碘甲狀腺原氨酸(T4)水平顯著升高，免疫球蛋白(IgG)含量降低，銅(Cu)含量增高，Cu／Zn(鋅)比值顯著升高的現(xiàn)象。而給藥全龜膠囊后陰虛大鼠的不良癥狀均有改善，可見，全龜膠囊對腎陰虛證有治療作用。

李發(fā)榮等[5]選取昆明種健康小鼠，雌雄各半，正常對照組每日灌胃蒸餾水，其余各組每日灌胃等體積甲狀腺素片藥液，灌胃9 d后小鼠痛閾值下降即造模成功。將其余組與正常對照組相比，可見各組耗氧量均顯著升高，痛閾值顯著降低，而給藥太白參后腎陰虛小鼠的體溫上升，痛閾值下降，飲水量及耗氧量上升等癥狀均有明顯改善。從而得知太白參對腎陰虛證有治療作用。

2)糖尿病型腎陰虛證

選用雌性（或雌雄各半）W istar大白鼠，先適應(yīng)性飼養(yǎng)5～7 d，待動物適應(yīng)飼養(yǎng)室環(huán)境，體質(zhì)量開始增加時再進行實驗。造模采用禁食12 h后空腹腹腔一次性注射鏈脲佐菌素誘發(fā)糖尿??；或先連續(xù)7 d皮下注射甲狀腺素，用量每日0.2mg／kg，第8天開始禁食12 h，爾后空腹腹腔一次性注射鏈脲佐菌素；或先禁食12 h，爾后空腹腹腔一次性注射鏈脲佐菌素，再連續(xù)7 d皮下注射甲狀腺素。此類造模方法得到的實驗動物除了表現(xiàn)出腎陰虛證基本癥狀外，還會表現(xiàn)出活動頻率增加，但反應(yīng)遲鈍，發(fā)育遲緩，飲水量、食量、尿量均高于正常組2～3倍，血糖、尿糖均升高等。

吳文莉等[6]選取雌性大白鼠，隨機分為4組，對比研究了上述3種不同的造模方法，結(jié)果表明，這3種造模方式均可造出腎陰虛型糖尿病的病證結(jié)合模型，而加用甲狀腺素可加重腎陰虛表現(xiàn)，適當縮短造模天數(shù)，更為理想。

孫永寧等[7－8]采用先甲狀腺素后鏈脲佐菌素(STZ)給藥雌性W istar大鼠的造模方法造模。結(jié)果表明，模型組大鼠與對照組相比，尿液中包含的甘氨酸、琥珀酸含量顯著升高，十六烷酸、膽固醇水平顯著下降，血液中包含的甘氨酸、乳酸、葡萄糖、半乳糖含量顯著升高，從而導致能量代謝紊亂、糖代謝紊亂、腎功能不全，引起糖尿病型腎陰虛證。

楊樸[9]選取SPF級W istar大白鼠，雌雄各半，采用先鏈脲佐菌素后甲狀腺素的造模方法造模，結(jié)果表明糖尿病造模組大鼠全血黏度、血漿黏度、紅細胞壓積、還原黏度、紅細胞聚集指數(shù)均較正常值明顯升高，從而導致血液相對濃縮。經(jīng)醒胰降糖靈治療后全血黏度、紅細胞壓積、紅細胞聚集指數(shù)均降低?？梢?，醒胰降糖靈有防治糖尿病及其并發(fā)癥的作用。

3)憂郁型腎陰虛證

選擇健康雄性（或雌雄各半）SD大鼠，實驗前對所有大鼠進行敞箱試驗和液體消耗試驗，剔除敞箱實驗水平得分和垂直得分總分高于120分和低于30分的大鼠后，根據(jù)實驗結(jié)果分層，隨即分組進行實驗。除正常組外，其余各組大鼠均孤養(yǎng)并按照程序給予大鼠24 h不同的刺激，造成大鼠抑郁。在應(yīng)激使大鼠抑郁的同時從第1天開始每天灌胃甲狀腺素混懸液，造模周期21 d。此類造模方法得到的實驗動物除了表現(xiàn)出腎陰虛證基本癥狀外，還會出現(xiàn)倦臥少動，毛濕，豎毛，易怒，捉拿時尖叫，攻擊性行為增多，飲食量有增加趨勢但最后仍減少，敞箱實驗各項指標值均減少，血漿環(huán)磷酸腺苷（cAMP）水平、環(huán)磷酸腺苷／環(huán)磷酸鳥苷（cAMP／cGMP）比值顯著升高，E2水平、E2／T比值升高等現(xiàn)象。

陳容[10]的造模成功后，模型組除出現(xiàn)基本現(xiàn)象外，還出現(xiàn)了5－羥色胺(5－HT)水平顯著降低現(xiàn)象，而給予憂慮康液后的大鼠腎陰虛表現(xiàn)和抑郁行為在一定程度上均有所改善，可見，憂慮康液對腎陰虛抑郁癥有一定的治療作用。

鄒志[11]、陳曉陽等[12]、史冰等[13]發(fā)現(xiàn)，造模后模型大鼠除出現(xiàn)基本現(xiàn)象外，還出現(xiàn)了血漿促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、皮質(zhì)醇（CORT）增高，海馬CA3區(qū)錐體細胞脫失，殘存椎體細胞排列稀疏、紊亂，下丘腦室旁核邊界不清，神經(jīng)元數(shù)目減少，皮質(zhì)束狀帶增厚，腎小球結(jié)構(gòu)紊亂，足底汗腺分泌旺盛等現(xiàn)象，而給予憂慮康液后模型大鼠所產(chǎn)生的異常癥狀體征均有明顯改善，對下丘腦－垂體－腎上腺（HPA）軸功能也有調(diào)節(jié)作用，從而發(fā)現(xiàn)了憂慮康液抗抑郁型腎陰虛證的作用機制。

秦莉花等[14]發(fā)現(xiàn)，造模后模型大鼠還出現(xiàn)了腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的mRNA和TrKB的mRNA表達降低的現(xiàn)象，給予憂慮康液后改善了模型大鼠指標的異常現(xiàn)象，從而得出憂慮康液通過促進海馬BDNF、TrKB基因表達上調(diào)治療抑郁型腎陰虛證的結(jié)論。

4)其他類型腎陰虛證

張穎等[15]選取清潔級雌性SD大鼠連續(xù)陰道涂片15 d，造成圍絕經(jīng)期大鼠，連續(xù)21 d每只每日灌胃甲狀腺素2.5 mg造腎陰虛證模型。由圍絕經(jīng)期大鼠與正常對照組相比可見，除出現(xiàn)腎陰虛證基本癥狀外，還出現(xiàn)了下丘腦去甲腎上腺素(NE)水平降低，多巴胺（DA）和5－HT水平升高的現(xiàn)象，進而出現(xiàn)潮熱、多汗、煩躁不安、失眠等癥狀，而給藥百合知母湯后能明顯改善圍絕經(jīng)期腎陰虛證大鼠的不良癥狀，因此認為百合知母湯有治療圍絕經(jīng)期腎陰虛證的作用。

楊宇飛等[16]選用雌性BALB／c小鼠，每天口服320mg／kg劑量的甲狀腺素片，服用10 d后造成紫癜病證結(jié)合腎陰虛證模型。由模型組與正常對照組比較可見，除腎陰虛基本癥狀外，還出現(xiàn)了T3、T、CORT、cAMP水平增高，促甲狀腺激素(TSH)水平降低，外周血小板計數(shù)明顯下降，股骨、脾臟巨核細胞計數(shù)增高，分類可見顆粒巨核、裸核巨核和變性巨核細胞增多，產(chǎn)板巨核細胞減少，脾臟T淋巴細胞亞群CD4＋，CD8＋，CD4＋／CD8＋均增高，而滋腎陰方不能使模型血小板恢復(fù)正常，表明治療紫癜效果不佳，與臨床實際相符，故還需繼續(xù)尋找對紫癜疾病有特殊療效的中藥，推進臨床治療的發(fā)展。

劉四軍[17]選取清潔級雌性SD大鼠適應(yīng)3 d后，連續(xù)14 d每日灌胃每200 g體質(zhì)量100μg劑量左甲狀腺鈉片溶液造模，之后用10%水合氯醛每100 g體質(zhì)量0.3m L麻醉，用苯酚溶液燒灼48 h后造出直徑為5mm的圓形潰瘍。模型組除出現(xiàn)腎陰虛證基本癥狀外，還出現(xiàn)了怕熱、出汗，神經(jīng)過敏，急躁，T3和T4水平顯著升高，潰瘍黏膜下層肉芽組織增生，而給藥清熱降火方后明顯改善了潰瘍和腎陰虛癥狀，從而得出清熱降火方對陰虛型口腔潰瘍有改善和控制復(fù)發(fā)的功效。

傅紫琴等[18]篩選出合格的昆明種雄性KM小鼠后，連續(xù)4 d每日灌胃0.15 g／kg劑量甲狀腺素，造腎陰虛證模型。由模型組與空白組相比可見，造模小鼠除表現(xiàn)腎陰虛證基本癥狀外，還出現(xiàn)了倦怠少動，負重游泳時間和耐缺氧時間縮短，血清超氧化物歧化酶（SOD）活性降低，丙二醛（MDA）含量增高等現(xiàn)象，而給藥山茱萸后可使上述指標和癥狀得到相應(yīng)改善?？梢姡杰镙怯醒a肝腎的作用。

張瑞雪[19]選取健康雄性小白鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5～7 d后，連續(xù)10 d每日灌胃320 mg／kg甲狀腺片水溶液造模，再以每只小鼠3mg用量灌胃給予柞蠶雄蠶蛾油，連續(xù)4周。結(jié)果顯著抑制了小鼠腎組織中MDA的生成，并升高了小鼠腎組織中SOD和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH－PX）抗氧化劑酶的活性，可提高運動小鼠的抗氧化能力、有氧能力，并延緩其疲勞的發(fā)生和促進疲勞的恢復(fù)。

李俊麗等[20]選取雄性SD大鼠，連續(xù)10 d每日灌胃給藥3mL甲狀腺片懸液。造模小鼠出現(xiàn)了基本的腎陰虛癥狀，給予左歸飲后進行雙向凝膠電泳分析對比可見，左歸飲糾正了21個非正常表達的蛋白質(zhì)，表明左歸飲可改善治療腎陰虛證。

1.2.2 甲狀腺素加利血平造模腎陰虛證法

通過灌胃給予甲狀腺素加利血平混合液造模，也是目前陰虛造模常用方法之一，適量加入利血平可使多種動物制成脾腎兩虛的模型。造模成功后，模型動物會出現(xiàn)體質(zhì)量減輕、食量減少、皮毛枯槁失去光澤、行動遲緩無力、反應(yīng)遲鈍、萎靡不振、嗜睡、體溫降低、畏寒、便溏及脫肛等癥狀。

徐飛等[21]選用雌雄各半的小鼠隨機分組探討不同提取工藝的六味地黃復(fù)方提取液對腎陰虛證模型的藥理作用。結(jié)果腎陰虛小鼠出現(xiàn)上述癥狀，而不同提取工藝的六味地黃復(fù)方提取液均可使小鼠癥狀基本恢復(fù)正常，相比之下，用60%乙醇超聲提取的藥理效果最佳。

凌慶枝等[22]選用清潔級雄性SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2 d后，連續(xù)4周每日灌胃給予甲狀腺素7.5mg及利血平0.05mg造模，探討六味地黃湯對腎陰虛型生精障礙大鼠生殖系統(tǒng)的影響。結(jié)果模型組除出現(xiàn)上述癥狀外，還出現(xiàn)了拱背、互相擁擠、豎毛、腹部皮毛潮濕、陰囊皺縮、睪丸回升等現(xiàn)象，經(jīng)給藥六味地黃湯后能很好地促進受損睪丸、附睪、曲細精管的修復(fù)，提高精子數(shù)量和質(zhì)量。

臧建偉[23]、王德秀等[24]、胡旭光等[25]均選用NIH種小鼠(雌雄各半)，連續(xù)7 d灌胃給予甲狀腺素150mg，利血平1mg／kg造模。隨機分組研究六味地黃湯生物制劑的藥效學、對腎陰虛小鼠HPA軸的調(diào)節(jié)作用和對腎陰虛小鼠脾T淋巴細胞亞群的影響。結(jié)果表明，六味地黃湯能改善腎陰虛小鼠癥狀，增加腎陰虛小鼠體質(zhì)量和脾臟、胸腺的質(zhì)量，減少小鼠扭體次數(shù)，降低模型小鼠血漿ACTH及CORT含量，對模型小鼠HPA軸、T淋巴細胞亞群也有明顯的調(diào)節(jié)作用，表明其有治療腎陰虛的作用和提高機體非特異性免疫的能力。

黃江榮等[26]選用清潔級昆明種小鼠(雌雄各半)，隨機分組研究六味地黃丸對甲亢腎陰虛小鼠基礎(chǔ)代謝的影響。連續(xù)21 d每日按3mg甲狀腺素加20mg利血平灌胃給藥造模后，模型小鼠除表現(xiàn)出上述癥狀外，還出現(xiàn)了心率加快，耗氧量增加，血清T3和T4水平升高，血漿cAMP水平升高等現(xiàn)象，而給藥六味地黃丸后腎陰虛癥狀均有改善，故六味地黃丸對腎陰虛證所致的基礎(chǔ)代謝增加有一定的調(diào)節(jié)作用。

呂愛平等[27－28]選用純系SD大鼠，雌雄各半，隨機分組研究脾、腎陰虛模型大鼠肝細胞線粒體磷脂組分變化的比較和自由基損傷的比較。連續(xù)12 d每日灌胃給藥甲狀腺素100mg、利血平0.25mg造模，模型小鼠出現(xiàn)神經(jīng)磷脂(SM)水平升高，磷脂酰膽堿(PC)水平下降，SM／PC比值升高，脂質(zhì)過氧化物(LPO)水平升高，3種抗氧化酶活性下降的現(xiàn)象，而治療藥物能有效地改善癥狀，由此可見，甘油磷脂的減少，神經(jīng)磷脂的增加，脂質(zhì)過氧化損傷，是脾、腎陰虛證形成的共同病理生理基礎(chǔ)。

張奕等[29]選用昆明種小鼠，雌雄各半，隨機分組研究蟲草養(yǎng)生茶對腎陰虛動物模型的影響。連續(xù)8 d每日灌胃給予甲狀腺素15 g／L和0.1 g／L利血平的等體積混合物0.4mL／只進行造模，模型小鼠除出現(xiàn)上述癥狀外，還出現(xiàn)了低溫游泳能力下降，而蟲草養(yǎng)生茶能對抗腎陰虛小鼠的癥狀，說明其對腎陰虛證有調(diào)節(jié)治療的作用。

許小強等[30]選用健康雄性SD大鼠，連續(xù)21 d每日灌胃甲狀腺素15mg／kg，肌肉注射0.1mg／kg利血平，進行造模，模型大鼠除出現(xiàn)上述癥狀外，還出現(xiàn)了煩躁，易出汗，血清CORT水平降低，學習記憶能力下降，而二精丸有效部分能有效地改善這些癥狀，故對腎陰虛證有調(diào)節(jié)作用。

2 腎上腺皮質(zhì)機能亢進腎陰虛證模型

2.1 概述

這類型的造模方法有2種，一種為促腎上腺皮質(zhì)激素造模法，一種為腎上腺皮質(zhì)激素造模法。第1種方法在現(xiàn)在的臨床應(yīng)用和研究中應(yīng)用不多，故將第2種方法作為重點闡述。該模型是現(xiàn)階段較為公認且周期較短的模型之一。這種方法通過給實驗動物過量使用糖皮質(zhì)激素，形成外源性糖皮質(zhì)激素水平升高，復(fù)制出腎上腺皮質(zhì)機能亢進的動物模型。造模周期為4～14 d。

造大鼠模型多選取清潔級雄性SD大鼠或W istar大鼠進行造模，模型大鼠出現(xiàn)體質(zhì)量下降，眼窩下限，精神不振，活動減少，反應(yīng)遲鈍，煩躁不安，體毛粗糙無光澤，體溫升高，大便干結(jié)色黑，小便色黃，飲水量、食量、尿量增加等基本癥狀。造小鼠模型多選用昆明種小鼠進行實驗，采用灌胃、皮下或肌肉注射的方法給予氫化可的松、醋酸氫化可的松等造模。模型小鼠多出現(xiàn)形體消瘦，煩躁易怒，拱背扎堆，毛發(fā)枯槁易脫落，尿黃便干，飲水、飲食量增多等基本癥狀。

常用造模藥物有氫化可的松、醋酸可的松、地塞米松等[1]。根據(jù)造模藥物的不同，分為氫化可的松造腎陰虛模型、醋酸氫化可的松造腎陰虛模型、地塞米松造腎陰虛模型和醋酸強的龍造腎陰虛模型。

2.2 方法

2.2.1 氫化可的松造腎陰虛模型

杜標炎[31]選取W istar大鼠，雌雄各半，連續(xù)3 d每日肌肉注射0.2m L氫化可的松造模，模型大鼠淋巴細胞凋亡增多，且多在胸腺皮質(zhì)部，而給藥六味地黃湯的大鼠細胞凋亡數(shù)目明顯減少，表明其可抑制糖皮質(zhì)激素誘導的胸腺淋巴細胞凋亡。

肖子曾等[32]選用清潔級健康雄性SD大鼠，腹腔注射40mg／kg STZ后禁食12 h，灌胃35mg／kg氫化可的松，連續(xù)4 d造成2型糖尿病腎陰虛模型。模型大鼠除前文所述癥狀外，還出現(xiàn)了肛門紅腫，痛閾值降低，空腹血糖（FPG）、血清cAMP、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）水平明顯升高，高密度脂蛋白膽固醇（HDL－C）水平降低，給藥六味地黃湯之后能明顯改善上述癥狀，可見其治療作用與改善脂代謝有關(guān)。

王秀榮等[33]選用昆明小鼠雌雄各半，皮下注射氫化可的松造模，使模型小鼠除前文所述癥狀，給藥六味地黃湯后，模型小鼠的半數(shù)溶血值(HC50)、巨噬細胞的吞噬率和吞噬指數(shù)，以及T淋巴細胞的刺激指數(shù)均明顯升高，接近正常值?？梢?，六味地黃湯能有效提高腎陰虛小鼠的免疫功能。

徐勤等[34]用肌肉注射雄性NIH小鼠氫化可的松造模，使模型小鼠出現(xiàn)除前文所述癥狀，且動脈周圍淋巴鞘T淋巴細胞多數(shù)凋亡，給藥六味地黃湯后T淋巴細胞凋亡數(shù)明顯下降，表明六味地黃湯有拮抗糖皮質(zhì)激素誘導脾T淋巴細胞凋亡的作用，從而抑制腎陰虛證。

戴冰等[35]選用清潔級昆明小鼠，雌雄各半，灌胃氫化可的松注射液造模，使模型小鼠出現(xiàn)前文所述癥狀，且血漿cAMP水平升高，血清TSH，T3，T4水平升高，而給藥六味地黃湯后癥狀得到改善，說明六味地黃湯通過降低HPT軸中垂體分泌的TSH，下調(diào)腎上腺分泌的T3和T4，修復(fù)受損甲狀腺組織來改善腎陰虛證。

傅萬山等[36]采用昆明小鼠皮下注射氫化考地松的造模方法，使模型小鼠出現(xiàn)上述癥狀，且對抗疲勞、耐低溫、耐缺氧的抗應(yīng)激能力及吞噬碳粒廓清指數(shù)和HC50明顯降低，而給藥六味地黃丸能明顯增強腎陰虛小鼠上述癥狀，從而治療腎陰虛證。

王顯輝等[37]選取雄性Wistar大鼠實驗，連續(xù)12 d每只每日肌肉注射氫化可的松注射液10mg進行造模腎陰虛證。給藥黃氏嗣育丸后與造模組相比可見，黃氏嗣育丸可增強睪丸、附睪、精囊腺、前列腺作用及增加精子數(shù)，表明黃氏嗣育丸有補腎增精的作用。

段曉紅等[38]選取雄性SD大鼠后，連續(xù)7 d每日腹腔注射氫化可的松50 mg／kg進行造模，除導致模型大鼠出現(xiàn)上述癥狀外，還出現(xiàn)了腎上腺、胸腺質(zhì)量降低，糖皮質(zhì)激素受體、甲狀腺激素受體和雄激素受體的表達均發(fā)生改變。而給藥滋腎陰方后能明顯改善腎陰虛證的不良癥狀，從而治療腎陰虛證。

史正剛等[39－40]選取Wistar大鼠，雌雄各半，連續(xù)7 d每日腹腔注射氫化可的松50mg／kg造模，與空白組比較，模型組cAMP水平無變化，cGMP水平明顯降低，cAMP／cGMP水平明顯升高，給藥知柏地黃丸后與模型組相比血漿CORT，ACTH，CRH，血清白細胞介素2（IL－2）、白細胞介素6（IL－6）、IgG及脾、腎上腺指數(shù)均明顯提高，故可知知柏地黃丸可有效拮抗外源性糖皮質(zhì)激素對HPA軸的抑制作用并增強其免疫功能。

朱萱萱等[41]選用ICR小鼠皮下注射氫化可的松的造模方法，使模型小鼠出現(xiàn)上述癥狀，且吞噬碳粒、遲發(fā)型超敏反應(yīng)、溶血素抗體生成及T淋巴細胞酯酶染色率均不同程度降低，胸腺和脾臟質(zhì)量下降。給藥補腎活血方后上述不良癥狀得以改善，從而促進腎陰虛小鼠的體液免疫功能，起到滋陰補腎的作用。

張迪等[42]選用普通級昆明小鼠皮下注射氫化可的松，使模型小鼠出現(xiàn)前文所述癥狀，而給予地黃后能有效地緩解氫化可的松所致的小鼠體質(zhì)量下降等癥狀，表明滋陰補腎藥地黃能有效治療腎陰虛證。

2.2.2 醋酸氫化可的松造腎陰虛模型

單德紅等[43]購入成年雄性SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，連續(xù)6 d每日皮下注射醋酸氫化可的松注射液45mg／kg建立糖皮質(zhì)激素型腎陰虛模型。模型組出現(xiàn)體質(zhì)量、尿量明顯減少，精氨酸加壓素（AVP）水平上升，AQP2表達增加等現(xiàn)象，而給藥六味地黃湯后指標基本恢復(fù)正常，六味地黃湯的滋陰作用與其抑制亢進的尿液濃縮機制有關(guān)。

應(yīng)薦等[44]選取清潔級雄性SD大鼠，連續(xù)6 d每日皮下注射醋酸氫化可的松45mg／kg進行造模，模型組除表現(xiàn)前文所述癥狀外，還表現(xiàn)出睪丸曲細管生精上皮變薄、生精細胞減少、睪丸間質(zhì)水腫、間質(zhì)細胞數(shù)量減少等現(xiàn)象，而給藥二地鱉甲煎后病理現(xiàn)象明顯減輕，表明補腎滋陰藥二地鱉甲煎能拮抗糖皮質(zhì)激素誘導大鼠睪丸的病理改變。

杜標炎[45]選用健康雄性NIH小鼠肌注醋酸氫化可的松，使模型小鼠出現(xiàn)前文所述癥狀，且胸腺、脾臟質(zhì)量量減輕，脾細胞IL－2活性降低，而給藥補腎陰中藥后能有效調(diào)整模型小鼠機體的免疫功能，從而建立治療腎陰虛證的重要藥理學基礎(chǔ)。

姚凝[46]選用健康昆明小鼠，雌雄各半，肌肉注射醋酸氫化可的松造模，使模型小鼠出現(xiàn)上述癥狀，且血清氧自由基（OFR）水平升高，SOD活性下降，而給藥華中五味子后改變了小鼠上述癥狀，表明對其有一定改善作用。

2.2.3 地塞米松造腎陰虛模型

夏炳江等[47]采用地塞米松肌肉注射，對雌性昆明小鼠進行造模，使模型小鼠出現(xiàn)上述癥狀，且腎上腺、脾臟、肝臟指數(shù)降低，ACTH、TSH水平升高，E2水平降低，cAMP／cGMP比值升高，股骨近端、腰椎骨密度明顯下降，微骨折等，給藥六味地黃丸后有明顯改善。表明地塞米松肌注法構(gòu)建腎陰虛骨質(zhì)疏松病證結(jié)合模型可行，且六味地黃丸對其有一定改善作用。

2.2.4 醋酸強的松龍造腎陰虛模型

除大、小鼠外，研究者們還會用豚鼠進行實驗。劉蓬等[48－50]選取健康活潑、耳廓反射靈敏的白色紅目雄性豚鼠，肌肉注射醋酸強的松龍，造模周期10 d。造模成功后豚鼠出現(xiàn)躁動易驚、怕人、食量減少、體質(zhì)量增長緩慢、大便干結(jié)等現(xiàn)象，還會出現(xiàn)聽力下降，嚴重可致聾，且影響主要以6 kHz為中心的高頻聽力下降，而給藥滋補腎陰的中藥后可改善此現(xiàn)象。

3 高血壓和過量使用熱性中藥致腎陰虛證模型

這2種造模方法運用較少，故合并在一起綜述。通過結(jié)扎實驗動物的腎動脈使其形成高血壓模型，或者灌胃給予熱性中藥造成體內(nèi)陰液耗傷[1]。根據(jù)高血壓和體內(nèi)陰液耗傷一般均表現(xiàn)出腎陰虛內(nèi)熱證型的原理，造出腎陰虛證模型。

倪琳琳等[51]選用SPF級雌性Wistar大鼠實驗，用10%烏拉坦按1mg／100 g體質(zhì)量腹腔麻醉，麻醉后臥位固定，于劍突下1.5 cm處沿腹正中線分層剝離皮膚及肌層，兩手配合擠出左腎，分離腎動脈，結(jié)扎使其狹窄70%，縫合傷口，放回籠中飼養(yǎng)1周后給藥卡托普利。結(jié)果表明，卡托普利對腎陰虛證高血壓有降血壓效果。

王劍等[52]、劉志宏[53]均將熱性中藥熬成湯劑，濃縮后灌胃給藥的方法造成腎陰虛證模型，再根據(jù)不同的實驗方法進行研究。模型大鼠出現(xiàn)豎毛、拱背、多動等癥狀，表明造模成功。結(jié)果表明，在模型大鼠的基礎(chǔ)上加上去卵巢手術(shù)可出現(xiàn)更年期腎陰虛證，而給藥滋腎固沖湯可治療腎陰虛型出血癥。

4 結(jié)語

近年來，對腎陰虛證的相關(guān)研究不斷增多，實驗動物的造模方法也越來越系統(tǒng)化。上述4種造模方法中，甲亢腎陰虛證模型是目前研究最常用的方法，實驗方便且現(xiàn)象指標均容易觀察，唯一不足的是造模周期長，大多為21 d。腎上腺皮質(zhì)功能亢進腎陰虛證模型與甲亢模型相比，最大的優(yōu)勢是造模周期短，此方法一般4～7 d即可造模成功，適用于對實驗時間有要求的研究項目，是現(xiàn)階段較為公認且造模周期較短的模型。高血壓腎陰虛證模型主要針對高血壓這一研究范籌，針對性強，且實驗難度較其他造模方法高。過量使用熱性中藥致腎陰虛證模型的研究相對較少。

研究最多治療腎陰虛證的中藥是六味地黃復(fù)方。除此之外，尚需挖掘更多能有效治療腎陰虛證的中藥單方或復(fù)方，同時還應(yīng)改善現(xiàn)有模型的不足，建立造模周期短、造模方法簡單方便，且更符合中醫(yī)腎陰虛證臨床實踐的新的實驗動物模型，以開發(fā)適合于臨床使用的治療腎陰虛證的中藥新藥。

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Construction of K idney－Yin Deficiency Syndrom e M odel and Its Experim ental Research Progress

Huang Wenhui1，Zhang Lili1，Guo Yilin1，Wang Bing2
（1.School of Traditional Chinese Materia Medica，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai，China 201203；2.Experiment Center for Teaching and Learning，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai，China 201203）

In order to understand the mechanism of traditional Chinese medicine in treating kidney－yin deficiency syndrome better，the literatures on kidney－yin deficiency syndrome in last 20 years in China were summarized，combined with traditional Chinese medicine intervention in the systematized induction of kidney－yin deficiency model，to provide some experimental methods for the treatment of kidney－yin deficiency by traditional Chinese medicine.

kidney－yin deficiency；animal model；traditional Chinese medicine；research progress

R256.5

A

1006－4931(2017)10－0001－07

2017－03－10)

10.3969／j.issn.1006－4931.2017.10.001

上海中醫(yī)藥大學課程建設(shè)項目[SHUTCMKCJSYB2016037]。

黃文慧（1996－），女，在讀大學本科，（電子信箱）15921935648＠163.com。

王冰（1974－），女，博士研究生，副教授，研究方向為中藥納米給藥系統(tǒng)，（電子信箱）annabel_cn＠163.com。