組織蛋白酶S的研究進(jìn)展

王林燕 王博 戴靈豪 杜仲燕 關(guān)旸 丁美紅

組織蛋白酶S的研究進(jìn)展

王林燕 王博 戴靈豪 杜仲燕 關(guān)旸 丁美紅

組織蛋白酶S（Cat S）是半胱氨酸蛋白酶的重要一員，主要分布在淋巴結(jié)、脾臟、肺等器官，多在表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物Ⅱ的細(xì)胞中表達(dá)，在抗原遞呈中發(fā)揮重要作用，參與疾病的發(fā)生、發(fā)展過程。Cat S還與炎癥因子相互作用，參與體內(nèi)免疫及炎癥反應(yīng)，在心血管、免疫系統(tǒng)和腫瘤等疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。本文通過概述CatS的結(jié)構(gòu)、與疾病的關(guān)系、上下游通路、活性檢測方法及抑制劑等方面內(nèi)容，為今后開展CatS的研究提供部分參考。

組織蛋白酶S 上下游通路 活性檢測 抑制劑

組織蛋白酶（Cat）是在動物組織的細(xì)胞內(nèi)（特別是溶酶體部分）發(fā)現(xiàn)的一類蛋白酶，它通過水解肽鏈降解蛋白質(zhì)以維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。它具有抗原遞呈、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、激活受體、促進(jìn)趨化因子或細(xì)胞因子釋放等功能。Cat結(jié)構(gòu)最早在20世紀(jì)Drenth等在番木瓜中發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)人體內(nèi)共有15種Cat，根據(jù)水解機(jī)制不同可分為絲氨酸、天冬氨酸和半胱氨酸蛋白酶；根據(jù)底物特異性，又可分為肽鏈內(nèi)切酶和肽鏈內(nèi)外切酶。Cat是由無活性的前體酶原水解而成，先在核糖體結(jié)合膜上合成前體酶原，后在高爾基體通過糖基化及磷酸化作用形成甘露糖-6-磷酸蛋白，最后通過溶酶體上甘露糖-6-磷酸特異性受體的識別作用，間接轉(zhuǎn)運(yùn)到溶酶體中。Cat S是半胱氨酸蛋白酶家族的一員，具有重要的調(diào)節(jié)功能，人體Cat S最早由Shi從肺泡巨噬細(xì)胞中提取。不同于其他半胱氨酸蛋白酶，Cat S最佳活性pH值為4～6，在中性條件下可保持酶活性；主要分布在淋巴結(jié)、脾臟、肺等器官，多在表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物Ⅱ（MHCⅡ）的細(xì)胞中表達(dá)，在抗原遞呈中發(fā)揮重要作用，參與疾病發(fā)展過程[1]。此外，Cat S還與炎癥因子相互作用，參與體內(nèi)免疫及炎癥反應(yīng)，在心血管、免疫系統(tǒng)和腫瘤等疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。本文就CatS的研究進(jìn)展作一綜述。

1 CatS結(jié)構(gòu)

Cat S具有木瓜蛋白酶家族相似的晶體結(jié)構(gòu)，為單鏈蛋白，含225個(gè)氨基酸，相對分子質(zhì)量為24.8KDa，與其他半胱氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)在氨基酸序列上存在同源性。三維空間結(jié)構(gòu)由2個(gè)結(jié)構(gòu)域組成：（1）L結(jié)構(gòu)域，由3個(gè)α螺旋和一個(gè)疏水口袋組成；（2）R結(jié)構(gòu)域，由含有1個(gè)疏水核嵌入的反平行β折疊和位于側(cè)面的2個(gè)α螺旋組成[2]。2個(gè)結(jié)構(gòu)域之間構(gòu)成狹長裂隙，為催化活性部位。結(jié)構(gòu)中的半胱氨酸25、組氨酸159和天門冬酰胺175構(gòu)成催化三聯(lián)子，是結(jié)合底物的重要部位。Cys25中硫陰離子作為親和物質(zhì)是催化反應(yīng)的關(guān)鍵部位，能夠進(jìn)攻底物肽。Cat S的N端有3個(gè)凹槽（即S1、S2和S3）與底物的特異性結(jié)合相關(guān)，決定了半胱氨酸蛋白酶抑制劑的特異性。C端存在一個(gè)與底物結(jié)合的位點(diǎn)，即S1'，在酶與主要組織相容性復(fù)合體二類分子保守區(qū)的特異性結(jié)合中起著重要作用。

2 Cat S與疾病的關(guān)系

Cat S可降解細(xì)胞內(nèi)外正常蛋白質(zhì)，在體內(nèi)炎癥免疫、抗原遞呈、血管生成、細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)重塑、損傷、修復(fù)等病理、生理過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)功能，與多種臨床疾病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸息息相關(guān)。

2.1 自身免疫性疾病 1999年研究表明Cat S與自身免疫性疾病密切相關(guān)，Cat S缺陷小鼠對膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎易感性較低[3]。Cat S在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血清和膝關(guān)節(jié)液中的表達(dá)水平明顯升高[11]，巨噬細(xì)胞大量表達(dá)Cat S并分泌進(jìn)入軟骨組織，可能會破壞功能性軟骨聚集蛋白聚糖-二型膠原網(wǎng)狀組織的完整性，在炎癥性滑膜細(xì)胞中發(fā)揮抗原遞呈、基質(zhì)降解的雙重作用。Cat S抑制劑和F類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎ctalkine（趨化因子CX3C亞家族的唯一成員）抗體可減輕類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠的機(jī)械性超敏反應(yīng)和脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)，可作為治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疼痛的潛在藥物[5]。此外，Cat S對系統(tǒng)性紅斑狼瘡也有影響，可驅(qū)動MHCⅡ介導(dǎo)的T細(xì)胞和B細(xì)胞活化并形成生發(fā)中心，促使B細(xì)胞向漿細(xì)胞轉(zhuǎn)化，從而促進(jìn)疾病發(fā)生、發(fā)展，而Cat S抑制劑可通過特異性阻斷自身抗原遞呈而改善疾病[6]。

2.2 慢性氣道炎癥性疾病 相關(guān)研究表明，卵蛋白引起的小鼠肺損傷模型與正常小鼠比較，其Cat S基因表達(dá)量明顯增加[7]。高氧誘導(dǎo)的肺損傷，經(jīng)Cat S基因敲除處理，動物肺泡功能明顯改善，并可減少巨噬細(xì)胞流入和肺部纖維性病變。采用ELISA檢測健康者與哮喘患者血清中Cat S含量并繪制24h晝夜變化曲線，發(fā)現(xiàn)哮喘患者Cat S含量明顯高于健康者，但是24h期間哮喘患者與健康者Cat S含量基本不隨時(shí)間變化或變化不明顯[8]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)Cat S-/-與野生型哮喘大鼠比較，其氣道高反應(yīng)性、IgE水平均較低，肺部炎癥明顯減弱[9]。亦有關(guān)于Cat S啟動子區(qū)域的單核苷酸多態(tài)性與哮喘發(fā)病率的關(guān)系研究，發(fā)現(xiàn)啟動子上rs7534124和rs1136774單核苷酸多態(tài)性可降低漢族人群哮喘易感性[10]。

2.3 心血管疾病 心血管疾病嚴(yán)重威脅人類健康，一般與動脈粥樣硬化相關(guān)。動脈粥樣硬化的形成原因主要是血管的細(xì)胞外基質(zhì)重塑、彈性蛋白的降解。當(dāng)血管平滑肌細(xì)胞受IL-1β和IFN-γ刺激時(shí)，會分泌Cat S并降解不溶性彈性蛋白，從而影響動脈粥樣斑塊穩(wěn)定性。在血管緊張素Ⅱ的刺激下，心血管部位巨噬細(xì)胞的Cat S mRNA表達(dá)量增多，巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的溶膠原和彈性蛋白酶活性明顯增加，通過血管緊張素受體拮抗劑（奧美沙坦）可抑制Cat S的活性，增強(qiáng)Apoe-/-小鼠動脈粥樣斑塊的穩(wěn)定性[11]。此外，有研究表明Cat S抑制劑RO544－4101可降低慢性腎臟疾病Apoe-/-小鼠動脈粥樣硬化發(fā)病率，降低巨噬細(xì)胞中生長分化因子-15、單核細(xì)胞趨化蛋白-1含量[12]。Cat S還與腹主動脈瘤、靜脈移植排斥反應(yīng)、急性心肌梗死患者心力衰竭相關(guān)。與Apoe-/-Cat S+/+比較，Apoe-/-Cat S-/-小鼠的腹主動脈瘤發(fā)病率顯明顯降低[13]。而且人體血液中總Cat S和活性Cat S的含量與BMI、舒張壓和主動脈直徑呈正相關(guān)，與最低踝肱指數(shù)呈負(fù)相關(guān)[14]。

2.4 腫瘤 Cat S可誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡并增加化學(xué)敏感性。血管生成是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵標(biāo)志，抑制血管生成是抗腫瘤的新策略。Cat S如同血管內(nèi)皮生長因子一樣，在血管生成中起著重要作用，在腫瘤微環(huán)境中促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的水解與內(nèi)皮細(xì)胞的侵襲，從而誘發(fā)血管生成，促使腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。協(xié)同使用Cat S抑制劑與抗血管內(nèi)皮生長因子能起到有效抑制血管生成的作用。Cat S也可介導(dǎo)自噬通量和自噬體、溶酶體的融合，激活自噬激發(fā)巨噬細(xì)胞M2型極化，誘使腫瘤發(fā)生[15]。Cat S與癌癥轉(zhuǎn)移亦密切相關(guān)，它是乳腺-腦轉(zhuǎn)移的調(diào)節(jié)劑，依靠水解黏附蛋白并通過血腦屏障遷移。

2.5 其他疾病 Cat S是蛋白酶活化受體2的偏向激動劑，可引起PAR2和瞬時(shí)感受器電位離子通道家族香草素受體亞家族依賴性炎癥和疼痛[16]，注射Cat S抑制劑可抗神經(jīng)性大鼠過敏性疼痛和異常性疼痛。Cat S過表達(dá)可使小鼠骨骼肌營養(yǎng)不良，當(dāng)Cat S基因敲除時(shí)，mdx小鼠肌纖維肌膜穩(wěn)定性明顯增強(qiáng)[17]。在溶酶體運(yùn)輸和自噬過程中，Cat S與Rab11家庭相互作用使蛋白4表達(dá)上調(diào)，而下調(diào)Cat S可影響巨噬細(xì)胞的自噬過程[18]。此外，Cat S還可引起小鼠受體依賴性瘙癢。

3 Cat S上下游通路研究

IFN-γ通過激活Janus激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄激活子通路啟動細(xì)胞轉(zhuǎn)錄功能，上調(diào)不同細(xì)胞中Cat S的表達(dá)量；也可增加小鼠肥大細(xì)胞及骨髓源性肥大細(xì)胞Cat S的mRNA和蛋白水平，并具有一定的時(shí)間劑量依賴關(guān)系[19]。miR-31/IRF-1/Cat S通路可能在囊性纖維化肺部疾病的發(fā)病中發(fā)揮作用，通過miR-31模擬物降低干擾素調(diào)節(jié)因子1、Cat S的表達(dá)和分泌[20]。

Cat S通過激活NF-κB和caspase-3誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡并增加其化學(xué)敏感性；也可激活CD74，調(diào)控趨化因子CCL2的表達(dá)，從而對腫瘤微環(huán)境產(chǎn)生影響[21]。Cat S可促進(jìn)表皮生長因子介導(dǎo)的表皮生長因子受體降解，調(diào)節(jié)表皮生長因子受體信號；而Cat S抑制劑可抑制表皮生長因子受體降解，促使表皮生長因子受體信號延長，促使下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子3、蛋白激酶B信號激活[22]。CatS是Mas相關(guān)的G蛋白偶聯(lián)受體（Mrgprs）的配體，可激活MrgprC11，從而引起瘙癢。Cat S也是PAR2的偏向激動劑，通過切割PAR2的氨基末端，暴露一個(gè)新拴系配體KVDGTS，激活PAR2并產(chǎn)生PAR2的特異性下游信號，刺激第二信使激活，引起PAR2依賴性炎癥和疼痛，使PAR2作為蛋白酶驅(qū)動的炎性疼痛放大[23]。

4 Cat S活性檢測

學(xué)者們常采用Western blot、ELISA等方法測定酶表達(dá)量及含量的變化，但是酶的關(guān)鍵參數(shù)除含量外，活性也是重要指標(biāo)。Cat S以前體酶原形式存在時(shí)無活性，不發(fā)揮生理功能，因此對酶的活性進(jìn)行精準(zhǔn)測定具有重要意義。Cat S活性檢測方法主要有底物檢測、探針檢測。底物檢測通過測定底物濃度或含量的變化反應(yīng)酶的活性，是經(jīng)典方法；探針檢測是目前Cat S活性檢測最常用的方法，可分為底物探針檢測和活性探針檢測。

4.1 底物探針檢測 底物探針檢測是將Cat的底物肽與熒光染料鍵和作為Cat的底物，Cat與底物結(jié)合并水解肽鏈，釋放出熒光基團(tuán)，采用特定的熒光檢測方法測定熒光強(qiáng)度，以熒光強(qiáng)度高低反應(yīng)Cat的活性。目前已有許多底物探針如Z-FR-AMC，Z-Val-Val-Arg-AMC等用于測定Cat S活性。以Z-Phe-Arg-AMC為底物，同時(shí)結(jié)合分子對接技術(shù)研究化合物的Cat S的抑制作用。以Z-VVR-AMC為底物，探究蛋白酶抑制劑對樹突狀細(xì)胞中Cat S活性的調(diào)節(jié)作用。底物探針檢測原理是Cat水解肽鏈，釋放出熒光染料，測定熒光強(qiáng)度，此過程中酶的結(jié)合是可逆的，酶的活性依然保存。但底物探針檢測專一性差，易出現(xiàn)假陽性，與Cat S同源性高的其他酶也能水解底物肽，釋放熒光染料；底物肽穿透性差，只可用于檢測細(xì)胞裂解液，無法直接檢測組織或細(xì)胞內(nèi)的Cat S活性。但是，不斷有學(xué)者對底物探針檢測進(jìn)行優(yōu)化探索，使底物檢測的特異性升高，如Steimle等[24]開發(fā)的底物Mca-GRWPPMGLPWE-Lys（Dnp）-DArg-NH2在pH7.5時(shí)可特異性結(jié)合Cat S，提高檢測的特異性、準(zhǔn)確性并且節(jié)約實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

4.2 活性探針檢測 活性探針由3個(gè)部分組成：可與Cat連接的彈頭部位；增強(qiáng)對1種或多種酶特異性識別的識別元件；可用于檢測的標(biāo)記物。3個(gè)部分元件功能各不相同，相輔相成，共同實(shí)現(xiàn)蛋白酶活性的實(shí)時(shí)體內(nèi)成像和高通量活性篩選。近年來有學(xué)者對Cat S的活性探針研究發(fā)現(xiàn)，以放射性元素碘標(biāo)記的探針可用于體內(nèi)外檢測Cat S活性[25]。將Cat S底物與棕櫚酸酯化，可實(shí)現(xiàn)探針探頭目標(biāo)定位的長久性和高信噪比；通過小鼠尾靜脈注射，用于體內(nèi)成像，以實(shí)現(xiàn)腫瘤的非侵入性鑒定[26]。將多種原理的探針相結(jié)合，如基于近紅外淬火的探針結(jié)合綠色熒光反應(yīng)的探針用于Cat S活性的測定，可實(shí)現(xiàn)不同種類探針的互補(bǔ)，為活性蛋白定位[27]。ZPraVG-DMK探針，修飾后的肽基重氮甲基酮可滲透入細(xì)胞，測定細(xì)胞內(nèi)Cat S活性[28]。以人cystatin C抑制位點(diǎn)的N-端底物樣區(qū)域作為支架，連接到重氮甲基酮作為探針，更易與半胱氨酸蛋白酶B、L、S和K結(jié)合，且靈敏度高，可在nM范圍內(nèi)檢測Cat活性[29]。

活性探針通過共價(jià)鍵與Cat不可逆性結(jié)合，使Cat失去活性；與底物探針檢測比較，活性探針可穿透細(xì)胞，不僅能檢測細(xì)胞裂解液，實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞體內(nèi)定位，同時(shí)其檢測特異度和靈敏度均較高。

5 Cat S抑制劑研究

Cat S與多種疾病相關(guān)，被認(rèn)為是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、腫瘤等疾病的生物治療靶點(diǎn)，因此抑制劑研究是Cat S領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。Cat S抑制劑通過與Cat S的Cys25位點(diǎn)結(jié)合，發(fā)揮抑制作用，但Cat S同源性較高，對其他Cat可能也會產(chǎn)生抑制作用[30]。因此，研究并開發(fā)特異性的Cat S抑制劑是研究的難點(diǎn)。

5.1 化學(xué)合成抑制劑 Cat S抑制劑主要有芳氨乙基酰胺類化合物、丁二酸酰胺類化合物、二肽類化合物、非肽類抑制劑等。Battu等[31]基于藥物的三維定量構(gòu)效關(guān)系和分子對接技術(shù)研究Cat S的抑制劑，發(fā)現(xiàn)新Cat S抑制劑的多個(gè)前導(dǎo)分子。Wilkinson等[32]對含氰基Cat S抑制劑進(jìn)行體內(nèi)外抗腫瘤藥效學(xué)評價(jià)，結(jié)果表明其具有極大的應(yīng)用價(jià)值和開發(fā)潛力。另有研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)化合物不與Cat S的Cys25位點(diǎn)結(jié)合，僅與S2和S3位點(diǎn)特異性結(jié)合，對Cat S的活性也有抑制作用，同時(shí)對其他半胱氨酸Cat活性無影響，如LY3000328化合物，具有Cat S的特異性抑制作用[33]。

5.2 Cat S天然抑制劑 關(guān)于Cat S天然抑制劑的研究很少。劉毅夫等[34]研究發(fā)現(xiàn)中藥淫羊藿中的淫羊藿苷、淫羊藿素3-O-α-L-鼠李吡喃糖基-7-O-β-D-葡萄吡喃糖醛酸苷、寶藿苷Ⅰ、淫羊藿苷A、箭藿苷B、朝藿定B和大花淫羊藿苷C單體對Cat S的活性有抑制作用。此外，Zhang等[35]研究發(fā)現(xiàn)蜂毒素可通過調(diào)控VEGF-A/ VEGFR2/MEK1/ERK1/2信號通路抑制Cat S介導(dǎo)的腫瘤生長和血管形成，可能是Cat S的抑制劑。

6 小結(jié)

近年來，Cat S因其廣泛的生理功能在國外掀起了研究的熱潮，學(xué)者們對Cat S的生物學(xué)功能和對疾病的影響開展了深入研究；而關(guān)于Cat S影響疾病的機(jī)制及其上下游通路的研究尚在探索之中。Cat S對疾病的發(fā)生、發(fā)展具有重要作用，眾多學(xué)者以Cat S作為疾病治療靶點(diǎn)，期望尋找有效的Cat S抑制劑，治療各類疾病。但半胱氨酸蛋白酶的同源性較高，許多抑制劑的特異性低，對其他半胱氨酸蛋白酶亦有抑制作用。因此，尋找一種特異性高、不良反應(yīng)小的Cat S抑制劑是研究的難點(diǎn)。天然藥物是藥物研發(fā)的巨大寶庫，建議充分發(fā)揮天然藥物的優(yōu)勢，在天然藥物中挖掘Cat S抑制劑。Cat S活性檢測是研究Cat S的重要手段，主要有活性探針檢測和底物探針檢測，兩者各有優(yōu)勢與不足，應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的檢測方法，建議Cat S活性檢測與Cat S蛋白含量檢測等檢測方法整合，共同闡明科學(xué)問題。

[1]ShiG P,Villadangos JA,Dranoff G,et al.Cathepsin S Required for Norm alMHC ClassⅡPep tide Load ing and Germ inal Center Developm ent[J].Immunity,1999,10(2):197-206.

[2]Bromme D.Cysteine cathepsins and the skeleton[J].Clin Rev Bone MineralMetab,2011,9(2):83-93.

[3]Nakagawa T Y,Brissette W H,Lira P D,et al.Impaired invariant chain deg radation and antigen p resentation and d im inished collagen-induced arthritis in cathepsin S nullm ice[J].Imm unity, 1999,10(2):207-217.

[4]趙進(jìn)軍.CatS在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的作用[D].南方醫(yī)科大學(xué),2014.

[5]Clark A K,Grist J,Alkashi A,et al.Sp inal cathepsin S and fractalkine contribute to chronic pain in the collagen-induced arthritis m odel[J].Arthritis&Rheumatology,2012,64(6):2038-2047.

[6]Bernard N J.Connective tissue d iseases.Inhibiting cathepsin S to treat SLE and lupus nephritis[J].Nature Reviews Rheumato logy,2014,10(2):66-66.

[7]Lew is C C,Yang J Y H,Huang X,et al.Disease-specific gene exp ression p rofiling in multip le models of lung d isease[J].Am J Resp CritCare,2008,177(4):376-387.

[8]Cimerm an N,Brguljan P M,Krasovec M,et al.Circad ian and concentration p rofile of cathepsin S in sera from healthy sub jects and asthmatic patients[J].PflügersArchiv-European Journal of Physiology,2001,442(1):r204-r206.

[9]Deschamps K,Crom lish W,Weicker S,et al.Genetic and pharmacologicalevaluation o fcathepsin s in amousemode lof動脈粥樣硬化thm a[J].American Journalof Resp iratory Cell&Molecular Biology,2011,45(1):81-87.

[10]Zhou PP,Zhang W Y,LiZ F,etal.Association between SNPs in the p rom oter reg ion in cathepsin S and risk o f asthm a in Chinese Han population[J].2016,20(10):2070-2076.

[11]SsaakiT,Kuzuya M,Nakamuar K,et al.AT1 b lockade attenuates atherosc lerotic p laque destabilization accom panied by the supp ression of cathepsin S activity in apoE-deficientm ice[J]. Atherosc lerosis,2010,210(2):430-437.

[12]Figueiredo JL,Aikawa M,Zheng C,etal.Selective Cathepsin S Inhibition Attenuates Atherosc lerosis in Apolipop rotein E-De fic ient Mice w ith Chronic Renal Disease[J].Am erican Journal of Pathology,2015,185(4):1156-1166.

[13]Qin Y,Cao X,Guo J,etal.Deficiency of cathepsin S attenuates angiotensinⅡ-induced abdom inalaortic aneurysm formation in apolipop rotein E-deficientm ice[J].Card iovascular Research, 2012,96(3):401-410.

[14]Lv B J,Lindholt J S,Cheng X,et al.Plasm a Cathepsin S and Cystatin C Levels and Risk of Abdom ina l Aortic Aneurysm:A random ized Population-Based Study[J].Plos One,2012,7(7): e41813.

[15]Yang M,Liu J,Shao J,et al.Cathepsin S-m ed iated autophagic flux in tum or-associated mac rophages accelerate tum or development by p romoting M 2 polarization[J].Molecular Cancer, 2014,13(1):43-43.

[16]Zhao P,Lieu T,Barlow N,eta l.Cathepsin S causes inflammatory pain via b iased agonism of PAR2 and TRPV4[J].Journal of BiologicalChem istry,2014,289(39):27215-27234.

[17]Tjond rokoesoemo A,Schips TG,SargentM A,et al.Cathepsin S contributes to the pathogenesis of m uscular dystrophy in m ice[J].Journal of Biolog ical Chem istry,2016,291:jbc.M116. 719054.

[18]Pawar K,Sharbati J,Einspanier R,et al.Mycobacterium bovis BCG Interferes with m iR-3619-5p Controlof Cathepsin S in the Process of Autophagy[J].Frontiers in Ce llular&Infection M icrobiology,2016,6(27):1772.

[19]Wang R,Ouyang Q,Zhao J,etal.IFN-γstimulates the release of cathepsin S inm ousem ast cells[J].Chinese JournalofCellular&Molecular Immunology,2016,32(5):1550.

[20]Weldon S,Mcna lly P,Mcauley D F,et al.m iR-31 dysregulation in cystic fib rosis airways contributes to increased pulm onary cathepsin S p roduction[J].Am J RespCrit Care,2014,190(2): 165-174.

[21]Wilkinson R D,Magorrian SM,William s R,et al.CCL2 is transcrip tionally controlled by the lysosoma l p rotease cathepsin S in a CD74-dependent manner[J].Oncotarget,2015,6(30): 29725-29739.

[22]Huang C C,Cheng-Che L,Lin H H,et al.Cathepsin S attenuates endosom alEGFR signalling:Am echanical rationale for the com bination of cathepsin S and EGFR tyrosine kinase inhibitors [J].Scientific Reports,2016,6:29256.

[23]Elm ariah S B,Reddy V B,Lerner E A.Cathepsin S Signals via PAR2 and Generates a Novel Tethered Ligand Recep tor Agonist[J].Plos One,2014,9(6):e99702.

[24]Steim le A,Kalbacher H,Maurer A,et al.A novel app roach for reliab le detection of cathepsin S activities in mouse antigen p resenting cells[J].Journal of Imm unological Methods,2016, 432:87-94.

[25]Veilleux A,Black W C,Gauthier J Y,et al.Probing cathepsin S activity in who le b lood by the activity-based p robe BIL-DMK: cellular d istribution in human leukocyte populations and evidence o f d iurnalm odulation[J].Ana lytical Biochem istry,2011, 411(1):43-49.

[26]Hu H Y,Vats D,Vizovisek M,etal.In vivo imaging ofm ouse tum ors by a lip idatedcathepsin S substarte[J].Angewand te-Chem ie InternationalEd ition,2014,53(29):7669-7673.

[27]Bender K O,O fori L,Linden W A V D,et a l.Design o f a Highly Selec tive Quenched Activity-Based Probe and Its App lication in DualColor Imag ing Stud ies o f Cathepsin S Activity Localization[J].Journa l of the American Chem ical Society,2015,137(14):1254.

[28]Hughes C S,Shaw G,Burden R E,et al.The app lication o f a novel,cellperm eab le activity-based p robe for the detection of cysteine cathepsins[J].Biochem ical&Biophysical Research Comm unications,2016,472(3):444-450.

[29]Garenne T,Said i A,Gilm ore B F,et a l.Active site labeling of cysteine cathepsins by a straightforward d iazom ethylketone p robe derived from the N-term inus of human cystatin C[J]. Biochem ical&Biophysical Research Communications,2015, 460(2):250-254.

[30]Lee-Dutra,A,Wiener,D.K.,Sun,S.Cathepsin S inhibitors: 2004-2010[J].ExpertOp in.Ther.Pat,2011,21:311-337.

[31]Battu M B,Chand ra A M,Sriram D,et al.Pharm acophore-Based 3D QSAR and Molecular Docking Stud ies to I-dentify New Non-Pep tid ic Inhib itors of Cathepsin S[J].Current Med icinalChem istry,2014,21(16):1910-1921.

[32]Wilkinson R D A,Young A,Burden R E,et al.A bioavailab le cathepsin S nitrile inhibitor ab rogates tum or deve lopment[J]. Molecular Cancer,2016,15(1):1-11.

[33]Jadhav P K,Schiffler M A,Gavard inas K,et al.Discovery of Cathepsin S Inhibitor LY3000328 for the Treatment of Abdom inal Aortic Aneurysm[J].Acs Med ic inalChem istry Letters,2014, 5(10):1138-1142.

[34]劉毅夫.Cat新型天然藥物抑制劑[D].吉林大學(xué),2008.

[35]Zhang Z,Zhang H,Peng T,eta l.Melittin supp resses cathepsin S-induced invasion and angiogenesis via b locking of the VEGF-A/VEGFR-2/MEK1/ERK1/2 pathway in human hepatocellular carcinom a[J].Oncology Letters,2016,11(1):1100.

2017-01-23）

（本文編輯：陳丹）

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.6.2017-46

浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（（LY17H 100007）；浙江中醫(yī)藥大學(xué)校級科研基金項(xiàng)目（2015ZZ10）

310053杭州，浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)科研中心公共平臺

王林燕，E-mail：linyan0520@126.com