丹槐銀屑濃縮丸聯(lián)合阿維A對銀屑病患者VEGF及受體FLT-1、KDR表達(dá)的影響

張 霞 康曉晶 陳少秀 繆澤群 王 恒

(十堰市太和醫(yī)院(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院)皮膚科,十堰,442000)

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丹槐銀屑濃縮丸聯(lián)合阿維A對銀屑病患者VEGF及受體FLT-1、KDR表達(dá)的影響

張 霞 康曉晶 陳少秀 繆澤群 王 恒

(十堰市太和醫(yī)院(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院)皮膚科,十堰,442000)

目的:觀察丹槐銀屑濃縮丸聯(lián)合阿維A對銀屑病血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growthfactor,VEGF)及其受體1(Fms related Tyrosine-1,FLT-1)、受體2(Kinase Insert Domain-contaning Receptor,KDR)表達(dá)的影響。方法:回顧性調(diào)查十堰市太和醫(yī)院皮膚科2014年1月以前收治的102例銀屑病為對照組,按入院先后將2014年2月至2015年2月收治的306例銀屑病病例分為丹槐組、阿維A組、聯(lián)合治療組。對照組采用免疫調(diào)節(jié)、皮質(zhì)類固醇激素等藥物對癥治療,阿維A組在對照組治療基礎(chǔ)上病損表皮涂抹阿維A軟膏,丹槐組在對照組治療基礎(chǔ)上加服丹槐銀屑濃縮丸,聯(lián)合治療組同時加用阿維A及丹槐銀屑濃縮丸。檢測治療前后表皮病變組織VEGF蛋白及VEGF-mRNA表達(dá),VEGF、FLT-1、KDR、表皮變組織真皮乳頭血管密度(Skin Tissue Dermal Papillary Vascular Density,MVD),靜脈血T淋巴細(xì)胞,并比較臨床療效。結(jié)果:聯(lián)合治療組總有效率達(dá)83.79%,VEGF蛋白質(zhì)及mRNA、FLT-1、KDR、MVD表達(dá)均及T淋巴細(xì)胞明顯降低,與阿維A及丹槐組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。結(jié)論:丹槐銀屑濃縮丸可降低VEGF過度表達(dá),阻斷VEGF與其受體結(jié)合,抑制病變組織皮下血管新生、重建,進(jìn)而降低真皮乳頭微血管的異常增生,阿維A抑制T細(xì)胞增殖介導(dǎo)的炎性反應(yīng),減輕銀屑病的病理改變,兩藥聯(lián)合應(yīng)用起到協(xié)同作用,可增強(qiáng)療效。

丹槐銀屑濃縮丸;銀屑病;血管內(nèi)皮生長因子;受體;真皮乳頭血管密度

銀屑病(俗稱牛皮癬),又稱“白疙”,以血燥、血熱、血瘀3種證型為主,中醫(yī)認(rèn)為銀屑病系外邪化熱入血而發(fā)病,且其血瘀、血熱、血燥病癥并存乃現(xiàn)風(fēng)熱濕之象[1-2]。銀屑病的發(fā)病機(jī)制目前嘗無定論,目前多數(shù)學(xué)者傾向于銀屑病是由自分泌型血管通透性因子VEGF增多造成,VEGF是一種高度特異性的促血管生長因子,具有促進(jìn)多種血管活性物質(zhì)合成、血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖遷移及再生的功能[3]。在正常情況下、機(jī)體VEGF及其受體HIT-l、KDR維持著動態(tài)平衡,血管內(nèi)皮及功能保持正常。當(dāng)機(jī)體抵抗力下降、免疫異常、炎性反應(yīng)刺激、尤其是出現(xiàn)激反應(yīng)時,可能破壞VEGF及其受體HIT-l、KDR之間的平衡關(guān)系,VEGF及其受體HIT-l、KDR均出現(xiàn)過度表達(dá)。刺激真皮乳頭微血管的異常增生進(jìn)而加重銀屑病發(fā)生發(fā)展,導(dǎo)致嚴(yán)重皮損。亦有學(xué)者認(rèn)為銀屑病是由T淋巴細(xì)胞介導(dǎo),T淋巴細(xì)胞的異常增殖常導(dǎo)致紅斑鱗屑性皮膚病[4],故而本研究重點(diǎn)以VEGF以其受體HIT-l、KDR分布的相關(guān)性來研究丹槐銀屑濃縮丸聯(lián)合阿維A治療銀屑病的機(jī)制,以期為臨床治療銀屑病提供理想的綜合治療方案。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年2月至2015年1月我院皮膚科2014年2月至2015年2月收治的306例銀屑病病例按入院先后分丹槐組、阿維A組、聯(lián)合治療組,每組102例。并對我院2013年2月以前收治的102例銀屑病病例做回顧性調(diào)查,以此102例為對照組。對照組患者中,男49例、女53例,年齡19～89歲,病程1～44年。阿維A組男50例、女52例,年齡17～88歲,病程1.2～42年。丹槐組男51例、女51例,年齡18～89歲,病程1.1～43年。聯(lián)合治療組男50例、女52例,年齡19～87歲,病程1～45年。4組病例在性別、年齡、病程等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。均簽署知情同意書,同意接受本科室各種治療方法。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 診斷時根據(jù)患者臨床表現(xiàn)、流行病學(xué)特征并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行鑒別診斷?？蓞⒄諈⒄铡镀つw性病學(xué)》[5]銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn),符合下列任一項(xiàng)的均可診斷為銀屑病:1)患者Auspitz征陽性、皮損均具有典型的點(diǎn)狀出血及薄膜現(xiàn)象;2)皮損真菌鏡檢陰性,病理檢查患者表皮角化過度或角化不全,真皮乳頭上延、表皮顆粒層減少且表皮突下延,棘層肥厚,粒細(xì)胞聚集于角質(zhì)層內(nèi)或下而形成Munro小膿瘍,淋巴細(xì)胞浸潤真皮淺層血管;3)患者治療前1個月內(nèi)未應(yīng)用免疫抑制劑、丹槐銀屑濃縮丸、阿維A、皮質(zhì)類固醇激素等藥物,患者梅毒血清檢查RPR、TPPA陰性,血尿常規(guī)檢查HIV初篩試驗(yàn)陰性,電解質(zhì)、肝腎功能檢查均正常。

1.3 治療方案 在本病案中,根據(jù)病案回顧調(diào)查,對照組基礎(chǔ)治療以免疫調(diào)節(jié)、皮質(zhì)類固醇激素等藥物并抗炎保肝和對癥治療為主,以低鹽、低脂肪飲食,禁煙,酒治療為輔。丹槐組在對照組治療礎(chǔ)上加用丹槐銀屑濃縮丸(黑龍江省中醫(yī)研究院醫(yī)院研制,規(guī)格:1 g/丸,批號:090801);阿維A組在對照組治療礎(chǔ)上于病損表皮涂抹阿維A軟膏(重慶華邦制藥有限公司,10 mg,批號:20010126);聯(lián)合治療組合用丹槐銀屑濃縮丸及阿維A軟膏,4組病例療程均為21 d。

1.4 療效標(biāo)準(zhǔn) 參照國家中醫(yī)藥管理局《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》中的相關(guān)療效標(biāo)準(zhǔn)[6]。治愈:皮疹完全消退或95%以上;顯效:銀屑病皮疹消退60%～95%;好轉(zhuǎn):銀屑病皮疹消退在30%以上但不到60%;無效:皮疹未消退或不足30%;治愈率=治愈例數(shù)/總例數(shù)×100%,總有效率=(治愈例數(shù)+有效例數(shù))/總例數(shù)×100%。

1.5 檢測指標(biāo) 參照文獻(xiàn)報(bào)道[7],于治療前后分別靜脈取血常規(guī)測T淋巴細(xì)胞。分別取患者銀屑病樣皮損部位組織,暫存至-30 ℃低溫冰箱保存以備VEGF蛋白分析。采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定各組患者銀屑病樣皮損部位組織VEGF、VFLT-1、KDR蛋白表達(dá)的光密度(Optical Density,OD)OD值。檢測時將標(biāo)本研磨,3 000 r/min離心30 min,取上清液(待測樣本),將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本加入到預(yù)先包被的VEGF單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,37 ℃溫育30 min,洗滌后再加入酶標(biāo)工作液,再于37 ℃下溫育30 min后洗滌除去未結(jié)合的成分,依次加入底物A、B,底物在辣根過氧化物酶催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品VEGF濃度呈正比,用SP-Max 3500FL型多功能熒光酶標(biāo)儀于450 nm波長下測定VEGF的OD值,對各組標(biāo)本進(jìn)行RNA提取,采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)測定患者VEGF-mRNA表達(dá)水平,VEGF共調(diào)節(jié)趨化因子1(VCC1)ELISA試劑盒(廠家:上海酶聯(lián)生物科技有限公司,批號:mi021457),提取mRNA試劑及反轉(zhuǎn)錄試劑(美國Invitrogen公司)。

2 結(jié)果

2.1 4組患者皮損觀察 4組患者治療前均有不同程序度的皮損,病理檢查其表皮角質(zhì)層過度角化,釘突延長且棘層變厚,真皮層有中重度炎細(xì)胞浸潤現(xiàn)象,角質(zhì)層內(nèi)有膿腫及血管炎等銀屑病性改變。在治療21 d后,對照組皮損面積減輕,但部分患者仍有角化現(xiàn)象,釘突及膿腫,表皮毛血管炎等明顯減輕但未完全痊愈。丹槐組療效優(yōu)對照組。陽性藥阿維A組皮損基本消失,無角化現(xiàn)象,釘突及膿腫基本消退。聯(lián)合治療組較優(yōu)于阿維A組臨床表現(xiàn),皮損消失,無角化現(xiàn)象,釘突及膿腫完全消退。

2.2 4組病例療效比較 對照組總有效率為62.74%,丹槐組及阿維A組總有效率分別為73.52%、80.39%,與對照組比較(P<0.05),但2組間比較(P>0.05)。聯(lián)合治療組總有效率達(dá)91.17%,與對照組、丹槐組及阿維A組組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.3 4組患者皮損組織VEGF、VEGFmRNA表達(dá)及T淋巴細(xì)胞增殖比較 對照組皮損組織VEGF、VEGFmRNA表達(dá)降低,與對照組比較,P<0.05;丹槐組治療后VEGF、VEGFmRNA表達(dá),與對照組及本組治療前比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但T淋巴細(xì)胞增殖無明顯變化,治療前后無明顯變化(P>0.05);阿維A組治療后VEGF、VEGFmRNA表達(dá)無明顯變化,T淋巴細(xì)胞降低明顯,與對照組及本組治療前比較(P<0.05)。聯(lián)合治療組VEGF、VEGFmRNA及T淋巴細(xì)胞均降低明顯,與丹槐組及阿維A組比較(P<0.05)。見表2。

2.4 4組患者皮損組織HIT-l、KDR及MVD比較 對照組HIT-l、KDR治療前后無明顯變化(P>0.05),MVD降低(P<0.05);丹槐量組HIT-l、KDR及MVD治療后明顯降低,與治療前及對照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);阿維A組HIT-l、KDR治療前后無明顯變化,MVD降低,與對照組比較(P<0.05);聯(lián)合治療組HIT-l、KDR及MVD均降低明顯,與丹槐組及阿維A組比較(P<0.05)。見表3。

表1 4組病例療效比較

注:與對照組比較*P<0.05;與丹槐組比較△P<0.05;與阿維A組比較,▲P<0.05。

表2 4組患者皮損組織VEGF、VEGFmRNA表達(dá)及T淋巴細(xì)胞增殖比較

注:與治療前比較*P<0.05;與對照組比較△P<0.05;與丹槐組比較▲P<0.05;與阿維A組比較,□P<0.05。

表3 4組患者皮損組織HIT-l、KDR及MVD比較

注:與治療前比較*P<0.05;與對照組比較△P<0.05;與丹槐組比較▲P<0.05;與阿維A組比較,□P<0.05。

3 討論

銀屑病是一種慢性炎性反應(yīng)性皮膚病,具有頑固性、泛發(fā)性、易復(fù)發(fā)性的特點(diǎn),發(fā)病多與遺傳、鏈球菌感染、自身免疫異常造成有關(guān),其中T淋巴細(xì)胞增殖、炎性反應(yīng)因子、內(nèi)分泌失調(diào)、精神神經(jīng)因素均有可能導(dǎo)致銀屑病發(fā)病[8]。最新研究表明VEGF及其受體分布FLT-1、KDR與銀屑病病理改變呈正相關(guān)[9],由VEGF刺激介導(dǎo)的真皮血管過度重構(gòu)與新生尤其是真皮乳頭微血管的異常增生是銀屑病重要發(fā)病原因,MVD密度增高,表皮細(xì)胞增殖過快和角化不全、毛細(xì)血管擴(kuò)張均可加重銀屑病皮損及病理進(jìn)程[10]。近年來研究發(fā)現(xiàn)抑制VEGF過度表達(dá)可減輕微、小靜脈血管的通透性、降低血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖及誘導(dǎo)血管再生等作用。

中醫(yī)治療講究“治風(fēng)先治血,血行風(fēng)自滅”,丹槐銀屑濃縮丸由丹參、槐花、黃連、柴草、雞血藤、赤芍、地黃、大青葉和白鮮皮等諸藥經(jīng)傳統(tǒng)工藝調(diào)合而成,丹參酮、丹參素、黃連素和小檗堿等為其主要有效藥理成份,具有清熱解毒、祛屑止癢、涼血活血之功效[11]。觀察發(fā)現(xiàn),聯(lián)合治療組患者治療后VEGF、VEGFmRNA表達(dá)及其受體HIT-l、KDR,MVD明顯降低,說明丹槐銀屑濃縮丸具有抑制VEGF分泌的作用,且阿維A確有抑制T細(xì)胞增殖作用。銀屑濃患者VEGF、VEGFmRNA表達(dá)及其受體HIT-l、KDR均異常增高,并在VEGF刺激作用下造成MVD,說明VEGF、VEGFmRNA表達(dá)及其受體HIT-l、KDR與銀屑病確有明確的相關(guān)性。本臨床觀察也證實(shí)HIT-l、KDR在銀屑病皮損中血管內(nèi)皮細(xì)胞和部分角質(zhì)形成細(xì)胞同時表達(dá)VEGF與KDR。使用丹槐銀屑濃縮丸治療21 d后,VEGF及其受體HIT-l、KDR表達(dá)均明顯下調(diào)。分析認(rèn)為,在本方中,君藥紫草味苦性寒,可涼血清熱;臣藥黃連、白鮮皮、大青葉可清熱解毒,尤其黃連的有效成份黃連素、小檗堿具有確切的清熱解毒、抗炎清腫之功效[12];雞血藤及丹參佐藥皆為上等活血良藥,《吳普本草》記載丹參味辛性涼。其有效成份丹參酮、丹參素具有活血化瘀,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證實(shí)其具有拮抗Ca2+內(nèi)流,改善ATP酶活性,松弛血管平滑肌改善微循環(huán)的作用[13]。白茅根涼血生津清熱利水,澤瀉甘寒泄熱毒,以上君臣諸藥可清泄熱毒、清熱解毒、涼血活血、疏通膚絡(luò)而祛屑止癢。研究表明,T淋巴細(xì)胞可通過自身的活化釋放多種細(xì)胞因子而觸發(fā)炎性反應(yīng),這種分子生物化學(xué)反應(yīng)會加重銀屑病皮。在本治療方案中,陽性藥維A酸為抗皮膚角化異常藥,其藥理作用主要是抑制T細(xì)胞增殖及表皮I型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶、促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞分化,同時也有抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖、抑制白細(xì)胞趨化性,具有調(diào)節(jié)表皮細(xì)胞分化和增殖等作用[14]。阿維A組治療后異常增殖T淋巴細(xì)胞明顯降低,佐證阿維A確有抑制T細(xì)胞增殖的作用。在本研究中我們還發(fā)現(xiàn)丹槐銀屑濃縮丸具有與阿維A類似問題的抑制T淋巴細(xì)胞增殖作用,但這種作用沒有阿維A明顯,且其藥理作用復(fù)雜,能否提純用于治療銀屑病需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

綜上所述,丹槐銀屑濃縮丸具有降低銀屑病患者表皮病變組織血管內(nèi)皮VEGF分秘、阻斷VEGF與其受體HIT-l、KDR結(jié)合,抑制表皮病變組織皮下血管新生、重建,減輕受體HIT-l、KDR在銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞和真皮乳頭微血管上表達(dá)[15],阿維A抑制T細(xì)胞增殖介導(dǎo)的炎性反應(yīng),降低真皮乳頭微血管的異常增生而達(dá)到減輕銀屑病的病理進(jìn)程。

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(2015-11-16收稿 責(zé)任編輯：王明)

Effect of Danhuai Yinxue Concentrated Pill Combined with Acitretin on Expression of VEGF and Receptor FLT-1 and KDR in Patients with Psoriasis

Zhang Xia，Kang Xiaojing，Chen Shaoxiu，Miu Zequn,Wang Heng

(DermatologicalDepartment，ShiyanTaiheHospital，Shiyan442000，China)

Objective:To observe the effect of Danhuai Yinxue Concentrated Pill combined with acitretin on expression of vascular endothelial growth factor(VEGF)and its receptor(FLT-1，KDR)of patients with psoriasis.Methods:A retrospective investigation for 102 cases in dermatological department of Shiyan Taihe Hospital before January 1，2014 was conducted as control group.Three hundred and six patients who received treatment in the hospital from February 2014 to February 2015 were collected and divided into Danhuai group，acitretin group，and joint treatment group.Patients in the control group were treated by immune regulative drugs or corticosteroids.Patients in acitretin group additionally adopted acitretin ointment on damaged skin，while patients in Danhuai group additionally adopted Danhuai Yinxue Concentrated Pill，compared with the control group.The joint treatment group applied acitretin ointment and Danhuai Yinxue Concentrated Pill，in addition to treatment for the control group.The expression of VEGF protein and VEGF mRNA，VEGF receptor，F(xiàn)LT-1 and KDR，skin tissue dermal papillary vascular density(MVD)，venous blood T lymphocyte were detested and compared before and after the treatment.The clinical curative effects of all the groups were observed.Results:The total effective rate of the joint treatment group was 83.79%，and the VEGF protein and mRNA，F(xiàn)LT 1 and KDR and MVD expression and T lymphocytes significantly decreased，compared with acitretin group and Danhuai group(allP<0.05).The difference showed statistical significance.Conclusion:Danhuai Yinxue Concentrated Pill may reduce excessive VEGF expression，block the connection between VEGF and its receptors，inhibit subcutaneous angiogenesis and reconstruction of damaged tissue to reduce the abnormal growths of dermal papilla capillaries.Acitretin may suppress inflammatory reaction induced by T cells proliferation，reduce the pathological changes in patients with psoriasis.The combination of Danhuai Yinxue Concentrated Pill and Acitretin has synergistic effects and enhance curative effects.

Danhuai Yinxue Concentrated Pill； Psoriasis； Vascular endothelial growth factor； Receptor； Dermal papillary vascular density

湖北省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號:2014CFB360)

R275.9

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.11.022