蛋白酶對1～21日齡肉仔雞生長性能、血清生化指標(biāo)及抗氧化功能的影響

■ 侯振平 蔣桂韜，2 吳端欽 劉延杰 陳寧波 王郝為 戴求仲，2*

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所，湖南長沙410205；2.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南長沙410131；3.山東濟(jì)南諾能生物工程有限公司，山東濟(jì)南250003）

豆粕是動物飼料蛋白質(zhì)的主要來源，由于我國蛋白原料資源緊缺，對外依存度隨著畜牧業(yè)的發(fā)展而逐年增大，2015年大豆進(jìn)口量高達(dá)8 169萬噸，飼料成本不斷攀升，養(yǎng)殖效益難以保障，并危及國家糧食安全。與此同時，我國畜禽生產(chǎn)中動物對飼料的蛋白質(zhì)利用效率仍然較低，如何提高飼料蛋白質(zhì)利用效率降低飼糧中蛋白原料用量一直是動物營養(yǎng)學(xué)研究的熱點領(lǐng)域，也是目前養(yǎng)殖減排的重要方向。研究表明，飼料中添加酶制劑具有補(bǔ)充動物機(jī)體內(nèi)源酶不足、提高飼料利用率、降低飼料成本、促進(jìn)畜禽生長、減少環(huán)境污染等作用[1]。有研究表明[2]，在飼料中添加蛋白酶，可以降低豆粕的添加水平。汪銀鋒等[3]指出，在幼齡畜禽飼糧中添加蛋白酶能夠彌補(bǔ)機(jī)體蛋白酶的分泌不足，從而提高畜禽生產(chǎn)性能，加速畜禽對蛋白質(zhì)的分解消化吸收，提高飼糧粗蛋白利用率，降低糞便中含氮物質(zhì)的排放，減少對環(huán)境的污染。蛋白酶的產(chǎn)品種類繁多，在不同畜禽中的應(yīng)用效果差異較大。目前關(guān)于降低飼糧中蛋白質(zhì)含量補(bǔ)充蛋白酶是否可達(dá)到蛋白質(zhì)降低前飼糧的飼喂效果的研究報道較少，生產(chǎn)上科學(xué)利用蛋白酶制劑尚缺乏理論支撐。本試驗通過在飼糧中添加不同水平的外源蛋白酶，觀察其對肉雞生長性能、血清生化指標(biāo)及抗氧化能力的影響，目的是闡明蛋白酶對肉雞生產(chǎn)性能影響的相關(guān)機(jī)制，并篩選確定飼糧中蛋白酶的適宜添加劑量，為其在肉雞飼養(yǎng)和飼料生產(chǎn)中科學(xué)合理利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 酶制劑

蛋白酶制劑為粉狀固體，是國產(chǎn)復(fù)合酶，成分為蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、纖維素酶、木聚糖酶等，主要含角蛋白酶，由濟(jì)南諾能生物工程有限公司生產(chǎn)提供。

1.2 試驗動物與分組

試驗選擇1日齡健康、體重相近的愛拔益加（AA）公母混合雛900只，購自湖南順成實業(yè)有限公司。將試驗雞隨機(jī)分成試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組和Ⅴ組5個組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)30只，各組間雞的初始體重?zé)o明顯差異（P＞0.05）。試驗Ⅰ組為對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組和Ⅴ組則分別在對照飼糧基礎(chǔ)上添加50、100、200 g/t和400 g/t蛋白酶。

1.3 試驗飼糧

試驗飼糧參照NRC（1994）及中國雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（NY/T33—2004）以玉米、豆粕作為主要原料，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。飼糧在湖南省畜牧獸醫(yī)研究所試驗工廠生產(chǎn)，為破碎料。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 飼養(yǎng)管理

試驗在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院麻類研究所沅江石磯湖基地動物房進(jìn)行，試驗肉雞采用網(wǎng)上平養(yǎng)，飼養(yǎng)管理與免疫均按《AA肉仔雞飼養(yǎng)管理手冊》進(jìn)行。

1.5 測定指標(biāo)及方法

1.5.1 生長性能

以重復(fù)為單位記錄每天耗料量，每日觀察雞群的生長、發(fā)病及死亡狀況，記錄死淘數(shù)。在21 d早晨8:00以重復(fù)為單位稱空腹體重（提前8 h停料）、結(jié)料。計算肉雞ABW、ADG、ADFI和F/G。

1.5.2 血清生化指標(biāo)

在試驗第21 d，各重復(fù)隨機(jī)抽取體重接近該處理的健康肉雞1只，頸靜脈采血10 ml，靜置15 min后4 000 r/min離心5 min，取上層血清，-20℃冷凍保存，備測。利用全自動生化分析儀（邁瑞，BS-480）測定外周血血清中總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、葡萄糖（GLU）、總膽固醇（T-CHO）及甘油三酯（TG）的含量。

1.5.3 抗氧化指標(biāo)

采用分光光度計（島津，UV-2600）測定血清中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）、總抗氧化能力（T-AOC）活性及丙二醛（MDA）含量。所有試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），并對差異顯著者進(jìn)行Duncan's法多重比較，P＜0.05為顯著水平。結(jié)果采用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 蛋白酶制劑對肉仔雞生長性能的影響（見表2）

表2 蛋白酶制劑對肉仔雞生長性能的影響

由表2可知，飼糧添加蛋白酶制劑提高了肉仔雞的ABW，其中試驗Ⅳ、Ⅴ組肉雞ABW顯著高于試驗Ⅰ組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）；各組之間ADFI、ADG和F/G差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 蛋白酶制劑對肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響（見表3）

表3 蛋白酶制劑對肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響

表3結(jié)果表明，添加蛋白酶后肉仔雞血清BUN含量試驗Ⅳ組顯著高于試驗Ⅰ組（P＜0.05），其他生化指標(biāo)各組間差異均不顯著（P＞0.05）。

2.3 蛋白酶制劑對肉仔雞血清抗氧化功能的影響（見表4）

由表4可知，添加蛋白酶制劑提高了肉仔雞血清SOD活性（P＞0.05），血清GSH-Px活性試驗Ⅱ組顯著高于試驗Ⅲ、Ⅳ組和Ⅴ組（P＜0.05），血清T-AOC活性試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組和Ⅳ組顯著高于試驗Ⅴ組（P＜0.05），血清MDA含量試驗Ⅱ組顯著低于試驗Ⅰ、Ⅳ組和Ⅴ組（P＜0.05）。

3 討論

表4 蛋白酶制劑對肉仔雞血清抗氧化功能的影響

3.1 蛋白酶制劑對肉仔雞生長性能的影響

近年來，通過添加外源性蛋白酶類來提高飼糧蛋白質(zhì)的消化率，降低生產(chǎn)成本成為研究的熱點。Freitas等[4]、Yu等[5]、王琤等[6]、李宗銳[7]等研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加蛋白酶能夠改善肉雞的飼料轉(zhuǎn)化率。有研究結(jié)果表明[8-11]，在飼糧中添加蛋白酶能夠改善肉雞的生產(chǎn)性能。Giannenas等[12]研究發(fā)現(xiàn)，豆粕型日糧中添加蛋白酶與對照組相比對肉雞生產(chǎn)性能無顯著性影響。本研究發(fā)現(xiàn)，除ABW外，添加蛋白酶制劑對肉雞的生長性能無顯著性影響（P＞0.05），但添加蛋白酶制劑有降低F/G的趨勢，但F/G與蛋白酶制劑的添加量沒有呈現(xiàn)二次曲線的關(guān)系，這與Freitas等[4]、Yu等[5]和Cowieson等[11]的研究結(jié)果稍有不同，與王琤等[6]、李宗銳[7]和周梁[8]等的研究結(jié)果一致，與Angel等[10]研究結(jié)果不同，這可能是試驗使用的蛋白酶、飼料原料和配方及試驗條件等不同造成。從對生長性能影響的角度講，本研究表明在肉雞育雛期添加200 g/t蛋白酶制劑效果最佳。這可能是由于肉雞幼齡時體內(nèi)蛋白酶的分泌極少，需大量添加外源酶以助提高肉雞對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，改善生長性能。

3.2 蛋白酶制劑對肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響

動物機(jī)體血清生化指標(biāo)的變化是動物健康及代謝情況的直接反映。TP、ALB和GLB含量是機(jī)體蛋白質(zhì)代謝和免疫功能的反映，AST和ALT在體內(nèi)主要參與轉(zhuǎn)氨基作用，GLU主要是參與糖代謝途徑，血清中TG和T-CHO含量反映出動物機(jī)體脂質(zhì)代謝的狀況。BUN可以準(zhǔn)確地反映出動物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸平衡的狀況。李宗銳[7]研究發(fā)現(xiàn)，蛋白酶與蛋白水平互作對21 d肉雞血清TP和GLB含量有顯著影響。李慧[13]研究表明，日糧中添加32 000 U/kg蛋白酶能夠顯著降低1～21 d和22～42 d肉雞GLU含量（P＜0.05）。本研究發(fā)現(xiàn)，除個別加酶組外的部分指標(biāo)較低外，與對照組相比，飼糧添加不同水平外源蛋白酶后不同程度地提高了肉仔雞血清中TP、ALB、GLB、GLU、BUN、T-CHO和TG的含量。這表明添加蛋白酶有助于促進(jìn)肉雞對飼料中蛋白質(zhì)、糖類和脂類物質(zhì)的消化分解，從而在一定程度上提高了反映機(jī)體代謝水平的相關(guān)血清生化指標(biāo)含量，這與加酶后肉雞生長性能得到改善相吻合。本試驗中添加蛋白酶制劑對大部分血清生化指標(biāo)的影響不顯著，與前人研究結(jié)果不盡相同[7,13]，這可能是動物品種、飼糧營養(yǎng)水平和蛋白酶種類及添加水平不同所致。

3.3 蛋白酶制劑對肉仔雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

氧化應(yīng)激可作為肉雞熱應(yīng)激反應(yīng)的部分體現(xiàn)，動物血清抗氧化指標(biāo)的變化反映了動物機(jī)體的抗氧化能力。機(jī)體內(nèi)的酶類氧自由基清除劑SOD和GSH-Px構(gòu)成酶促抗氧化體系。T-AOC代表體內(nèi)酶性和非酶性抗氧化物的總體水平。MDA是脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物，間接反映氧自由基對細(xì)胞的損傷程度，正常動物機(jī)體內(nèi)含量越低越好。而關(guān)于飼料營養(yǎng)水平及添加酶制劑對肉雞血清抗氧化功能的報道極少。李宗銳[7]、周梁[8]等研究表明，添加蛋白酶能降低21 d肉雞血清中MDA含量（P＜0.05）。王琤等[14]研究發(fā)現(xiàn)，添加蛋白酶能夠顯著升高血清中SOD和GSH-Px的活性，降低血清中MDA的含量（P＜0.05）。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加50 g/t外源蛋白酶提高了肉仔雞血清中SOD、GSH-Px和T-AOC活性并降低了MDA含量，這與王琤等[14]的研究結(jié)果一致，與其他研究者結(jié)果不完全一致[9,11]，可能是試驗用的蛋白酶、飼料原料、試驗設(shè)計及試驗條件不同而致。

4 結(jié)論

飼糧中添加適量的蛋白酶制劑能夠提高肉仔雞免疫功能，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，從而在一定程度改善生長性能。本試驗條件下，綜合考慮生長性能、血清生化指標(biāo)和抗氧化功能，1～21 d肉仔雞生長飼糧中蛋白酶制劑添加量以200 g/t最佳。