外周血有核紅細(xì)胞數(shù)量與缺氧缺血性腦病新生兒腦損傷相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系

喬 健，姜東林，龔 芳，陳小倩，李成萬(wàn)△

(1.南通大學(xué)第三附屬醫(yī)院兒科，江蘇無(wú)錫 214041；2.蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院新生兒科，江蘇蘇州 215003)

外周血有核紅細(xì)胞數(shù)量與缺氧缺血性腦病新生兒腦損傷相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系

喬 健1，姜東林1，龔 芳1，陳小倩2，李成萬(wàn)1△

(1.南通大學(xué)第三附屬醫(yī)院兒科，江蘇無(wú)錫 214041；2.蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院新生兒科，江蘇蘇州 215003)

目的 探討外周血有核紅細(xì)胞(NRBC)數(shù)量與缺氧缺血性腦病(HIE)新生兒腦損傷相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系。方法 選取2013年2月至2015年4月南通大學(xué)第三附屬醫(yī)院與蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院收治的HIE患兒29例(HIE組)，非HIE窒息新生兒27例(窒息組)及健康新生兒24例(對(duì)照組)，均于娩出后24 h內(nèi)檢測(cè)外周血NRBC數(shù)量、S100B蛋白、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)及腦型肌酸激酶同功酶(CK-BB)水平進(jìn)行比較，并分析NRBC數(shù)量與S100B蛋白、NSE及CK-BB水平的相關(guān)性。結(jié)果 HIE組患兒外周血NRBC數(shù)量及腦損傷相關(guān)指標(biāo)(S100B蛋白、NSE及CK-BB)水平均高于窒息組和對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；HIE重度患兒外周血NRBC數(shù)量、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均高于輕度和中度患兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；且HIE患兒外周血NRBC數(shù)量與S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均呈正相關(guān)(r=0.469，P<0.01；r=0.445，P<0.01；r=0.378，P<0.05)。結(jié)論 外周血NRBC數(shù)量能夠反映HIE新生兒的腦損傷，且檢測(cè)簡(jiǎn)便，可用于HIE的早期輔助診斷。

缺氧缺血，腦 ；新生兒；腦損傷；有核紅細(xì)胞

新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)指新生兒在圍產(chǎn)期由于缺血缺氧而導(dǎo)致的腦部損傷性疾病，極易導(dǎo)致新生兒的智力障礙、腦癱甚至死亡[1]。對(duì)于新生兒HIE的救治在于早發(fā)現(xiàn)、早治療，盡早診斷出新生兒的腦損傷從而進(jìn)行有效干預(yù)，可避免或減少神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥的產(chǎn)生。有核紅細(xì)胞(nucleated red blood cell，NRBC)為幼紅細(xì)胞，在新生兒外周血中少量存在，現(xiàn)有研究表明外周血NRBC數(shù)量與窒息相關(guān)[2-3]。本研究觀(guān)察了窒息致HIE新生兒外周血NRBC數(shù)量與S100B蛋白、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)及腦型肌酸激酶同功酶(creatine kinaes BB isozyme,CK-BB)等腦損傷相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系，以期為HIE的早期輔助診斷提供指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年2月至2015年4月南通大學(xué)第三附屬醫(yī)院新生兒科及蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院新生兒科因窒息住院的新生兒56例，均符合新生兒窒息的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。其中，被臨床診斷為HIE的新生兒29例(HIE組)，男13例，女16例；HIE輕度12例，中度11例，重度6例；診斷為窒息無(wú)HIE的新生兒27例(窒息組)，男16例，女11例。HIE的臨床診斷符合2005年新生兒學(xué)組會(huì)議制定的HIE診斷依據(jù)。HIE分度：輕度表現(xiàn)為興奮抑制交替，肌張力正常或稍高，可有肌陣攣，瞳孔正?；驍U(kuò)大，原始反射、中樞性呼吸衰竭及腦電圖(EEG)正常；中度表現(xiàn)為嗜睡，肌張力及原始反射減弱，常有驚厥，有中樞性呼吸衰竭，瞳孔縮小，EEG表現(xiàn)為低電壓；重度表現(xiàn)為昏迷，肌張力表現(xiàn)為松軟或間歇性伸肌張力增高，原始反射消失，伴有驚厥，中樞性呼吸衰竭明顯，瞳孔不對(duì)稱(chēng)或擴(kuò)大，對(duì)光反射遲鈍，EEG呈現(xiàn)爆發(fā)抑制，等電線(xiàn)[5]。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除伴有感染性疾病、中樞系統(tǒng)畸形、先天性心臟病、呼吸系統(tǒng)疾病患兒。對(duì)照組選擇健康新生兒24例，男11例，女13例。3組在體質(zhì)量、胎齡、性別及分娩方式上比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。

1.2 方法 窒息新生兒于娩出后24 h內(nèi)抽取股靜脈血3 mL，健康新生兒在娩出后24 h內(nèi)抽取臍靜脈血或股靜脈血3 mL，所有標(biāo)本均分兩管置于含10%乙二胺四乙酸二鈉30 μL和抑肽酶40 μL的試管中。混勻后其中1管用于NRBC計(jì)數(shù)，另外1管3 000 r/min離心5 min后分離血漿，-70 ℃保存用以批量檢測(cè)。NRBC計(jì)數(shù)應(yīng)用瑞氏-姬姆薩染色后計(jì)算每100個(gè)白細(xì)胞中NRBC的數(shù)量；外周血S100B蛋白與CK-BB濃度檢測(cè)均采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELLSA)，S100B蛋白檢測(cè)試劑盒購(gòu)自瑞典康乃格診斷公司，CK-BB檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海北加生化試劑有限公司，檢測(cè)儀器均為Bio-Rad Model550型酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Rad公司)；NSE濃度檢測(cè)采用電化學(xué)發(fā)光免疫法，試劑盒購(gòu)自美國(guó)Beckman Coulter公司，檢測(cè)儀器為Elecsys 2010全自動(dòng)免疫分析儀(美國(guó)Roche公司)。具體操作按照試劑盒及儀器操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 3組外周血各項(xiàng)觀(guān)察指標(biāo)比較HIE組外周血NRBC計(jì)數(shù)、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均高于窒息組與對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；窒息組與對(duì)照組上述各項(xiàng)指標(biāo)比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 不同程度HIE患兒各項(xiàng)觀(guān)察指標(biāo)比較 重度HIE新生兒外周血NRBC數(shù)量、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均高于輕度及中度HIE新生兒，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表2。

2.3 相關(guān)性分析 相關(guān)性分析顯示，HIE新生兒外周血NRBC數(shù)量與腦損傷指標(biāo)S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均呈正相關(guān)(r=0.469，P<0.01；r=0.445，P<0.01；r=0.378，P<0.05)。

表1 3組外周血各項(xiàng)觀(guān)察指標(biāo)比較

*：P<0.01，與HIE組比較；#：每100個(gè)白細(xì)胞中NRBC的數(shù)量。

表2 不同程度HIE患兒外周血各項(xiàng)觀(guān)察指標(biāo)比較

*：P<0.01，與重度患兒比較；#：每100個(gè)白細(xì)胞中NRBC的數(shù)量。

3 討 論

NRBC作為未成熟紅細(xì)胞，是胎兒造血系統(tǒng)及胎兒血液循環(huán)的一個(gè)特征性標(biāo)記，在圍產(chǎn)期隨著胎兒造血系統(tǒng)的逐漸發(fā)育成熟，其外周血液循環(huán)中的NRBC僅有少量存在[6]。S100B蛋白、NSE及CK-BB均與腦的能量代謝有關(guān)：S100家族中的S100B蛋白是中樞神經(jīng)中主要且最有活性的成員，主要存在于腦神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與Schwann細(xì)胞，其可通過(guò)調(diào)節(jié)蛋白激酶C和鈣調(diào)蛋白的磷酸化及RNA的合成調(diào)節(jié)細(xì)胞能量代謝[7]；NSE是在神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞和神經(jīng)元中催化能量代謝糖酵解過(guò)程中磷酸烯醇式丙酮酸與2-磷酸甘油酸互相轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵酶；CK-BB也是腦神經(jīng)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞能量代謝中的重要催化酶。在發(fā)生缺氧缺血性腦損傷時(shí)，腦組織細(xì)胞膜的完整性遭到破壞，細(xì)胞內(nèi)高濃度的S100B蛋白、NSE及CK-BB則被釋放到腦脊液中，而由于新生兒的血腦屏障發(fā)育還不完善或直接受損，外周血會(huì)出現(xiàn)S100B蛋白、NSE及CK-BB的明顯升高[7-9]。而在缺氧缺血的條件下，機(jī)體需要更多的血紅蛋白參與攜氧，這就使得機(jī)體內(nèi)的紅細(xì)胞需求增加，反饋刺激造血系統(tǒng)加速紅細(xì)胞的生成與釋放，從而使得紅細(xì)胞未成熟就被釋放進(jìn)入外周血中，使得外周血NRBC計(jì)數(shù)出現(xiàn)增高[10]。

對(duì)于腦損傷的評(píng)估，現(xiàn)有的輔助檢查常有腦電圖、B型超聲、CT及磁共振成像(MRI)等，均是從電生理及影像學(xué)角度去評(píng)估，檢查時(shí)限各有不同，腦電圖在出生后1周內(nèi)檢查，B型超聲可在HIE的72h內(nèi)開(kāi)始檢查，CT待患兒生命體征穩(wěn)定后檢查，一般以生后4～7d為宜，而MRI在生后1d即可檢查，均存在檢查時(shí)間滯后、檢查時(shí)間長(zhǎng)或費(fèi)用過(guò)高等缺點(diǎn)。本研究所選擇的檢測(cè)手段為血清學(xué)檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)間為出生后24h內(nèi)。研究發(fā)現(xiàn)在該時(shí)間段內(nèi)HIE組外周血NRBC計(jì)數(shù)、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均明顯高于窒息組與對(duì)照組(P<0.01)，而窒息組與對(duì)照組上述各指標(biāo)比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明HIE新生兒早期的腦損傷已經(jīng)在S100B蛋白、NSE及CK-BB等指標(biāo)上反映出來(lái)，同時(shí)早期的缺血缺氧已使HIE新生兒外周血NRBC計(jì)數(shù)升高到足以區(qū)分健康和僅有窒息的新生兒。在HIE的分度比較中，重度HIE新生兒外周血NRBC數(shù)量、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均明顯高于輕度及中度患兒(P<0.01)，說(shuō)明新生兒外周血NRBC數(shù)量及上述腦損傷指標(biāo)能夠反映HIE新生兒的嚴(yán)重程度,這與國(guó)內(nèi)外的其他研究相一致[10-11]。相關(guān)性分析顯示，HIE新生兒外周血NRBC計(jì)數(shù)與腦損傷指標(biāo)S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均呈明顯正相關(guān)(P<0.01)，這可能說(shuō)明在相同的病理因素作用下(缺血缺氧)，反饋刺激外周血NRBC數(shù)量的增高程度與腦損傷的嚴(yán)重程度是協(xié)調(diào)一致的，外周血NRBC數(shù)量能夠反映腦損傷的嚴(yán)重程度，但確切的病理機(jī)制還需要進(jìn)一步探討。在臨床上，檢測(cè)外周血NRBC數(shù)量用血量少，簡(jiǎn)便快捷，更適合于早期開(kāi)展。

綜上所述，新生兒外周血NRBC數(shù)量的增高能夠反映腦損傷的存在，同時(shí)該檢測(cè)方法簡(jiǎn)便快捷，這對(duì)于早期篩查HIE及判斷疾病的嚴(yán)重程度具有重要意義。

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無(wú)錫市醫(yī)院管理中心醫(yī)學(xué)科研項(xiàng)目(YGZXM14025)。 作者簡(jiǎn)介：?jiǎn)探?1970-)，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事新生兒腦損傷方面研究。△

?驗(yàn)交流·

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.35.033

R722.12

B

1671-8348(2016)35-5004-02

2016-07-13

2016-09-21)