斑螯酸鈉維生素B6注射液聯(lián)合化療對(duì)肺癌組織FAS表達(dá)及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響研究

蔣 云，李志強(qiáng)，周麗芳，毛晨梅，魏繼武

(1.蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院藥劑科，江蘇蘇州 215000;2.東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬江陰醫(yī)院藥劑科，江蘇江陰 214400;3.南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院藥劑科，南京 210008)

斑螯酸鈉維生素B6注射液聯(lián)合化療對(duì)肺癌組織FAS表達(dá)及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響研究

蔣 云1，李志強(qiáng)2，周麗芳1，毛晨梅1，魏繼武3

(1.蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院藥劑科，江蘇蘇州 215000;2.東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬江陰醫(yī)院藥劑科，江蘇江陰 214400;3.南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院藥劑科，南京 210008)

目的 探討斑螯酸鈉維生素B6注射液(商品名：艾易舒)聯(lián)合化療對(duì)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者癌變組織FAS蛋白表達(dá)及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響。方法 選取84例NSCLC患者為研究對(duì)象，隨機(jī)數(shù)字表法分為聯(lián)合組和對(duì)照組，每組42例。對(duì)照組中途剝落2例，共40例有效病例入組，予以單純吉西他濱+順鉑(GP)化療方案；聯(lián)合組剝落4例，共38例有效病例入組，予以艾易舒注射液聯(lián)合GP化療方案。對(duì)比兩組受試者2個(gè)化療周期后臨床療效及毒副反應(yīng)發(fā)生率的差異，記錄其治療前后Karnofsky功能狀態(tài)量表(KPS)評(píng)分、癌變組織FAS蛋白陽(yáng)性表達(dá)水平變化情況，分析聯(lián)合組治療前后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化差異。結(jié)果 聯(lián)合組治療總有效率明顯高于對(duì)照組(44.7% vs. 22.5%，P<0.05)。治療后，兩組發(fā)熱、神經(jīng)反應(yīng)降低、腎損傷等毒副反應(yīng)發(fā)生率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，聯(lián)合組骨髓抑制、惡心嘔吐中重度毒副反應(yīng)發(fā)生率明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。治療后，兩組受試者KPS評(píng)分及癌變組織FAS蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均較治療前明顯提升，且聯(lián)合組高于對(duì)照組(P<0.05)。聯(lián)合組受試者癌細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)均出現(xiàn)不同程度的改變，部分可見癌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)萎縮、染色質(zhì)破裂、細(xì)胞器退變或凋亡；多數(shù)存在膜性結(jié)構(gòu)裂隙、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)松散或脫顆粒等變化。結(jié)論 艾易舒注射液聯(lián)合GP化療方案對(duì)促進(jìn)NSCLC患者病情轉(zhuǎn)歸、改變癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)、減輕毒副作用等具有積極意義。

斑螯酸鈉維生素B6注射液；化學(xué)治療；癌，非小細(xì)胞肺；FAS蛋白；超微結(jié)構(gòu)

當(dāng)前臨床治療非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的方案較多，約70%的患者確診時(shí)已處于晚期階段，錯(cuò)失最佳手術(shù)治療時(shí)機(jī)，僅能通過放射治療和化學(xué)治療(以下簡(jiǎn)稱化療)等保守治療方式抑制病情發(fā)展，延長(zhǎng)生存時(shí)間。以鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療方案是目前臨床治療NSCLC的常見途徑之一[1]，但隨之而來(lái)的毒副反應(yīng)不可忽視，現(xiàn)已成為影響患者預(yù)后的重要因素，受到廣泛關(guān)注。部分學(xué)者認(rèn)為，在化療基礎(chǔ)上應(yīng)用斑螯酸鈉維生素B6注射液(商品名：艾易舒)能有效抑制腫瘤細(xì)胞蛋白質(zhì)和核酸的合成，在提高抗腫瘤效果的同時(shí)減輕化療藥物引起的毒副反應(yīng)[2]，對(duì)患者預(yù)后恢復(fù)有利。本研究以此為方向，通過比較單純吉西他濱聯(lián)合順鉑(GP)化療及艾易舒注射液聯(lián)合GP化療的臨床療效、毒副反應(yīng)及治療前后生活質(zhì)量、癌變組織FAS蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況與癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化差異，分析兩種療法在NSCLC臨床治療中的應(yīng)用價(jià)值，以期尋求更切實(shí)可行的治療方案，為全面提升NSCLC患者臨床療效、改善其預(yù)后質(zhì)量提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年3月至2014年6月于東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬江陰醫(yī)院就診的84例NSCLC患者為研究對(duì)象。(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理檢查，符合《美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)非小細(xì)胞肺癌臨床實(shí)踐指南》中NSCLC相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)者[3]；入組時(shí)Karnofsk功能狀態(tài)量表(KPS)評(píng)分大于或等于70分且體力狀況Zubrod-ECOG-WHO(ZPS)評(píng)分小于或等于2分者；符合相關(guān)藥物治療及化療適應(yīng)證的患者；國(guó)際防癌聯(lián)合會(huì)的TNM分期結(jié)果為ⅢB期或Ⅳ期者[4]；經(jīng)院倫理協(xié)會(huì)通過且自愿簽署知情同意書者。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他原發(fā)性惡性腫瘤、嚴(yán)重臟器功能障礙、凝血功能障礙、嚴(yán)重器質(zhì)性疾病、自身免疫性疾病、精神疾病或意識(shí)障礙者；年齡不足30歲或超過70歲者；妊娠期或哺乳期婦女；入組前30 d接受其他治療措施者；過敏體質(zhì)或相關(guān)治療禁忌證者。(3)剝落標(biāo)準(zhǔn)：中途退出治療、更改治療方案、治療途中死亡、轉(zhuǎn)院或隨訪期失聯(lián)的患者；治療依從性不足的患者；自愿離組的患者。隨機(jī)數(shù)字表法將84例受試者分為聯(lián)合組和對(duì)照組各42例。對(duì)照組中途剝落2例，共40例有效病例入組，其中男28例，女12例；平均年齡(54.4±6.1)歲；ⅢB期24例，Ⅳ期16例；鱗癌15例，腺癌25例。聯(lián)合組剝落4例，共38例有效病例入組，其中男24例，女14例；平均年齡(54.6±6.0)歲；ⅢB期22例，Ⅳ期16例；鱗癌14例，腺癌24例。兩組受試者性別、年齡、臨床TNM分期、病理類型等一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 材料 (1)試劑：鏈霉素抗生物素過氧化酶(SP)免疫組織化學(xué)試劑盒(兔)由上海研卉生物科技有限公司提供；兔抗人FAS多克隆抗體由上海信裕生物科技有限公司提供；二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供；四氧化鋨固定液(鋨酸,1%)由上海君瑞生物技術(shù)有限公司提供。(2)儀器：JME-1200EX型透射電鏡由日本JEOL公司提供；EM UC7型超薄切片機(jī)由鉑悅儀器(上海)有限公司提供；超低溫冰箱(-80℃)由美國(guó)Revo公司提供；DHG-9040A型立式電熱恒溫干燥箱由嘉興市中新醫(yī)療儀器有限公司提供。(3)藥物：注射用鹽酸吉西他濱(規(guī)格：0.2 g，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20093403)由南京正大天晴制藥有限公司生產(chǎn)；順鉑注射液(規(guī)格：10 mg，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H37021358)由齊魯制藥有限公司生產(chǎn)；艾易舒(規(guī)格：10 mL∶0.1 mg，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20053862)由貴州柏強(qiáng)制藥有限公司生產(chǎn)。

1.3 方法

1.3.1 治療方法 兩組受試者入組后均予以GP化療方案，且化療期間配合止吐、護(hù)肝、護(hù)胃、化痰、抗過敏等常規(guī)對(duì)癥支持治療措施。GP化療：注射用鹽酸吉西他濱1 000 mg/(m2·d)+250 mL生理鹽水混合后靜脈滴注，第1、8天用藥，每次靜脈滴注30 min+順鉑注射液20 mg/(m2·d)，靜脈滴注，第1～5天用藥。聯(lián)合組受試者在GP化療第1天起，同時(shí)加用艾易舒，每次50 mL，于250 mL 5%葡萄糖溶液充分混合后靜脈滴注，每日1次。兩組受試者均以21 d為1個(gè)化療周期，治療2個(gè)周期后觀察療效。

1.3.2 免疫組織化學(xué)染色方法 兩組受試者均于治療前后活檢采集癌灶組織標(biāo)本，經(jīng)10%甲醛固定后石蠟包埋，行4 μm連續(xù)切片，置入60 ℃烤箱內(nèi)烘烤60 min后放置于37 ℃恒溫箱內(nèi)過夜；參考SP試劑盒使用說(shuō)明書行免疫組織化學(xué)染色：將切片置入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ溶液中脫蠟，每次15 min；再將切片置入梯度乙醇溶液(100%、95%、85%、70%)內(nèi)，每次5 min；自來(lái)水沖洗60 s，除去乙醇并水化；磷酸鹽緩沖液(PBS)內(nèi)漂洗5 min，重復(fù)2次；高溫高壓抗原修復(fù)FAS；將切片置入濕盒并滴入50 μL過氧化酶阻斷溶液，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3 min，重復(fù)3次；切片滴入50 μL非免疫性動(dòng)物血清，室溫下孵育10 min，加入50 μL一抗，置入4 ℃恒溫箱內(nèi)過夜；使用PBS沖洗，滴入50 μL生物素標(biāo)記的二抗，室溫下孵育10 min；使用PBS沖洗，滴入50 μL鏈酶親和素-過氧化物酶溶液，室溫下孵育10 min；使用PBS沖洗，滴入100 μL DAB溶液，顯微鏡下觀察顯色效果；使用PBS沖洗5 min，重復(fù)3次；蘇木精復(fù)染15 min,自來(lái)水沖洗；1%鹽酸乙醇15 s，自來(lái)水沖洗15 min；梯度乙醇溶液(100%、95%、85%、70%)脫水，每次5 min；置入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ溶液中，每次15 min；中性樹膠封片；用已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照,結(jié)果陽(yáng)性；用PBS代替一抗作陰性對(duì)照,結(jié)果陰性。

1.3.3 超微結(jié)構(gòu)觀察方法 將活檢采集的癌灶組織標(biāo)本使用2.5%戊二醛固定2～4 h,置入4 ℃環(huán)境保存?zhèn)溆?；PBS漂洗大于4 h，4 ℃換5次漂洗液，分出小部分組織標(biāo)本備用；去上清，1%鋨酸、0.1 mol/L二甲砷酸緩沖液固定2 h；PBS漂洗每次10 min，重復(fù)3次；不同濃度丙酮(30%、50%、70%、80%、90%)分別脫水10 min，濃度100%丙酮脫水10 min，重復(fù)3次；配置環(huán)氧樹脂包埋劑浸透包埋樣品；置于35 ℃恒溫箱內(nèi)過夜，第24～48小時(shí)時(shí)調(diào)整溫度至60 ℃，在65 ℃聚合；行1～2 μm半薄切片，60～80 nm超薄切片；醋酸鈾飽和水溶液染后再用檸檬酸鉛染色；使用透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。

1.4 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 觀察指標(biāo) 觀察對(duì)比兩組受試者2個(gè)化療周期后臨床療效及毒副反應(yīng)發(fā)生率差異，記錄其治療前后KPS評(píng)分、癌變組織FAS陽(yáng)性表達(dá)水平變化情況，分析聯(lián)合組治療前后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化差異。

1.4.2 臨床療效評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) 以WHO制定的《實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)評(píng)估療效[5]。完全緩解(CR)：瘤灶完全消失；部分緩解(PR)：瘤灶面積較治療前縮小50%及以上；穩(wěn)定(SD)：瘤灶面積較治療前縮小不足50%或增大不足25%；進(jìn)展(PD)：瘤灶較治療前增大25%及以上或出現(xiàn)新病灶?？傆行?RR)=(CR例數(shù)+PR例數(shù))/總例數(shù)×100%。

1.4.3 生活質(zhì)量評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) 以KPS評(píng)分為評(píng)估依據(jù)[3]，該量表總分共計(jì)0～100分，分為11個(gè)等級(jí)，0分表示死亡；100分表示體力狀態(tài)正常，無(wú)癥狀或體征；得分越高則健康狀況越好。

1.4.4 FAS蛋白表達(dá)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) FAS蛋白陽(yáng)性染色以細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為主，根據(jù)染色率及染色強(qiáng)度評(píng)估其表達(dá)情況。陰性(-)：整張切片均無(wú)著色或偶見棕黃色細(xì)胞，且細(xì)胞數(shù)不足5%；陽(yáng)性(+)：淺棕黃色，腫瘤組織陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)為5%～25%；強(qiáng)陽(yáng)性(++)：棕黃色，腫瘤組織陽(yáng)性染色細(xì)胞數(shù)超過25%。陽(yáng)性率=(陽(yáng)性例數(shù)+強(qiáng)陽(yáng)性例數(shù))/總例數(shù)×100%。

1.4.5 毒副反應(yīng)評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) 參考《抗癌藥物的化學(xué)與藥理學(xué)》中相關(guān)要求[6]，將骨髓抑制、惡心嘔吐、發(fā)熱、神經(jīng)反應(yīng)降低、腎損傷等GP化療的常見毒副反應(yīng)分為0～Ⅳ度，0度為無(wú)毒副反應(yīng)，Ⅳ度為嚴(yán)重毒副反應(yīng)。中重度毒副反應(yīng)=Ⅲ度+Ⅳ度。

2 結(jié) 果

2.1 兩組臨床療效比較 聯(lián)合組治療RR高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.336，P<0.05),見表1。

表1 兩組患者臨床療效比較[n(%)]

*:P<0.05,與對(duì)照組比較。

2.2 兩組化療后中重度毒副反應(yīng)發(fā)生率比較 聯(lián)合組受試者化療后骨髓抑制、惡心嘔吐發(fā)生率低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組患者發(fā)熱、神經(jīng)反應(yīng)降低、腎損傷發(fā)生率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2。

表2 兩組患者化療后中重度毒副反應(yīng)發(fā)生率比較[n(%)]

2.3 兩組治療前后KPS評(píng)分比較 治療前，兩組受試者KPS評(píng)分比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組受試者KPS評(píng)分均較治療前提升，且聯(lián)合組高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.202,P<0.05),見表3。

表3 兩組治療前后KPS評(píng)分比較，分)

*：P<0.05，與對(duì)照組比較。

2.4 兩組治療前后癌變組織FAS蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 治療前，兩組受試者癌變組織FAS蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后，兩組受試者癌變組織FAS蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均較治療前提升(P<0.05)，且聯(lián)合組高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.364，P<0.05),見表4、圖1。

2.5 聯(lián)合組治療前后細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化比較 電鏡檢查結(jié)果顯示，聯(lián)合組的鱗癌患者治療前細(xì)胞體積大，呈多變形或多角形的鑲嵌排列狀態(tài)，細(xì)胞核大；癌細(xì)胞間隙寬，可見橋粒連接，細(xì)胞質(zhì)可見多處散在的無(wú)定向束狀排列張力原纖維(圖2A)。腺癌患者治療前細(xì)胞呈腺泡狀緊密排列，腔面微絨毛密集且短鈍、粗細(xì)不均；癌細(xì)胞核大，呈類圓形，核仁清晰；細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有分泌顆粒，部分可見微腺泡(圖2B)。治療后，聯(lián)合組受試者癌細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)均出現(xiàn)不同程度的改變，部分可見癌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核萎縮(圖3A)、染色質(zhì)破裂(圖3B)、細(xì)胞器退變或凋亡(圖3C)；多數(shù)存在膜性結(jié)構(gòu)裂隙、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)松散或脫顆粒等變化。

表4 兩組治療前后癌變組織FAS陽(yáng)性表達(dá)率比較

*:P<0.05,與同組治療前比較；#:P<0.05，與對(duì)照組治療后比較。

A:治療前FAS蛋白陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞膜；B:治療后FAS蛋白陽(yáng)性表達(dá)于細(xì)胞膜。

圖1 治療前后FAS蛋白陽(yáng)性表達(dá)(SP×400)

A:肺鱗癌細(xì)胞(×4 000)；B:肺腺癌細(xì)胞(×400)。

圖2 治療前肺癌細(xì)胞電鏡圖

A：癌細(xì)胞核染色質(zhì)邊集(×8 000)；B:癌細(xì)胞核濃縮(×5 000)；C:癌細(xì)胞器空泡化(×6 000)。

圖3 治療后肺癌細(xì)胞電鏡圖

3 討 論

肺癌是臨床常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率居于城市人口惡性腫瘤發(fā)病率之首[6]，現(xiàn)已成為威脅人們生命健康安全的重要因素，受到社會(huì)及醫(yī)學(xué)界的廣泛關(guān)注。據(jù)不完全資料統(tǒng)計(jì)，NSCLC患病人數(shù)約占肺癌總患病人數(shù)的80%以上[7]，其相較于小細(xì)胞癌具有癌細(xì)胞生長(zhǎng)分裂緩慢、擴(kuò)散轉(zhuǎn)移偏晚的特征，多數(shù)患者確診時(shí)已經(jīng)處于中晚期，治療難度大且5年病死風(fēng)險(xiǎn)高，預(yù)后普遍欠理想。

GP化療作為當(dāng)前臨床治療NSCLC的常見途徑，能有效延長(zhǎng)受試者生存期、抑制其病情發(fā)展。吉西他濱是一種破壞細(xì)胞復(fù)制的二氟核苷類抗代謝物抗癌藥，能作用于DNA細(xì)胞合成期(S期)及DNA合成前期(G1期)，對(duì)抑制DNA合成具有積極影響[8]。順鉑是NSCLC患者一線化療常用的鉑類藥物之一，有細(xì)胞毒性，可抑制癌細(xì)胞DNA復(fù)制并促進(jìn)其細(xì)胞膜上結(jié)構(gòu)破壞，廣譜抗癌效果突出。相關(guān)研究證實(shí)，GP化療能在進(jìn)一步增強(qiáng)順鉑與DNA嵌合穩(wěn)定性的基礎(chǔ)上延緩癌細(xì)胞DNA修復(fù)進(jìn)程[9]，以此鞏固抗癌效果、提高臨床療效、延長(zhǎng)受試者總生存期。本研究也證實(shí)，確診后予以單純GP化療方案的部分對(duì)照組患者治療2個(gè)化療周期后獲得較理想的臨床治療效果，瘤灶面積較治療前縮小50%以上，但其總體療效不及GP聯(lián)合艾易舒注射液靜脈滴注的聯(lián)合組受試者突出，同張西等[10]報(bào)道基本一致，表明在GP化療基礎(chǔ)上予以艾易舒靜脈滴注對(duì)進(jìn)一步提高抗腫瘤效果有利。

艾易舒是一種新型抗腫瘤藥物，由斑蝥酸鈉和維生素B6配伍而成，有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力[11]、滅殺癌細(xì)胞后誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡及保護(hù)骨髓等作用[12]。相關(guān)研究指出，艾易舒主要配伍成分之一的斑蝥酸鈉是一種高效、低毒的抗癌物，能通過阻滯抑制腫瘤細(xì)胞蛋白質(zhì)與核酸合成、阻滯癌細(xì)胞增殖達(dá)到治療目的。盛蕾等[13]學(xué)者也認(rèn)為，斑蝥酸鈉滅殺癌細(xì)胞效果確切，可通過抑制癌細(xì)胞內(nèi)DNA及RNA合成及前體深入，誘使癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)、形態(tài)及功能改變[14]，從而促使癌細(xì)胞凋亡，延長(zhǎng)受試者生存時(shí)間。本研究也證實(shí)，聯(lián)合艾易舒靜脈滴注治療后，聯(lián)合組受試者癌細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)裂隙、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)松散、脫顆粒等改變明顯，證實(shí)GP化療聯(lián)合艾易舒靜脈滴注能滅殺癌細(xì)胞并誘導(dǎo)其凋亡，對(duì)促進(jìn)患者病情轉(zhuǎn)歸有利。

相關(guān)研究表明，F(xiàn)AS為細(xì)胞膜上受體，當(dāng)其于配體FASL結(jié)合時(shí)可激活FAS信號(hào)通道，從而開啟細(xì)胞凋亡過程，誘發(fā)T淋巴細(xì)胞免疫滅殺靶細(xì)胞[15]。近年來(lái)，越來(lái)越多報(bào)道稱FAS在腫瘤細(xì)胞中存在異常表達(dá)[16]，而正常肺部組織內(nèi)FAS陽(yáng)性表達(dá)率可達(dá)到100%。肺癌患者癌變組織內(nèi)FAS陽(yáng)性表達(dá)率低于正常肺組織，猜測(cè)同腫瘤組織通過下調(diào)FAS抗原表達(dá)以逃避機(jī)體免疫監(jiān)視相關(guān)[17]。本研究也證實(shí)，兩組確診NSCLC的受試者治療前FAS陽(yáng)性表達(dá)率均不足40%，同大部分報(bào)道結(jié)論相一致，而接受治療后，其FAS陽(yáng)性表達(dá)率均有不同程度的提升，聯(lián)合組增幅大于對(duì)照組，證實(shí)GP化療聯(lián)合艾易舒靜脈滴注對(duì)提高FAS表達(dá)以促進(jìn)其同F(xiàn)ASL結(jié)合、獲得滅殺腫瘤細(xì)胞效果有利。

除上述結(jié)論外，本研究還就兩種療法的安全性予以評(píng)估，發(fā)現(xiàn)單純GP化療的對(duì)照組受試者治療后毒副反應(yīng)較大，以惡心嘔吐、骨髓抑制較為明顯；而予以聯(lián)合治療方案的聯(lián)合組受試者化療2個(gè)周期后，中重度惡心嘔吐癥狀發(fā)生率僅為7.9%，且無(wú)中重度骨髓抑制病例，證實(shí)GP化療聯(lián)合艾易舒靜脈滴注對(duì)保護(hù)骨髓、降低骨髓抑制風(fēng)險(xiǎn)、緩解化療毒副反應(yīng)等具有積極影響，于患者預(yù)后恢復(fù)有利。本研究雖取得一定成果，但受隨訪時(shí)間、樣本量、受試者病情嚴(yán)重程度、體質(zhì)、藥物敏感性等因素影響，仍有部分結(jié)論同其他報(bào)道存在差異，可擴(kuò)大樣本量、延長(zhǎng)隨訪時(shí)間，盡可能排除相關(guān)干擾因素后將差異較大的內(nèi)容作為重點(diǎn)探究對(duì)象予以進(jìn)一步分析，以此獲得更嚴(yán)謹(jǐn)、完善的報(bào)道結(jié)果。

綜上所述，GP化療聯(lián)合艾易舒注射液靜脈滴注方案對(duì)提高NSCLC患者臨床療效、改善其預(yù)后質(zhì)量、減輕化療引起的毒副反應(yīng)具有積極影響，臨床可將其作為一種安全可行的治療方案，為全面提高NSCLC患者治療有效性提供條件。

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Effect of sodium cantharidiniate and Vitamin B6injection combined chemotherapy on FAS expression and cell ultrastructure of lung cancer tissue*

JiangYun1,LiZhiqiang2,ZhouLifang1,MaoChenmei1,WeiJiwu3

(1.DepartmentofPharmacy,Children′sHospitalAffiliatedtoSuzhouUniversity,Suzhou,Jiangsu215000,China; 2.DepartmentofPharmacy,JiangyinHospitalAffiliatedtoMedicalCollege,SoutheastUniversity,Jiangyin,Jiangsu214400,China;3.DepartmentofPharmacy,GulouHospitalAffiliatedtoMedicalCollegeofNanjingUniversity,Nanjing,Jiangsu210008,China)

Objective To investigate the effect of sodium cantharidiniate and Vitamin B6injection combined chemotherapy on FAS expression and cell ultrastructure in patients with non-small-cell lung carcinoma(NSCLC).Methods Eight-four patients with NSCLC were selected as the study subjects.By the random number table method,they were divided into the combination group and the control group,42 cases in each group.There were 2 cases lost to follow up and 40 effective cases were included in the control group,they were treated with simple GP chemotherapy(gemcitabine+cisplatin).There were 4 cases lost to follow up and 38 effective cases were enrolled in the combination group,they were treated with sodium cantharidiniate and vitamin B6injection combined with GP chemotherapy.The clinical curative effect and incidence of side effects were compared between the two groups after 2 cycles of chemotherapy.The changes of Karnofsky performance scale(KPS) score and positive expression of FAS in cancerous tissues were recorded before and after treatment.The changes of cell ultrastructure in the combination group before and after treatment were analyzed.Results The total response rate in combination group was significantly higher than that in control group(44.7%vs. 22.5%,P<0.05).After treatment,there was no significant difference in the incidence of side effects such as fever,declined neural response and renal function damage between the two groups(P>0.05).The incidence rates of myelosuppression,nausea and vomiting and other moderate to severe side effects in combination group were significantly lower than those in control group(P<0.05).After treatment,the KPS scores and positive expression rates of FAS in the cancerous tissues of both groups were significantly higher than those before treatment,and those in combined group were higher than those in control group(P<0.05).The ultrastructure of cancer cells in combination group showed varying degrees of change.Some showed cancer cell cytoplasm atrophy,chromatin rupture,cell degeneration or apoptosis, while most showed existence of membrane structure fracture,loose endoplasmic reticulum structure or degranulation.Conclusion Sodium cantharidiniate and vitamin B6injection combined with GP chemotherapy has a positive significance to promote the prognosis of NSCLC patients,change the ultrastructure of cancer cells,reduce the toxic and side effects.

sodium cantharidiniate and vitamin B6injection;chemotherapy;carcinoma,non-small-cell lung;FAS protein;ultrastructure

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81172143)。 作者簡(jiǎn)介：蔣云(1973-)，副主任醫(yī)師，本科，主要從事臨床藥學(xué)、藥學(xué)服務(wù)研究。

??·臨床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.35.008

R

A

1671-8348(2016)35-4922-04

2016-08-28

2016-10-06)