京尼平苷及其體內(nèi)代謝產(chǎn)物京尼平對(duì)HepG2細(xì)胞毒性的比較及機(jī)制研究

任艷青，田宇柔，李 琛，何穎娜，麻景梅，牛麗穎，王鑫國(guó)

(河北中醫(yī)學(xué)院中藥藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室，河北省中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心，河北省高校中藥配方顆粒應(yīng)用技術(shù)研發(fā)中心，河北 石家莊 050091)

京尼平苷及其體內(nèi)代謝產(chǎn)物京尼平對(duì)HepG2細(xì)胞毒性的比較及機(jī)制研究

任艷青，田宇柔，李 琛，何穎娜，麻景梅，牛麗穎，王鑫國(guó)

(河北中醫(yī)學(xué)院中藥藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室，河北省中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心，河北省高校中藥配方顆粒應(yīng)用技術(shù)研發(fā)中心，河北 石家莊 050091)

目的 通過(guò)比較京尼平苷(geniposide，GS)及其體內(nèi)代謝產(chǎn)物京尼平(genipin，GP)的HepG2 肝細(xì)胞毒性，進(jìn)一步明確中藥梔子致肝毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)，并探討其毒性作用機(jī)制。方法 采用MTT法檢測(cè)不同濃度GS與GP的細(xì)胞毒作用；試劑盒法測(cè)定細(xì)胞中錳-超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)活力及谷胱甘肽(GSH)含量；二乙酸-2′，7′-二氯熒光素(DCFH-DA)染色法測(cè)定胞內(nèi)活性氧(ROS)的變化；高內(nèi)涵細(xì)胞分析技術(shù)(high content screening，HCS)進(jìn)行多參數(shù)細(xì)胞毒性(細(xì)胞數(shù)量、核尺寸及形態(tài)、核DNA含量、細(xì)胞膜通透性、線粒體膜電位和細(xì)胞色素C)分析。結(jié)果 GS(20～1 000 μmol·L-1)對(duì)HepG2細(xì)胞無(wú)明顯細(xì)胞毒作用(P>0.05)，50 μmol·L-1GP可明顯抑制HepG2細(xì)胞增殖(P<0.05)，IC50值為(450.00 ± 26.15)μmol·L-1；GS對(duì)胞內(nèi)Mn-SOD、CAT、GSH、ROS含量無(wú)明顯影響(P>0.05)，GP孵育細(xì)胞后，引起胞內(nèi)Mn-SOD、CAT活性明顯下降，GSH含量明顯降低，并可明顯增加ROS的生成(P<0.05或P<0.01)；50、500、1 000 μmol·L-1GP可明顯降低線粒體膜電位，促進(jìn)細(xì)胞色素C的釋放，升高細(xì)胞膜通透性(P<0.05或P<0.01)，500、1 000 μmol·L-1GP組還可觀察到明顯的核固縮以及核熒光強(qiáng)度的升高，細(xì)胞數(shù)量的明顯下降(P<0.01)，1 000 μmol·L-1GS對(duì)上述細(xì)胞毒性參數(shù)無(wú)明顯影響(P>0.05)。結(jié)論 GP是梔子致肝細(xì)胞毒性的直接物質(zhì)基礎(chǔ)，氧化應(yīng)激所導(dǎo)致的線粒體損傷與細(xì)胞凋亡是GP引起肝毒性的主要機(jī)制。

梔子；京尼平苷；京尼平；藥物性肝損傷；氧化應(yīng)激；線粒體損傷；細(xì)胞凋亡；高內(nèi)涵分析

梔子為茜草科植物梔子(GardeniajasminoidesEllis)的干燥成熟果實(shí)，為保肝利膽的常用中藥。京尼平苷(geniposide，GS)即梔子苷，是其含量最高的環(huán)烯醚萜苷類物質(zhì)，臨床常用于急慢性肝損傷、酒精性肝病、膽汁淤積性肝損傷、慢性肝炎、肝纖維化、非酒精性脂肪肝、肝功能衰竭、肝癌等肝臟疾病的治療[1-2]，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)京尼平苷還具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗抑郁、神經(jīng)保護(hù)、抗血管生成[3-5]等廣泛的藥理活性。近些年來(lái)，不少學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物長(zhǎng)期大劑量灌服梔子具有明顯的肝毒性[6-10]，其肝毒性問(wèn)題一直是阻礙臨床用藥的主要問(wèn)題。目前，梔子引起肝毒性物質(zhì)基礎(chǔ)及毒效機(jī)制尚不明確，有學(xué)者提出京尼平(genipin，GP)苷是梔子肝毒性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，也有學(xué)者推測(cè)梔子所導(dǎo)致的肝毒性是由其體內(nèi)代謝產(chǎn)物京尼平所引起，但尚缺乏直接的實(shí)驗(yàn)支持。本研究將不同濃度的京尼平苷與京尼平作用于人肝癌HepG2細(xì)胞，通過(guò)比較二者的肝細(xì)胞毒性，進(jìn)一步明確梔子肝毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)，并在此基礎(chǔ)上，基于建立的高內(nèi)涵多參數(shù)細(xì)胞毒性分析方法，從氧化應(yīng)激損傷角度探討其毒性作用機(jī)制，為梔子的安全性評(píng)價(jià)提供更多實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)也為尋找減輕梔子肝毒性的藥物奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 京尼平苷(批號(hào)140815，純度98%)、京尼平(批號(hào)141207，純度98%)購(gòu)自南京狄爾格醫(yī)藥科技有限公司，均以DMSO配制成0.1 mol·L-1儲(chǔ)備液，無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基梯度稀釋至工作濃度。高糖DMEM、胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；MTT、DMSO購(gòu)自美國(guó)Amresco公司；超氧化物歧化酶(SOD)分析測(cè)試盒、過(guò)氧化氫酶(CAT)測(cè)定試劑盒、微量還原型谷胱甘肽(GSH)測(cè)試盒、活性氧(ROS)測(cè)試盒，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；多參數(shù)細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司。1.2 儀器 MCO-15AC CO2培養(yǎng)箱(日本SANYO)；超凈工作臺(tái)(力康生物醫(yī)療科技控股有限公司)；TGL-16臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；DMI 3000 B倒置熒光顯微鏡(德國(guó)Leica)；150-96超聲波破碎儀(賽飛中國(guó)有限公司)；Multiskan FC酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo Fisher Scientific)；VTI700高內(nèi)涵細(xì)胞分析系統(tǒng)(美國(guó)Thermo Fisher Scientific)。

1.3 細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng) 人肝癌HepG2細(xì)胞，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤細(xì)胞庫(kù)。采用高糖DMEM培養(yǎng)基(含體積分?jǐn)?shù)為0.1 胎牛血清、1×105U·L-1青霉素、100 mg·L-1鏈霉素)，5% CO2、37 ℃飽和濕度培養(yǎng)箱培養(yǎng)，細(xì)胞為貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞生長(zhǎng)至80%匯合時(shí)即可用胰酶消化傳代，實(shí)驗(yàn)選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。

1.4 MTT法檢測(cè)細(xì)胞毒性 HepG2細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，每孔約5 000個(gè)細(xì)胞，待細(xì)胞貼壁后，同步化處理24 h，加入不同濃度的GS、GP(濃度梯度均為20、50、100、250、500、1 000 μmol·L-1)，每個(gè)濃度設(shè)6個(gè)復(fù)孔，作用24 h后，每孔加入MTT 繼續(xù)培養(yǎng)4 h，小心吸棄上清，每孔加入DMSO 150 μL，振蕩使結(jié)晶充分溶解，酶標(biāo)儀570 nm處測(cè)定吸光度OD值，計(jì)算細(xì)胞存活率(存活率/%=OD實(shí)驗(yàn)組/OD對(duì)照組×100%)，并根據(jù)藥物濃度對(duì)應(yīng)細(xì)胞增殖抑制率作線性回歸，計(jì)算IC50值，即藥物抑制50%細(xì)胞增殖時(shí)的濃度，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5 試劑盒法測(cè)定細(xì)胞中Mn-SOD、CAT、GSH水平 HepG2細(xì)胞以每瓶5×105個(gè)接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，GS、GP濃度梯度均為50、100、250、500、1 000 μmol·L-1，培養(yǎng)24 h后，用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下，離心收集細(xì)胞，超聲破碎后按照Mn-SOD、CAT、GSH檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作，計(jì)算細(xì)胞Mn-SOD、CAT活力及GSH含量。

1.6 熒光探針DCFH-DA 法檢測(cè)ROS水平 參照文獻(xiàn)[11]方法，以1×108·L-1密度接種細(xì)胞于96孔板，每孔100 μL，24 h后分別加入1 000 μmol·L-1GS，50、500、1 000 μmol·L-1GP，培養(yǎng)24 h，藥物作用時(shí)間結(jié)束后，吸棄培養(yǎng)基，加入30 μmol·L-1DCFH-DA探針50 μL每孔，繼續(xù)孵育30 min，PBS洗滌3次后，選擇激發(fā)波長(zhǎng)485 nm，發(fā)射波長(zhǎng)525 nm，于高內(nèi)涵細(xì)胞分析系統(tǒng)觀察細(xì)胞內(nèi)ROS 染色，檢測(cè)細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度值。

1.7 HCS技術(shù)進(jìn)行多參數(shù)細(xì)胞毒性分析 細(xì)胞接種(密度5×107·L-1、3復(fù)孔/組)、同步化、藥物干預(yù)(1 000 μmol·L-1GS，50、500、1 000 μmol·L-1GP)24 h，吸棄培養(yǎng)液，加入活細(xì)胞染液(含非膜通透性細(xì)胞核染料和線粒體膜電位染料)每孔50 μL，置于培養(yǎng)箱內(nèi)孵育30 min；室溫進(jìn)行固定、透化、封閉處理，依次加入細(xì)胞色素C小鼠單克隆一抗(1 ∶400)、DyLightTM649 羊抗鼠IgG(1 ∶500)二抗及Hoechst 33342，清洗后開(kāi)啟HCS系統(tǒng)，設(shè)定10倍物鏡，每孔掃描16個(gè)視野，每種染料的掃描波長(zhǎng)設(shè)定如下：Hoechst 33342：激發(fā)/發(fā)射光波長(zhǎng)350/461 nm、非膜通透性細(xì)胞核染料：激發(fā)/發(fā)射光波長(zhǎng)491/509 nm、線粒體膜電位染料：激發(fā)/發(fā)射光波長(zhǎng)552/576 nm、細(xì)胞色素C：激發(fā)/發(fā)射光波長(zhǎng)646/674 nm，并設(shè)定每一通道的聚焦位置及曝光強(qiáng)度參數(shù)，對(duì)每個(gè)孔逐一進(jìn)行掃描，進(jìn)行多參數(shù)細(xì)胞毒性分析：細(xì)胞數(shù)量、核尺寸及形態(tài)、核DNA含量、膜通透性、線粒體膜電位(MMP)、細(xì)胞色素C含量(其中，核DNA含量、膜通透性、MMP、細(xì)胞色素C均以細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度值表示)。

2 結(jié)果

2.1 京尼平苷及其體內(nèi)代謝產(chǎn)物京尼平對(duì)HepG2細(xì)胞的細(xì)胞毒作用 京尼平苷(20～1 000 μmol·L-1)濃度范圍內(nèi)對(duì)HepG2細(xì)胞無(wú)明顯細(xì)胞毒作用(P>0.05)；50、100、250、500、1 000 μmol·L-1京尼平可使細(xì)胞存活率明顯下降(P<0.05或P<0.01)，細(xì)胞存活率依次為(90.19 ± 5.04)%、(77.84 ± 7.76)%、(66.84 ± 6.55)%、(51.60 ± 6.62)%、(30.66 ± 4.48)%，見(jiàn)Fig 1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，京尼平對(duì)HepG2細(xì)胞有明顯的細(xì)胞毒作用，且隨濃度的增加，細(xì)胞毒作用增強(qiáng)，毒性作用呈濃度依賴性，IC50值為(450.00 ± 26.15)μmol·L-1。

Fig 1 Cytotoxic effects of GS and its metabolite GP on

*P<0.05,**P<0.01vscontrol

2.2 京尼平苷及其體內(nèi)代謝產(chǎn)物京尼平對(duì)胞內(nèi)Mn-SOD、CAT、GSH水平的影響 不同濃度的京尼平苷(50、100、250、500、1 000 μmol·L-1)處理HepG2細(xì)胞后，對(duì)胞內(nèi)Mn-SOD、CAT活力及GSH含量均無(wú)明顯影響(P>0.05)；50、100、250、500、1 000 μmol·L-1京尼平可明顯降低胞內(nèi)Mn-SOD、CAT活性及GSH含量(P<0.05或P<0.01)，且此作用隨京尼平濃度的增加越明顯，見(jiàn)Fig 2。

Fig 2 Effects of GS and its metabolite GP on levels of Mn-SOD,

*P<0.05,**P<0.01 vscontrol

2.3 京尼平苷及其體內(nèi)代謝產(chǎn)物京尼平對(duì)胞內(nèi)ROS水平的影響 對(duì)照組HepG2細(xì)胞熒光強(qiáng)度很弱，表明細(xì)胞內(nèi)活性氧的量很少；1 000 μmol·L-1京尼平苷對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性氧水平無(wú)明顯影響(P>0.05)；50、500、1 000 μmol·L-1京尼平孵育HepG2細(xì)胞后，細(xì)胞熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)(P<0.01)，說(shuō)明京尼平可以誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)總活性氧水平明顯升高，并呈現(xiàn)明顯的濃度依賴性，見(jiàn)Fig 3。

Fig 3 Effects of GS and its metabolite GP on ROS levels

**P<0.01vscontrol

2.4 京尼平苷及其體內(nèi)代謝產(chǎn)物京尼平對(duì)HepG2細(xì)胞多參數(shù)細(xì)胞毒性的影響 正常對(duì)照組細(xì)胞線粒體膜電位正常，細(xì)胞色素C釋放較少，細(xì)胞膜通透性低，核形態(tài)完好，熒光強(qiáng)度低；1 000 μmol·L-1京尼平苷孵育細(xì)胞，對(duì)以上指標(biāo)均無(wú)明顯影響(P>0.05)，未觀察到明顯的凋亡特征，提示京尼平苷的細(xì)胞毒性不明顯，與MTT結(jié)果具有較好的一致性。50 μmol·L-1京尼平可明顯降低線粒體膜電位(P<0.01)，促進(jìn)細(xì)胞色素C的釋放(P<0.01)，升高細(xì)胞膜通透性(P<0.05)，提示京尼平可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生早期凋亡；500、1 000 μmol·L-1京尼平除對(duì)線粒體及通透性有影響外，還可觀察到細(xì)胞核的固縮及核內(nèi)染色質(zhì)的凝集(P<0.01)，核熒光強(qiáng)度明顯升高(P<0.01)以及細(xì)胞數(shù)量的明顯下降(P<0.01)，提示京尼平誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生晚期凋亡，通過(guò)高內(nèi)涵分析可發(fā)現(xiàn)，京尼平對(duì)HepG2細(xì)胞具有明顯的細(xì)胞毒作用，毒性作用機(jī)制與其導(dǎo)致的線粒體損傷與細(xì)胞凋亡有關(guān)，見(jiàn)Fig 4。

Fig 4 Effects of GS and its metabolite GP on multiparameter cytotoxicity in HepG2 cells by HCS assays (×100) ±s,n=3)

*P<0.05,**P<0.01vscontrol

3 討論

近些年來(lái)，中藥及其成分引起的藥物性肝損傷(drug-induced liver injury，DILI)發(fā)病率逐年升高[12]，越來(lái)越引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視。因此，通過(guò)現(xiàn)代毒理學(xué)研究手段，闡明中藥肝毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)及毒性作用機(jī)制對(duì)于防治中藥源性肝損傷具有重要的意義。高內(nèi)涵分析技術(shù)(high content screening，HCS)現(xiàn)已成為國(guó)際通用的DILI研究手段[13]，Persson等[14]采用HCS技術(shù)對(duì)100種已知肝毒性藥物(對(duì)氨基水楊酸、碘胺酮等)的HepG2細(xì)胞毒性進(jìn)行了重新評(píng)估。Tolosa等[15]也以HepG2細(xì)胞為觀察對(duì)象，采用HCS技術(shù)對(duì)78種肝毒性成分(炔雌醇、碘胺酮等)作用于HepG2細(xì)胞3、24 h毒性進(jìn)行了分析，均顯示HCS技術(shù)在DILI及毒性作用機(jī)制研究中具有高度的敏感性與特異性[16]。

梔子導(dǎo)致的DILI已被共識(shí)，不少學(xué)者從整體動(dòng)物水平探討了梔子水提物、醇提物及京尼平苷所導(dǎo)致的肝損傷。本研究以HepG2細(xì)胞為對(duì)象，對(duì)比分析京尼平苷及其代謝產(chǎn)物京尼平的肝細(xì)胞毒性差異，發(fā)現(xiàn)不同濃度的京尼平苷孵育HepG2細(xì)胞，均未產(chǎn)生明顯的細(xì)胞毒作用，提示京尼平苷不是梔子產(chǎn)生肝毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)。京尼平對(duì)HepG2細(xì)胞具有明顯的肝細(xì)胞毒性，毒性作用呈濃度依賴性，IC50值為(450.00 ± 26.15)μmol·L-1，明確了京尼平是引起肝毒性的直接物質(zhì)基礎(chǔ)，可以推論梔子的肝毒性是梔子藥材中的京尼平苷經(jīng)腸道細(xì)菌β-葡萄糖苷酶水解后的代謝產(chǎn)物京尼平所引起，與文獻(xiàn)推測(cè)一致[4]。

氧化應(yīng)激損傷是中藥源性DILI的主要機(jī)制[17]，氧化應(yīng)激是指ROS的產(chǎn)生與機(jī)體內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)的清除之間失衡[18]。Mn-SOD、CAT、GSH是體內(nèi)重要的抗氧化系統(tǒng)[12,17]，為了明確京尼平導(dǎo)致的DILI與氧化應(yīng)激的關(guān)系，我們測(cè)定了胞內(nèi)Mn-SOD、CAT活力及GSH、ROS含量，發(fā)現(xiàn)京尼平可明顯降低Mn-SOD、CAT活性及GSH含量，說(shuō)明細(xì)胞抗氧化能力下降，同時(shí)伴隨著ROS的大量增多，說(shuō)明京尼平誘導(dǎo)的肝細(xì)胞毒性與氧化應(yīng)激密切相關(guān)。線粒體是氧化應(yīng)激損傷的重要靶細(xì)胞器[19]，線粒體膜電位的變化可以反映出線粒體受損的程度，并被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡的早期事件，同時(shí)由于線粒體的損傷導(dǎo)致細(xì)胞色素C的大量釋放[20]，進(jìn)而觸發(fā)細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)，引起細(xì)胞的凋亡。我們采用國(guó)際先進(jìn)的HCS體外毒性評(píng)價(jià)技術(shù)，從線粒體功能及細(xì)胞凋亡的角度對(duì)京尼平所導(dǎo)致的肝細(xì)胞毒性進(jìn)行了分析，通過(guò)HCS多參數(shù)細(xì)胞毒性測(cè)定對(duì)線粒體膜電位、細(xì)胞色素 C 含量、膜通透性、核尺寸及形態(tài)、核DNA含量、細(xì)胞數(shù)量等指標(biāo)進(jìn)行同時(shí)分析。在研究中，我們發(fā)現(xiàn)，50 μmol·L-1京尼平組細(xì)胞線粒體膜電位下降，大量細(xì)胞色素C釋放到胞質(zhì)中，細(xì)胞膜通透性明顯增加，提示線粒體膜電位水平、細(xì)胞色素C含量及細(xì)胞膜通透性是京尼平誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的早期敏感性指標(biāo)；隨著京尼平孵育濃度的加大，還伴隨著核形態(tài)的破壞，表明京尼平可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生晚期凋亡，而京尼平苷未觀察到明顯的肝細(xì)胞毒性。

通過(guò)以上研究可以發(fā)現(xiàn)，京尼平具有明顯的肝細(xì)胞毒性作用，是梔子致肝毒性的直接物質(zhì)基礎(chǔ)，氧化應(yīng)激所導(dǎo)致的線粒體損傷與細(xì)胞凋亡是京尼平引起肝毒性的主要作用機(jī)制之一。以上研究結(jié)果為梔子的安全性評(píng)價(jià)提供了資料，為梔子的臨床合理應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，有關(guān)京尼平對(duì)線粒體凋亡通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，課題組正在進(jìn)一步深入研究。

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Cytotoxic effect of geniposide and its metabolite genipin on HepG2 cells and mechanism

REN Yan-qing,TIAN Yu-rou,LI Chen,HE Ying-na,MA Jing-mei,NIU Li-ying,WANG Xin-guo

(PharmacologicalLabofTraditionalChineseMedicine,HebeiUniversityofChineseMedicine,HebeiTCMFormulaGranuleEngineering&TechnologyResearchCenter,TCMFormulaGranuleResearchCenterofHebeiProvinceUniversity,Shijiazhuang050091,China)

Aim To compare the cytotoxicity of geniposide (GS) and its metabolite genipin (GP) on human hepatocelluar HepG2 cells and explore the substance and mechanism of hepatotoxicity induced byFructusGardeniae. Methods The cytotoxic effect of GS and GP was analyzed by MTT method; the antioxidant enzyme activities of manganese superoxide dismutase (Mn-SOD), catalase (CAT) and levels of glutathione (GSH) were detected by respective kits; the change of intracellular reactive oxygen species (ROS) was measured by 2′,7′-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA) staining method; multiparameter cytotoxicity analysis (cell loss, nuclear size and morphological changes, DNA content, cell membrane permeability, mitochondrial membrane potential changes, cytochrome C release) were measured simultaneously by high content screening (HCS) assays. Results No cytotoxicity was found in GS (20～1 000 μmol·L-1) groups (P>0.05) , but GP was found to exert obvious cytotoxic effect, and 50 μmol·L-1GP could obviously inhibit HepG2 cell proliferation (P<0.05), and the IC50value was (450.00 ± 26.15) μmol·L-1; GS showed no obvious effects on Mn-SOD, CAT, GSH, ROS (P>0.05) , GP could significantly decrease the activity of Mn-SOD, CAT and the level of GSH, and obviously increase the content of ROS (P<0.05 orP<0.01); treatment with 50, 500, 1 000 μmol·L-1GP resulted in loss of mitochondrial membrane potential, cytochrome C release and increased cell permeability (P<0.05 orP<0.01), 500, 1 000 μmol·L-1GP could also show abvious nuclear condensation, increased total nuclear intensity and cell loss (P<0.01). Opposed with GP, GS had no significant effect on the cytotoxic parameters (P>0.05). Conclusion GP is the direct substance of hepatotoxicity induced byFructusGardeniae, and the mechanism might be associated with oxidative stress, mitochondria injury and apoptosis.

FructusGardeniae; geniposide; genipin; drug-induced liver injury; oxidative stress; mitochondria injury; cell apoptosis; high-content screening assays

時(shí)間：2016-12-5 15:14

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20161205.1514.046.html

2016-06-27，

2016-08-31

河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No H2014206302)；河北省中醫(yī)藥管理局科研計(jì)劃項(xiàng)目(No 2014007)；河北中醫(yī)學(xué)院青年教師科研基金項(xiàng)目(No QNZ2014007)

任艷青(1984-)，女，碩士，研究方向：中藥藥理學(xué)，Tel：0311-89926307，E-mail：renyanqing2006@163.com； 王鑫國(guó)(1966-)，男，教授，研究方向：中藥藥理學(xué)，通訊作者，Tel：0311-89926208，E-mail：wangxinguozy@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.12.023

A

1001-1978(2016)12-1755-07

R284.1；R322.47；R329.24；R329.25；R991