氟苯尼考在花鱸體內(nèi)的代謝及殘留消除規(guī)律

黃聚杰，林茂,2*，鄢慶枇，李忠琴,2，李江森

(1.集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院;2.鰻鱺現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)教育部工程研究中心：福建 廈門 361021)

氟苯尼考在花鱸體內(nèi)的代謝及殘留消除規(guī)律

黃聚杰1，林茂1,2*，鄢慶枇1，李忠琴1,2，李江森1

(1.集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院;2.鰻鱺現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)教育部工程研究中心：福建 廈門 361021)

為了解氟苯尼考在花鱸(Lateolabraxjaponicus)體內(nèi)的代謝動(dòng)力學(xué)特征和殘留消除規(guī)律，利用高效液相色譜法檢測(cè)氟苯尼考混飼口灌給藥后在花鱸血漿、肌肉、肝和腎等樣品中的時(shí)間-濃度變化。在代謝動(dòng)力學(xué)研究中，將20 mg/kg 氟苯尼考單次混飼口灌給藥于花鱸后，獲得48 h內(nèi)的藥時(shí)數(shù)據(jù)，利用DAS和WinNonlin軟件進(jìn)行比較分析。結(jié)果表明，不同藥代動(dòng)力學(xué)分析軟件或者不同權(quán)重系數(shù)所獲得的房室參數(shù)值有較大差異，特別是消除相半衰期(T1/2β)；而非房室參數(shù)值則比較接近。其中DAS軟件非房室模型分析氟苯尼考在花鱸血漿中的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)顯示，藥時(shí)曲線下面積(AUC0—∞)為257.591 mg/(L·h)，表觀分布容積(Vz/F)為1.401 L/kg，平均滯留時(shí)間(MRT0—∞)和消除半衰期(T1/2z)分別為18.505和12.508 h，達(dá)峰濃度(Cmax)和達(dá)峰時(shí)間(Tmax)分別為18.356 μg/mL和3 h。在殘留消除研究中，氟苯尼考以60 mg/kg的高劑量單次給藥后，采集30 d內(nèi)的藥時(shí)數(shù)據(jù)，利用WT程序計(jì)算的結(jié)果顯示，氟苯尼考在花鱸肌肉、肝、腎和血漿中的理論休藥期分別為6.54、8.69 、8.30和5.89 d。研究結(jié)果為氟苯尼考在花鱸養(yǎng)殖中的用藥方案和休藥期的制定提供理論依據(jù)。[中國(guó)漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)，2016,6(3):6-13]

氟苯尼考；花鱸；藥代動(dòng)力學(xué)；殘留；休藥期

氟苯尼考(florfenicol，F(xiàn)FL)是甲砜霉素的氟化物，又稱為氟甲砜霉素，于20世紀(jì)80年代被研制出來(lái)。作為一種新型的動(dòng)物用藥，由于其具有抗菌譜廣、吸收良好、體內(nèi)分布廣泛、安全高效且無(wú)潛在的致再生障礙性貧血等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛地應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖[1]。中國(guó)農(nóng)業(yè)部1435號(hào)公告第一批《獸藥試行標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)目錄》公布了水產(chǎn)用的氟苯尼考粉制劑(10%)[2]，此外《獸藥典-獸藥使用指南化學(xué)藥品卷(2010版)》指出，可以用于水產(chǎn)動(dòng)物的氟苯尼考制劑還有氟苯尼考預(yù)混劑(50%)和氟苯尼考注射液[3]。作為氯霉素的替代品，研究顯示氟苯尼考對(duì)殺鮭氣單胞菌(Aeromonassalmonicidas)、鰻弧菌(Vibrioanguillarum)、遲緩愛(ài)德華菌(Edwardsiellatarda)等水產(chǎn)動(dòng)物病原菌具有較強(qiáng)的抑制及殺滅作用[4]。

花鱸(Lateolabraxjaponicus)，又稱鱸、海鱸、七星鱸，隸屬鱸形目、鮨科、花鱸屬，是水產(chǎn)養(yǎng)殖的主要種類，其肉質(zhì)細(xì)嫩，營(yíng)養(yǎng)豐富，為廣溫、廣鹽性的肉食性經(jīng)濟(jì)魚類[5]。氟苯尼考在相關(guān)水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究較多，實(shí)驗(yàn)品種涉及鯽(Carassiusauratus)[6]、西伯利亞鱘(Acipenserbaerii)[7]、羅非魚(OreochromisniloticusxO.aureus)[8]、日本鰻鱺(Anguillajaponica)、歐洲鰻鱺(A.anguilla)[9]、中華鱉(Trionyxsinensis)[10]、中國(guó)明對(duì)蝦(Penaeusorientalis)[11]、大黃魚(Larimichthyscrocea)[12]、九孔鮑(Haliotisdiversicolor)[13]、斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)[14]等，但在花鱸體內(nèi)的代謝研究未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究模擬實(shí)際養(yǎng)殖條件，采用混飼口灌給藥方式，研究氟苯尼考在花鱸體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)和殘留消除規(guī)律，并提出給藥方案和休藥期建議，以期為該藥物的安全使用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)前花鱸暫養(yǎng)于200 L養(yǎng)殖缸中，使用循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)，水溫(22±1)℃，鹽度17.8。期間花鱸經(jīng)抽樣檢測(cè)體內(nèi)無(wú)氟苯尼考?xì)埩簦瑫吼B(yǎng)7 d后開始實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)用魚平均體重為(505.3±70.5)g。

1.2 主要試劑

氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品(99.7%，Dr. Ehrenstorfer)；氟苯尼考原料藥(99.0%，張家港市恒盛藥用化學(xué)有限公司，批號(hào)FB20130452)；正己烷，乙腈(色譜純，Tedia)。

1.3 給藥及樣品采集

代謝動(dòng)力學(xué)研究采用20 mg/kg的常規(guī)治療劑量以導(dǎo)管單次混飼口灌給藥，于給藥后0.25、0.5、1、2、3、4、6、9、15、24、36、48 h，分別采集血液、肝、腎和肌肉等樣品。殘留消除研究則采用60 mg/kg的高劑量單次混飼口灌給藥[15-18]，采樣時(shí)間點(diǎn)為給藥后1、2、3、4、6、9、15、24、30 d。給藥前花鱸以150 mg/L的MS-222麻醉劑浸浴3 min以減少捕撈的應(yīng)激反應(yīng)。

血液的采集是用2 mL注射器進(jìn)行尾柄抽血，并置于5 mL離心管中，注射器和離心管使用前用 0.1% 肝素鈉潤(rùn)洗后風(fēng)干。血樣于4 000 r/min條件下離心10 min，取上清液，同其他組織樣品置于-20 ℃ 保存待測(cè)。

1.4 樣品處理

組織(肌肉、肝、腎)和血漿自然解凍后，組織剪碎并用研磨儀勻漿。肌肉、肝樣品各取1 g，腎取0.2 g，血漿1 mL，樣品分別放入10 mL離心管中。加入2 mL乙酸乙酯，漩渦振蕩5 min后，于10 000 r/min離心10 min，取其上清液于廣口瓶中。重復(fù)上述提取步驟2次，合并上清液。將廣口瓶放入通風(fēng)柜內(nèi)的水浴鍋中，70 ℃水浴加熱風(fēng)干后，加入2 mL流動(dòng)相溶液，放入搖床振蕩直至殘留物完全溶解。加入飽和正己烷2 mL，振蕩5 min。所有液體移至10 mL離心管中，于10 000 r/min離心10 min，下層液體經(jīng)0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾后，存于進(jìn)樣瓶中待測(cè)。

1.5 色譜條件

樣品處理后利用高效液相色譜儀Agilent1100進(jìn)行檢測(cè)分析；色譜柱是Agilent HC-C18(4.6 mm × 250 mm，5 μm)；進(jìn)樣量10 μL；流動(dòng)相為乙腈-水(30 ∶70，V/V)；流速1 mL/min;流速柱溫40 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)223 nm。

1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢測(cè)限

將配置的100 μg/mL氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用定容液配成0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、20 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行測(cè)定。以質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)、峰面積為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出回歸方程和相關(guān)系數(shù)。按信噪比S/N=3計(jì)算最低檢測(cè)限。

1.7 回收率和精密度

在空白血漿、肌肉、肝、腎樣品中，分別添加標(biāo)準(zhǔn)液，配置成氟苯尼考質(zhì)量濃度分別為0.1、1、10 μg/mL的樣品，按1.4進(jìn)行樣品前處理，各個(gè)濃度樣品分別于一日和一周內(nèi)重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算回收率和日內(nèi)、日間精密度[9]。

1.8 代謝和殘留消除數(shù)據(jù)分析

代謝動(dòng)力學(xué)的藥時(shí)數(shù)據(jù)采用DAS3.0軟件進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)分析，并與WinNonlin5.2軟件分析結(jié)果進(jìn)行比較。殘留消除的藥時(shí)數(shù)據(jù)以SPSS11.0軟件進(jìn)行曲線擬合，并以WT1.4軟件計(jì)算休藥期。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜特征

在本研究的色譜條件下，氟苯尼考的保留時(shí)間在7.6 min左右，峰型尖銳對(duì)稱，分離效果好(圖1)。以3倍信噪比(S/N)計(jì)算氟苯尼考的最低檢測(cè)限為0.05 μg/mL。

圖1 空白血漿樣品(a)及其添加氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品后(b)的色譜圖Fig.1 Chromatogram of control plasma sample (a) and the sample added with florfenicol standard(b)

2.2 分析方法驗(yàn)證

以氟苯尼考的色譜峰面積值(S)為橫坐標(biāo)，氟苯尼考質(zhì)量濃度(C)為縱坐標(biāo)，隨檢測(cè)批次繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算當(dāng)批樣品中藥物的質(zhì)量濃度，各批次標(biāo)準(zhǔn)曲線高度近似，且相關(guān)系數(shù)(R2)均大于0.998。添加0.1、1和10 μg/mL氟苯尼考的加標(biāo)空白樣品，經(jīng)檢測(cè)，平均回收率為(94.6±5.2)%，日內(nèi)變異系數(shù)為(3.7±0.5)%，日間變異系數(shù)為(5.4±1.2)%。

2.3 氟苯尼考在花鱸血漿中的藥動(dòng)學(xué)特征

花鱸以20 mg/kg的劑量采取混飼口灌方式給藥，給藥后的時(shí)間-濃度數(shù)據(jù)(圖2)顯示，在0～3 h內(nèi)，氟苯尼考在血漿中的濃度逐漸升高，在3 h時(shí)達(dá)到峰濃度(Cmax)18.356 μg/mL。之后進(jìn)入消除相，以較快的速度下降到15 h時(shí)的6.731 μg/mL，在48 h時(shí)氟苯尼考?xì)埩魹?.727 μg/mL。

藥時(shí)數(shù)據(jù)以DAS軟件(可選5種權(quán)重系數(shù)1、1/C、1/C/C、1/C′/C′或 1/C′)和WinNonlin軟件的房室模型進(jìn)行分析，可獲得擬合良好(R>0.93)的藥動(dòng)學(xué)曲線(圖2)。這6條擬合線較為相近，但并不完全吻合，模型參數(shù)(表1)顯示這6種計(jì)算方式所獲得的參數(shù)值有較大的差異，特別是重要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)消除相半衰期(T1/2β，h)以DAS軟件不同權(quán)重系數(shù)計(jì)算，其值從8.564到6 931.472，以WinNonlin計(jì)算

則為18.636。而以非房室模型進(jìn)行分析(表2)，DAS和WinNonlin軟件所獲得的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較接近，甚至AUC(0—t)、MRT(0—t)、Tmax和Cmax等參數(shù)值相等。

圖2 單次口灌氟苯尼考后花鱸血漿中的藥時(shí)數(shù)據(jù)點(diǎn)及其擬合曲線6條擬合線分別采用藥動(dòng)學(xué)軟件DAS(可選5種權(quán)重系數(shù)1、1/C、1/C/C、1/C′/C′或1 1/C′)和Win-Nonlin的二室模型進(jìn)行運(yùn)算和繪制。Fig.2 The concentration-time data and fitted curve offlorfenicol in plasma of Lateolabrax japonicus after single oral administrationThe six lines were fitted by DAS software operated with five kinds of weigh factors and WinNonlin software, respectively.

參數(shù)單位DAS軟件 DASsoftwareParametersUnit11/C1/C/C1/C′/C′1/C′WinNonlin軟件WinNonlinsoftware評(píng)價(jià)指標(biāo)AIC—54．91922．979-8．442-4．71324．78453．726SBC—57．82825．888-5．532-1．80427．69456．636R—0．9390．9360．9340．9370．9390．945模型參數(shù)T1/2Kah0．3160．1900．1610．2220．2750．891T1/2αh6．3298．0331090．8077．6574．2861．262T1/2βh6931．4726931．4728．564237．10921．64518．636V/FL·kg-11．0891．2481．3171．1391．0621．001CL/FL·(h·kg)-10．0010．0010．0080．0260．0670．070AUC(0—t)mg·(L·h)-1238．167236．012233．948247．175245．054283．785AUC(0—∞)mg·(L·h)-1275．278267．150264．425277．804273．649—Tmaxh1．6201．2601．1521．3801．4641．960Cmaxmg·L-115．18814．42313．91115．51015．63515．953

注：“—”表示無(wú)。1、1/C、1/C/C、1/C′/C′、1/C′為擬合的權(quán)重系數(shù)，AIC為赤田判據(jù)，SBC為許貝氏判據(jù),R為相關(guān)系數(shù)。T1/2Ka為吸收相半衰期；T1/2α為分布相半衰期；T1/2β為消除相半衰期；V/F為表觀分布容積；CL/F為清除率；AUC為曲線下面積；Tmax為達(dá)峰時(shí)間；Cmax為達(dá)峰濃度。下同。

表2 采用非房室模型計(jì)算氟苯尼考在花鱸血漿中的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

注：MRT為平均滯留時(shí)間；T1/2z為消除半衰期；Vz/F為表觀分布容積，下標(biāo)“z”表示統(tǒng)計(jì)矩原理計(jì)算。下同。

2.4 氟苯尼考在花鱸組織中的代謝特征

氟苯尼考在花鱸肌肉、肝和腎中的藥時(shí)曲線(圖3)顯示，氟苯尼考在這3種組織中廣泛分布，達(dá)峰濃度(Cmax)分別可至11.150、17.702和14.944 μg/g。在肝和腎中3 h即達(dá)峰值，而在肌肉中的達(dá)峰時(shí)間(Tmax)較慢(9 h)。

3種組織中的藥時(shí)數(shù)據(jù)以DAS軟件非房室模型進(jìn)行分析(表3)，結(jié)果顯示，氟苯尼考在肌肉中的平均滯留時(shí)間(MRT0—t)最長(zhǎng)，為16.263 h；清除率(CLz/F)最小，為0.073 L/(h·kg)；藥時(shí)曲線下面積(AUC0—t)最大，為251.259 mg/(L·h)，表明48 h內(nèi)氟苯尼考在肌肉中有較多分布，滯留較長(zhǎng)。而氟苯尼考在肌肉中的半衰期(T1/2z= 12.653 h)卻相對(duì)較短，這表明氟苯尼考在藥時(shí)曲線的尾端消除加快。

圖3 單次口灌氟苯尼考后花鱸肌肉和肝、腎中的藥時(shí)曲線(n=5)Fig.3 The time-concentration curve of florfenicol in muscle, liver and kidney ofLateolabrax japonicus after single oral dose

參數(shù)Parameters單位Unit肌肉Muscle肝Liver腎KidneyAUC(0—t)mg·(L·h)-1251．259140．977208．306AUC(0—∞)mg·(L·h)-1275．669161．354238．894MRT(0—t)h16．26312．47015．959MRT(0—∞)h20．69020．21423．320T1/2zh12．65317．87017．637Vz/FL·kg-11．3253．1962．131CLz/FL·(h·kg)-10．0730．1240．084Tmaxh9．0003．0003．000Cmaxmg·L-111．15017．70214．944

2.5 氟苯尼考的殘留消除與休藥期

將60 mg/kg氟苯尼考單次口灌花鱸后，檢測(cè)其殘留消除情況。第1天時(shí)肌肉、肝、腎和血漿中的藥物含量分別為19.194、19.499、25.564和17.601 μg/mL，從第2天開始血漿和組織中藥物含量迅速下降，第9天時(shí)分別為0.098、0.345、0.234和0.088 μg/mL，第15天時(shí)只有腎組織中仍可檢測(cè)到0.051 μg/mL的藥物殘留，其后各樣品中均未檢出殘留。藥時(shí)數(shù)據(jù)以SPSS軟件擬合獲得殘留消除方程(表4)，結(jié)果顯示氟苯尼考在肌肉、肝、腎和血漿中的消除速率常數(shù)(1/d)分別為0.583、0.439、0.524和0.642。根據(jù)氟苯尼考在魚體中的最高殘留限量值(MRL=1 μg/g)[34]，以WT軟件的回歸法計(jì)算理論休藥期(圖4)，結(jié)果表明，22 ℃水溫條件下，氟苯尼考以60 mg/kg的劑量單次口灌后，在花鱸肌肉、肝、腎和血漿中的理論休藥期(WDT)分別為6.54、8.69、8.30和5.89 d。

表4 氟苯尼考在花鱸各組織的消除曲線方程和參數(shù)

圖4 氟苯尼考在花鱸各組織中的理論休藥期a:擬合回歸線；b:95%置信區(qū)間的上限。Fig.4 Plot of the withdrawal time calculated for florfenicol in Lateolabrax japonicusa:Linear regression line; b:Tolerance limit with 95% confidence.

3 討論

3.1 房室模型與非房室模型

國(guó)內(nèi)外藥動(dòng)學(xué)研究中，房室模型(compartmental analysis，CA)和非房室模型 (noncompartmental analysis，NCA)常用于藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的計(jì)算[6,8,13,18-19,21,23,26-30]。CA的優(yōu)點(diǎn)在于通過(guò)對(duì)藥時(shí)數(shù)據(jù)的回歸分析獲得擬合曲線的方程，以此可以進(jìn)行藥殘濃度的模擬和預(yù)測(cè)，但其缺點(diǎn)是非典型數(shù)據(jù)有可能出現(xiàn)異常參數(shù)，甚至無(wú)法成功擬合。如本研究中，氟苯尼考在肝、腎組織中的藥時(shí)曲線(圖3)存在二次吸收或者“雙峰”的現(xiàn)象，這種離群數(shù)據(jù)點(diǎn)與房室模型擬合曲線的趨勢(shì)不一致，導(dǎo)致擬合模型的相關(guān)系數(shù)較低。此外，使用不同的軟件或者權(quán)重系數(shù)所得到的房室模型的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)有時(shí)會(huì)存在極大的差異(表1)，這也造成不同學(xué)者之間的研究結(jié)果在比較或互證時(shí)，部分藥動(dòng)學(xué)參數(shù)值(如T1/2β)可比性太差。NCA的缺點(diǎn)在于參數(shù)少，無(wú)法提供擬合方程進(jìn)行藥殘預(yù)測(cè)，而實(shí)際上對(duì)于藥物的評(píng)價(jià)，NCA提供的一些參數(shù)足夠了，如參數(shù)V/F反映了藥物在體內(nèi)的分布特性，T1/2和MRT分別評(píng)價(jià)藥物的消除半衰期和體內(nèi)滯留時(shí)間，AUC則很好地說(shuō)明了藥物的暴露程度和生物利用度。NCA最大的優(yōu)點(diǎn)還在于對(duì)非典型數(shù)據(jù)也能提供變異較小的參數(shù)值，不同軟件(如DAS和WinNolin)中NCA的計(jì)算結(jié)果比較接近或基本一致(表2)。目前，在新藥注冊(cè)的藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)中，一般推薦以NCA計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，而在研究報(bào)道中也越來(lái)越多被采用[13,20,27-30]。

3.2 氟苯尼考在花鱸體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征

Cmax和Tmax是評(píng)價(jià)藥物在動(dòng)物體內(nèi)吸收程度和吸收速率最直觀的指標(biāo)。本研究中，花鱸在22 ℃水溫下，以20 mg/kg的劑量單次口灌氟苯尼考后，Cmax和Tmax分別為18.356 μg/mL和3 h(表2)。唐雪蓮等[18]的研究顯示氯霉素在鱸體內(nèi)的Cmax和Tmax分別是21.093 μg/mL和3.961 h(24 ℃，口灌劑量為80 mg/kg)；而胡琳琳等[19]的研究則表明氟甲喹在鱸體內(nèi)的這兩個(gè)參數(shù)值為1.809 μg/mL和4 h(25℃，口灌劑量為20 mg/kg)。研究顯示花鱸對(duì)氟苯尼考和氯霉素有較好的吸收，而對(duì)氟甲喹的吸收利用程度低，這也說(shuō)明了不同的藥物由于化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)不同，在同種水產(chǎn)動(dòng)物中的吸收存在一定的差異[25]。諸多報(bào)道中，氟苯尼考以20 mg/kg的劑量給藥后，牙鲆的達(dá)峰濃度為12.18 μg/mL[20]，說(shuō)明花鱸對(duì)氟苯尼考的吸收相對(duì)于牙鲆更好。氟苯尼考以10～30 mg/kg的劑量給藥后在水產(chǎn)動(dòng)物中的達(dá)峰時(shí)間各不相同，如花鱸(3 h)、鯽(3.59 h)[6]、牙鲆(4 h)[20]、中華鱉(3.5 h)[10]、大西洋鱈魚(0.5 h)[22]、西伯利亞鱘(3.59 h)[7]、羅非魚(12 h)[23]、日本鰻鱺(12 h)和歐洲鰻鱺(12 h)[9]等動(dòng)物中，在大西洋鱈魚中吸收較快，而在羅非魚和鰻鱺中吸收較慢；其中，花鱸、牙鲆和鰻鱺等對(duì)氟苯尼考的吸收利用程度較高。

藥動(dòng)學(xué)參數(shù)中的表觀分布容積(V/F)反映藥物在動(dòng)物體內(nèi)的分布情況[25]。氟苯尼考在西伯利亞鱘[7]、鯽[6]、錦鯉[24]和日本鰻鱺[9]等動(dòng)物體內(nèi)的V/F在2.1～3.3 L/kg之間，遠(yuǎn)大于1 L/kg，表明氟苯尼考在這些水產(chǎn)動(dòng)物組織中的分布多于血液。而相對(duì)而言，在花鱸(1.401 L/kg)和大西洋鮭(1.12 L/kg)[21]體內(nèi)的V/F則顯示氟苯尼考在二者組織和血液中的分布更為均勻。

半衰期(T1/2)是個(gè)重要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，它反映藥物在動(dòng)物機(jī)體中的消除速率。氟苯尼考在花鱸(表2)、羅非魚[23]、中華鱉[10]、中國(guó)明對(duì)蝦[11]、鯽[6]、日本鰻鱺和歐洲鰻鱺[9]等動(dòng)物體內(nèi)的T1/2在3.6～12.5 h之間，這表明氟苯尼考在大多數(shù)水產(chǎn)動(dòng)物體內(nèi)的消除較快。

3.3 給藥方案和休藥期建議

花鱸在養(yǎng)殖過(guò)程中，常見(jiàn)的細(xì)菌性疾病主要有皮膚潰瘍病、爛尾病、爛鰓病、腸炎病和類結(jié)節(jié)病等，它們是由哈維氏弧菌(Vibrioharveyi)、點(diǎn)狀氣單胞菌(Aeromonaspunctata)、嗜水氣單胞菌(A.hydrophila)或殺魚巴斯德菌(Pasteurellapiscicda)等病原菌引起[31]，氟苯尼考對(duì)常見(jiàn)病原菌的最小抑菌濃度(MIC)多報(bào)道為0.3～1.6 μg/mL[32-33]。抗菌藥物的給藥劑量是否有效取決于Cmax/MIC能否達(dá)到10[33]，而本研究中氟苯尼考在花鱸血液中的Cmax為18.356 μg/mL，據(jù)此計(jì)算Cmax/MIC值在11.5～61.2之間，表明20 mg/kg的劑量對(duì)于常見(jiàn)的病原菌是有效的。結(jié)合半衰期T1/2z(12.508 h)，建議給藥方案為以20 mg/kg體重的劑量混飼口服，給藥間隔為12 h，即每天2次，連續(xù)3～5 d。

藥物殘留消除規(guī)律的研究對(duì)于水產(chǎn)動(dòng)物食品安全具有重要的理論參考價(jià)值。為了最大程度地保障水產(chǎn)品的食用安全，在殘留消除研究中通常會(huì)采用常規(guī)用藥劑量、多次(3～5次)給藥的方式[14,18]，但由于部分水產(chǎn)動(dòng)物應(yīng)激性強(qiáng)，在多次捕撈給藥后難以健康存活至15 d或更長(zhǎng)時(shí)間，因此有些學(xué)者也采用單次、高倍(3～5倍)劑量的給藥方式[15-16]，既可以避免多次應(yīng)激，又充分考慮了藥物的累積效應(yīng)，本研究采取了第二種給藥方式考察氟苯尼考在花鱸中的代謝消除規(guī)律。根據(jù)中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部頒布的第235號(hào)公告中關(guān)于動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量的規(guī)定，氟苯尼考在魚體各組織中的MRL為1 000 μg/kg[34]，據(jù)此計(jì)算，22 ℃水溫條件下，如果僅考慮肌肉為主要食用組織，建議休藥期為7 d；如果考慮所有組織，則以消除最慢的腎為靶組織，建議休藥期為9 d。

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Pharmacokinetics and rules of residue elimination of florfenicol in Lateolabrax janponicus

HUANG Jujie1, LIN Mao1,2*,YAN Qingpi1, LI Zhongqin1,2, LI Jiangsen1

(1. Fisheries College, Jimei University; 2. Engineering Research Center of the Modern Technology for Eel Industry,Ministry of Education: Xiamen 361021, China)

To study pharmacokinetic of florfenicol in sea bassLateolabraxjaponicus, the concentration of florfenicol in the sample of blood, muscle, liver and kidney collected at different time following oral administration was detected by high performance liquid chromatography. For pharmacokinetics analysis, the dose was 20 mg/kg body weight and the time-concentration data in 48 h were analyzed using DAS and WinNonlin software. There were great differences in the values of compartmental pharmacokinetic parameters between the operations by different softwares or different weigh factors, especially half-life of elimination (T1/2β). Meanwhile, the values of non-compartmental parameters processed by the different software were similar. Non-compartmental parameters in plasma were offered by DAS software, such as area under the curve (AUC0—∞) of 257.591 mg/(L·h), apparent volume of distribution (Vz/F) of 1.401 L/kg, mean residence time (MRT0-∞) of 18.505 h, half-life (T1/2z) of 12.508 h, maximum concentrations (Cmax) of 18.356 μg/mL, and time toCmax(Tmax) of 3 h. For the research of residue elimination, the dose was 60 mg/kg and the data in 30 d were regressed by WT program. In theory, the calculated withdrawal time of florfenicol in muscle, liver, kidney and plasma of sea bass was 6.54, 8.69, 8.30 and 5.89 d, respectively.The result provided a scientific reference for practical applications of florfenicol in aquatic animals. [Chinese Fishery Quality and Standards, 2016, 6(3):6-13]

florfenicol;Lateolabraxjaponicus; pharmacokinetics; residue; withdrawal time

LIN Mao, linmao@jmu.edu.cn

2016-03-05；接收日期：2016-04-11

公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201203085)；海洋經(jīng)濟(jì)發(fā)展區(qū)域示范項(xiàng)目(14PYY050SF03)；福建省自然科學(xué)基金(2014J01131)；福建省教育廳科技項(xiàng)目(JA15292)

黃聚杰(1988-)，男，碩士，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物藥動(dòng)學(xué)與殘留檢測(cè)技術(shù)，594366545@qq.com 通信作者：林茂，副教授，研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物病害控制，linmao@jmu.edu.cn

S948

A

文章編號(hào)：2095-1833(2016)03-0006-08