防風(fēng)配方顆粒的提取工藝優(yōu)化以及含量測(cè)定

趙粉榮 劉 斌 田志杰

內(nèi)蒙古大唐藥業(yè)股份有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010

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防風(fēng)配方顆粒的提取工藝優(yōu)化以及含量測(cè)定

趙粉榮 劉 斌 田志杰

內(nèi)蒙古大唐藥業(yè)股份有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010

目的：優(yōu)選防風(fēng)配方顆粒的提取工藝，建立升麻素苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量測(cè)定方法，為有效控制該制劑的質(zhì)量提供參考。方法：以升麻素苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷提取量和出膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)考察加水量、提取時(shí)間和提取次數(shù)對(duì)防風(fēng)配方顆粒提取工藝的影響。采用HPLC 測(cè)定升麻素苷與5-O-甲基維斯阿米醇苷含量。結(jié)果：最佳提取工藝為浸泡0.5h，加10、8、6倍量水提取3次，每次0.5h；升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷分別在6.24～62.4μg、5.68～56.8μg與峰面積呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率依次為99.63%、99.75%，RSD分別為0.13%、1.04%。結(jié)論：該提取工藝和含量測(cè)定方法穩(wěn)定可行，有效成分提取效率高，為防風(fēng)配方顆粒的生產(chǎn)和質(zhì)量控制提供參考。

防風(fēng)配方顆粒；升麻素苷；5-O-甲基維斯阿米醇苷；浸膏得率； 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

防風(fēng)是常用中藥，為傘形科植物防風(fēng)Saposhnikoviadivaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根。具有祛風(fēng)解表，勝濕止痛，止痙之功效。用于感冒頭痛，風(fēng)濕麻痹，風(fēng)疹瘙癢，破傷風(fēng)。春、秋二季采挖未抽花莖植株的根，除去須根和泥沙，曬干[1]。主要成分有升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷等?！吨袊?guó)藥典》(2015年版)規(guī)定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷為防風(fēng)藥材質(zhì)量控制的指標(biāo)成分。防風(fēng)配方顆粒是將防風(fēng)飲片經(jīng)現(xiàn)代制藥工藝提取、濃縮、干燥、制粒而成的顆粒劑。目前有關(guān)防風(fēng)配方顆粒的工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究尚未有報(bào)道，但配方顆粒研究前景廣闊。故本實(shí)驗(yàn)通過(guò)正交試驗(yàn)，利用HPLC測(cè)定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的含量，并結(jié)合干浸膏得率作為質(zhì)量指標(biāo)，優(yōu)選防風(fēng)藥材水提取的最佳工藝，為中藥防風(fēng)配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(島津)；BP211D 型電子天平(德國(guó) Sautoris 公司)；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 升麻素苷對(duì)照品(批號(hào)：111522-201511 中國(guó)食品藥品檢定研究院)；5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品(批號(hào)：111523-201509 中國(guó)食品藥品檢定研究院)；防風(fēng)藥材(安國(guó)義通中藥材有限公司)，甲醇(色譜純)，水(超純水)。

2 方法與結(jié)果

2.1 配方顆粒的制備 稱取防風(fēng)藥材，按優(yōu)選的工藝條件提取，合并煎液，濃縮后干燥，得干浸膏粉，粉碎過(guò)3號(hào)篩，加入適量輔料，混勻，經(jīng)過(guò)制粒、整粒，得防風(fēng)配方顆粒。

2.2 高效液相色譜含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 十八硅烷鍵合硅膠為填充劑C18色譜柱( 4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相：甲醇-水(40∶60)，流速1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)254nm，理論板數(shù)按升麻素苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取升麻素苷對(duì)照品3.12mg，5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品2.84mg，加甲醇溶解并定容至50mL，分別制成62.4μg·mL-1和56.8μg·mL-1對(duì)照品溶液，備用。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品顆粒適量，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置50mL錐形瓶中，精密加入80%甲醇20mL，稱定重量，超聲處理15min，取出，放冷，用80%甲醇補(bǔ)足減失重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，得供試品溶液。見(jiàn)圖1。

2.2.4 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品溶液在200～400nm進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果顯示在254nm處有最大吸收且靈敏度最高， 故確定其檢測(cè)波長(zhǎng)254nm。

2.3 線性關(guān)系考察 精密吸取升麻素苷(62.4μg·mL-1)和5-O-甲基維斯阿米醇苷(56.8μg·mL-1)對(duì)照品溶液1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.0mL，分別置10mL量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)，樣品含量為橫坐標(biāo)，得回歸方程依次為Y=119530X+7436.2，R2=0.9997(n=6)，Y=121669X+ 4218.4,R2=0.9997(n=6)，結(jié)果表明升麻素苷在6.24～62.4 μg范圍、5-O-甲基維斯阿米醇苷在5.68～56.8μg范圍呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣 6 次，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算峰面積的RSD為分別0.39%與0.45%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品，按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算峰面積的RSD分別為0.44%與0.42%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密取同一供試品溶液10μL，按0h、1h、2h、4h、8h、10h時(shí)間間隔，分別進(jìn)樣分析，測(cè)定色譜峰面積。結(jié)果表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好，其RSD分別為1.13%與1.11%。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的防風(fēng)配方顆粒樣品約0.25g，共6份，分別精密加入升麻素苷對(duì)照溶液10mL(濃度為62.4μg·mL-1)，或5-O-甲基維斯阿米醇苷對(duì)照品溶液6mL(濃度為56.8μg·mL-1)，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1、2。平均加樣回收率99.63%與99.75%，RSD為0.13%與1.04%，表明樣品回收率良好。

表1 升麻素苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 5-O-甲基維斯阿米醇苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

3 提取工藝的正交試驗(yàn)

3.1 正交設(shè)計(jì) 在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，固定浸泡時(shí)間0.5 h，選擇加水量(A)、提取時(shí)間(B)、提取次數(shù)(C)作為考察因素。以升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的總含量和出膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)。采用L9(34) 正交表設(shè)計(jì)，因素水平詳見(jiàn)表3。

表3 防風(fēng)配方顆粒提取的因素與水平

3.2 實(shí)驗(yàn)方法 取內(nèi)蒙防風(fēng)藥材9份，每份40 g，按表4設(shè)計(jì)的工藝條件進(jìn)行提取，合并水煎煮提取液，濾過(guò)，水煎液均定容到1000mL容量瓶中，備用。從定容到1000mL的水煎液中吸取5mL至25mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。用微孔濾膜濾過(guò)，取濾液，進(jìn)樣，測(cè)定升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷總含量。

3.3 正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析 按上述實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行正交試驗(yàn)得到9份供試品溶液，按照含量測(cè)定方法進(jìn)行含量測(cè)定，并計(jì)算總含量。正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4，方差分析結(jié)果見(jiàn)表5。

由直觀分析可知， 各因素影響提取效果的順序?yàn)镃>B>A。方差分析表明因素C對(duì)提取工藝具有顯著性影響，其他因素則影響不明顯，考慮大生產(chǎn)節(jié)約成本等因素，最佳提取工藝條件為A1B1C3，即加10、8、6倍量水提取3次，每次0.5h。

表4 防風(fēng)提取工藝正交設(shè)計(jì)與試驗(yàn)結(jié)果表

表5 綜合評(píng)分方差分析

3.4 優(yōu)選工藝的驗(yàn)證試驗(yàn) 按最佳提取工藝進(jìn)行了3次驗(yàn)證試驗(yàn)，取防風(fēng)藥材500g，結(jié)果升麻素苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.506%、0.509%、0.528%，5-O-甲基維斯阿米醇苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.357%、0.350%、0.381%，出膏率依次為41.9%、44.5%、43.8%， 說(shuō)明該工藝穩(wěn)定可行。因此，確定防風(fēng)配方顆粒提取工藝為：加10、8、6倍量水提取3次，每次0.5h。

4 配方顆粒樣品含量測(cè)定

按照最優(yōu)提取工藝，制備出防風(fēng)配方顆粒。精密稱取防風(fēng)配方顆粒約0.5 g，按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算升麻素苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為2.37、2.29、2.32 mg·g-1，5-O-甲基維斯阿米醇苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.31 、1.28、1.39mg·g-1，故暫定本品配方顆粒每1g含升麻素苷( C22H28O11)和5-O-甲基維斯阿米醇苷(C22H28O10)總量不得少于3.0 mg。

5 討論

對(duì)于原料藥材飲片的選擇，是中藥配方顆粒研制、生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)和應(yīng)用等最根本的前提的前提條件，只有在確保了原料藥材的質(zhì)量的基礎(chǔ)上，才能保證和提高穩(wěn)定中藥配方顆粒的質(zhì)量[2]。由于條件有限，本研究只收集了兩個(gè)不同產(chǎn)地的品種進(jìn)行含量測(cè)定等一系列的對(duì)比考察研宄，通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)兩個(gè)不同產(chǎn)地的品種含有效成分總含量差別不大。

防風(fēng)配方顆粒的水提工藝直接關(guān)系到配方顆粒的質(zhì)量，以出膏率和升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷含量作為衡量指標(biāo)，初步評(píng)價(jià)了工藝的提取效果，結(jié)果表明煎煮時(shí)間和加水量對(duì)工藝的影響較小，而煎煮次數(shù)對(duì)其二者的含量和出膏率有顯著的影響，是該飲片提取工藝的重要因素。目前由于防風(fēng)配方顆粒樣品數(shù)量較少，有待于后續(xù)試驗(yàn)數(shù)據(jù)的積累，制定了升麻素苷和5-O-甲基維斯阿米醇苷的限量范圍，使該制劑的質(zhì)量更加穩(wěn)定可靠，為有效控制防風(fēng)配方顆粒的質(zhì)量提供保證。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S]. 北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010: 239.

[2]涂瑤生，畢曉黎，羅文匯. 中藥配方顆粒的質(zhì)量控制研究[J].世界科學(xué)技術(shù)中醫(yī)藥現(xiàn)代化思路與方法，2011,13(1)：41.

(編輯：程鵬飛)

2016-09-26

趙粉榮，女，碩士，工程師，從事中藥質(zhì)量控制研究。E-mail：454962527@qq.com

R284.2

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1007-8517(2016)23-0024-03