高危型HPV檢測(cè)在CIN診斷中的臨床價(jià)值

裘明利 吳云燕 王宏達(dá) 王孫英

·檢測(cè)診斷·

高危型HPV檢測(cè)在CIN診斷中的臨床價(jià)值

裘明利 吳云燕 王宏達(dá) 王孫英

目的探討高危型HPV檢測(cè)在子宮頸上皮內(nèi)瘤變?cè)\斷中的臨床指導(dǎo)價(jià)值。方法回顧性分析2013年4月至2015年6月323例子宮頸上皮內(nèi)瘤變住院患者的高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）基因亞型檢測(cè)、液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）和病理檢查資料，以病理檢查結(jié)果為最終診斷標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果323例子宮頸上皮內(nèi)瘤變患者中HR-HPV陽性308例，HR-HPV陽性率95.4%，單一型病毒感染較為常見，排名前3位的HR-HPV型別依次為HPV16、58、52型。高危型HPV感染呈逐漸向年輕化發(fā)展的趨勢(shì)，但各年齡段的HPV陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.946，P＞0.05）。多重感染與子宮頸病變程度無明顯相關(guān)性（r=0.131，P＞0.05）。對(duì)于子宮頸上皮內(nèi)瘤變者，TCT檢測(cè)陽性率88.5%，HPV陽性率95.4%，兩者聯(lián)合檢測(cè)的陽性率100%（χ2=0.060，P＞0.05）。結(jié)論高危型HPV感染呈逐漸向年輕化發(fā)展的趨勢(shì)；多重感染與子宮頸病變程度無相關(guān)性；高危型HPV檢測(cè)在子宮頸上皮內(nèi)瘤變?cè)\斷中的臨床意義越來越重要，可降低或消除TCT檢查的假陰性結(jié)果；TCT與高危型HPV檢測(cè)聯(lián)合使用可明顯提高診斷子宮頸上皮內(nèi)瘤變的靈敏度。

高危型人乳頭瘤病毒 宮頸上皮內(nèi)瘤病 熒光PCR分型定性檢測(cè) 病理組織學(xué)

子宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，起源于子宮上皮內(nèi)瘤變（CIN），兩者病因相同，均與HR-HPV持續(xù)感染密切相關(guān)［1］，因此HR-HPV檢測(cè)在宮頸癌篩查中有重要的臨床價(jià)值。CIN反映子宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的連續(xù)過程，無特殊臨床表現(xiàn)，通過篩查發(fā)現(xiàn)CIN，及時(shí)治療高級(jí)別病變，是預(yù)防子宮頸癌的有效措施。本文探討高危型HPV檢測(cè)在CIN變?cè)\斷中的臨床價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2013年4月至2015年6月本院行HR-HPV基因亞型檢測(cè)、液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）和病理檢查的323例CIN患者的臨床資料，年齡22～69歲，平均年齡43歲。根據(jù)2001年Bethesda系統(tǒng)分類法（TBS）進(jìn)行細(xì)胞學(xué)分級(jí)報(bào)告［2］。其中細(xì)胞學(xué)診斷為未見上皮內(nèi)病變細(xì)胞和惡性細(xì)胞（NILM）37例，未明確診斷意義的不典型鱗狀上皮細(xì)胞（ASCUS）28例，不能排除高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變不典型鱗狀細(xì)胞（ASC-H）42例，低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）112例，與CINⅠ符合，高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）104例，包括CINⅡ、CINⅢ和原位癌，進(jìn)行陰道鏡檢查或病理檢查。按10歲為1個(gè)年齡段，觀察各年齡段婦女HR-HPV感染情況。

1.2 方法 （1）取樣步驟與要求：HR- HPV樣本采集：采集人員行常規(guī)婦科檢查，以窺陰器暴露宮頸口，先用棉簽擦去宮頸分泌物，再將宮頸取樣器刷置于宮頸口，輕柔旋轉(zhuǎn)使其順時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)5圈。緩慢去除宮頸取樣器刷并將其置入無菌取樣管中，標(biāo)記患者編號(hào)及采樣日期立即送檢，實(shí)驗(yàn)室-20℃避光保存，并于4d內(nèi)出檢驗(yàn)結(jié)果。（2）TCT樣本采集：先用棉簽擦去宮頸分泌物，再用細(xì)胞刷在宮頸口鱗柱交界處同一方向旋轉(zhuǎn)3～5圈，隨即將全部脫落細(xì)胞轉(zhuǎn)移至細(xì)胞保存液中并固定≥15min，然后采用美國Cytyc ThinPrep 2000系統(tǒng)進(jìn)行TCT制片。（2）TCT：TCT診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2001年Bethesda系統(tǒng)分類法的診斷標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)TCT結(jié)果分為NILM組、ASCUS組、ASC-H組、LSIL組和HSIL組，NILM組為細(xì)胞學(xué)檢查陰性，其余各組為細(xì)胞學(xué)檢查陽性。（3）HR-HPV基因亞型檢測(cè)：對(duì)國際衛(wèi)生組織（WHO）確認(rèn)的13種HR-HPV型別的特異性DNA核酸片段（包括HPV l6、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型）進(jìn)行熒光PCR分型定性檢測(cè)，判斷單一或多重感染。HR-HPV分型檢測(cè)的方法、步驟和結(jié)果判讀參照儀器和試劑盒說明書。（4）子宮頸組織病理學(xué)診斷：對(duì)323例婦女進(jìn)行陰道鏡下宮頸多點(diǎn)活檢或?qū)m頸LEEP術(shù)、宮頸錐切術(shù)、子宮全切術(shù)及組織病理檢查。病理診斷結(jié)果根據(jù)病變程度分為CINⅠ（輕度異型）、C1NⅡ（中度異型）、CINⅢ（重度異型和原位癌）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 12.0軟件。不同組別及不同基因亞型HR-HPV陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)。HR-HPV基因亞型與CIN不同分級(jí)的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HR-HPV感染情況及基因亞型分布 323例婦女中，HR-HPV陽性308例，陽性率95.4%。HRHPV感染以單一感染為主，占66.2%，多重感染占33.8%；多重感染者中，二重感染最為常見，占69.2%，其次為三重感染，占19.2%，≥四重感染者僅占11.5%。所有HR-HPV陽性患者中，排名前三位的基因亞型依次為HPV16型（40.3%），HPV58型（25.3%），52型（22.6%）；感染率最低的是HPV45型（1.0%）。

2.2 不同年齡段婦女的HR-HPV感染率 高危型HPV感染呈逐漸向年輕化發(fā)展的趨勢(shì)，30～39歲達(dá)到最高峰，但各年齡段HR-HPV陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.946，P＞0.05），見表1。

表1 不同年齡段婦女HR-HPV陽性分布情況［n（%）］

2.3 不同基因亞型HR-HPV感染與子宮頸病變程度的相關(guān)性 323例進(jìn)行陰道鏡活檢及病理學(xué)診斷，不同類基因亞型HR-HPV感染（即單一感染或多重感染）者及不同程度CIN患者HR-HPV陽性率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=36.358，P＜0.01），見表2。

表2 323例不同類型HR-HPV感染者的宮頸病變情況［n（%）］

2.4 TCT、HR-HPV定性檢測(cè)與病理檢查結(jié)果的比較 對(duì)323例患者的組織病理診斷、TCT結(jié)果及HPV檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，以組織病理學(xué)診斷結(jié)果為最終確診結(jié)果，見表3。

表3 323例患者TCT、HR-HPV定性檢測(cè)病理結(jié)果的比較

3 討論

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，早期宮頸癌常無明顯癥狀和體征，頸管型患者因子宮頸外觀正常易漏診或誤診。因此，采用子宮頸細(xì)胞學(xué)檢查和（或）高危型HPV檢測(cè)、陰道鏡檢查、子宮頸活組織檢查的“三階梯”程序來篩查，達(dá)到早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療宮頸癌和癌前病變的目的，這對(duì)降低宮頸癌的發(fā)病率和病死率有重要意義。近年來，研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌發(fā)病趨勢(shì)呈現(xiàn)年輕化，這引起全世界婦科腫瘤專家的重視。早在20世紀(jì)80年代，國外資料就已闡明，25～35歲年輕宮頸癌患者的發(fā)病率在20世紀(jì)50年代為9%，20世紀(jì)80年代已上升到24%［3］。本資料結(jié)果表明，CIN的高發(fā)年齡集中在30～39歲，而＜30歲婦女的發(fā)病率高于≥40歲婦女，這可能與性生活年齡提早和性亂行為［4］相關(guān)。其相關(guān)因素包括對(duì)青少年缺乏性教育，對(duì)成年人缺乏性衛(wèi)生、健康知識(shí)的普及，及避孕套使用率不高等。

據(jù)IARC（國際癌癥研究機(jī)構(gòu)）統(tǒng)計(jì)［5］，HPV16、18是在世界范圍內(nèi)常見的HPV感染型別。而在中國的宮頸癌患者中，HPV16、18、52、58陽性率高于其他型別，尤其是HPV 52、58在中國南方地區(qū)較為常見［6-8］。本資料結(jié)果顯示，高危型HPV陽性率前3位的型別分別為，HPV16、58、52型，與深圳地區(qū)常見基因型一致，但序次稍有不同［9］。本資料最主要的HR-HPV感染亞型HPV16，這與馮金鴿等［10］報(bào)道一致，而HPV18并不是本地區(qū)較常見的感染基因型。表明HPV感染基因型分布規(guī)律存在明顯的地域差異。本資料中，HR-HPV感染以單一感染為主，占66.2%，多重感染占33.8%；而在多重感染者中，二重感染最為常見，占69.2%。關(guān)于多重感染是否與宮頸癌及癌前病變具有相關(guān)性，目前仍然存在一定爭(zhēng)議。Munoz等［5］研究認(rèn)為，多重感染并不會(huì)增加子宮頸癌的發(fā)生概率。Fife等［11］認(rèn)為，HPV多重感染對(duì)子宮頸病變及子宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展起促進(jìn)作用。

2012年3月美國癌癥協(xié)會(huì)NCCN就公布了新版的《子宮頸癌篩查臨床實(shí)踐指南》，指南中指出高危型HPV檢測(cè)已作為子宮頸癌的初篩及異常細(xì)胞學(xué)結(jié)果處理的組成部分。本資料中，TCT檢測(cè)陽性率為88.5%，HPV陽性率為95.4%，兩者聯(lián)合檢測(cè)的陽性率100%。這些結(jié)果體現(xiàn)HR-HPV檢測(cè)在宮頸癌及其癌前病變篩查中的重要性。HR-HPV檢測(cè)可對(duì)細(xì)胞學(xué)低度病變者進(jìn)行有效分層，提高對(duì)高級(jí)別病變的檢出率，避免漏診、過度治療或治療不足。同時(shí)，表明HR-HPV檢測(cè)聯(lián)合細(xì)胞學(xué)檢查，對(duì)提高不同級(jí)別子宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的診斷率、發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)性的提示、術(shù)后隨訪監(jiān)測(cè)及低級(jí)別病變分流等具有重要的意義，對(duì)于正常人群中的高?；颊吆Y查也具有重要作用。

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ObjectiveTo Investigate the value of HR-HPV genotyping in diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia（CIN）.MethodsFrom April 2013 to June 2015，323 women from Fuyang Maternal and Child Health Hospital were selected to be HPV genotyping test，thin liqid—based cytology test（TCT）and histopathologic examination，all those were analyzed retrospectivel. And that，the pathological examination results were the fi nal diagnosis standard.ResultsHR-HPV prevalence was 95.4%in this study.The infection of one type HPV was more common. The top 3 of HR-HPV types were HPV16，58，52. There was no signifi cant difi erenee between age and HPV positive rate（χ2=0.946，P＞0.05）. Multiple infection and cervieal lesions rank correlation analysis（r=0.131，P＞0.05）. For cervical intraepitheliai neoplasia，cvtology positive rate was 88.5%（286/323），and HPV positive rate was 95.4%，cvtology combine HPV positive rate was 100%（χ2=0.060，P＞0.05）.ConclusionHPV infection is radually tending to be younger.The clinical signifi cance of HR-HPV detection is more important in the diagnosis of cervical intraepithelial neoplasia，which Can reduce or eliminate the false negative results of TCT examination. The combination of Cytology test and HPV genotyping test can improve the sensitivity for high-grade lesions.

High-risk Human papillomavirus Cervical intraepitheliai neoplasia Real time PCR Kit Histopathologic

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