熒光免疫法與免疫層析法檢測血清N末端腦鈉肽前體的方法學(xué)比較及偏倚評估

摘要：目的 通過mini-VIDAS熒光免疫分析儀和Roche cobas h 232心臟標(biāo)志物檢測儀測定N末端腦鈉肽前體的方法比對，探討兩種方法檢測結(jié)果的偏差是否在允許的范圍內(nèi)，檢測結(jié)果是否具有可比性。方法 以mini-VIDAS熒光免疫分析儀作為參考儀器，Roche cobas h 232心臟標(biāo)志物檢測儀作為實驗儀器，依據(jù)美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）EP9-A2文件的要求設(shè)計比對方案，以采集自臨床患者的空腹新鮮血清標(biāo)本作為待測標(biāo)本，以美國臨床實驗室修正法規(guī)1988（CLIA，88）允許總誤差的1/2作為標(biāo)準(zhǔn)，對2臺儀器檢測結(jié)果間偏差進行評估。結(jié)果 熒光免疫法與免疫層析法比較，r2>0.95，2臺儀器的相關(guān)性好，在醫(yī)學(xué)決定水平x=300，x=450，x=900時，免疫層析法的預(yù)期相對偏倚分別是29.75%，18.47%，7.18%，在x=300，兩種方法存在統(tǒng)計學(xué)差異，偏倚不可被臨床接受。結(jié)論 臨床實驗室內(nèi)同一檢測項目同時在兩套系統(tǒng)檢測時，應(yīng)進行比對實驗和偏倚評估，以確保檢測結(jié)果具有可比性。

關(guān)鍵詞：N末端腦鈉肽前體；方法比對；偏倚評估

N末端腦鈉肽前體（NT-proBNP）作為一種良好的心臟標(biāo)志物，在心血管領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，特別對急診呼吸困難患者鑒別原因具有重要意義?？焖倜庖叻治鰞x在急診檢驗工作中具有無法比擬的優(yōu)越性，但也必須滿足快速、準(zhǔn)確、精密等要求[1]。為確?？焖俜治鰞x的性能，醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可國家標(biāo)準(zhǔn)ISO15189要求檢測系統(tǒng)在工作前進行分析評價，證實其能夠滿足預(yù)期用途[2]。方法學(xué)不同的檢測系統(tǒng)間在測定患者樣品結(jié)果上具有可比性，在臨床檢驗工作中是很重要的。本實驗按照臨床實驗室管理要求和美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）EP9-A2文件的要求[3]，對兩臺儀器檢測NT-proBNP的結(jié)果進行比對分析，并判斷其臨床可接受性，旨在為不同檢測儀檢測結(jié)果的可比性提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1儀器與試劑 mini-VIDAS熒光免疫分析儀及配套試劑、校準(zhǔn)物。Roche cobas h 232心臟標(biāo)志物檢測儀及其配套試劑。

1.1.2樣本來源 樣本來自我院2014年6月～12月健康人群或患者40份，無溶血、黃疸、脂濁，標(biāo)本的濃度分布范圍覆蓋分析方法的線性范圍。包括高、中、低3個水平。

1.2方法

1.2.1測定方法 Roche cobas h 232心臟標(biāo)志物檢測儀的檢測原理是首先運用膠體金免疫層析法進行定性，所用抗體為人N末端腦鈉肽前體單克隆抗體和人N末端腦鈉肽前體抗體，再利用光反射原理對其進行定量檢測。mini-VIDAS熒光免疫分析儀采用一步夾心免疫法結(jié)合終點法熒光檢測技術(shù)。

1.2.2方法對比實驗 以mini-VIDAS熒光免疫分析儀作為參比系統(tǒng)（x），以Roche cobas h 232作為試驗系統(tǒng)（y），兩種檢測系統(tǒng)在質(zhì)控在控的前提下，依據(jù)EP9-A2文件，每天隨機選取8份標(biāo)本，先對標(biāo)本進行隨機排列，按1-8編號，每份標(biāo)本分別用兩種方法進行雙份測定。第一次測定1→8，第二次8→1，連續(xù)測定5d，記錄數(shù)據(jù)。對實驗所得數(shù)據(jù)進行分析，計算相關(guān)系數(shù)r值[4]。

1.2.3離群值的檢測 按照EP9-A2文件對方法間和方法內(nèi)的離群值進行檢查。

1.2.4參比方法測定范圍的檢測 參比方法測定范圍可用相關(guān)系數(shù)（r2）進行粗略的估算，若r2>0.95，則認(rèn)為參比方法測定標(biāo)本的取值范圍比較合適。然后計算回歸方程y=bx+a（b為斜率，a為常數(shù)項）。

1.2.5可接受性能評價 計算方法間的系統(tǒng)誤差SE=∣y-x∣ SE%=（SE/x）×100%，以CLIA，88對室間評估的允許誤差為判斷依據(jù)，由方法學(xué)比較評估的系統(tǒng)誤差（SE%）不大于允許誤差的1/2為臨床可接受水平，判斷不同檢測系統(tǒng)間的測定結(jié)果是否具有可比性。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS16.0統(tǒng)計學(xué)軟件對2種檢測系統(tǒng)的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。用Excel 2003做離群值檢驗。以mini-VIDAS熒光免疫分析儀作為參比系統(tǒng)，另外Roche cobas h 232心臟標(biāo)志物檢測儀與之做相關(guān)回歸分析，并計算線性回歸方程。

2結(jié)果

2.1離群值的檢驗 用Excel 2003進行離群值檢驗，所有檢測結(jié)果中未出現(xiàn)離群值

2.2兩種檢測系統(tǒng)的相關(guān)性 以mini-VIDAS熒光免疫分析儀作為參比系統(tǒng)，Roche cobas h 232心臟標(biāo)志物檢測儀與其相關(guān)回歸方程為y=0.9589x+101.59，r2=0.992，r2>0.95，說明回歸統(tǒng)計的斜率和截距可靠，可以估計不同檢測系統(tǒng)間的系統(tǒng)誤差，NT-proBNP在兩種檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果的回歸曲線見圖1。

2.3不同檢測系統(tǒng) 檢測結(jié)果在醫(yī)學(xué)決定水平處可接受性能的比對評價 以mini-VIDAS熒光免疫分析儀作為目標(biāo)檢測系統(tǒng)，將不同醫(yī)學(xué)決定水平濃度代入回歸方程，用以判斷各檢測系統(tǒng)的臨床可接受性能，見表1。

3討論

隨著檢驗技術(shù)的日新月異，各種大型自動化高效率設(shè)備的使用，使檢驗結(jié)果的精確度、準(zhǔn)確性及工作效率得到了很大的提高，但一些易攜帶，操作簡單，結(jié)果報告快速的小型儀器，因其能滿足危重患者搶救時間上的要求，能使患者得到及早的診斷和治療，也有其存在的必要性。在實際工作中，由于臨床檢測需求和檢測對象的不同，同一項目采用不同分析儀進行檢測時，檢測結(jié)果之間存在的差異往往被人們忽視，導(dǎo)致檢測結(jié)果的不確定性，從而給臨床醫(yī)生的結(jié)果判斷和臨床診治帶來干擾[5]，為了消除或減少因儀器不同所引起的結(jié)果的差異，實驗室建立儀器之間的比對制度，保證實驗結(jié)果的可比性，實現(xiàn)同一實驗室不同檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果的可比性與一致性是當(dāng)前實驗室質(zhì)量管理評審活動的重要內(nèi)容[6]。在采用不同分析儀對同一檢驗項目進行檢測時，必須進行檢測結(jié)果的可比性評估，從而確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和一致性，更好的服務(wù)于臨床[7]。

該實驗中，mini VIDAS熒光免疫分析儀采用原裝配套試劑，操作人員經(jīng)過統(tǒng)一培訓(xùn)，該儀器參加遼寧省衛(wèi)生部臨床檢驗中心的室間值評活動，結(jié)果均為優(yōu)秀，是一可靠的檢測系統(tǒng)，作為參照系統(tǒng)，對Roche cobas h 232心臟標(biāo)志物檢測儀檢測NT-proBNP作相關(guān)性方法比對，兩套檢測系統(tǒng)均無離群點，重復(fù)性較好。相關(guān)與回歸分析表明，實驗方法與比較方法間的相關(guān)系數(shù)r2>0.95，說明X的分布范圍合適，可以用回歸統(tǒng)計的方法分析各檢測系統(tǒng)之間的系統(tǒng)誤差，將不同醫(yī)學(xué)決定水平值（Xc）代入相應(yīng)的回歸方程，計算出醫(yī)學(xué)決定水平處的系統(tǒng)誤差，以方法學(xué)比較的系統(tǒng)誤差<1/2CLIA'88的允許誤差范圍為臨床可接受性能的判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果表明，在醫(yī)學(xué)決定水平300ug/L處，系統(tǒng)誤差29.75%大于允許誤差的1/2（20%），不能達到臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)要求。究其原因，從檢測方法的角度分析，Roche cobas h 232心臟標(biāo)志物檢測儀使用的是膠體金免疫層析法和光反射原理的結(jié)合，目前膠體金法多用于定性，要將其作用從定性跨越到定量還需在檢測結(jié)果質(zhì)量上加以改進，基于檢測方法的差異，敏感性和檢測范圍也不同，造成其差異過大。免疫層析法雖然檢測方便、快捷，但其存在檢測線性范圍窄，能滿足急診患者的初篩要求，對住院患者的病情評估及治療檢測方面的應(yīng)用存在限制，因此，在臨床工作中要根據(jù)不同患者的需求，采用不同的檢測方法，以便更好的為臨床服務(wù)。

參考文獻：

[1]楊縝，劉秀菊，周道民.急性心肌梗死心肌標(biāo)志物及其床旁檢測技術(shù)[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2008，29（6）：520-521，524.

[2]徐建新，李福剛.POCT對傳統(tǒng)醫(yī)療模式帶來的新機遇[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2007，30（12）：1329-1331.

[3]The National Committee for Clinical Laboratory Standards，EP9-A2 Method comparison and bias estimation using patient samples [S].Wanye：PA.NCCLS.2002.

[4] Clinical and Laboratory Standards Institute. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples [S].Approved Guideline-second edition EP9-A2， CLSI，2010.

[5]遲林，李昊淼，韓秀英.不同血細(xì)胞分析儀測定結(jié)果可比性分析[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志.2011.26（4）：100-102.

[6]朱晨光，黃偉華，李明.淺談實驗室管理體系的管理評審控制環(huán)節(jié)[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008.18（1）：151-152.

[7]劉曉良.不同生化分析儀測定項目結(jié)果的比對試驗[J].中國實用醫(yī)藥，2012，7（11）：272-273.

編輯/申磊