復(fù)方魚腥草滴丸質(zhì)量標準研究

摘要：目的 建立復(fù)方魚腥草滴丸的質(zhì)量標準。方法 采用TLC法對處方中魚腥草、黃芩進行定性鑒別，采用HPLC法測定黃芩中黃芩苷的含量。結(jié)果 在TLC中均能檢出魚腥草，黃芩，且斑點清晰，專屬性強，陰性對照無干擾；黃芩苷在0.10255～2.04491μg內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r=0.9999），平均回收率為98.94%（n=6），RSD=1.3%。結(jié)論 所建立的方法準確、可靠、專屬性強，可以用于該制劑的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：復(fù)方魚腥草滴丸；TLC法；魚腥草；黃芩；HPLC法；黃芩苷

復(fù)方魚腥草滴丸由魚腥草、黃芩、板藍根、連翹和金銀花五味藥材制備而成，具有清熱解毒之功效。用于外感風(fēng)熱所致的急喉痹，急乳蛾，癥見咽部紅腫、咽痛；急性咽炎，急性扁桃體炎見上述癥候者[1]。原標準TLC方法重現(xiàn)性、穩(wěn)定性較差，含量測定方法前處理復(fù)雜，重現(xiàn)性差，為了更好地提高產(chǎn)品質(zhì)量的可控性，本文對魚腥草、黃芩進行了薄層色譜鑒別，并采用高效液相色譜法對方中黃芩的活性成分黃芩苷進行含量測定，為該制劑生產(chǎn)提供了質(zhì)量控制依據(jù)。

1 儀器與試藥

島津LC-20AD高效液相色譜儀，Labsolution工作站，PDA檢測器。

黃芩苷對照品（批號為110715-201117），魚腥草對照藥材（批號為121046-200403）均購自中國食品藥品檢定研究院。復(fù)方魚腥草滴丸及處方中5味藥材由江西天施康中藥股份有限公司提供。硅膠G板（青島海洋化工廠分廠），水為超純水，甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1魚腥草的薄層鑒別 取本品5g，加水20ml，加熱回流30min，放冷，離心，取上清液，用氨水調(diào)節(jié)pH值11～12，用乙酸乙酯振搖提取2次，30ml/次，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加無水乙醇1ml溶解，作為樣品溶液。另取魚腥草對照藥材0.5g，加水50ml，煎煮30min，濾過，濃縮濾液至約20ml，用氨水調(diào)節(jié)pH值11～12，同法制成對照藥材溶液。取缺魚腥草藥材的陰性樣品5g，按樣品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B）試驗，分別吸取樣品溶液10μl、對照溶液5μl，點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯（4∶3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱約1min，置紫外光燈（365nm）下檢視。結(jié)果樣品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色熒光主斑點。陰性對照液無干擾，見圖1。

2.2黃芩的薄層鑒別 取本品2g，加溫水20ml，超聲提取10min，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值1.5～2.0，80℃保溫1h，離心，棄去上清液，沉淀用水洗滌2次，殘渣加2ml甲醇使溶解，作為樣品溶液。另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。取缺黃芩藥材的陰性樣品2g，按樣品溶液制備方法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B）試驗，分別吸取樣品溶液1μl、對照溶液5μl，點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7∶1∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點顯色清晰。結(jié)果樣品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照液無干擾，見圖2。

2.3含量測定

2.3.1色譜條件 色譜柱為Ultimate XB-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水-磷酸（45：55：0.2）；流速：1.0ml/min；檢測波長：315nm，進樣量：10μl。

2.3.2對照溶液的制備 取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。

2.3.3樣品溶液的制備 取本品，研碎，取約0.2g，精密稱定，置100ml量瓶中，加70%乙醇60ml，超聲提取30min，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，離心，取上清液，作為樣品溶液。

2.3.4陰性對照溶液的制備 取缺黃芩的模擬制劑約0.2g，按樣品溶液的制備方法制備，即得。

2.3.5方法專屬性考察 按上述色譜條件分別進樣供試品溶液、黃芩苷對照品和缺黃芩陰性對照溶液，結(jié)果陰性對照無干擾（見圖3）。

2.3.6標準曲線的制備 分別精密吸取對照品溶液（其濃度為0.204491mg/ml）1ml、5ml，置10ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，作為對照品溶液Ⅰ、Ⅱ；再分別精密吸取對照品溶液Ⅰ、Ⅱ各5μl、10μl、20μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以對照品進樣量為橫坐標X，峰面積積分值為縱坐標Y，得回歸方程：Y=3148105.2462x-26698.8788，R2=0.9999，表明黃芩苷在0.10255～2.04491μg內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.7精密度試驗 精密吸取對照溶液10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣7次，結(jié)果黃芩苷峰面積RSD為0.1%。

2.3.8穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一樣品溶液分別于0、1、2、4、8、14、24h進樣10μl，測定黃芩苷的峰面積，計算其RSD為0.2%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.9重復(fù)性試驗 精密稱取同一批號樣品（批號12120901） 6份，按\"2.3.3\"項下方法制備樣品溶液，進樣，測定，結(jié)果黃芩苷平均含量（n=6）為29.9528mg/g，RSD為0.7%。

2.3.10加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品（其批號12120901）約0.1g，置100ml量瓶中，精密添加對照品溶液（0.063236mg/ml）各50ml，按\"2.3.3\"項下方法制備樣品溶液， 依法測定。結(jié)果黃芩苷平均回收率為98.94%，RSD=1.3%。

2.3.11樣品測定 取3批樣品，按\"2.3.3\"項下方法制備樣品溶液，依法測定，結(jié)果批號為12120201、12120901、12121101的樣品中黃芩苷含量分別為76.53mg/粒、76.18mg/粒、78.98mg/粒。

3 討論

3.1薄層鑒別試驗 魚腥草為方中君藥，現(xiàn)標準僅以甲基正壬酮為對照對產(chǎn)品中魚腥草進行薄層鑒別，不能較全面的對其進行質(zhì)量控制，故參照文獻[2]，以魚腥草對照藥材進行薄層鑒別，結(jié)果該方法分離效果好，重現(xiàn)性較好，陰性對照無干擾，表明該方法專屬性強，可作為本制劑定性檢測的指標。同時參考文獻[3，4]，以板藍根、連翹對照藥材，黃芩苷、綠原酸對照品為對照進行試驗，結(jié)果板藍根、金銀花陰性對照試驗有干擾，連翹薄層鑒別因輔料基質(zhì)PEG6000干擾造成斑點成條狀，故有待于進一步地摸索。

3.2含量指標的選擇 黃芩中主要成分黃芩苷具有抗菌作用、抗病毒作用、抗炎作用和解熱作用，還具有調(diào)節(jié)機體免疫作用、抗腫瘤作用等生物活性[5]，這與復(fù)方魚腥草滴丸的臨床適用癥完全吻合。故選用黃芩苷作為本品含量測定指標具有控制意義，原標準含量測定前處理復(fù)雜，故對復(fù)方魚腥草滴丸含量測定進行修訂完善。

3.3提取條件的考察 分別對不同提取方法（超聲處理、加熱回流）、不同提取溶劑（甲醇、乙醇、70%乙醇）、不同提取時間（15、30、60min）進行考察，結(jié)果確定最佳提取工藝為70%乙醇超聲提取30min。

參考文獻：

[1]國家藥典委員會.中國藥典一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：916-917.

[2]國家藥典委員會.中國藥典第二增補本[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：143.

[3]許楊彪.復(fù)方魚腥草顆粒質(zhì)量標準研究[J].中成藥，2003，25（2）：121-123.

[4]王瑞，楊海英，楊琪偉，等.板藍根質(zhì)量標準研究[J].中草藥，2010，41（3）：478-480

[5]雷芳.黃芩苷藥理作用研究進展[J].中國藥業(yè)，2010，19（15）：87-90.

編輯/安樺