先天性腎盂輸尿管連接部梗阻患兒尿中FOS的檢測分析

摘要：目的 為了解FOS在先天性腎盂輸尿管連接部梗阻（CUPJO）患兒中的表達(dá)。方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測38例先天性腎盂輸尿管連接部梗阻患兒及22例健康兒童尿液中FOS，根據(jù)OD值計(jì)算相應(yīng)FOS濃度，采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)收集和處理，組間比較采用兩獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果 CUPJO患兒術(shù)中腎盂尿的FOS濃度為（4.37±3.01）ng/ml，術(shù)前晨尿?yàn)椋?.59±2.31）ng/ml，對照組晨尿?yàn)椋?.51±1.22）ng/ml，CUPJO患兒術(shù)中腎盂尿和術(shù)前晨尿的FOS表達(dá)都明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；結(jié)論 FOS表達(dá)水平可能成為先天性腎盂輸尿管連接部梗阻早期診斷的一個(gè)指標(biāo)，并有助于先天性腎盂積水嚴(yán)重程度的鑒別，可能為臨床選擇治療方案提供參考依據(jù)。尿液FOS作為一個(gè)有效的生物標(biāo)志物，在小兒先天性腎盂輸尿管連接部梗阻的診斷及長期隨訪中具有較好的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：先天性腎盂輸尿管連接部梗阻；FOS；兒童

先天性腎積水是一種常見的導(dǎo)致腎功能受損的小兒泌尿系統(tǒng)疾病，約占新生兒的1%[1]，主要由泌尿系統(tǒng)先天性畸形引起，其中最常見的畸形是先天性腎盂輸尿管連接部梗阻（CUPJO），占先天性腎積水的80%～90%[2]，CUPJO男女比例約為3：1，多發(fā)生于左側(cè)，多表現(xiàn)為腎臟尿液濃縮功能下降，如不能得到早期診斷和治療，腎功能將受到不可逆轉(zhuǎn)的損傷，由于CUPJO對腎臟的損害程度決定了治療方案的選擇及療效預(yù)測，因此如何判定梗阻程度及預(yù)測腎功能發(fā)展趨勢，是臨床研究的難點(diǎn)，尋找先天性腎盂輸尿管連接部梗阻早期診斷標(biāo)志物是急待解決的問題。有研究發(fā)現(xiàn)在小鼠發(fā)生腎盂輸尿管連接部梗阻3d內(nèi)，c-fos， CD44，CLU，SPP1和EGF的表達(dá)即發(fā)生了明顯的變化，尤其是c-fos的表達(dá)上調(diào)最顯著，且出現(xiàn)時(shí)間最早[3]，F(xiàn)OS是c-fos基因的表達(dá)產(chǎn)物，c-fos基因是一種細(xì)胞原癌基因，屬于轉(zhuǎn)錄因子的早期即刻基因家族，本研究旨在了解CUPJO患兒尿中FOS的表達(dá)，探索其作為先天性腎盂輸尿管連接部梗阻早期診斷指標(biāo)的可能性。

1 資料與方法

1.1一般資料 2014年3月～2016年4月在新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院小兒外科治療的腎盂輸尿管連接部梗阻患兒38例為病例組，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《實(shí)用兒科學(xué)》第七版[4]。其中男28例，女10例，年齡2個(gè)月～11歲，平均年齡（51.70±42.37）月；維吾爾族20例，漢族12例，其它民族6例。同時(shí)期在新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院兒童保健門診進(jìn)行體檢的健康兒童22例作為健康對照組，其中男14例，女8例，年齡（48.23±35.63）月。兩組的性別（χ2=0.670，P>0.05）和年齡（t=0.856，P>0.05）分布均無顯著差異，見表1。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本的采集 采集病例組與對照組兒童尿液10 ml，4000rpm 離心15min，將上清液轉(zhuǎn)移至新的15ml離心管中，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 FOS的測定 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測尿液中FOS濃度，檢測試劑盒由Elabscience公司生產(chǎn)，產(chǎn)品貨號：E-EL-H0695c，實(shí)驗(yàn)操作步驟為：①稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：加入1ml稀釋液至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，取0.5ml 10ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml稀釋液的EP管中混勻，如此反復(fù)做倍比稀釋；②加樣和溫育：按加樣方案向相應(yīng)微孔分別加100μl標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃溫育1h；③洗板：倒掉微孔板內(nèi)液體，用稀釋后的清洗緩沖液洗4次，向?yàn)V紙上印干；④酶結(jié)合物溫育：加100μl酶結(jié)合物至每一微孔，37℃溫浴30min。洗板：如前；⑤底物溫育：滴加90μl底物液至每一微孔，37℃避光溫育15min。⑥終止反應(yīng)：以與加底物液相同的速度和順序滴加50μl終止液至每一微孔；⑦測定結(jié)果：450nm處測吸光值；⑧結(jié)果計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)品10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0 ng/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，使用EXCEL2003作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品OD值計(jì)算相應(yīng)FOS含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用EXECL2003和SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)收集和處理，F(xiàn)OS濃度以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間FOS濃度的比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

先天性腎盂輸尿管連接部梗阻患兒術(shù)中腎盂尿FOS濃度為（4.37±3.01）ng/ml，術(shù)前晨尿?yàn)椋?.59±2.31）ng/ml，對照組晨尿?yàn)椋?.51±1.22）ng/ml，先天性腎盂輸尿管連接部?；純盒g(shù)中腎盂尿和術(shù)前晨尿的FOS表達(dá)都明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3 討論

對于先天性腎盂輸尿管連接部梗阻雖已有大量臨床和實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道，但其病理生理機(jī)制仍未完全闡明，現(xiàn)代影像學(xué)及腎功能測定方法的發(fā)展改變了過去\"腎臟擴(kuò)張即存在梗阻，必須手術(shù)治療\"的觀念[5]，已發(fā)現(xiàn)許多腎積水患兒未進(jìn)行手術(shù)卻長期保持良好穩(wěn)定的腎功能[6，7，8]，動物實(shí)驗(yàn)已顯示，輕度輸尿管不全梗阻雖能引起明顯腎積水，并不一定發(fā)生進(jìn)行性腎功能下降[7]，但臨床也確有不少腎盂輸尿管連接部梗阻患兒如不及時(shí)手術(shù)解除梗阻，腎功能發(fā)生進(jìn)行性損害，可見，如何精確判斷輸尿管梗阻程度及預(yù)測腎功能發(fā)展趨勢，是小兒腎積水是否進(jìn)行手術(shù)治療的關(guān)鍵所在，然而，臨床尚無可靠方法。B超、IVU、CT、MRI、放射性核腎素圖診斷輸尿管梗阻時(shí)均有一定的局限性，當(dāng)腎積水影像學(xué)發(fā)生變化時(shí)，患兒的腎功能已經(jīng)發(fā)生了一定程度的、不可逆轉(zhuǎn)的損害。因此，尋找更可靠的診斷方法和建立類似先天性腎積水的動物模型以揭示先天性腎積水的發(fā)展規(guī)律是臨床實(shí)驗(yàn)研究急待解決的問題。

先天性腎積水病腎漫性損傷及間質(zhì)纖維化中涉及一系列生物標(biāo)志物的表達(dá)改變，如內(nèi)皮素-1（ET-1）、表皮生長因子（EGF）、轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β1）、尿血管緊張素原（uAGT），等[9，10，11]，美國的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)在小鼠發(fā)生腎盂輸尿管連接部梗阻3d內(nèi)，c-fos， CD44，CLU，SPP1和EGF基因的表達(dá)即發(fā)生了明顯的變化，尤其是FOS的表達(dá)上調(diào)最顯著，且出現(xiàn)時(shí)間最早[3]，c-fos是一種細(xì)胞原癌基因，屬于轉(zhuǎn)錄因子的早期即刻基因家族，其編碼的蛋白FOS與細(xì)胞生長調(diào)控的許多因子有關(guān)，這些因子參與細(xì)胞生長、增值、分化的調(diào)控。本研究顯示，CUPJO患兒術(shù)中腎盂尿和術(shù)前晨尿的FOS表達(dá)都明顯高于對照組晨尿（P<0.05），揭示檢測患兒FOS表達(dá)水平可能成為CUPJO早期診斷的一個(gè)指標(biāo)，并有助于先天性腎盂積水嚴(yán)重程度的鑒別，可能為臨床選擇保守治療或手術(shù)治療提供參考依據(jù)。尿液FOS作為一個(gè)有效的生物標(biāo)志物，在小兒先天性腎盂輸尿管連接部梗阻的診斷及長期隨訪中具有較好的應(yīng)用前景。

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編輯/趙恒德