G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)在診斷AECOPD患者肺真菌感染的應(yīng)用

隨著人口老齡化的加劇，抗生素的使用率增加，肺部感染的病原微生物正發(fā)生著變化，細(xì)菌，病毒，支原體，衣原體和真菌等不同病原致病后應(yīng)對(duì)措施不同，缺少有效的早期診斷手段，真菌感染的病死率也居高不下。如何減少肺部感染的發(fā)生率和致死率，是當(dāng)下值得重視和研究的臨床問題[1]。我科自2013年1月～2015年6月對(duì)慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）合并侵襲性肺真菌感染（IPFI）的高危79例患者進(jìn)行了真菌1，3-β-D-葡聚糖（G試驗(yàn)）和曲霉半乳甘露聚糖檢測(cè)（GM試驗(yàn)），旨在早期診斷。

1資料與方法

1.1一般資料 本組自2013年1月～2015年6月因AECOPD 入院，經(jīng)規(guī)范廣譜抗生素治療5 d 后，喘息和氣促不能緩解，體溫超過38℃或起初下降后再復(fù)升，遂行血漿G 試驗(yàn)和血清GM 試驗(yàn)的患者共79 例。根據(jù)我國血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)與治療原則（第四次修訂），結(jié)合抗真菌感染治療效果，本組中，臨床確診侵襲性肺真菌感染 45 例、擬診侵襲性肺真菌感染6 例，非侵襲性肺真菌感染 28 例。

1.2方法

1.2.1血漿G 試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)原理為根據(jù)檢測(cè)血漿吸光度變化對(duì)真菌1，3-β-D-葡聚糖濃度進(jìn)行定量，具體步驟如下：取待測(cè)血漿0.2 ml直接加入酶反應(yīng)主劑中，溶解后使用微量加樣器轉(zhuǎn)移至9 mm ×65 mm 標(biāo)準(zhǔn)無熱原平底試管中（不要產(chǎn)生氣泡），插入MB-80 微生物快速動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)中進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后檢測(cè)系統(tǒng)自動(dòng)計(jì)算出待測(cè)血清中1，3-β-D 葡聚糖含量，以>10 pg/ml視為結(jié)果陽性。

1.2.2血清GM值檢測(cè) 采用PlateliaAspergillus試劑盒（法國公司），具體方法為：血清樣本經(jīng)含乙二胺四乙酸（EDTA）的處理液加熱處理，經(jīng)處理的血清樣本與探測(cè)抗體一起加入到包被有單抗的微孔內(nèi)，經(jīng)過孵育，當(dāng)有特異性抗原存在時(shí)形成了單抗一半乳甘露聚糖一單抗/過氧化物酶復(fù)合物。經(jīng)沖洗去掉未結(jié)合物質(zhì)，加入顯色溶液顯色至反應(yīng)停止后即可在450 nm/630 nm處讀取吸光度（A）值?；颊哐宓腉M值計(jì)算公式為：A指數(shù)（I）=A測(cè)定/A標(biāo)準(zhǔn)血清，GM試驗(yàn)陽性定義為連續(xù)2次不同時(shí)點(diǎn)檢測(cè)A值>0.5或單次>0.7。

1.2.3 G 試驗(yàn)與GM 試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè) 聯(lián)合檢測(cè)的結(jié)果判斷方法有兩種，分別為聯(lián)合一：結(jié)果陽性是指G（+）GM（+），G（+）GM（-），G（-）GM（+）；結(jié)果陰性是指G（-）GM（-）。聯(lián)合二：結(jié)果陽性是指G（+）GM（+）；結(jié)果陰性是指G（+）GM（-），G（-）GM（+），G（-）GM（-）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以臨床確診IPFI 為真陽性，以非IPFI 為真陰性作四格表分析評(píng)價(jià)G 試驗(yàn)、GM 試驗(yàn)與聯(lián)合檢測(cè)診斷IPFI 的價(jià)值。采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件。

2結(jié)果

2.1 G試驗(yàn)結(jié)果 79 例患者中G 試驗(yàn)陽性45 例，陰性34 例，陽性率為57.0%。以臨床確診IPFI 為真陽性共45 例，排除IPFI 診斷為真陰性共28 例，行四格表分析。G 試驗(yàn)敏感度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值（PPV）及陰性預(yù)測(cè)值（NPV）見表1。

2.2 GM試驗(yàn)結(jié)果 79 例患者中GM 試驗(yàn)陽性13 例，陰性66 例，陽性率16.5%。以臨床確診IPFI 為真陽性共45 例，排除IPFI 診斷為真陰性共28 例，行四格表分析。GM 試驗(yàn)敏感度、特異度、PPV 和NPV 見表2。

2.3 G試驗(yàn)和GM 試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果 臨床確診IPFI 患者45 例，非IPFI 患者28 例。根據(jù)G 試驗(yàn)與GM 試驗(yàn)結(jié)果，聯(lián)合一，即只要有一種結(jié)果為陽性則聯(lián)合檢測(cè)陽性，余為聯(lián)合檢測(cè)陰性，其敏感度、特異度、PPV、NPV 見表3；聯(lián)合二，即兩種結(jié)果均為陽性則聯(lián)合檢測(cè)陽性，余為聯(lián)合檢測(cè)陰性，其敏感度、特異度、PPV、NPV 見表3。

3討論

侵襲性肺真菌感染的治療依賴早期的診斷和用藥，但臨床上診斷系統(tǒng)性曲霉感染經(jīng)常遇到困難，病情缺乏特異的臨床表現(xiàn)，很多患者死亡后經(jīng)尸檢才能發(fā)現(xiàn)感染了曲霉。真菌感染機(jī)體的過程中，其菌體成分作為抗原釋放于體液中并刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體，因此對(duì)抗原和抗體的檢測(cè)有助于診斷。真菌1，3-β-D-葡聚糖是酵母和絲狀真菌細(xì)胞壁的多聚糖成分，在原核生物、病毒和人體細(xì)胞內(nèi)均不存在。因此，血液及無菌體液中檢出1，3-β-D-葡聚糖在很大程度上可以視為IPFI的標(biāo)志，如念珠菌、曲霉、鐮刀霉、酵母和絲孢酵母感染等。該試驗(yàn)在定植的念珠菌中結(jié)果顯示為陰性，而接合菌（毛霉）、隱球菌屬的感染由于其細(xì)胞壁不能釋放這種多聚糖往往在G試驗(yàn)中也顯示陰性。

半乳甘露聚糖（GM）是曲霉細(xì)胞壁上的多聚抗原，一般在曲霉感染者出現(xiàn)臨床癥狀和影像學(xué)檢查異常前數(shù)天，其體內(nèi)循環(huán)中GM即可呈陽性表達(dá)，其靈敏度和特異度均可達(dá)到80%以上。GM試驗(yàn)和G試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)能提高曲霉檢出的陽性率。作為診斷IFI的新型無創(chuàng)檢測(cè)手段，G試驗(yàn)具有靈敏度和特異度高的優(yōu)點(diǎn)，既能作為高度疑診。

參考文獻(xiàn)：

[1]劉代紅.血清半乳甘露聚糖檢測(cè)對(duì)患者AECOPD的診斷價(jià)值[J].中華呼吸雜志，2013；28（3）：83-86.

編輯/孫杰