微顆粒在臨床疾病中的研究進展

微顆粒是（Microparticles， MPs）是細胞遇到缺氧、損傷、壓力等刺激時產(chǎn)生并釋放至細胞外間隙的一種異質(zhì)性質(zhì)膜超微結(jié)構(gòu)，直徑范圍在100～1000 nm。MPs可攜帶多種信號與其他細胞相互作用，并調(diào)節(jié)靶細胞的功能[1]，越來越多的研究表明MPs不僅是疾病發(fā)生的重要原因，同時也是機體發(fā)生病理變化的結(jié)果，因此有望成為臨床診斷疾病的生物標記或治療疾病的藥物靶點，有著巨大的研究前景。本文就MPs與臨床有關(guān)的研究進展進行綜述。

1 MPs與臨床疾病

1.1 MPs與心血管疾病 目前已知多種細胞來源的MPs都能攜帶組織因子（Tissue factor， TF）[2]，具有很強的促進凝血的作用。有研究發(fā)現(xiàn)單核細胞來源的MPs表達具有功能活性的TF1，這種MPs可在血栓形成的部位不斷累積，使凝血進一步惡化[3]。血小板來源的MPs和紅細胞來源的MPs可以通過凝血因子XII依賴的內(nèi)源性途徑激發(fā)并促進凝血酶產(chǎn)生[4]，血小板來源的MPs還可以外顯磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine，PS）及其他一些帶有負電荷的磷脂，為活化凝血因子提供結(jié)合位點，誘導(dǎo)凝血并參與血栓形成[5]。Mibank E等人在動脈粥樣硬化小鼠實驗中發(fā)現(xiàn)，心肌缺血損傷后，其粥樣斑塊中含有大量巨噬細胞，這些細胞來源的MPs攜帶腫瘤壞死因子（Tumour Necrosis Factor alpha，TNF-α）使心肌細胞肌節(jié)振幅縮短，動力減弱，說明MPs在心肌梗死的炎癥信號通路中起推動作用[6]。另一方面，MPs也能通過調(diào)節(jié)抗凝劑或溶解纖維蛋白發(fā)揮抗凝作用，促進活化的抗凝劑C蛋白和S蛋白調(diào)節(jié)凝血[7]，MPs還有助于纖維蛋白溶解酶的產(chǎn)生，后者促進血凝塊的降解[8]。因此，MPs具有促凝和抗凝雙方面的作用，任何一方的失衡都會造成病理結(jié)果。

1.2 MPs與感染及炎癥反應(yīng) 敗血癥誘導(dǎo)的微血管損傷會導(dǎo)致循環(huán)系統(tǒng)中MPs增多，由于MPs在血栓形成、炎癥反應(yīng)及血管生成中所具有的多種作用，因此也極有可能是導(dǎo)致敗血癥及感染性休克的主要原因之一[9，10]。MPs表面的TF可能是引發(fā)敗血癥的彌散性血管內(nèi)凝血（disseminated intravascular coagulopathy，DIC）的起始因素，有研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細胞來源的MPs在DIC發(fā)生早期，其CD105表達增多，CD31表達降低，兩者具有顯著的直接聯(lián)系[11]。Zafrani等人的研究發(fā)現(xiàn)與普通實驗小鼠相比，鈣蛋白酶抑制劑的高表達的轉(zhuǎn)基因小鼠，其循環(huán)系統(tǒng)中MPs數(shù)量明顯減少，發(fā)生炎癥、DIC及器官損傷的幾率也大大降低，其存活率增高。但將發(fā)生敗血癥的普通小鼠體內(nèi)的MPs注入這種轉(zhuǎn)基因小鼠，則會導(dǎo)致后者發(fā)生凝血功能紊亂，死亡率增加[12]，說明MPs在敗血癥發(fā)生過程中直接參與鈣蛋白酶介導(dǎo)的機體損傷。此外，血小板來源的MPs也能激發(fā)產(chǎn)生炎癥因子，例如白介素1（Interleukin 1，IL-1）、IL-6、IL-8和TNF-α，這些細胞因子反過來又會進一步激活炎癥，使細胞以產(chǎn)生更多的MPs，從而加重炎癥反應(yīng)[13]。

1.3 MPs與腫瘤 腫瘤細胞產(chǎn)生的MPs可以攜帶腫瘤細胞特異性的分子標記，例如內(nèi)皮細胞粘附分子，人表皮生長因子受體2，趨化因子受體6，細胞外金屬蛋白，血管內(nèi)皮生長因子等[14，15]。研究發(fā)現(xiàn)原癌蛋白和趨化因子可以通過腫瘤細胞來源的MPs在細胞之間傳遞，說明腫瘤細胞的一些侵襲因子可以在腫瘤細胞內(nèi)部水平移動，使所有腫瘤細胞都具有高度侵襲性[16]；還有研究發(fā)現(xiàn)當正常細胞暴露在攜帶有纖連蛋白和組織型谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶的腫瘤細胞來源的MPs中時，正常細胞也會獲得該MPs具有的表型[18]，說明腫瘤細胞來源的MPs可能是導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移的重要原因。

除了腫瘤細胞來源的MPs，其他細胞產(chǎn)生的MPs也在腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)歸中起作用。血漿MPs水平增高的前列腺癌患者比MPs正常的患者更容易出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移，其預(yù)后也更為不良[19]，然而其中的機制目前還不清楚，并且能夠用于指導(dǎo)臨床診斷以及對預(yù)后具有參考價值的MPs種類很少[20]，研究表明MPs可能比腫瘤細胞攜帶了更高濃度的特異性miRNAs，這種非基因成分的轉(zhuǎn)移特征也為臨床解決腫瘤耐藥提供了潛在的治療方法。

2 MPs臨床研究面臨的困難

2.1樣本處理與制備 生物體液成分復(fù)雜，其MPs的表達也受到多種因素影響。例如提取血液中的MPs，抽取最初的幾毫升血樣的操作規(guī)范化對于獲取MPs非常重要。應(yīng)避免選擇肝素這種更易引發(fā)溶血的抗凝劑[21]，避免攪拌和長期儲存，防止人為造成MPs數(shù)量增加。此外，血液粘稠度，比如纖維蛋白原，白蛋白的含量情況，分離過程中使用的離心力等等都會影響最后的MPs分析。而目前各實驗室提取的MPs純度不高，也有待技術(shù)上的改進。

2.2 MPs的計數(shù)與分類標準 目前國際上對MPs的計數(shù)尚未達到標準化，只是對提取血液中MPs有比較公認的方法：聯(lián)合應(yīng)用梯度離心，流式分析和表型分析法；一些精確檢測MPs表型的方法，比如電子顯微鏡，原子力顯微鏡和動態(tài)光散射，以及一些新興的技術(shù)，比如納米顆粒追蹤技術(shù)[22]雖然能使MPs可視化，但還無法替代流式技術(shù)在臨床得到廣泛應(yīng)用。此外，我們還需要明確如何將MPs從不同細胞來源的，不同大小微囊泡中分離出來并得到準確檢測，并建立起不同微囊泡的分類標準。

3展望

隨著對MPs的研究不斷深入，MPs在體內(nèi)的生理病理功能比我們預(yù)想的復(fù)雜得多，其對機體有利還是有害與它們所處的微環(huán)境有關(guān)。鑒于MPs的多種生物作用及其巨大的臨床診治潛力，希望在不久的將來，能有更先進的技術(shù)使MPs研究標準化并將其應(yīng)用推及臨床，為人類造福。

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編輯/丁一