125I-OxLDL-Ab在正常小鼠及動脈粥樣硬化動物模型體內(nèi)的生物分布

劉子華，樊彩云，李鳳林，鄧新榮，徐燕華，羅志福

1.中國原子能科學(xué)研究院 同位素研究所，北京 102413；2.成都華神生物技術(shù)有限責(zé)任公司，四川 成都 610225

125I-OxLDL-Ab在正常小鼠及動脈粥樣硬化動物模型體內(nèi)的生物分布

劉子華1，樊彩云1，李鳳林1，鄧新榮1，徐燕華2，羅志福1

1.中國原子能科學(xué)研究院 同位素研究所，北京 102413；2.成都華神生物技術(shù)有限責(zé)任公司，四川 成都 610225

分別采用高效液相色譜法、紫外分光光度法對OxLDL-Ab進行定性、定量分析，評價125I-OxLDL-Ab在正常動物和動脈粥樣硬化模型動物的體內(nèi)分布。正常動物采用昆明小鼠，模型采用載脂蛋白E基因敲除的小鼠(apolipoprotein E-deficient mice, ApoE-/-)。高效液相色譜條件為：磷酸緩沖液(PB, 0.2 mol/L, pH=7.4)為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長220 nm；紫外分光光度法測得蛋白濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=0.664 5x-0.008 3，r2=0.999 7。125I-OxLDL-Ab在正常小鼠體內(nèi)分布實驗結(jié)果表明：除甲狀腺外，各器官的放射性攝取隨時間延長而減少，無明顯濃集；在注射125I-OxLDL-Ab后1 d各器官代謝消除超過2/3， 7 d后血液中完全清除。125I-OxLDL-Ab在ApoE-/-鼠體內(nèi)的分布實驗中采用w=2%的KI溶液封閉了甲狀腺，消除了甲狀腺高攝取的影響；靶器官肺有較高放射性攝取，且在注射后4～8 h顯示出放射性濃集；除血外，其它各器官的靶器官/非靶器官的放射性攝取比值(T/NT)均大于1，其中T/Mu(肌肉)>8，顯示出125I-OxLDL-Ab對靶器官有一定的選擇性。標(biāo)記抗體的體內(nèi)靶向性是顯像研究中至關(guān)重要的一環(huán)，要進一步用于動脈粥樣硬化早期顯像診斷，還需進一步提高靶器官/非靶器官的放射性攝取比值，提高其在體內(nèi)與其抗原的親和性。

氧化低密度脂蛋白單克隆抗體；動脈粥樣硬化；125I；ApoE-/-小鼠；生物分布

動脈粥樣化屬于慢性炎癥疾病，發(fā)病機制十分復(fù)雜，與基因相關(guān)[1]。目前的檢測方法很多，各有利弊[2-3]，多數(shù)診斷方法與動脈粥樣化的診斷無直接對應(yīng)性。介入性診斷結(jié)果準(zhǔn)確，檢查風(fēng)險大，費用高。檢查現(xiàn)狀主要是根據(jù)病人的典型病史、臨床癥狀，并結(jié)合儀器進行生化檢查?？贵w因為其高特異性，廣泛地應(yīng)用到疾病的靶向診治中。放射性核素因其檢查的高靈敏度及無創(chuàng)的診療優(yōu)點[4]，越來越多應(yīng)用到疾病的檢查中；放射性核素標(biāo)記抗體同時具備了靶向性好、靈敏度高、檢查方便的特點，在臨床上應(yīng)用前景廣闊。用放射性核素標(biāo)記抗體對動脈粥樣化進行檢查的研究為其早期診斷方案提供了一種新途徑[5]。

目前學(xué)術(shù)界公認氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, OxLDL)在動脈粥樣硬化的形成與發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用[6]。OxLDL-Ab是一類以O(shè)xLDL作為抗原誘發(fā)自身機體免疫應(yīng)答產(chǎn)生的抗體，針對不同位點的抗原決定簇產(chǎn)生的OxLDL-Ab也不同[7]。OxLDL-Ab與動脈粥樣化關(guān)系的研究表明，患者體內(nèi)OxLDL-Ab滴度與OxLDL的比值越高，動脈粥樣硬化越趨于穩(wěn)定，心腦血管疾病發(fā)生的危險性降低[8]，這可能與它對OxLDL的特異親和性相關(guān)。動脈粥樣硬化發(fā)病早期病灶處有OxLDL異常濃集，可利用OxLDL-Ab將放射性核素載帶到早期病灶-靶點，通過放射性核素示蹤技術(shù)獲得該疾病因子體內(nèi)分布情況，獲取病變部位和病變程度的信息，評價進行放射性顯像診斷動脈粥樣硬化的可能性。

放射性核素123I半衰期13.27 h，發(fā)射158.97 keV(83.3%)的γ射線，可與蛋白質(zhì)等生物分子的酪氨酸殘基發(fā)生取代反應(yīng)而被鍵合到分子中，是標(biāo)記抗體、進行體內(nèi)顯像的最佳核素之一，但因其需加速器制備，價格昂貴且半衰期短，往往用其同位素125I代替進行實驗研究。125I在化學(xué)性質(zhì)上與123I幾乎相同[9]，發(fā)射能量為27.472 keV的X射線和35.492 keV的γ射線，衰變方式是軌道電子俘獲，半衰期59.407 d，對多數(shù)蛋白質(zhì)的免疫活性輻射損傷影響小，標(biāo)記物穩(wěn)定性好。

本工作對制備的125I-OxLDL-Ab[10]進行動物體內(nèi)研究，所用OxLDL-Ab[11]分子量為900 kDa，是IgM型免疫球蛋白，以五聚體存在，由二硫鍵連接，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，抗體特異性高，與其抗原OxLDL的親和常數(shù)高達109L/mol，在體外的穩(wěn)定性和活性極佳。用125I核素標(biāo)記IgM型OxLDL-Ab的研究在國內(nèi)尚未見其它報道，本工作擬在此基礎(chǔ)上對制備的125I-OxLDL-Ab進行定性、定量分析，評價125I-OxLDL-Ab在正常動物和模型動物ApoE-/-鼠(載脂蛋白E基因敲除的小鼠)[12-13]體內(nèi)的分布，為123I-OxLDL-Ab進一步用于動脈粥樣硬化早期顯像診斷提供研究基礎(chǔ)。

1 實驗部分

1.1 試劑和儀器

OxLDL-Ab，由成都華神生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供；1，3，4，6-四氯-3α，6α-二苯甘脲，Sigma公司；Na125I溶液，美國Perkin Elmer Life Science公司；牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)，北京國藥有限責(zé)任公司；Sephadex G-25 M凝膠過濾預(yù)裝柱(Pre-packed disposable PD-10, PD-10)，瑞典Amersham Bioscience公司；UFC510096型超濾管，美國Millipore公司；Zorbax-GF450凝膠過濾色譜柱，美國Agilent公司。昆明小鼠：健康雄性，體重20～22 g，4～5周齡，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物研究所提供(清潔級)。載脂蛋白E基因敲除的小鼠(apolipoprotein E-deficient mice, ApoE-/-)：雄性，體重18～22 g，4月齡，具有動脈粥樣硬化斑塊，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部動物實驗中心提供(SPF級)。

Miniscan放射性薄層掃描儀，美國Bioscan公司；HPLC 1200型高效液相色譜儀，美國Agilent 公司；UV2450型紫外可見分光光度計，日本Shimadzu公司；RM905a活度計，中國計量科學(xué)研究院；LB-2722-2放射性色層掃描儀，德國Berthold公司；211型數(shù)字型酸度計，美國Orion research 公司；Research單道可調(diào)移液器，美國Eppendorf公司；AGBP211D型電子天平，精度為0.000 1，德國Sartorius公司。

1.2 OxLDL-Ab 的分析

1.2.1 OxLDL-Ab的純度分析 采用HPLC法對生物樣品OxLDL-Ab進行分析。將樣品置于UFC510096型超濾管中，以3 000 r/min離心3 min，將濃縮后的抗體轉(zhuǎn)移于無菌樣品管中保存，待測。色譜條件：采用磷酸緩沖液(PB, 0.2 mol/L, pH=7.4)為流動相，流速1.0 mL/min；檢測波長220 nm，檢測時間30 min；進樣量20 μL，平行實驗3次。

1.2.2 OxLDL-Ab的濃度分析 采用紫外分光光度法測OxLDL-Ab樣品的濃度：準(zhǔn)確稱取牛血清白蛋白0.25 g，用0.9%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))的氯化鈉溶液稀釋到250 mL，精確稀釋成1 g/L標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。取9支試管編號，按表1配制系列溶液，混勻后分別測定各溶液在280 nm的吸光度，繪制吸光度-蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線；取濃縮后的OxLDL-Ab樣品液約4 mL，測其280 nm處的紫外吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算抗體準(zhǔn)確濃度。

1.3125I-OxLDL-Ab的制備

采用Iodogen法標(biāo)記抗體，取含40 μg 1，3，4，6-四氯-3α，6α-二苯甘脲的Iodogen管，依次將OxLDL-Ab、適量的PB(pH=7.4，0.2 mol/L)、Na125I(1.3×1010kBq/L)溶液置于Iodogen管進行取代反應(yīng)，從反應(yīng)管中移出反應(yīng)液，靜置數(shù)分鐘待活化的碘穩(wěn)定，采用凝膠過濾色譜法進行分離純化，紙色譜法測定標(biāo)記率和放化純，采用新華1號層析紙，展開劑為80%甲醇-水體系，用放射性薄層掃描儀檢測。

表1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

Table 1 Preparation of standard solution

No.V(標(biāo)準(zhǔn)蛋白液)/mLV(NaCl)/mLρ/(g·L-1)10.04.0020.53.50.12531.03.00.25041.52.50.37552.02.00.50062.51.50.62573.01.00.75083.50.50.87594.00.01.000

1.4125I-OxLDL-Ab在動物體內(nèi)的分布

1.4.1125I-OxLDL-Ab在正常動物體內(nèi)的分布 取正常昆明小鼠28只，隨機分為7組，每組4只，每只自尾靜脈注射100 μL125I-OxLDL-Ab(370 kBq, 2.5×1010MBq/mol)，記錄注射時間，分別于注射后4 h、8 h 、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d斷頸處死動物，取血、心、肝、脾、肺、腎、甲狀腺、血管(取左冠脈5～10 mm長)等主要臟器，稱重，測量放射性計數(shù)，經(jīng)衰變校正后計算每克組織百分注射劑量率(%ID/g )。

1.4.2125I-OxLDL-Ab在模型動物體內(nèi)的分布 實驗前2天，給所有的實驗小鼠飲用w=2%的碘化鉀水，封閉甲狀腺。實驗時，取ApoE-/-動脈粥樣硬化小鼠21只，隨機分為7組，每組3只，每只自尾靜脈注射100 μL125I-OxLDL-Ab溶液(370 kBq，2.5×1010MBq/mol)，在不同時間處死動物并測量血、心、肝、脾、肺、腎、甲狀腺、血管等臟器的放射性計數(shù)，計算每克組織百分注射劑量率(%ID/g)，實驗方法同正常動物。

2 結(jié)果與討論

2.1 OxLDL-Ab 的分析

2.1.1 OxLDL-Ab的純度分析 樣品的HPLC圖示于圖1。由圖1可知：OxLDL-Ab有兩個主要的色譜峰，第一峰保留時間為7.555 min，經(jīng)確定為OxLDL-Ab的主峰；第二峰保留時間為11.593 min，為流動相NaH2PO4的色譜峰。流動相附近有少量雜峰，因為本實驗是按分子量大小順序出峰，可初步肯定雜質(zhì)分子量很小，接近流動相，在標(biāo)記制備中會被PD-10柱分離，不會對標(biāo)記抗體產(chǎn)生影響，該批抗體純度高。

圖1 樣品的HPLC圖Fig.1 HPLC of the sample

2.1.2 OxLDL-Ab的濃度分析 紫外分光光度法繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線示于圖2。由圖2可知，標(biāo)準(zhǔn)蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=0.664 5x-0.008 3，r2=0.999 7，計算得樣品的質(zhì)量濃度為0.432 g/L。

2.2125I-OxLDL-Ab的制備及評價

125I-OxLDL-Ab的標(biāo)記率和放化純度示于圖3。如圖3可知，制備的125I-OxLDL-Ab標(biāo)記率為75%，放化純度為98%，親和常數(shù)Ka=(1.06±0.25)×10-10，該純度可以進行體內(nèi)分布研究。

2.3125I-OxLDL-Ab在動物體內(nèi)的分布

2.3.1125I-OxLDL-Ab在正常動物體內(nèi)的分布125I-OxLDL-Ab在正常動物體內(nèi)的分布結(jié)果列入表2。由表2可知：注射后4 h甲狀腺125I-OxLDL-Ab的每克組織百分注射劑量率最高為(19.280±2.914)%ID/g，且在7 d后仍有(7.215±5.818)%ID/g的高攝取，說明125I-OxLDL-Ab在體內(nèi)的脫碘嚴(yán)重，甲狀腺一直有很高的125I攝取，在以后的體內(nèi)分布研究時應(yīng)消除甲狀腺高吸收的影響；125I-OxLDL-Ab的胃放射性攝取在4 h時為(15.686±2.962)%ID/g，8 h時降為(3.314±1.186)%ID/g；血液放射性攝取在4 h時為(9.611±1.295)%ID/g，1 d后僅為(2.908±0.379)%ID/g，超過三分之二的125I-OxLDL-Ab被代謝清除，到第7 d時血中計數(shù)很低，測得值為(0.062±0.013)%ID/g，說明125I-OxLDL-Ab已基本清除；除甲狀腺外，各器官的放射性攝取隨時間延長而減少，無明顯濃集。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.2 Calibration curve

2.3.2125I-OxLDL-Ab在ApoE-/-鼠體內(nèi)的分布125I-OxLDL-Ab在ApoE-/-鼠體內(nèi)的分布結(jié)果列入表3。由表3可知：注射4 h后，甲狀腺中125I-OxLDL-Ab的放射性攝取為(2.080±0.111)%ID/g，且隨時間延長而降低，與其它組織器官無顯著差異，說明封閉甲狀腺避免了甲狀腺對放射性碘離子的大量吸收，使體內(nèi)的碘離子濃度增大，這可能會抑制125I-OxLDL-Ab脫碘的發(fā)生；血液中125I-OxLDL-Ab的放射性攝取在4 h時為(8.001±1.211)%ID/g，與正常動物相似，但1 d后血中放射性攝取率仍有(4.609±1.183)%ID/g，為4 h時的57%，正常動物注射后24 h時放射性攝取率降低了70%，提示模型動物血液OxLDL滴度高，OxLDL與125I-OxLDL-Ab發(fā)生分子結(jié)合而使其代謝清除變慢；注射1 d后標(biāo)記抗體在胃中放射性攝取仍有(2.757±0.488)%ID/g ，相對于注射后降低不明顯，可能跟標(biāo)記抗體在體內(nèi)的代謝途徑有關(guān)，如標(biāo)記抗體在體內(nèi)脫碘、再分布等影響。而靶器官肺的放射性攝取在注射125I-OxLDL-Ab 后4～8 h增大，在4 h時為(6.014±1.101)%ID/g，比血放射性攝取低，8 h時為(8.936±2.294)%ID/g，高于血中的值，出現(xiàn)放射性濃集，1 d后隨時間延長而攝取量降低，但僅次于血液含量，提示說明肺部毛細血管叢病變，有一定的靶向性；血管部位在4～8 h也有放射性濃集現(xiàn)象，由(4.098±0.731)%ID/g增大到(4.347±0.674)%ID/g；肝、腎等重要代謝器官125I-OxLDL-Ab放射性攝取低于血和肺；其它組織器官的值均隨時間增加而降低，除靶器官肺和甲狀腺外，注射后各時間點125I-OxLDL-Ab放射性攝取與正常動物體內(nèi)分布結(jié)果無明顯差異，考慮為正常代謝。

圖3 125I-OxLDL-Ab的標(biāo)記率(a)和放化純度(b)Fig.3 Labeling yield(a) and radiochemical purity(b) of 125I-OxLDL-Ab

Table 2 Biodistribution of125I-OxLDL-Ab of normal miceinvivo

組織125I-OxLDL-Ab的每克組織百分注射劑量率/(%ID·g-1)4h8h1d2d3d5d7d血9.611±1.2956.209±0.7332.908±0.3791.177±0.1450.525±0.5250.133±0.0420.062±0.013心2.232±0.5071.142±0.2160.516±0.0860.225±0.0290.111±0.0100.032±0.0060.017±0.003肝臟2.802±0.4411.572±0.3630.765±0.1050.363±0.0620.256±0.0130.099±0.0310.059±0.013脾2.675±0.6791.079±0.2250.511±0.0730.220±0.0400.139±0.0270.051±0.0170.027±0.008肺3.529±0.5541.883±0.4470.867±0.1640.365±0.0260.282±0.1530.063±0.0180.032±0.008腎3.190±0.5721.879±0.4140.849±0.1470.388±0.0590.211±0.0180.078±0.0170.062±0.018胃15.686±2.9623.314±1.1860.631±0.1080.197±0.0440.216±0.0360.061±0.0120.030±0.007腸2.229±0.3421.056±0.1960.327±0.0630.130±0.0150.087±0.0100.070±0.0840.014±0.002肌肉0.876±0.1020.631±0.1580.239±0.0360.357±0.5350.097±0.0190.036±0.0340.011±0.009血管4.031±0.9092.262±0.4261.090±0.2340.436±0.1350.277±0.0770.060±0.0330.042±0.020骨1.943±0.1711.120±0.2560.475±0.0630.248±0.0580.161±0.0250.089±0.0590.044±0.007甲狀腺19.280±2.914-37.272±10.94757.942±40.050-20.321±7.2837.215±5.818

注：n=4

表3125I-OxLDL-Ab在模型動物體內(nèi)的分布

Table 3 Biodistribution of125I-OxLDL-Ab of atherosclerosis miceinvivo

組織125I-OxLDL-Ab的每克組織百分注射劑量率/(%ID·g-1)4h8h1d2d3d5d7d血8.001±1.2116.966±1.1064.609±1.1831.091±0.2640.504±0.0750.105±0.0340.085±0.025心1.617±0.2561.258±0.3000.793±0.2130.166±0.0490.093±0.0160.019±0.0050.018±0.005肝2.688±0.5102.800±0.6851.305±0.3720.323±0.0120.144±0.0290.065±0.0080.062±0.018脾2.808±0.3903.260±0.9131.447±0.2210.266±0.0590.124±0.0180.043±0.0040.039±0.010肺6.014±1.1018.936±2.2943.876±0.6200.509±0.1190.277±0.0760.072±0.0160.057±0.014腎3.582±0.5254.381±1.3031.837±0.4810.360±0.0850.177±0.0250.055±0.0100.050±0.012胃2.243±0.4202.794±0.6842.757±0.4880.195±0.0550.100±0.0270.015±0.0030.016±0.005腸1.945±0.2412.154±0.5551.250±0.2510.150±0.0450.057±0.0150.012±0.0020.010±0.005肌肉0.581±0.0400.590±0.1200.436±0.0900.055±0.0140.030±0.0040.008±0.0010.008±0.001血管4.098±0.7314.347±0.6741.866±0.5430.395±0.1120.198±0.0460.042±0.0080.041±0.011骨1.713±0.3051.840±0.3080.762±0.1910.130±0.0310.059±0.0150.016±0.0050.015±0.003甲狀腺2.080±0.1111.804±0.3661.185±0.1540.230±0.0650.093±0.0130.120±0.0270.076±0.016

注：n=3

根據(jù)125I-OxLDL-Ab 在ApoE-/-鼠體內(nèi)分布數(shù)據(jù)，做靶器官與非靶器官放射性攝取比值(T/NT)的柱形圖，如圖4所示。由圖4可知：靶器官肺與血的T/NT比值小于1，不同時間點125I-OxLDL-Ab的T/Bl(血)含量比為0.462～1.300，提示動物模型血液中OxLDL抗原含量高，在下一步的斑塊顯像研究中可能會有內(nèi)源性的干擾，需采用措施排除血液中OxLDL的干擾；除血外，肺與其它器官的T/NT比值均大于1.0，其中肝、腎的T/NT較低， 3 d內(nèi)T/NT比值在1.344～3.024，這表明125I-OxLDL-Ab在靶器官肺中的靶向性較低，對以后的顯像研究可能會產(chǎn)生干擾；而靶器官與肌肉的T/Mu(肌肉)值較高，為8.149～15.370，靶向性明顯。

Bl——血，He——心，Li——肝，Sp——脾，Ve——血管，Ki——腎，St——胃，In——腸，Mu——肌肉，Bo——大腿骨，Th——甲狀腺□——4 h，■——8 h，——1 d，——2 d，——3 d，——5 d，——7 d圖4 125I-OxLDL-Ab在ApoE-/-鼠體內(nèi)的主要器官T/NT比值Fig.4 Target/nontarget ratio of 125I-OxLDL-Ab of main organs of ApoE-/- mice

2.3.3 討論 本實驗所采用動物模型為載脂蛋白E基因缺陷的鼠，為高脂飲食型模型，屬全身性動脈粥樣硬化模型，因此對動脈粥樣硬化易發(fā)部位冠脈血管也取樣研究，實驗發(fā)現(xiàn)冠脈部位沒有明顯斑塊。對比125I-OxLDL-Ab在正常動物和模型動物的體內(nèi)分布數(shù)據(jù)可知，肺在注射8 h時放射性濃集明顯(正常(1.883±0.447)%ID/g，模型(8.936±2.294)%ID/g)，血管在注射8 h時有一定放射性濃集(正常(2.262±0.426)%ID/g，模型(4.347±0.674)%ID/g)。實驗數(shù)據(jù)顯示對于本批實驗?zāi)Ｐ蛠碚f，肺、血管均為125I-OxLDL-Ab的靶部位。125I-OxLDL-Ab與其抗原OxLDL在體外的活性好，在其模型動物分布中，肺、血管等在4～8 h時有放射性濃集現(xiàn)象，顯示出125I-OxLDL-Ab在體內(nèi)的靶向性，為其作為粥樣硬化顯像藥物的研究起到積極作用。

3 結(jié) 論

采用儀器測定了OxLDL-Ab的純度和濃度，保證了原料的質(zhì)量。制備的125I-OxLDL-Ab在動脈粥樣硬化動物模型的靶器官——肺(注射后4～8 h)有放射性濃集，可進一步進行體內(nèi)靶向性研究，不排除其研發(fā)為動脈粥樣硬化放射性顯像診斷劑的可能性。

致謝：感謝韓世泉、梁端鵬、葉肇云、柳銀黎、楊超一、馮婷婷等科研人員的幫助。

[1] Hansson G K. Inflammation, atherosclerosis, and coronary artery disease[J]. N Engl J Med, 2005, 352(16): 1685-1695.

[2] 張春東，勇強，李治安.動脈硬化的影像學(xué)檢測方法[J].心肺血管病雜志，2008,27(5):313-316.

[3] Davies J R, Rudd J H F, Weissberg P L, et al. Radionuclide imaging for the detection of inflammation in vulnerable plaques[J]. J Am Coll Cardio, 2006, 47(8 Suppl): 57-68.

[4] Zahi A F, Valentin F, Konstantin N, et al. Computed tomography and magnetic resonance imaging for noninvasive coronary angiography and plaque imaging current and potential future concepts[J]. Circulation, 2002, 106: 2026-2034.

[5] 李學(xué)斌,郭繼鴻.21世紀(jì)心血管疾病的診治展望[J].新醫(yī)學(xué)，2000,31(3)：135-137.

[6] Boullier A, Bird D A, Chang M K, et al. Scavenger receptors, oxidized LDL and atherosclerosis[J]. Ann Cad Sci, 2001, 947: 214-222.

[7] Norata G D, Tonti L, Roma P, et al. Apoptosis and proliferation of endothelial cells in early atherosclerotic lesions: possible role of oxidized LDL[J]. Nutr Metab Cardiovasc Dis, 2002, 12(5): 297-305.

[8] Shoji T, Nishizawa Y, Fukumoto M, et al. Inverse relationship between circulating oxidized low density lipoprotein (OxLDL) and anti-oxLDL antibody levels in healthy subjects[J]. Atherosclerosis, 2000, 148(1): 171-177.

[9] 盧玉楷.簡明放射性同位素應(yīng)用手冊[M].上海：上海科學(xué)普及出版社,2004:28.

[10]劉子華，鄧新榮，徐燕華，等.125I標(biāo)記氧化低密度脂蛋白抗體[J].同位素,2009,22(4):204-208.

[11]Xu Y H, Luo Z X. Development of methods for preparation of monoclonal antibody against oxidized low density lipoprotein[J]. China J Biol, 2007, 20 (9): 693-696.

[12]Plump A S, Smith J D, Hayek T, et al. Several hypercholesterolemia and atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice created by homologous recombination in ES cells[J]. Cell, 1992, 71(10): 343-353.

[13]Ayala-Lopez W, Xia W, Varghese B, et al. Imaging of atherosclerosis in ApoE knockout mice: targeting of a folate-conjugated radiopharmaceutical to activated macrophages[J]. J Nucl Med, 2010, 51: 768-774.

Biodistribution of125I-OxLDL-Ab in Normal Mice and in Animal Models of AtherosclerosisinVivo

LIU Zi-hua1, FAN Cai-yun1, LI Feng-lin1, DENG Xin-rong1,XU Yan-hua2, LUO Zhi-fu1

1.Department of Isotope, China Institute of Atomic Energy, Beijing 102413, China；2.Chengdu Hoist Bio-tech Co. Ltd, Chengdu 610225, China

Anti-oxidized low-density lipoprotein antibody(OxLDL-Ab) was analysized with high performance liquid chromatography(HPLC) and ultraviolet spectrophotometry(UV). The biodistribution of125I-OxLDL-Ab was evaluated in both normal animals and animal models of atherosclerosis. Kunming mice were used as normal animals and ApoE knock-out mice (ApoE-/-mice) were used as animal models of atherosclerosis in the study of biodistribution. The optimum conditions of HPLC were as follows: phosphate buffer (0.2 mol/L, pH=7.4) was used as the mobile phase, the flow rate was 1 mL/min and the detection wavelength was 220 nm. The standard curve of concentration was obtained in the quantitative analysis of UV withy= 0.664 5x-0.008 3(r2=0.999 7). Biodistribution in normal animal show that organ uptakes decrease with time and no obvious accumulation is observed in organs except hypothyroid; over 2/3 uptake clear away in 24 h after injection and couldn’t be detected 7 d later. The hypothyroids of ApoE-/-mice are blocked by 2% KI solution to avoid their high uptake in the biodistribution of125I-OxLDL-Ab. Uptake in lung (the target organ) is high in the early 4-8 h after injection of125I-OxLDL-Ab. The ratio of target/organs is more than 1 except blood, and the ratio of target/muscle is more than 8, which show the selectivity of125I-OxLDL-Ab to the targeted organinvivo. Futher studies need to be done to evaluate the possibility125I-OxLDL-Ab as a SPECT imaging agent in diagnose of early stage of atherosclerosis.

OxLDL-Ab; atherosclerosis;125I ; ApoE-/-mice; biodistribution

2015-07-10；

2015-09-10

劉子華(1977—)，女，山東煙臺人，碩士，副研究員，從事放射性藥物研究

TL923

A

0253-9950(2016)06-0378-07

10.7538/hhx.2016.YX.2015064