蕪菁中氯原酸提取方法及定量分析研究

阿合提·阿巴斯

（新疆兵團(tuán)農(nóng)二師第五中學(xué)，新疆 喀什 844200）

蕪菁中氯原酸提取方法及定量分析研究

阿合提·阿巴斯

（新疆兵團(tuán)農(nóng)二師第五中學(xué)，新疆 喀什 844200）

對(duì)不同來源的蕪菁中提取氯原酸進(jìn)行討論，提出采用高效液相色譜法進(jìn)行氯原酸含量的測(cè)定。建立Agilent HC-C18色譜柱（4.6×250mm,5-μm）,柱溫30℃，流動(dòng)相為甲醇70%～0.5%H2PO330%，檢測(cè)波長327 nm，流速1.0 mL/min。結(jié)果證明，該方法簡(jiǎn)便易行、處理方便、重復(fù)性好，線性關(guān)系良好，且測(cè)定數(shù)據(jù)穩(wěn)定。本法可作為蕪菁中氯原酸的定量分析方法。

氯原酸；蕪菁；提取；高效液相色譜；含量測(cè)定

蕪菁為十字花科，又名大頭菜、蔓青、圓根、臺(tái)采、扁蘿卜等。維吾爾等少數(shù)民族稱蕪菁為恰瑪古（Qamagur）。蕪菁的肉質(zhì)形狀有扁圓、圓、圓柱形，皮色有白色、紫紅色，肉色有白色、淡金黃色[1]。蕪菁在新疆南部種植非常廣泛，一年四季都能吃到蕪菁，開春下種，4—5月可食嫩葉和根莖，而主要食用季節(jié)為冬季至來年3月，肉質(zhì)含有大量的VA，VB，VB1，VC及多種糖類、氨基酸、尼克酸、蛋白質(zhì)、脂肪、纖維素、鐵、鈣、磷等礦物質(zhì)[1-2]。同時(shí)，蕪菁還是維吾爾醫(yī)生常用藥物，具有清熱除濕、潤肺解毒、清肝明目、消食下氣、止咳止渴、補(bǔ)腎生精等功能，常用于治療性功能減退等癥[3]，主要含有黃酮類、苯丙素類及氯原酸等化學(xué)成分，這些也是氯原酸的主要來源。

氯原酸是由咖啡糅酸與奎尼酸（雞納酸）組成的縮酚酸，異名為咖啡糅酸，化學(xué)名稱為3-O-咖啡?？崴?，分子式為C16H18O9，分子量345.30，是植物體在有氧呼吸過程中經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物，呈半水狀或微黃色針壯晶體[4]。綠原酸是一種具有廣泛活性和藥理活性的物質(zhì)，具有抗菌、抗病毒、止血、增高白血球數(shù)、降血壓、保肝利膽、降血脂的功效，對(duì)急性咽喉炎、皮膚病有顯著療效，有清除自由基和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等藥理作用[5]；對(duì)消化系統(tǒng)、血液系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)疾病均有療效；對(duì)金葡萄球菌、溶血性鍵球菌、痢疾桿菌、傷寒桿菌有抑制作用[6]，因此，氯原酸在制劑上應(yīng)用越來越廣泛。目前，有關(guān)氯原酸生物活性的研究已經(jīng)深入到食品、保健品、醫(yī)藥等多個(gè)領(lǐng)域。

氯原酸是一種廣泛存在于中草藥、高等雙子葉植物的化學(xué)成分，含量較高的植物有杜仲、向日葵、金銀花、端木、可可樹、咖啡等。另外，水果、蔬菜、大豆、小麥、綠茶等食品中都有氯原酸類物質(zhì)，盡管氯原酸在植物界廣泛存在，但含量較高的植物并不多見。高純度氯原酸價(jià)格昂貴，是目前國際公認(rèn)的“植物黃金”[7]，因此，氯原酸提取受到國內(nèi)外學(xué)者的普遍關(guān)注。所以，進(jìn)一步研究和優(yōu)化測(cè)定氯原酸含量的方法十分重要。

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，國內(nèi)外產(chǎn)生了很多測(cè)定方法。關(guān)于氯原酸的測(cè)定主要有紙層析-紫外分光光度法、薄層層析法、薄層掃描法、高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳法等。其中高效液相色譜法是使用最為廣泛的方法。雖然關(guān)于用HPLC法分別或同時(shí)測(cè)定氯原酸的含量有較多報(bào)道，但是用HPLC法來測(cè)定蕪菁中氯原酸的含量還沒報(bào)道。新疆維吾爾藥食物蕪菁中氯原酸的測(cè)定成為食品分析的重要項(xiàng)目之一。為了提高測(cè)定效率，節(jié)省溶劑，評(píng)價(jià)和比較藥食物蕪菁中氯原酸的含量，試驗(yàn)建立HPLC法測(cè)定氯原酸含量，用不同提取法比較不同產(chǎn)地蕪菁中氯原酸的含量，為新疆維吾爾藥食物蕪菁的全面分析、鑒定提供試驗(yàn)依據(jù)。該法能快速測(cè)定，靈敏度高、選擇性好、方法簡(jiǎn)便易行，是測(cè)定蕪菁中氯原酸的理想方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和藥品

1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

北京LC981高效液相色譜儀器，包括P981高壓輸液泵、UV981可變波紫外可見分光檢測(cè)器、T98柱溫箱，101A-1型干燥箱（上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠），F(xiàn)A2104N型電子天平 （上海民橋精密科學(xué)有限公司），F(xiàn)W100型高速粉碎機(jī)（北京市永光明區(qū)療儀器廠），KQ3200ED型數(shù)控超聲波清洗器（昆市超聲儀器有限公司）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

氯原酸（分析純）對(duì)照品由上海晶純?cè)噭┯邢薰咎峁?，批?hào)7572；甲醇（色譜純）；無水乙醇（分析純）、磷酸（分析純）。

1.1.3 樣品來源

蕪菁原料來源于喀什色滿和伽師縣等地。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 對(duì)照品溶液的制備

緊密稱取對(duì)照品氯原酸0.005 0 g，用甲醇溶解并定容至25 mL容量瓶中，配制成濃度為200 ug/mL的對(duì)照品溶液，備用。

1.2.2 樣品溶液的制備

將新鮮蕪菁切成片，在干燥箱中70℃干燥8 h，在超速粉碎機(jī)粉碎后，準(zhǔn)確稱取蕪菁粉末2.000 0 g，置25 mL容量瓶中，加乙醇至定容，浸泡48 h，超聲波提取3次，每次15 min，用0.45 ug濾膜過濾，備用。

1.2.3 色譜條件

色譜柱：Agilent HC-C18色譜柱 （4.6×250 mm，5-μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.5%H2PO330%；柱溫30℃；檢測(cè)波長327 nm；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量20 uL。按上述色譜條件下測(cè)定氯原酸，色譜圖見圖1和圖2。

圖1 對(duì)照品的色譜圖

圖2 樣品的色譜圖

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品含量的測(cè)定

分別緊密稱取蕪菁樣品的葉、根、莖各2.000 0 g，按“1.2.2”所述方法制備樣品溶液注入高效液相色譜儀,測(cè)定氯原酸的峰面積，按外表法計(jì)算，測(cè)定結(jié)果見表1。

從表1可以看出，不同地區(qū)蕪菁中氯原酸的含量存在著一定的差異，葉子中所占氯原酸的含量比根莖中的較大，超聲后得到氯原酸效果好，且含量高。

表1 樣品測(cè)定結(jié)果（mg/g）

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)以不同地區(qū)的蕪菁為原料，用高效液相色譜-紫外可見分光檢測(cè)器進(jìn)行色譜分析，采用外表法測(cè)定氯原酸的含量。結(jié)果表明，不同地區(qū)蕪菁中氯原酸的含量存在著一定的差異，原因可能是由于土壤質(zhì)量不同而造成的。

葉子中所占氯原酸的含量比根莖中的較大，超聲后得到氯原酸效果好，且含量高。原因是超聲波能擊碎細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)組分化，滲透至溶液中，從而達(dá)到充分分離，提取率高的目的。本實(shí)驗(yàn)中采用的方法，操作簡(jiǎn)單，處理方便，測(cè)定迅速，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，結(jié)果可靠，適合于測(cè)定蕪菁中氯原酸的含量。

[1]謝英彪，顏培增，劉光隆.食物營養(yǎng)與食療寶典[M].北京:人民軍醫(yī)出版社，2007.

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[3]馬龍，鄧淑文，屈衛(wèi)東.新疆蕪菁抗衰老作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998,21(4):62.

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1005-2690（2016）06-0116-02

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2016-04-25）