多重耐藥銅綠假單胞菌對頭孢洛扎-他唑巴坦的敏感性和藥敏試驗(yàn)方法的比較

由多重耐藥（MDR）銅綠假單胞菌引起的感染呈現(xiàn)上升趨勢，特別是在危重患者中，導(dǎo)致相關(guān)感染的發(fā)病率和病死率增加。目前對MDR銅綠假單胞菌感染的治療可選藥物很少。2014 年和2015 年，美國FDA 和歐洲藥品管理局（EMA ）相繼分別批準(zhǔn)了頭孢洛扎-他唑巴坦用于治療復(fù)雜性尿路感染和腹腔感染2項(xiàng)適應(yīng)證。該復(fù)合制劑與頭孢他啶相比，對AmpC酶更穩(wěn)定，對銅綠假單胞菌的青霉素結(jié)合蛋白（PBP）有較高的親和力，可有效地穿透缺失孔蛋白的外膜蛋白，并在有外排泵存在的細(xì)胞周質(zhì)中發(fā)揮抗菌作用。因此頭孢洛扎-他唑巴坦可用于治療MDR銅綠假單胞菌所致感染。但該復(fù)合制劑對產(chǎn)金屬酶（MBL）的菌株無效。本文主要評估MDR和廣泛耐藥（XDR） 銅綠假單胞菌對該藥的耐藥率、潛在的耐藥基因、克隆結(jié)構(gòu)，并比較不同藥敏試驗(yàn)方法對測試頭孢洛扎-他唑巴坦的準(zhǔn)確性。

Frieder 等收集44株MDR和68株XDR銅綠假單胞菌。其中66 株銅綠假單胞菌確定為感染，占58.9%；46 株為定植菌，占41.1%。主要分離標(biāo)本為血培養(yǎng)、傷口拭子和尿液。采用微量肉湯稀釋法（BMD）為標(biāo)準(zhǔn)方法、比較梯度擴(kuò)散法（E試驗(yàn)法）和紙片擴(kuò)散法進(jìn)行頭孢洛扎-他唑巴坦的藥敏試驗(yàn)，根據(jù)EUCAST和CLSI藥敏折點(diǎn)判斷結(jié)果。微量肉湯稀釋法結(jié)果顯示頭孢洛扎-他唑巴坦的MIC50、MIC90和MIC范圍分別為2、256和0.5～＞256 mg/L。計(jì)有38 株（33.9%）銅綠假單胞菌對頭孢洛扎-他唑巴坦耐藥，其中17株分離自骨髓移植患者。根據(jù)卡方檢驗(yàn)，MDR株的耐藥率（4.8%）明顯低于XDR株的耐藥率（50%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.000 1）。與標(biāo)準(zhǔn)方法（BMD）獲得的結(jié)果相比較，BMD檢測7株頭孢洛扎-他唑巴坦敏感的菌株，E試驗(yàn)法檢測為耐藥；但沒有BMD耐藥的菌株被E試驗(yàn)法檢測為敏感的菌株。因此E試驗(yàn)法檢測銅綠假單胞菌對頭孢洛扎-他唑巴坦的敏感性試驗(yàn)結(jié)果中未發(fā)生非常重大錯誤，但有6.3%的主要錯誤。Bland–Altman分析（MIC一致性分析）顯示在頭孢洛扎低濃度時BMD和E試驗(yàn)法顯現(xiàn)很好的一致性，但當(dāng)頭孢洛扎高濃度時（≥128 mg/L）兩者結(jié)果存在較大差異。

紙片擴(kuò)散法測得71株銅綠假單胞菌對頭孢洛扎-他唑巴坦敏感、7株中介和34株耐藥。有1株假性耐藥（與標(biāo)準(zhǔn)方法BMD相比），沒有非常重大錯誤，分類一致率為92%（95%CI：86.5%～96.3%）。

采用恒溫?cái)U(kuò)增PCR方法篩選金屬β內(nèi)酰胺酶編碼基因（如blaVIM1-37，blaNDM1-7），常規(guī)PCR 用于篩選blaIMP基因。隨機(jī)選擇的77株細(xì)菌進(jìn)行全基因組測序（WGS）以用于克隆結(jié)構(gòu)分析。在38株頭孢洛扎-他唑巴坦耐藥細(xì)菌中，主要的耐藥基因?yàn)閎laIMP（n=25），blaVIM（n=4） 和blaGES（n=1），其余8株的基因型暫不清楚。多位點(diǎn)序列分型顯示，主要ST型為235型、274型和395型。頭孢洛扎-他唑巴坦耐藥性與ST235型有很大相關(guān)性（P＜0. 001）。

綜上所述，本研究中頭孢洛扎-他唑巴坦對銅綠假單胞菌顯示有較高的抗菌活性（敏感率66.1%）。耐藥性與ST235型相關(guān)，主要攜帶blaIMP基因。由于XDR菌株中存在碳青霉烯酶，故XDR菌株中頭孢洛扎-他唑巴坦耐藥率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于MDR株。紙片擴(kuò)散法可用于準(zhǔn)確測定頭孢洛扎-他唑巴坦的藥敏結(jié)果。

SCHAUMBURG F， BLETZ S， MELLMANN A， et al.Susceptibility of MDRPseudomonas aeruginosato ceftolozane/tazobactam and comparison of different susceptibility testing methods[J]. J Antimicrob Chemother， 2017， 72（11）: 3079-3084.