復(fù)方鹽酸苯海拉明糖漿質(zhì)量控制研究

植國繁，巫玲玲，藍(lán) 彬，藍(lán)獻(xiàn)麗，蔣敏捷，蔣偉哲

（廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530021）

復(fù)方鹽酸苯海拉明糖漿質(zhì)量控制研究

植國繁，巫玲玲，藍(lán) 彬，藍(lán)獻(xiàn)麗，蔣敏捷，蔣偉哲

（廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西 南寧 530021）

目的 建立復(fù)方鹽酸苯海拉明糖漿的質(zhì)量控制方法。方法 采用理化鑒別與薄層色譜（TLC）法對復(fù)方鹽酸苯海拉明糖漿進(jìn)行定性鑒別，用高效液相色譜（HPLC）法對鹽酸苯海拉明進(jìn)行含量測定。結(jié)果 理化鑒別結(jié)果現(xiàn)象顯著，薄層色譜斑點(diǎn)清晰、集中。鹽酸苯海拉明進(jìn)樣量在4．032～14．112 g范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系（r＝0．999 6），平均加樣回收率為98．80%，RSD＝1．18%（n＝9）。結(jié)論 TLC法和HPLC法準(zhǔn)確、可靠，可用于復(fù)方鹽酸苯海拉明糖漿的質(zhì)量控制。

復(fù)方鹽酸苯海拉明糖漿；鹽酸苯海拉明；高效液相色譜法；質(zhì)量控制

復(fù)方鹽酸苯海拉明糖漿是由單糖漿、防腐劑、鹽酸苯海拉明、葡萄糖酸鈣配制而成，為抗組胺藥，適用于治療過敏性疾病。鹽酸苯海拉明可與H1受體結(jié)合產(chǎn)生拮抗作用，從而抑制過敏反應(yīng)，但嗜睡和抗膽堿能作用明顯，故其應(yīng)用受到一定限制[1]。葡萄糖酸鈣能改善細(xì)胞膜的通透性，與促進(jìn)神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿產(chǎn)生抗過敏效應(yīng)，兩者在不加大劑量的情況下聯(lián)用具有協(xié)同抗過敏作用[2]。該制劑味甜、口感好，小兒用藥依從性高，且效果好，療效確切。為提高復(fù)方鹽酸苯海拉明糖漿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，筆者對其含量測定方法和鑒別方法進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

EL204型電子天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）；KF10002型電子天平（凱豐集團(tuán)有限公司）；XS205DU型十萬分之一電子天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）；KQ－500DB型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）；LC－20A型高效液相色譜儀、SIL－20A型自動(dòng)進(jìn)樣器、SPD－20A型紫外檢測器、色譜化學(xué)工作站（日本島津公司）；Luna 5μm CN 100A色譜柱（250 mm×4．6mm，4μm，廣州菲羅門科學(xué)儀器有限公司）。乙腈為色譜純（Fisher Scientific）、超純水（自制）、其他試劑均為分析純；鹽酸苯海拉明對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為100066－200807）；復(fù)方鹽酸苯海拉明糖漿（廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，批號為20150109，20150127，20150318）。

2 方法與結(jié)果

2．1 性狀

本品為淡黃色液體，味甜，微有麻感。

2．2 鑒別

2．2．1 理化鑒別[3]

取本品50 m L，置分液漏斗中，用三氯甲烷萃取3次，合并萃取液，于水浴上加熱蒸干，提取物在80℃干燥后，按下述方法試驗(yàn)。

1）取上述提取物少量，加硫酸1滴，開始出現(xiàn)黃色，隨即變成橙紅色，滴加蒸餾水，即成白色乳濁液。

2）取上述提取物少量，加蒸餾水溶解后，滴加硝酸銀試液，即成白色凝乳狀濁液。

2．2．2 薄層色譜鑒別

取本品15．0 mL，置60 m L分液漏斗中，用三氯甲烷萃取3次，每次5mL，取有機(jī)層，合并萃取液，作為供試品溶液；取鹽酸苯海拉明對照品，加三氯甲烷制成每1m L含1mg的溶液，作為對照品溶液；取空白輔料（缺鹽酸苯海拉明）15．0mL，同法制備陰性對照品溶液。照薄層色譜法[2015年版《中國藥典（四部）》通則0502][4]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，展開劑為二氯甲烷－甲醇（9∶1）[5]，展開，取出，晾干，噴稀碘化鉍鉀試液，日光下檢視，結(jié)果見圖1。

圖1 鹽酸苯海拉明薄層色譜圖

2．3 有關(guān)物質(zhì)檢查

2．3．1 檢查標(biāo)準(zhǔn)

應(yīng)符合糖漿劑項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定[2015年版《中國藥典（四部）》通則0116][6]。

2．3．2 有關(guān)物質(zhì)[3]

取本品5.0m L，加流動(dòng)相溶解并稀釋成每1mL約含0.5mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取1.0m L，置100m L容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。照含量測定項(xiàng)下的色譜條件，精密量取對照溶液與供試品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.5倍（0.5%），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積（1.0%）。色譜圖見圖2。

圖2 鹽酸苯海拉明有關(guān)物質(zhì)檢查高效液相色譜圖

2．4 鹽酸苯海拉明含量測定

2．4．1 溶液制備

稱取鹽酸苯海拉明對照品125 mg，精密稱定，置25mL棕色容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成5 g／L的對照品貯備液，避光，置4℃冰箱貯存?zhèn)溆茫痪芰咳φ掌焚A備液1mL置10mL容量瓶中，加流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，制成1mL含0.5mg的對照品溶液；精密量取裝量差異項(xiàng)下的本品5.0mL，置10m L容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液；取輔料5.0m L，置10m L容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得陰性對照品溶液。

2．4．2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Luna 5μm CN 100A柱（250mm×4.6mm，4μm）；流動(dòng)相：乙腈－水－三乙胺（50∶50∶0.5，冰醋酸調(diào)節(jié)pH至6.5）[3]；流速：1.0mL／min；柱溫：30℃；檢測波長：258 nm；進(jìn)樣量：20μL。

取二苯酮5mg，置100mL容量瓶中，加乙腈5mL使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻；另精密量取鹽酸苯海拉明標(biāo)準(zhǔn)品貯備液1mL，置10m L容量瓶中，加入上述二苯酮溶液 1 mL，加流動(dòng)相稀釋至刻度，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數(shù)按苯海拉明峰計(jì)算不低于5 000，鹽酸苯海拉明峰與二苯酮色譜峰的分離度應(yīng)大于2.0。取2.4.1項(xiàng)下方法制備的陰性對照品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果，陰性對照品溶液在鹽酸苯海拉明出峰處無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對照無干擾，見圖3。

2．4．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密吸取對照品貯備液0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4mL，分別置10mL棕色容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度分別為0.201 6，0.302 4，0.403 2，0.504 0，0.604 8，0.705 6 g／L的對照品溶液，按2.4.2項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣20μL。以對照品進(jìn)樣量（X，mg）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y＝0.081 4X+ 0.030 8，r＝0.999 6(n＝6)。結(jié)果表明，鹽酸苯海拉明進(jìn)樣量在4.032～14.112μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取同一對照品溶液，按2.4.2項(xiàng)下色譜條件分別連續(xù)進(jìn)樣測定6次。結(jié)果，鹽酸苯海拉明峰面積積分值的 RSD＝0.08%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號為20150318）制備的供試品溶液，在室溫下避光放置，分別于0，2，4，8，16，24 h時(shí)各進(jìn)樣 20μL測定。結(jié)果的 RSD＝0.26%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖3 鹽酸苯海拉明含量測定高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號為20150318），按2．4．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂方法平行測定6次。結(jié)果的 RSD＝0．49%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：按處方比例稱取除鹽酸苯海拉明外的其他輔料，配成100m L空白糖漿液，另精密量取鹽酸苯海拉明對照品貯備液0．8，1．0，1．2m L各3份，用空白糖漿液溶解并定容至刻度，搖勻，按擬訂色譜條件各進(jìn)樣20μL測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸苯海拉明加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2．4．4 樣品含量測定

分別取3批供試品各2份，按2．4．1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件各進(jìn)樣20μL測定，計(jì)算鹽酸苯海拉明的含量。結(jié)果見表2。

表2 3批樣品中鹽酸苯海拉明含量測定結(jié)果

3 討論

復(fù)方苯海拉明糖漿含有鹽酸苯海拉明和葡萄糖酸鈣2種抗過敏藥物，前者含量雖少，但其含量是否達(dá)標(biāo)影響臨床療效?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用硝酸銀滴定法測定其含量，此方法雖不需要特殊儀器，但由于終點(diǎn)判斷要通過肉眼來完成等因素，會(huì)影響含量測定的準(zhǔn)確性，含量低的成分影響更大。本研究中用高效液相色譜法測定其含量，樣品無需復(fù)雜的預(yù)處理，其他成分不干擾測定，操作簡便快速，而且穩(wěn)定性、精密度均良好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于控制其質(zhì)量。

相關(guān)研究指出，鹽酸苯海拉明的主要降解產(chǎn)物之一是二苯酮[7]，本研究中同時(shí)建立了有關(guān)物質(zhì)的檢查方法，確定了有關(guān)物質(zhì)限量，有利于本品質(zhì)量控制。

本制劑處方中防腐劑羥苯乙酯也有紫外吸收，故測定鹽酸苯海拉明含量時(shí)須設(shè)法排除其干擾。本研究中用高效液相色譜法成功地將兩者分離，提高了方法的專屬性和準(zhǔn)確度。

[1]張 羅，韓德民．H1抗組胺藥[J]．臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2013，27（2）：104－109．

[2]廖蕓蕓，楊 斌，王柳萍，等．鹽酸苯海拉明與葡萄糖酸鈣聯(lián)用抗過敏的實(shí)驗(yàn)研究[J]．廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，22（1）：41－43．

[3]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典（二部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：1 001．

[4]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典（四部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：57－59．

[5]馮婉姍，羅雙輝．麝香拔濕膏定性定量方法研究[J]．藥物分析雜志，2010，30（1）：120－122．

[6]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典（四部）[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：20．

[7]吳愛琴，鄧 紅，葉俊鵬．HPLC法測定鹽酸苯海拉明軟膠囊中的二苯酮[J]．廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，19（4）：314－315．

Quality Control of Com pound Diphenhyd ram ine Hyd roch loride Syrups

Zhi Guofan，Wu Lingling，Lan Bin，Lan Xianli，Jiang M injie，Jiang Weizhe（Pharmaceutical College，Guangxi Medical University，Nanning，Guangxi，China 530021）

Objective To establish a quality control method for Compound Diphenhydramine Hydrochloride Syrups．M ethods Physical Chemical Identity and TLC were adopted for conducting the qualitative identification of Compound Diphenhydramine Hydrochloride Syrups，HPLC was used to determine the content of Diphenhydramine Hydrochloride in this preparation．Results The results of Physical and Chemical Identification was significant．TLC spots were clear．A good linearity relationship with the peak areas was exhibited（r＝0．999 6）when the sample size of Diphenhydramine Hydrochloride was in the range of 4．032－14．112μg．The average recovery rate of diphenhydramine hydrochloride was 98．80%，RSD＝1．18%（n＝9）．Conclusion The method of TLC and HPLC is accurate and specific with good reproducibility．It can be used for the quality control of Compound Diphenhydramine Hydrochloride Syrups．

Compound Diphenhydramine Hydrochloride Syrups；diphenhydramine hydrochloride；HPLC；quality control

R927．2；R976

A

1006－4931(2016)06－0059－03

植國繁，男，碩士研究生，研究方向?yàn)樾滤幯芯颗c開發(fā)，（電子信箱）726750095＠qq．com；蔣偉哲，男，教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向?yàn)樾滤幯芯颗c開發(fā)，本文通訊作者，（電話）0771－5358272（電子信箱）jiangweizhe6812＠163．com。

2015－09－16)

廣西高校重點(diǎn)學(xué)科和重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)項(xiàng)目，項(xiàng)目編號：桂教科研[2013]8號－3。