化痰理氣口服液止咳平喘及通透性藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究※

劉素香 陳曦 徐敏妮 吳文平 楊利生 王顯著 白麗君 竇建衛(wèi)*

化痰理氣口服液止咳平喘及通透性藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究※

劉素香1陳曦2徐敏妮1吳文平3楊利生1王顯著4白麗君1竇建衛(wèi)2*

化痰理氣口服液源于全國(guó)名老中醫(yī)黃保中主任驗(yàn)方蔞貝枳桔二陳湯，由全瓜蔞，浙貝母，炒枳殼，桔梗，陳皮等9味中藥飲片組成。具有祛痰止咳、寬胸散結(jié)、理氣平喘、健脾益氣之功效。長(zhǎng)期應(yīng)用于臨床，療效確切，本研究通過(guò)鎮(zhèn)咳、平喘、抗炎等藥效學(xué)試驗(yàn)研究評(píng)價(jià)其藥理作用，為進(jìn)行院內(nèi)制劑及新藥的開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及藥品

1.1.1 藥物與試劑化痰理氣口服液（由西安市中醫(yī)院院制劑室制成口服液，批號(hào)：20130301），氫溴酸右美沙芬片（北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：H10920080），橘紅丸（北京同仁堂股份有限公司，批號(hào)：Z51020365），氨水（廣州化學(xué)試劑二廠產(chǎn)品，批號(hào)：060803），氨茶堿片（北京益民制藥廠，批號(hào)：0750816），0.9%氯化鈉注射液(陜西華山制藥有限公司，批號(hào)：A100712031)，阿司匹林(Bayer Hea1thCare Manufacturing S.r.1，批號(hào)：J2013078)，伊文思藍(lán)（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：WC20090209），醋酸（廣東光華化學(xué)廠有限公司，批號(hào)：20100329）。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物72只SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(陜)2007-001；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCYK(陜)2012-005。豚鼠80只，體重160～200 g，雌雄各半，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(陜) 2007-001。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器JM型電子天平（余姚紀(jì)銘稱(chēng)重校驗(yàn)設(shè)備有限公司），CJ721醫(yī)用霧化器，(北京西長(zhǎng)安街醫(yī)療器械廠），電子天平（Sartorius公司，型號(hào)：BT1250D），電子天平（上海天平儀器廠，型號(hào)：FA1104JM），Stat Fax 2100型分光光度計(jì)（Awareness Techno1ogy Inc.，Pa1m City，F(xiàn)L，USA）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 小鼠氨水引咳實(shí)驗(yàn)72只昆明小鼠，體重18～22 g，雌性。隨機(jī)分為6組，即模型對(duì)照組，陽(yáng)性藥右美沙芬組（15.75 mg/kg)，橘紅丸組（4.8 g/kg），化痰理氣口服液高(3.0 g/kg)、中(1.5 g/kg)、低（0.75 g/kg)劑量組，每組12只。灌胃給藥5d，灌胃體積20 m1/kg，1次/d。其中模型對(duì)照組給等體積蒸餾水。末次給藥前不禁水只禁食12 h，末次給藥1 h后將每只動(dòng)物分別置于500 m1密閉鐘罩內(nèi)，通過(guò)空氣壓縮機(jī)以400 mmHg恒壓噴以25%濃氨水5 s，觀察小鼠咳嗽的潛伏時(shí)間及2 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)［2］。

1.2.2 磷酸組胺吸入法致喘實(shí)驗(yàn)選體重160～200 g豚鼠80只，雌雄各半，分別放入密閉的鐘罩內(nèi)，用超聲霧化器噴射0.1%磷酸組織胺（His）與2%氯化乙酰膽堿（Ach）混合液15 s，噴霧停止后，觀察6 min內(nèi)豚鼠出現(xiàn)抽搐跌倒的時(shí)間，并記錄從噴霧開(kāi)始到抽搐、跌倒的時(shí)間，稱(chēng)為引喘潛伏期。如果引喘潛伏期大于120 s者，作為不敏感而排除。取篩選合格者豚鼠60只，隨機(jī)按體重分為6組，即模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥氨茶堿片組（75mg/kg)、橘紅丸組（4.0 g/kg）、化痰理氣口服液高、中、低劑量組（2.5 g/kg，1.25 g/kg，0.625 g/kg)，每組10只。灌胃給藥，灌胃體積10 m1/kg，1次/d，給藥5 d。其中模型對(duì)照組給等體積的蒸餾水。末次給藥1 h后，以上述同樣條件引喘，觀察并記錄引喘潛伏期（s）和6min內(nèi)抽搐跌倒的動(dòng)物數(shù)量［1-3］。

1.2.3 腹腔毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)72只昆明小鼠，體重18～22 g，雌性。隨機(jī)分為6組，即模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥阿司匹林組（40 mg/kg）、橘紅丸組（4.8g/kg）、化痰理氣口服液高、中、低劑量組（3.0 g/kg，1.5 g/ kg，0.75 g/kg)，每組12只。取各組小鼠，灌胃給藥，灌胃體積20 mL/kg，1次/d，給藥7 d。其中模型對(duì)照組給等體積蒸餾水。末次給藥后45 min，尾靜脈注射0.5%伊文斯藍(lán)0.01 m1/g，再立即腹腔注射0.7%乙酸（0.2m1/只），過(guò)20 min后脫椎處死，打開(kāi)腹腔，注入10 mL生理鹽水沖洗，吸出洗滌液，3000 r/min離心10 min，再取上清液于590 nm處測(cè)光密度（OD）值，(OD值間接表示通透性)，并計(jì)算抑制率［4-5］。抑制率=（模型對(duì)照組吸光度-給藥組吸光度）/模型對(duì)照組吸光度×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，數(shù)據(jù)分析使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用成組配對(duì)t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 化痰理氣口服液對(duì)濃氨水噴霧法所致小鼠咳嗽的作用與模型對(duì)照組比較，右美沙芬組和化痰理氣口服液高劑量組明顯減少小鼠咳嗽次數(shù)（P＜0.01），明顯延長(zhǎng)潛伏期（P＜0.01）。提示右美沙芬和化痰理氣口服液高劑量均能明顯延長(zhǎng)小鼠咳嗽潛伏期。見(jiàn)表1。

表1 化痰理氣口服液對(duì)濃氨水噴霧法所致小鼠咳嗽的作用（±s，n=12）

表1 化痰理氣口服液對(duì)濃氨水噴霧法所致小鼠咳嗽的作用（±s，n=12）

注：與模型對(duì)照組比較，▲P＜0．01

潛伏期（s）咳嗽次數(shù)（次）2 7 . 5 3 ± 9 . 2 9 1 6 . 0 0 ± 3 . 5 9陽(yáng)性藥右美沙芬組1 5 . 7 5 m g / k g 4 3 . 2 1 ± 1 1 . 6 9▲9 . 0 0 ± 1 . 2 8▲橘紅丸組4 . 8 3 6 . 9 7 ± 6 . 5 3 1 2 . 5 8 ± 3 . 2 9化痰理氣口服液高劑量組3 . 0 3 9 . 8 4 ± 7 . 7 5▲1 0 . 7 5 ± 2 . 4 9▲化痰理氣口服液中劑量組1 . 5 3 7 . 0 5 ± 6 . 8 8 1 2 . 6 7 ± 3 . 5化痰理氣口服液低劑量組0 . 7 5 2 8 . 8 3 ± 1 0 . 1 8 1 4 . 3 3 ± 2 . 8 4組別劑量（g生藥/ k g）模型對(duì)照組-

2.2 化痰理氣口服液對(duì)磷酸組胺吸入法所致豚鼠哮喘的作用與模型對(duì)照組比較，化痰理氣口服液高劑量組、氨茶堿組明顯延長(zhǎng)豚鼠哮喘潛伏期，抽搐跌倒動(dòng)物數(shù)量減少（P＜0.01）。提示，氨茶堿和化痰理氣口服液高劑量均能明顯延長(zhǎng)豚鼠哮喘潛伏期，減少抽搐跌倒動(dòng)物數(shù)量。見(jiàn)表2。

表2 化痰理氣口服液對(duì)磷酸組胺吸入法所致豚鼠哮喘的影響（±s，n=10）

表2 化痰理氣口服液對(duì)磷酸組胺吸入法所致豚鼠哮喘的影響（±s，n=10）

注：與模型對(duì)照組比較，▲P＜0．01

潛伏期（s）抽搐跌倒動(dòng)物數(shù)（只）7 8 . 7 4 ± 1 0 . 1 2 1 0陽(yáng)性藥氨茶堿組7 5 m g / k g 2 7 0 . 4 5 ± 5 4 . 4 4▲2橘紅丸組4 . 0 9 0 . 7 4 ± 1 0 . 3 3 3化痰理氣口服液高劑量組2 . 5 1 2 3 . 7 6 ± 3 2 . 6 4▲2化痰理氣口服液中劑量組1 . 2 5 9 0 . 5 4 ± 1 0 . 6 4 3化痰理氣口服液低劑量組0 . 6 2 5 8 6 . 5 4 ± 1 6 . 4 3 9組別劑量（g生藥/ k g）模型對(duì)照組-

2.3 化痰理氣口服液對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，阿司匹林組、本品大劑量組可抑制乙酸提高小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.05)。提示本品大劑量具有一定的抑制乙酸提高小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的作用。見(jiàn)表3。

表3 化痰理氣口服液對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性影響（±s，n=12）

表3 化痰理氣口服液對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性影響（±s，n=12）

注：與模型對(duì)照組比較，▲P＜0．01

O D值抑制率（%）0 . 5 4 ± 0 . 1 8 0 . 0 0陽(yáng)性藥阿司匹林組4 0 m g / k g 0 . 3 2 ± 0 . 1 1 4 0 . 8 6▲橘紅丸組4 . 8 0 . 4 1 ± 0 . 1 5 2 5 . 4 5化痰理氣口服液高劑量組3 . 0 0 . 3 6 ± 0 . 1 2 3 3 . 1 7▲化痰理氣口服液中劑量組1 . 5 0 . 4 0 ± 0 . 1 5 2 6 . 2 2化痰理氣口服液低劑量組0 . 7 5 0 . 4 6 ± 0 . 1 2 1 5 . 9 6組別劑量（g生藥/ k g）模型對(duì)照組-

3 討論

自2003年8月至今，我們應(yīng)用黃保中主任驗(yàn)方蔞貝枳桔二陳湯觀察治療慢性阻塞性肺疾病痰氣交阻型病例計(jì)1000余例，療效顯著，具有良好的應(yīng)用前景。此方不僅具有祛痰止咳、散結(jié)平喘、寬胸理氣、健脾益氣之功效，同時(shí)可以減少COPD患者住院率，改善生活質(zhì)量，患者的咳痰時(shí)間和痰量減少明顯優(yōu)于對(duì)照組［6］。此方由全瓜蔞、浙貝母合《醫(yī)宗金鑒》枳桔二陳湯化裁而成。具有化痰散結(jié)，寬胸理氣，止咳平喘之效［7］。方用全瓜蔞、浙貝清熱化痰散結(jié)，寬胸理氣；桔梗宣散壅塞之肺氣，且載藥上行達(dá)肺；枳殼化痰除痞、行氣暢中；桔梗、枳殼二者相伍，升降氣機(jī)，有“通肺利膈下氣”之效；枳殼與白術(shù)配伍，取枳術(shù)丸之意，健脾消痞，升清降濁；“脾為生痰之源，肺為貯痰之器”，方中陳皮、云苓、法半夏、炒白術(shù)，健脾益氣化痰，以絕生痰之源；全瓜蔞、白術(shù)、枳殼配伍可通腑瀉熱、使邪有出路。肺與大腸相表里，肺氣壅塞，腑氣不通，則氣短喘咳不止，若腑氣通，肺氣宣散，則咳喘自平。方中苦寒藥瓜蔞、貝母與辛溫藥陳皮、半夏并用，不寒不燥。主要針對(duì)“痰”“氣”交阻病因，切中病理要害。此方為治療慢阻肺痰氣交阻型的有效方劑。

但由于中湯藥煎煮麻煩費(fèi)時(shí)費(fèi)力，口感差，不少患者望而卻步；另外慢性咳喘病患者往往服藥時(shí)間較長(zhǎng)，除了急性期治療外，緩解期也應(yīng)堅(jiān)持鞏固，中湯藥的依從性差使部分患者不能堅(jiān)持?？诜壕哂锌诟泻茫瑪y帶方便，胃腸道刺激小，對(duì)含有揮發(fā)油類(lèi)藥物能最大程度保持原藥藥效的優(yōu)勢(shì)，在最大限度不影響原湯劑療效的基礎(chǔ)上，將黃師蔞貝枳桔二陳湯由原來(lái)的湯劑進(jìn)行劑型改革，名為化痰理氣口服液，對(duì)其進(jìn)行祛痰、止咳、平喘作用的藥理研究以驗(yàn)證其作用，為方便更多的患者服用，同時(shí)為進(jìn)行院內(nèi)制劑及新藥的開(kāi)發(fā)，進(jìn)行前期準(zhǔn)備工作。

本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)典的氨水致小鼠咳嗽以及氯化乙酰膽堿-磷酸組胺致哮喘法來(lái)評(píng)價(jià)化痰理氣口服液的止咳、平喘作用。揮發(fā)后的氨水可形成一種刺激性氣體，這種氣體對(duì)氣管-支氣管刺激強(qiáng)烈，可誘發(fā)咳嗽反應(yīng)，檢測(cè)氨水致咳小鼠咳嗽潛伏期、咳嗽次數(shù)，可評(píng)價(jià)藥物的止咳作用。而豚鼠是一種易致敏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，2%氯化乙酰膽堿-0.1%磷酸組胺混合噴霧可激發(fā)氣管炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致氣管痙攣，誘使豚鼠發(fā)生哮喘，檢測(cè)引喘潛伏期可評(píng)價(jià)藥物平喘作用。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，高劑量的化痰理氣口服液可明顯減少氨水致小鼠咳嗽的次數(shù)，延長(zhǎng)咳嗽潛伏期，增加氯化乙酰膽堿-磷酸組胺混合噴霧誘發(fā)的哮喘潛伏期，證明有明顯的止咳、平喘作用，同時(shí)此藥具有抑制乙酸提高小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的作用。這為化痰理氣口服液的綜合開(kāi)發(fā)利用和進(jìn)行院內(nèi)制劑及新藥的開(kāi)發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)和科學(xué)依據(jù)。

[1]中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)．特發(fā)性肺(間質(zhì))纖維化診斷和治療指南(草案)[J]．現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2003，15(2):129-130．

[2]張濟(jì)周，楊梁梓．中西醫(yī)對(duì)肺纖維化發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J]．云南中醫(yī)中藥雜志，2009，30(9):75-77．

[3]趙蘭才，武維屏．肺間質(zhì)纖維化的中醫(yī)研究進(jìn)展述評(píng)(綜述)[J]．北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，23(4):70-72．

[4]李輝．李國(guó)勤辨治特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化經(jīng)驗(yàn)[J]．中醫(yī)雜志，2009，50(2): 122-123．

[5]丁明橋，徐朝霞，王鵬．肺間質(zhì)纖維化的中醫(yī)發(fā)病機(jī)制探討[J]．遼寧中醫(yī)

（1西安市中醫(yī)醫(yī)院肺病科，陜西西安710021；2西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院陜西西安710061；3西安市中醫(yī)醫(yī)院肝病科，陜西西安710021；4西安市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科，陜西西安710021）

目的評(píng)價(jià)化痰理氣口服液的止咳平喘作用以及對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性影響。方法采用小鼠氨水引咳實(shí)驗(yàn)、磷酸組胺豚鼠引喘方法實(shí)驗(yàn)進(jìn)行化痰理氣口服液止咳及平喘作用的研究。采用伊文思藍(lán)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果止咳實(shí)驗(yàn)顯示，本品高劑量能顯著延長(zhǎng)小鼠引咳潛伏期和減少2min內(nèi)的咳嗽次數(shù)；平喘實(shí)驗(yàn)顯示，本品高劑量能明顯延長(zhǎng)豚鼠引喘潛伏期，本品大劑量及氨茶堿組可減少抽搐跌倒動(dòng)物數(shù)量；毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)顯示，本品大劑量具有抑制乙酸提高小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的作用。結(jié)論化痰理氣口服液具有明顯的止咳平喘的功效，并且抑制乙酸提高小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的作用。

化痰理氣口服液；止咳平喘；毛細(xì)血管通透性

LIU Suxiang1， CHEN Xi2， XU M inni1， WU Wenping3， YANG Lisheng1， WANG Xianzhu4， BAI Lijun1， DOU Jianwei2*
(1. Department of Pu1monary Disease， Xi'an Hospita1 of Traditiona1 Chinese Medicine， Xi'an 710021， China；2. Schoo1 of Pharmacy， M edica1 Co11ege of Xi'an Jiaotong University， Xi'an 710061， China；3. Department of Hepato1ogy， Xi'an Hospita1 of Traditiona1 Chinese Medicine， Xi'an 710021， China；4. Department of Pharmacy， Xi'an Hospita1 of Traditiona1 Chinese M edicine， Xi'an 710021， China)

Objective To eva1uate the re1ieving cough and asthma effects of Huatan Liqi ora11iquid and its inf1uence on b1ood caPi1-1ary Permeabi1ity of the abdomina1 in mice.Methods AdoPting cough exPeriment and asthma exPeriment induced by ammonia in mice and histamine PhosPhate in guinea Pigs resPective1y method to study the re1ieving cough and asthma effects of Huatan Liqi ora1 1iquid.B1ood caPi11ary Permeabi1ity was observed by Evans b1ue exPeriment.Resu lts Cough exPeriment showed that the grouP of high dose cou1d significant1y Pro1ong themice cough incubation Period and the frequency of cough in 2 min,re1ieving asthma exPeriments showed that the grouP of high doses can obvious1y Pro1ong asthma incubation Period of the guinea Pig,the grouPof high doses and aminoPhy11ine can decrease the amount of twitched anima1s induced by histamine PhosPhate in guinea Pigs,and caPi11ary Permeabi1ity exPeriments have shown that high doses of the Product Possesses inhibitory effected on acetic acid to imProve b1ood caPi11ary Permeabi1ity of the abdomina1 cavity.Conclusion Huatan Liqi ora11iquid has obvious effect of re1ieving cough and asthma,and it can inhibit the action of the acetic acid to imProve b1ood caPi11ary Permeabi1ity of the abdomina1 cavity.

Huatan Liqiora11iquid；re1ieving cough and asthma；caPi11ary Permeabi1ity

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.02.071

1672-2779（2016）-02-0137-03

國(guó)家中醫(yī)藥管理局第三批全國(guó)優(yōu)秀中醫(yī)臨床人才研修項(xiàng)目；陜西省中醫(yī)藥管理局課題(No：13-LC032)

*通訊作者：djw@mail．xjtu．edu．cn