厚樸居群葉表皮毛的顯微特征差異及分類意義

楊 旭， 楊志玲， 麥 靜， 潘文婷， 李火根

( 1. 南京林業(yè)大學 林木遺傳與生物技術(shù)省部共建教育部重點實驗室， 南京 210037； 2. 中國林科院亞熱帶林業(yè)研究所，浙江 富陽， 311400； 3. 中國林科院亞熱帶林業(yè)實驗中心， 江西 分宜 336600 )

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厚樸居群葉表皮毛的顯微特征差異及分類意義

楊 旭1,2， 楊志玲2， 麥 靜2， 潘文婷3， 李火根1*

( 1. 南京林業(yè)大學 林木遺傳與生物技術(shù)省部共建教育部重點實驗室， 南京 210037； 2. 中國林科院亞熱帶林業(yè)研究所，浙江 富陽， 311400； 3. 中國林科院亞熱帶林業(yè)實驗中心， 江西 分宜 336600 )

葉片的微觀形態(tài)特征包括表皮的毛被特征，在現(xiàn)代植物分類研究中被越來越多地應(yīng)用于疑難類群的分類鑒定中。厚樸為我國常用中藥，該分類群的分類地位一直存在著很大爭議。該研究選取16個厚樸的天然群體，運用光學和電子顯微鏡觀測不同居群厚樸葉片的毛被特征，并通過對顯微特征的UPMGA聚類分析，了解其分類地位及親緣關(guān)系。結(jié)果表明：不同居群厚樸葉表皮毛差異顯著，表皮毛各特征均呈現(xiàn)出多態(tài)性。16個居群厚樸葉表皮大致可以分為兩類形態(tài)，一類由2～3個細胞組成，表皮毛直立或微倒伏，長147.48～489.21 μm，頂細胞長度遠長于其他細胞，與其他細胞的銜接方式為直接；另一類表皮毛由2～7個細胞組成，彎曲或扭曲，全長251.70～489.21 μm，頂細胞長176.47～353.23 μm，與其余細胞形成一定的夾角(123.31°～150.61°)，頂細胞與其他細胞的銜接方式以鈍接為主。16個樣本可以分為兩個類群——直立型和彎曲型，所劃分的類群與根據(jù)葉形劃分的類型基本一致。直立型表皮毛又可以劃分為粗短型和細長型，所劃分的類群對應(yīng)的葉形為小凸尖型的厚樸和中間型厚樸。因此，該研究結(jié)果證實厚樸在歸并為一個種后，將其分為3個地理亞種是合理的。

厚樸, 天然居群, 葉表皮毛, 顯微特征, 分類意義

厚樸為常用中藥，在我國已有兩千多年的藥用歷史，以干燥根皮、干皮和枝皮入藥，性辛苦溫，有燥濕消痰，下氣除滿之功效(國家藥典委員會, 2005)。厚樸為多年生植物，其分布和栽培面積很廣，在長期的系統(tǒng)發(fā)育和引種栽培過程中，因為基因交流、遺傳漂變等原因，在外部形態(tài)、內(nèi)部結(jié)構(gòu)和內(nèi)含物含量等方面發(fā)生了豐富的變異。在表型上葉型、毛被、花色上出現(xiàn)了過渡類型(楊志玲和楊旭，2012)。并且由于存在廣泛的營養(yǎng)繁殖，缺少有性生殖的選擇壓力，豐富的變異類型得以保存和進一步發(fā)生，從而造成種下的界定存在很大的爭議。

厚樸藥材來源于厚樸(Magnoliaofficinalis)和凹葉厚樸(M.officinalissubsp.biloba)(劉玉壺等，1996)?！吨袊叩戎参飯D鑒》中將凹葉厚樸作為一個種處理，定名為M.biloba(Rehd. et Wils.)Cheng(中國科學院植物研究所,1972)；《中國藥用植物志》和《中國藥典》各版本將其作為厚樸的變種處理，定名為M.officinalisvar.bilobaRehd. et Wils(國家藥典委員會，2005；裴監(jiān)和周太炎，1957)；《中國植物志》將其作為厚樸的亞種處理，學名為M.officinalissubsp.biloba(Rehd. et Wils.)Law. (劉玉壺等，1996)。此外，鄧朝義(1986)根據(jù)葉柄的長短、頂芽及果柄被毛情況發(fā)表新變種毛芽厚樸(M.officinalisRehd. et Wils. var.pubescensC. Y. Deng)。傅大立等(2007)根據(jù)幼枝、托葉、頂葉芽、混合芽、花蕾和花梗均無毛的情況發(fā)表新變種無毛厚樸M.officinalisRehd. et Wils. var.glabraD. L. Fu T. B Zhao et H T Dai。易同培(2014)根據(jù)花被片、雄蕊花藥及雌蕊群顏色發(fā)表新變種紅花凹葉厚樸[MagnoliaofficinalisRehd. et Wils. subps.biloba(Rehd. et Wils.) Law var.rubicundaYi]。并且，在長期的栽培過程中，又有大量的栽培變種的涌現(xiàn)(趙天榜等，1991a,b)。而這些變種又在不斷地被歸并(紀成據(jù)，1998)。最新版的“FloraofChina”首次把厚樸和凹葉厚樸及以下變種進行歸并，統(tǒng)稱厚樸(Houpo?aofficinalis)。

盡管從實踐利用的角度對厚樸各種、亞種和變種進行了歸并，但厚樸的分類地位及各分類群的分類關(guān)系仍存在著很大的爭議。斯金平等(2000)提出，厚樸葉在種群間和種群內(nèi)，甚至同一植株中均存在連續(xù)的變異，因此將厚樸分為小凸尖型、中間型和凹葉型3個地理宗，并對其觀點提供了同工酶譜帶和化學含量的佐證(朱玉球等，2000；童再康等，2000)。郭寶林等(2001)利用RAPD技術(shù)探討了不同產(chǎn)地厚樸的種內(nèi)關(guān)系，也認為將厚樸分為3個地理宗更為合適，但這一觀點并未得到國內(nèi)外專家的廣泛認可。Yu et al(2011)對厚樸復(fù)合群ITS序列分析結(jié)果顯示，各葉型間沒有ITS序列上的相關(guān)性，且根據(jù)Kimura-2參數(shù)計算的不同產(chǎn)地厚樸間的遺傳距離也未因葉型形態(tài)而表現(xiàn)較近的遺傳距離(Yu et al,2011)。余盛賢等(2010)運用分子譜系對厚樸居群間的遺傳分析也驗證了以上觀點。

以往對厚樸分類學的研究中，利用的均是宏觀的特征，把葉的微觀形態(tài)特征運用到該屬植物的分類研究中，將會提供新的依據(jù)。在植物分類研究中，葉是僅次于花和果實用于分類的特征(王東超等，2012；李相傳等，2010)。葉微觀形態(tài)特征在現(xiàn)代植物分類研究中被越來越多的應(yīng)用與疑難類群的分類鑒定中(彭斌等，2010；徐艷琴等，2013)。表皮毛在種間或種下等級被證實是一類有運用價值的分類特征。因此，本研究運用光學和電子顯微技術(shù)觀測厚樸葉片的毛被特征，旨在通過葉表皮毛被的顯微特征的差異來分析了解厚樸分類群的分類地位及親緣關(guān)系，以期對厚樸進行深入的研究，品種資源的合理開發(fā)與利用、新品種的選育，以及進一步擴大厚樸植物的應(yīng)用范圍提供理論的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

由于“FloraofChina”對厚樸各亞種和變種進行歸類，統(tǒng)稱為厚樸，因此本研究所采集的居群包括小凸尖型厚樸、凹葉型厚樸及中間型厚樸等多種類型，于2014年6-7月厚樸葉片基本成熟時采集厚樸葉片。采集地的經(jīng)緯度情況見表1。每居群采集30個個體，小于30個的全部采集。將采集的植株制成臘葉標本，帶回實驗室備用。

表 1 厚樸樣本來源及野生居群地信息

Table 1 Location and habitat characters of wild population ofHoupo?aofficinalis

居群Population 采集地點 Location經(jīng)度Longitude緯度Latitude海拔Elevation(m) 葉型 LeaftypeAHYX安徽省岳西縣鷂落坪自然保護區(qū)YaoluopingNatureReserve，Yuexi，AnhuiProvince111°21′36″E30°50′24″N824圓鈍，微凸或微凹Obtuse，slightlyconvexorslightlyconcaveAHYX2安徽省岳西縣鷂落坪自然保護區(qū)YaoluopingNatureReserve，Yuexi，AnhuiProvince116°21′36″E30°50′24″N824先端凹缺成二裂ThetipconcaveintotwocracksFJJN福建省建寧縣溪源鄉(xiāng)Xiyuan，Jianning，F(xiàn)ujianProvince117°2′24″E26°31′24″N373圓鈍，微凸或微凹Obtuse，slightlyconvexorslightlyconcaveGXZY廣西省資源縣車田鄉(xiāng)Chetian，Ziyuan，Guangxi110°37′48″E26°1′44″N859全緣，先端圓鈍Entire，apexobtuseGZLP貴州省黎平縣德化鄉(xiāng)Dehua，Liping，GuizhouProvince119°8′24″E26°14′23″N896先端凹缺成二裂ThetipconcaveintotwocracksHBES湖北省建始縣長梁鄉(xiāng)Changliang，Jianshi，HubeiProvince109°27′48″E30°22′48″N525全緣，先端圓鈍Entire，apexobtuseHBES2湖北省建始縣長梁鄉(xiāng)Changliang，Jianshi，HubeiProvince109°27′48″E30°22′48″N525先端凹缺成二裂ThetipconcaveintotwocracksHNAH湖南省安化縣江南鎮(zhèn)Jiangnan，Anhua，HunanProvince111°12′4″E28°22′48″N1021圓鈍，微凸或微凹Obtuse，slightlyconvexorslightlyconcaveHNAH2湖南省安化縣江南鎮(zhèn)Jiangnan，Anhua，HunanProvince111°12′4″E28°22′48″N1021先端凹缺成二裂ThetipconcaveintotwocracksHNSM湖南省石門縣壺瓶山自然保護區(qū)HupingshanNaturalReserve，Shimen，HunanProvince110°19′48″E30°0′36″N1016先端凹缺成二裂ThetipconcaveintotwocracksHNXX河南新縣新集鎮(zhèn)Xiji，Xinxian，HenanProvince114°52′12″E31°37′46″N715先端凹缺成二裂ThetipconcaveintotwocracksSCXH四川省宣漢縣龍泉鄉(xiāng)Longquan，Xuanhan，SichuanProvince108°5′24″E31°29′24″N1530全緣，先端急尖Entire，apexacutusSXLG陜西嵐皋縣滔河鎮(zhèn)Taohe，Langao，ShanxiProvince108°31′12″E30°2′24″N798全緣，先端急尖Entire，apexacutusYNTC云南省騰沖市騰越鎮(zhèn)Tengyue，Tengchong，YunnanProvince98°30′1″E25°1′48″N2252全緣，先端急尖Entire，apexacutusZJAJ浙江省安吉縣天荒坪鎮(zhèn)Tianhuangping，Anji，ZhejiangProvince119°36′31″E30°26′84″N895先端凹缺成二裂ThetipconcaveintotwocracksZJSC浙江省遂昌縣埯口鄉(xiāng)Ankou，Suichang，ZhejiangProvince119°16′13″E28°36′24″N1045圓鈍，微凸或微凹Obtuse，slightlyconvexorslightlyconcave

1.2 方法

每個居群中所有個體均隨機挑選1片葉片，采用葉表皮局部刮取表皮毛制片法，先用吸耳球吹去葉表面的浮塵，均勻刮取葉基、葉尖、葉緣、葉中部的表皮毛于載玻片上，用醋酸甘油(50%冰醋酸∶甘油∶蒸餾水=1∶1∶1)透化后，加拿大樹膠稀釋液封片，室溫下晾干。使用DM BA200-B光學顯微鏡在10 × 40倍鏡下觀測其結(jié)構(gòu)，每居群隨機取20顆完整、具有代表性的表皮毛進行測量，記錄總細胞數(shù)、表皮毛全長、頂細胞長(指表皮毛末端的一個細胞)、其余細胞長、頂余比(頂細胞與其余細胞長度比)、頂細胞比例、頂細胞直徑、頂細胞與其他細胞銜接方式、細胞間是否具有膨大關(guān)節(jié)、是否具有伸長細胞、是否具有內(nèi)含物等信息。

每個居群隨機選取2～3片葉片，挑選葉片中上部靠近葉脈的部位， 將一小塊成熟完好的干葉片直接貼在觀測臺上，鍍導電膜，在KYKY-1000B型掃描電子顯微鏡下觀察拍照。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用Photoshop圖像處理軟件編輯。數(shù)據(jù)采用

SPSS軟件統(tǒng)計，以變異系數(shù)作為種群內(nèi)各形態(tài)特征變異的測度，用單樣本的t-檢驗檢測居群內(nèi)形態(tài)變異的顯著性水平，使用NTSYS 2.2對不同居群表皮毛性狀進行聚類分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 厚樸葉表皮性狀

通過對16個居群厚樸葉下表皮光學和顯微電鏡觀察顯示(表2，圖1，圖2)，厚樸葉表皮密被中長的單列多細胞毛，毛細胞矩形、長方形或不規(guī)則形，基部寬平，末端漸尖，多數(shù)透明無色，部分毛細胞內(nèi)可見暗色油滴狀液體(不確定是油滴還是由細胞壁滲入的透明液)。表皮毛大致可分為兩種形態(tài)。一種由2～3個細胞組成，表皮毛大多直立或微向一側(cè)倒伏，全長147.48～489.21 μm。頂細胞長度遠長于其他細胞，有131.09～388.07 μm，頂細胞占表皮毛全長的79%～91%，頂細胞與其他細胞的銜接方式為直接；另一種表皮毛由2～7個細胞組成，表皮毛大多彎曲或扭曲，全長251.70～489.21 μm，與其余細胞形成一定的夾角(123.31°～150.61°)。頂細胞長度遠長于其他細胞， 有176.47～353.23 μm， 頂細胞占表皮毛全長的65%～82%，頂細胞與其他細胞的銜接方式為直接或鈍接。

表 2 不同居群厚樸表皮毛特征的差異比較

Table 2 Morphological characters of leaf trichomes for differentHoupo?aofficinalispopulations

居群Population表皮毛形態(tài)Shapeofleaftrichome總細胞數(shù)Totalnumberofcells銜接方式Connectionpattern表皮毛長度Fulllength(μm)頂細胞長度Lengthofthefirstcell(μm)頂細胞直徑Diameteroffirstcell(μm)頂細胞比例Ratioofthefirstcell頂細胞與其余細胞夾角Angle(°)AHYX直立Upright2d(0)直接或鈍接Boxer/obtuseangle186．71cd(0．33194)150．22c(0．3193)14．37ab(0．1301)0．80abc(0．0625)173．25a(0．1925)AHYX2彎曲Bent3．67a(0．3134)鈍接Obtuseangle276．73abcd(0．4309)180．48bc(0．4220)11．44b(0．0865)0．65d(0．1962)142．19b(0．2265)FJJN直立Upright2．33b(0．21)直接或鈍接Boxer/obtuseangle165．11cd(0．4094)131．09c(0．4749)14．56ab(0．1367)0．79abcd(0．0722)167．3a(0．0912)GXZY直立Upright2．11cd(0．1564)直接或鈍接Boxer/obtuseangle147．48d(0．0859)133．84c(0．0850)12．53b(0．4405)0．91a(0．0219)172．08a(0．1209)GZLP彎曲Bent2．75bc(0．1818)鈍接Obtuseangle251．70abcd(0．3049)176．74bc(0．1808)13．641b(0．3599)0．73bcd(0．2054)143．41b(0．2436)HBES直立Upright2．5bcd(0．228)直接或鈍接Boxer/obtuseangle278．17abcd(0．6279)241．58abc(0．3938)11．91b(0．2888)0．87abc(0．0575)171．38a(0．0724)HBES2彎曲Bent3．2ab(0．0594)鈍接Obtuseangle362．27abc(0．4803)244．09abc(0．4267)19．09a(0．1356)0．72bcd(0．2083)126．31b(0．3762)HNAH直立Upright2d(0)直接或鈍接Boxer/obtuseangle174．13cd(0．2777)147．04bc(0．3029)14．29ab(0．1336)0．84abc(0．0357)176．09a(0．1687)HNAH2彎曲Bent3．67a(0．3133)鈍接Obtuseangle298．23abcd(0．3841)201．08abc(0．4339)10．99b(0．1981)0．67d(0．1920)123．41b(0．4087)HNSM直立Upright2．7bcd(0．1778)直接或鈍接Boxer/obtuseangle245．68abcd(0．5447)197．50abc(0．5545)13．68b(0．1754)0．80abcd(0．075)170．61a(0．2253)HNXX彎曲Bent2．5bcd(0．228)鈍接Obtuseangle280．11abcd(0．4648)225．01abc(0．5071)11．93b(0．3252)0．82abc(0．2195)133．81b(0．3482)SCXH直立Upright2．50bcd(0．204)直接或鈍接Boxer/obtuseangle292．42abcd(0．9321)261．74abc(0．9673)14．92ab(0．3257)0．86abc(0．0732)167．39a(0．0426)SXLG直立Upright2．82bc(0．1454)直接或鈍接Boxer/obtuseangle429．13ab(0．6717)296．49abc(0．5709)12．318b(0．2583)0．73bcd(0．2192)173．01a(0．0701)YNTC直立Upright2．5bcd(0．228)直接或鈍接Boxer/obtuseangle496．98a(0．5298)388．07a(0．5402)14．77ab(0．1537)0．88ab(0．1023)168．67a(0．1166)ZJAJ彎曲Bent2．71bcd(0．1808)鈍接Obtuseangle489．21a(0．6141)353．23ab(0．7014)12．17b(0．2761)0．71cd(0．1827)127．67b(0．4151)ZJSC直立Upright2．0d(0)直接或鈍接Boxer/obtuseangle186．74bcd(0．5073)163．64bc(0．5812)12．95b(0．3938)0．84abc(0．1190)167．67a(0．1428)平均Average2．6225(0．1641)285．05(0．4748)218．24(0．4669)13．4724(0．2386)0．7887(0．1276)155．8285(0．2038)

注：同列中不同的小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

Note: The different small letters in the same column indicate the significant differenctes (P<0.05).

圖 1 不同居群厚樸表皮毛光鏡照片F(xiàn)ig. 1 Comparison of the morphological characters among different Houpo?a officinalis populations

圖 2 不同居群厚樸葉表皮毛的顯微電鏡照片F(xiàn)ig. 2 Microscopic characters of leaves trichomes in different Houpo?a officinalis populations under LM a. AHYX; b. AHYX2， c. FJJN; d. GXZY; e. GZLP; f. HBES; g. HBES2; h. HNAH; i. HNAH2; j. HNSM， k. HNXX， l. SCXH; m. SXLG; n. YNTC; o. ZJSC; p. ZJAJ.

圖 3 不同居群厚樸葉表皮毛的UPGMA聚類圖Fig. 3 UPGMA dendrogram using morphological characters for different Houpo?a officinalis populations

2.2 表皮毛特征在厚樸居群內(nèi)和居群間的變異

不同居群厚樸葉表皮表皮毛差異顯著，表皮毛形態(tài)、構(gòu)成細胞數(shù)、表皮毛長度、頂細胞長度、頂細胞直徑、頂細胞比例、頂細胞與其余細胞夾角都呈現(xiàn)出非常多的多態(tài)性(圖1，圖2)(以下數(shù)據(jù)均展示的是居群水平)。表皮毛的形態(tài)及構(gòu)成表皮毛的細胞數(shù)大致可分為兩類，一類表皮毛由2～3個細胞組成，表皮毛大多直立或微向一側(cè)倒伏；另一種表皮毛由2～7個細胞組成，表皮毛大多彎曲或扭曲。構(gòu)成細胞個數(shù)最多的為HNAH的凹葉厚樸，平均由3.67個細胞構(gòu)成，構(gòu)成細胞數(shù)最少的為AHYX、HNAH、ZJSC的中間型厚樸，均是由兩個細胞構(gòu)成，一個為占絕對優(yōu)勢的頂細胞，一個為稍膨大的基部細胞，構(gòu)成細胞個數(shù)最多的居群為最少居群1.84倍。表皮毛長度最長的為ZJAJ居群(489.21 μm)，表皮毛長度最短的為GXZY居群(147.48 μm)，長度最長的居群為最短居群的3.31倍。頂細胞長度最長的為YNTC居群(388.07 μm)，長度最小的為FJJN居群(131.09 μm)，長度最大居群為最小居群的2.63倍；頂細胞直徑最大的為HBES的凹葉厚樸居群(19.09 μm)，直徑最小的為HNAH的凹葉厚樸居群(10.99 μm)，直徑最大的居群為最小居群的1.74倍；頂細胞比例最大的為GXZY居群，頂細胞占表皮毛全長的91%，頂細胞比例最小的為AHYX的凹葉厚樸，頂細胞占表皮毛全長的65%；頂細胞與其余各細胞的夾角在各居群間差異沒有達到顯著水平，其中夾角最大的為HNAH中間型厚樸，夾角最小的為HNAH的凹葉厚樸，前者為后者的1.43倍。

從表2可以看出，表皮毛各性狀中，表皮毛性狀、頂細胞銜接方式、頂細胞與其余細胞夾角等性狀在居群內(nèi)表現(xiàn)非常一致。而表皮毛長度、頂細胞長度、頂細胞直徑、總細胞數(shù)、頂細胞比例等則呈現(xiàn)出較大的變異。變異系數(shù)在居群內(nèi)差異最為顯著的是頂細胞長度，變異系數(shù)最大的是SCXH居群(0.967 3)，比最小的GXZY居群(0.085 0)高11.38倍，此外，表皮毛長度在各居群間差異也較顯著。同一居群內(nèi)表皮毛性狀，一般凹葉厚樸的變異系數(shù)要高于小凸尖型和中間型厚樸。

2.3 厚樸表皮毛變異模式

基于表皮毛的主要特征的UPMGA聚類分析結(jié)果顯示(圖3)，16個樣本可顯著分為兩個類群，一類為直立類型的表皮毛，一類為彎曲類型的表皮毛，所劃分的兩個類群與葉形劃分類型一致。其中直立型表皮毛又可顯著分為兩類，一類毛被較長，頂細胞直徑較小，這類為小凸尖型的厚樸，一類毛被較前者粗短， 葉型為中間型厚樸。而典型的凹葉厚樸樣本分支的分辨率較差，地理種源相近的居群沒有相應(yīng)的聚在一起。因此我們建議將厚樸分類群分為兩個類型，分別為厚樸和凹葉厚樸，厚樸下又分為兩個變型，小凸尖型和中間型厚樸。

3 討論

3.1 基于厚樸表皮毛特征的分類學啟示

長期以來，枝、芽的解剖結(jié)構(gòu)、化學成分、核型和染色體、遺傳多樣性等都曾被運用于厚樸的分類學研究(王峻鵬，2008；張春霞等，2009；He et al, 2009)，但這些研究都存在樣本數(shù)量不足的缺點，其結(jié)果都存在著較大的分歧。葉表皮的毛被特征作為種間的特異性差別，是一種比較穩(wěn)定的特征，對于種及種下單元的劃分具有一定的參考意義(高敏和郭寶林，2010)。一般認為，表皮的毛被特征，可作為種間及種下分類群的擴散途徑及演化趨勢的形態(tài)學證據(jù)。物種曾經(jīng)的中心分布區(qū)其葉表皮毛類型比較原始，而分布于外圍區(qū)域的類型為衍生類型。染紅平等(1991)綜合葉表皮毛的類型、密度及分支特征提出我國常綠櫟類毛的演化趨勢為從單一到復(fù)雜的演化途徑，分化出形態(tài)各異的結(jié)構(gòu)復(fù)雜的毛系。而高敏(2011)對淫羊藿屬表皮毛的研究認為，單一表皮毛的演化途徑為細胞數(shù)由多到少，細胞壁從薄到厚至中部膨大，頂細胞比例逐漸增大，伸長細胞由無到有、相鄰細胞連接方式由直接到鈍接甚至“t”型相接，表皮毛形態(tài)從平直到卷曲。

本研究基于厚樸在我國亞熱帶地區(qū)廣泛分布的前提下，在全分布區(qū)內(nèi)選擇大樣本天然群體進行觀察，且選擇了每種群的30個個體的表皮毛進行詳盡的測量，研究樣本和數(shù)量具有較好的代表性。研究認為依據(jù)葉表皮的表皮毛特征，厚樸種群可明顯聚為三大類型，分別為典型的小凸尖型厚樸、典型的凹葉厚樸和中間型厚樸，這一結(jié)論與斯金平等(2000)將厚樸以葉的類型劃分為3個地理宗的結(jié)果吻合。郭寶林等(2011)通過RAPD分子標記將不同種源厚樸的聚類分析結(jié)果顯示，典型的厚樸聚類分辨率最好，可單獨聚為一支，而中間型厚樸和凹葉厚樸形成一個復(fù)合的群體，這與本文的研究結(jié)果有一定的相似性。此外，俞盛賢等(2010)運用2個葉綠體基因間序列psbA-mtH和tmj-tmF對不同居群的厚樸和凹葉厚樸的遺傳結(jié)構(gòu)研究認為凹葉厚樸為較原始的類型，從凹葉厚樸中進化出了厚樸，基于此，我們推測，厚樸葉表皮表皮毛的演化趨勢為細胞數(shù)由多到少，頂細胞比例逐漸增大，表皮毛形態(tài)從卷曲到平直。

3.2 整合物種概念在厚樸分類學上的運用

厚樸分類群分布范圍非常廣，野外調(diào)查結(jié)果顯示，厚樸分布區(qū)橫跨21.11個經(jīng)度，6.6個緯度。小凸尖型的厚樸主要分布于大巴山脈、武陵山脈及大渡河兩岸，凹葉厚樸主要分布于浙、閩、贛皖交界的武夷山系、洞宮山系、南嶺山系及廣西北部和東北部(劉玉壺等，1996)。兩者在分布區(qū)上有許多的重疊。厚樸花期一般在5-6月，凹葉厚樸花期為4-5月，兩者花期很難相遇，在一定程度上防止了不同分類群間的基因漸滲。然而，近幾十年的研究逐漸認識到，生殖隔離并不是物種形成的直接原因，只是差異適應(yīng)與遺傳漂變的一個副產(chǎn)物(Wu et al，2001；Rieseberg et al，2006)。

通常提到的物種的形成是譜系不斷分裂和不斷融合的過程(Mallet，2007)。許多物種，已經(jīng)在形態(tài)、化學成分或異常結(jié)構(gòu)上產(chǎn)生很大的變異，但這種變異還需要時間加以固定，是處于形成兩個種的“在路上”的階段(劉建全，2014)。厚樸分類群中，表型特征、化學成分及遺傳變異都存在顯著的差異，因此有理由認為，厚樸為多型種。多型種通過地理或生殖的隔離而產(chǎn)生地方宗、地理宗和地理亞種的階段，最后才進化成種。因此，本研究認為，厚樸在歸并為一個種后，將其分為三個地理亞種是合理的。但是，該結(jié)論是建立在以葉表皮的顯微結(jié)構(gòu)的差異為基礎(chǔ)上的，還需要采用‘整合物種概念’(Integrated species concept)的綜合手段。在居群水平上，對廣義形態(tài)分類性狀包括花部特征、花粉粒形態(tài)、種實特性的差異等進行廣泛的統(tǒng)計分析，并結(jié)合DNA條形碼序列及化學成分的差異；并對上述獲得的形態(tài)或遺傳間斷群進行地理隔離、生態(tài)以及生殖隔離的深入分析和實驗驗證，綜合以上證據(jù)獲得的間斷或單系群，重新進行厚樸界限的劃定和分類修訂。使其具有更為廣泛的應(yīng)用性或驗證性。

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大多數(shù)高職院校對頂崗實習階段的黨團組織生活沒有足夠重視，對頂崗實習學生的思想政治教育工作缺乏周密的教學計劃，沒能建立起完整有效的管理體系；也沒有建立起學生、輔導員、實習指導教師、企業(yè)技術(shù)指導師傅之間進行思想溝通的有效載體。況且許多非公有制經(jīng)濟組織還沒有建立黨組織，大學生流動黨員在這些企業(yè)中進行頂崗實習無法轉(zhuǎn)組織關(guān)系，無法過組織生活。

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Comparison of characteristics of leaf trichomes inHoupo?aofficinalisand their taxonomical significances

YANG Xu1,2， YANG Zhi-Ling2， MAI Jing2， PAN Wen-Ting3, LI Huo-Gen1*

( 1.KeyLaboratoryofGenetics&Biotechnology,NanjingForestryUniversity,MinistryofEducation, Nanjing 210037, China；2.ResearchInstituteofSubtropicalForestry,ChineseAcademyofForestry, Fuyang 311400, Zhejiang, China;3.SubtropicalExperimentalCenter,ChineseAcademyofForestry, Fenyi 336600, Jiangxi, China)

CortexHoupo?aofficinalisis a traditional Chinese medicine. There have been long disputes in classifying status in this taxonomic group. In this study, microphotography and scanning electron microscope were used to observe leaf trichomes of this taxonomic group of 16 natural populations. The result indicated that there existed significant differences in leaf epidermal hair among 16 populations, which indicated high polymorphism between populations. Microscopic structures of epidermal hair could be divided into two groups. One kind of epidermal hair was composed of 2-3 cells, upright or flattened a little, 147.48-489.21 μm long. The first cell was much longer than other cells, and comprises 79%-91% of the whole hair length. The connection pattern to other cells was boxer. The another kind of epidermal hair was composed of 2-7 cells, bent or twisted, 251.70-489.21 μm long. The first cell was 176.47-353.23 μm long, which comprised 65%-82% of the whole hair length and bearing angle of 123.31-150.61 to other cells. The connection pattern to other cells was obtuse angle. According to UPMGA clustering analysis of morphological diversity among populations, the hair ofH.officinaliscould be divided into two main groups, namely upright group and bent group. The result was basically coincident with Leaf-shaped. Meanwhile upright group can also be divided into two groups, namely leptosomatic group and stubby group, corresponding to typicalH.officinalisand middle type. Therefore, the results prove that it is reasonable thatH.officinalisshould be divided into three geographic clans.

Houpo?aofficinalis, leaf trichomes, microscopic characters, classification significance

10.11931/guihaia.gxzw201506001

2015-09-10

2015-12-20

國家自然科學基金(31270585)； 農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金項目 (2013GB24310613) [Supported by the National Natural Science Foundation of China (31270585)； Fund for Agricultural Scientific and Technological Achievement Transformation (2013GB24310613)]。

楊旭(1979-)，女，浙江建德人，碩士，助理研究員，主要從事藥用植物資源保護和利用，(E-mail)yangxu2119@126.com。

*通訊作者： 李火根，教授，博士生導師，主要從事林木遺傳育種工作，(E-mail)hgli@njfu.edu.cn。

Q944.56

A

1000-3142(2016)11-1335-09

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