血液溫度和貯存時(shí)間對(duì)去白細(xì)胞血液質(zhì)量效果分析*

魯國(guó)勇，朱榮華，李維錦,陳兆慶，謝函凌，段志燕

(云南省保山市中心血站 678000)

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·臨床研究·

血液溫度和貯存時(shí)間對(duì)去白細(xì)胞血液質(zhì)量效果分析*

魯國(guó)勇，朱榮華△，李維錦,陳兆慶，謝函凌，段志燕

(云南省保山市中心血站 678000)

目的 了解血液的溫度、采血后貯存時(shí)間對(duì)去白細(xì)胞血液制備的影響，尋找白細(xì)胞濾除的最佳溫度和貯存時(shí)間，為臨床提供更加優(yōu)質(zhì)的血液制品，讓更多患者受益。方法 按照血液溫度、采血后貯存時(shí)間，對(duì)濾后白細(xì)胞殘存量、紅細(xì)胞回收率效果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 (1)血液溫度的影響，通過(guò)397份標(biāo)本的觀察，血液溫度在10 ℃及以下172份，合格率86.62%(149/172)；10 ℃以上225份，合格率61.77%(139/225)。2組白細(xì)胞濾過(guò)合格率經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=30.22，P<0.05)。(2)采血后貯存時(shí)間的影響，通過(guò)545份標(biāo)本的觀察，采血后貯存時(shí)間4 h內(nèi)濾除208份，合格率59.13%(123/208)；4～12 h內(nèi)濾出189份，合格率 87.30%(165/189)；12～48 h內(nèi)濾除 148份，合格率 86.48%(128/148)；3組白細(xì)胞濾過(guò)率經(jīng)過(guò)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.16，P<0.05)。結(jié)論 結(jié)合當(dāng)?shù)貙?shí)際，云南保山無(wú)償獻(xiàn)血血液白細(xì)胞去除工作最佳濾出溫度，血液溫度控制在2～10 ℃。兼顧到冷沉淀的制備時(shí)效(8 h內(nèi))，血液貯存4～8 h內(nèi)進(jìn)行白細(xì)胞濾出工作為最佳過(guò)濾時(shí)間。

白細(xì)胞； 時(shí)間； 溫度； 分析

臨床上由輸血引發(fā)的各種疾病越來(lái)越引起人們的重視，輸注過(guò)濾去除白細(xì)胞血液避免因輸入獻(xiàn)血者的白細(xì)胞而引起的非溶血性發(fā)熱性輸血反應(yīng)(FNHTR)和同種免疫反應(yīng)，防止輸血相關(guān)性移植物抗宿主病(TA-GVHD)的發(fā)生預(yù)防巨細(xì)胞病毒(CMV)感染，減少輸血引發(fā)的病毒性傳染疾病和血小板輸注無(wú)效等，是提高輸血療效和安全的有效手段，在臨床治療中，對(duì)輸血安全、臨床治療效果、成分血的保存起著十分重要的作用。去除白細(xì)胞血液質(zhì)量又有明確規(guī)定GB18469-2012[1]，保山市對(duì)去除白細(xì)胞工作無(wú)數(shù)據(jù)可查，為保證質(zhì)量，保山市中心血站開(kāi)展濾除白細(xì)胞最佳溫度和最佳貯存時(shí)間觀察，以彌補(bǔ)保山少白細(xì)胞血液工作數(shù)據(jù)的空缺?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 全血；一次性使用去白細(xì)胞多聯(lián)采血袋；大容量Nageotte血細(xì)胞計(jì)數(shù)板；普通顯微鏡；邁瑞B(yǎng)C-5300全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀，溫差電偶溫度儀。

1.2 方法 隨機(jī)抽取采血時(shí)間在48 h內(nèi)(采血時(shí)在血袋外用記號(hào)筆標(biāo)明采血時(shí)間T0)用去白細(xì)胞多聯(lián)袋采集的全血，在濾除白細(xì)胞前測(cè)量全血溫度(三明治夾心法)，記錄測(cè)量溫度，在過(guò)濾開(kāi)始時(shí)記錄時(shí)間(T1)，結(jié)束時(shí)記錄時(shí)間(T2)，過(guò)濾時(shí)間T=T2-T1，血液的貯存時(shí)間T=T1-T0。根據(jù)血液不同的測(cè)量溫度值、血液的貯存時(shí)間，白細(xì)胞、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)分析溫度對(duì)白細(xì)胞濾除效果(白細(xì)胞殘留量)以及對(duì)紅細(xì)胞的影響(紅細(xì)胞回收率)。

1.3 紅細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及過(guò)濾后白細(xì)胞驗(yàn)證 過(guò)濾前、后用全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)白細(xì)胞、紅細(xì)胞。驗(yàn)證白細(xì)胞：50 μL大容量Nageotte血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤(pán)計(jì)數(shù)。

1.4 判定合格標(biāo)準(zhǔn) 白細(xì)胞殘留量小于2.5×106/U；紅細(xì)胞回收率為≥85%。

2 結(jié) 果

2.1 溫度對(duì)濾除白細(xì)胞的影響 通過(guò)397份標(biāo)本的觀察，血液溫度在2～10 ℃ 172份，通過(guò)濾除白細(xì)胞后，合格率86.7%(149/172)，紅細(xì)胞回收率為92.9%；10～15 ℃150份，合格率74.0%(111/150)，紅細(xì)胞回收率為89.9%；15 ℃以上75份，合格率37.3%(28/75)，紅細(xì)胞回收率為91.2%；3組白細(xì)胞濾過(guò)率經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=63.97，P<0.05);濾前溫度10～15 ℃、15 ℃以上兩組白細(xì)胞濾過(guò)合格率經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=28.47，P<0.05)。

將濾前血液溫度2～10 ℃的172份分解為2組(2～8 ℃和8～10 ℃)進(jìn)行白細(xì)胞濾過(guò)效果分析，其中2～8 ℃組35份，合格31份，不合格4份，合格率為88.57%，紅細(xì)胞回收率97.40%；8～10 ℃組137份，合格118份，不合格19份，合格率為86.13%，紅細(xì)胞回收率92%；兩組白細(xì)胞濾過(guò)合格率經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.143，P>0.05)。

2.2 過(guò)濾溫度與過(guò)濾時(shí)間分析 血液溫度高，過(guò)濾時(shí)間短；溫度低，過(guò)濾時(shí)間長(zhǎng)，見(jiàn)表1。

表1 過(guò)濾溫度與過(guò)濾時(shí)間的關(guān)系±s，min)

2.3 貯存時(shí)間對(duì)濾除白細(xì)胞效果的影響 通過(guò)545份標(biāo)本的觀察，采血貯存時(shí)間4 h(A組)內(nèi)濾除208份，合格率59.13%；4～12 h(B組)內(nèi)濾出189份，合格率87.30%；13～48 h(C組)148份，合格率 86.48%，見(jiàn)表2。3組白細(xì)胞濾過(guò)率經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.16，P<0.05)。兩兩比較，A組與B組白細(xì)胞合格率經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=39.44，P<0.05)；A組與C組白細(xì)胞合格率經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=31.11，P<0.05)；B組和C組白細(xì)胞合格率經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.05，P>0.05)。

表2 貯存時(shí)間對(duì)濾除白細(xì)胞的影響

2.4 貯存溫度與時(shí)間之間的關(guān)系 溫度與貯存時(shí)間(8 h內(nèi))之間存在著負(fù)相關(guān)，Pearson相關(guān)系數(shù)(r=-0.691,P<0.05),其中200 mL相關(guān)系數(shù)(r=-0.753,P<0.05),300 mL相關(guān)系數(shù)(r=-0.742,P<0.05),400 mL相關(guān)系數(shù)(r=-0.396,P<0.05)。

3 討 論

本課題主要研究同一白細(xì)胞濾器對(duì)血液溫度和采血后貯存時(shí)間的影響。血液溫度在10 ℃及以下通過(guò)濾除白細(xì)胞后，合格率86.6%(149/172)，紅細(xì)胞回收率為92.9%；10 ℃以上合格率61.7%(139/225)，紅細(xì)胞回收率為90.2%。2組白細(xì)胞濾過(guò)合格率經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=30.22，P<0.05)。說(shuō)明血液溫度低過(guò)濾后白細(xì)胞去除率顯著提高，這與謝如鋒等[2]的研究結(jié)果相一致。效果較溫度高好。因?yàn)檠悍胖迷?～6 ℃冰箱一段時(shí)間后白細(xì)胞、血小板和纖維蛋白凝聚形成微聚體從而容易被去除[3]。另外白細(xì)胞在4～6 ℃中變形能力差，容易被白細(xì)胞濾器攔截。在制備去白細(xì)胞血液過(guò)程中，去白細(xì)胞血液質(zhì)量與濾器的材質(zhì)也有很大關(guān)系。

從過(guò)濾時(shí)間看，200、300、400 mL 3種規(guī)格型號(hào)的血袋，血液溫度2～10 ℃組過(guò)濾時(shí)間均較10 ℃以上組均有延長(zhǎng)1～2 min。當(dāng)血液溫度降低時(shí)，血液黏度增加，流速減小，白細(xì)胞因重力慣性過(guò)濾機(jī)理穿過(guò)濾材的減少，使血液過(guò)濾材料中滯留的時(shí)間增長(zhǎng)，有利于白細(xì)胞被濾材截留[4]。另外，當(dāng)溫度降低時(shí)，細(xì)胞膜脂質(zhì)雙分子層的流動(dòng)性減弱，細(xì)胞的變形能力變差，使白細(xì)胞更容易被過(guò)濾材料截留[2]。

溫度與貯存時(shí)間(8 h內(nèi))之間存在著負(fù)相關(guān)，Pearson相關(guān)系數(shù)(r=-0.691,P<0.05),其中200 mL相關(guān)系數(shù)(r=-0.753,P<0.05),300 mL相關(guān)系數(shù)(r=-0.742,P<0.05),400 mL相關(guān)系數(shù)(r=-0.396,P<0.05)。血液在4 ℃貯存5 h后，血液溫度已均勻降至8 ℃左右[5]。本次觀察127份血液貯存在(4±2)℃冰箱5 h后溫度，血液溫度降至10 ℃以下97份，占76.38%，與相關(guān)研究基本一致。

4～8 h組與13～48 h(隔夜)組比較，紅細(xì)胞回收率13～48 h組稍有降低外，白細(xì)胞濾除效果并無(wú)顯著提高。過(guò)濾時(shí)間有一定延長(zhǎng)。因此，對(duì)本文所使用的濾器而言，其過(guò)濾機(jī)制可能是以篩濾為主，血液溫度對(duì)白細(xì)胞濾除有顯著影響。增加貯存時(shí)間未能產(chǎn)生進(jìn)一步的影響，僅使紅細(xì)胞回收率略有下降，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

白細(xì)胞在(4±2)℃只能保存5～8 d，全血在4 ℃儲(chǔ)存7 d，25%的粒細(xì)胞已不完整。隨著細(xì)胞的死亡和裂解，細(xì)胞碎片增加，它們中有些仍然含有HLA-Ⅱ類(lèi)抗原，不能被去白細(xì)胞濾器濾除，同樣可引起同種免疫反應(yīng)?，F(xiàn)在許多研究者普遍認(rèn)為，貯存前去除白細(xì)胞比貯存后去除白細(xì)胞更為優(yōu)越，Yaprak等[6]研究了貯存前去除白細(xì)胞和貯存后去除白細(xì)胞的血液中生物活性物質(zhì)的變化，細(xì)胞外髓過(guò)氧化物酶(MPO)、嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(BCP)，組胺(HIS)和Ⅰ型纖溶酶原激活物抑制因子(PAI-1)在未濾除白細(xì)胞的血液中均呈現(xiàn)時(shí)間依賴(lài)性累計(jì)增加，貯存前濾除白細(xì)胞可預(yù)防這些物質(zhì)的產(chǎn)生。

血液的貯存時(shí)間、貯存溫度、血漿的量、過(guò)濾前白細(xì)胞的量、過(guò)濾時(shí)間的長(zhǎng)短、濾過(guò)時(shí)血液的流速等都會(huì)影響白細(xì)胞的去除效果[7]。本次研究的一次性濾除白細(xì)胞血袋，在保山市的最佳濾過(guò)濾時(shí)間為采血后4～8 h為最佳時(shí)間，最佳濾除溫度為2～10 ℃。在今后的工作中找出各種型號(hào)濾器血液濾除白細(xì)胞效果好、操作簡(jiǎn)單的制備方法，掌握血液的最佳濾除白細(xì)胞時(shí)機(jī)是今后努力的方向。

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云南省保山市科技立項(xiàng)項(xiàng)目(?？谱諿2016]19號(hào))。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.037

A

1673-4130(2016)23-3334-03

2016-06-11

2016-09-01)

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