IL-28B基因rs129798600多態(tài)性治療HCV基因型1患者早期應(yīng)答的關(guān)系

許建平,鄺永輝

(廣東省河源市源城人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 517000)

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·論 著·

IL-28B基因rs129798600多態(tài)性治療HCV基因型1患者早期應(yīng)答的關(guān)系

許建平,鄺永輝

(廣東省河源市源城人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 517000)

目的 探討在白細(xì)胞介素28B(IL-28B)基因多態(tài)性基礎(chǔ)上對丙型肝炎病毒(HCV)基因型1患者的持續(xù)性病毒學(xué)應(yīng)答(SVR)做出的預(yù)測，為患者治療提供科學(xué)參考依據(jù)。方法 應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測HCV定量值；使用基因測序方法檢測rs129798600的基因型。結(jié)果 發(fā)生完全早期病毒性應(yīng)答(cEVR)患者的年齡顯著低于未發(fā)生cEVR(Non-cEVR)患者，而男性比例與丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶水平則顯著高于后者；IL-28B基因型CC和年齡小于40歲為發(fā)生cEVR的獨(dú)立相關(guān)因素。結(jié)論 HCV rs129798600位點(diǎn)CT基因型的患者，則可以考慮對年齡小于40歲的患者進(jìn)行PEG-IFN聯(lián)合利巴韋林治療，而對其他患者可以進(jìn)行三聯(lián)治療。

丙型肝炎； 多態(tài)性； 干擾素； 利巴韋林

丙型肝炎是一種主要經(jīng)血液傳播的疾病，80%的丙型肝炎病毒(HCV)感染者可發(fā)展成慢性肝炎，如果不治療大多數(shù)患者在20年后可發(fā)展成肝硬化，少數(shù)可發(fā)展成肝癌(HCC)，故HCV是嚴(yán)重威脅人類健康的社會(huì)和公共衛(wèi)生問題,其治療也成為非常緊迫的問題[1-2]。影響HCV治療效果的因素既有宿主因素，也有病毒因素。宿主因素包括白細(xì)胞介素28B(IL-28B)基因多態(tài)性、年齡、性別、種族、肝纖維化程度和肥胖等，病毒因素包括HCV基因型、病毒載量、治療過程中病毒的動(dòng)力學(xué)等[3]。其中IL-28B基因多態(tài)性是慢性丙型肝炎(CHC)患者治療持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答(SVR)最強(qiáng)的預(yù)測因素[4-5]。

本研究回顧性分析感染HCV基因型1的中國CHC患者rs129798600基因多態(tài)性與完全早期病毒性應(yīng)答(cEVR)的關(guān)系，探討在IL-28B基因多態(tài)性基礎(chǔ)上對HCV基因型1患者的持續(xù)性病毒學(xué)應(yīng)答(SRV)做出進(jìn)一步的預(yù)測，為治療前剔除難治性患者提供科學(xué)參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究的所有對象來自廣東省河源市人民醫(yī)院2009年5月至2015年4月的門診患者。診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2004年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)制定的《丙型肝炎防治指南》中的規(guī)定。納入標(biāo)準(zhǔn)：HCV抗體陽性且HCV RNA陽性；未接受過針對CHC的治療；具有實(shí)驗(yàn)室檢測資料；具備全血和血清標(biāo)本可進(jìn)行IL-28B和HCV基因分型檢測；接受聚乙二醇干擾素(PEG-IFN)聯(lián)合利巴韋林(RBV)標(biāo)準(zhǔn)治療且具有基線和第12周HCV定量數(shù)據(jù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：人類免疫缺陷病毒(HIV)及其他肝炎病毒感染；酒精性或藥物性肝病。選擇其中HCV基因型1的患者共356例進(jìn)行分析。cEVR的判斷標(biāo)準(zhǔn)為治療第12周 HCV RNA較治療前下降大于2 Log;SVR的判斷標(biāo)準(zhǔn)為治療結(jié)束之后12周或者24周HCV RNA檢測不到。標(biāo)本收集及核酸提?。核袠?biāo)本均在患者治療前進(jìn)行收集并分裝保存于-80 ℃?；蚪MDNA及HCV RNA采用Qiagen離心柱試劑盒，按照說明書進(jìn)行操作。所有參與患者簽署知情同意書并獲醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 儀器與試劑 血球計(jì)數(shù)儀及配套試劑由日本希森美康公司提供，全自動(dòng)生化分析儀由日本日立公司生產(chǎn)，配套試劑由上海復(fù)星診斷提供。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)儀為美國ABI公司產(chǎn)品7500?；蚪MDNA及HCV RNA提取試劑盒為深圳凱杰生物技術(shù)公司產(chǎn)品。HCV RNA采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒為深圳凱杰生物技術(shù)公司產(chǎn)品，檢測下限為100 IU/mL。

1.3 方法 IL-28B與HCV基因分型：IL-28B及HCV基因分型采用測序法檢測，測序的引物提供給Invitrogen公司合成；提取好的IL-28B DNA和HCV RNA直接送Invitrogen公司進(jìn)行測序及結(jié)果分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。等位基因頻率進(jìn)行哈代-溫伯格平衡分析。分類變量采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)。連續(xù)變量之間的比較采用t檢驗(yàn)。各因素與SVR的關(guān)系采用多元Logistic回歸分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 患者基本特征比較 發(fā)生cEVR患者的年齡顯著低于未發(fā)生cEVR(Non-cEVR)患者，而男性比例與丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平則顯著高于后者，其他指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 cEVR與Non-cEVR患者的基本資料

2.2 患者各項(xiàng)指標(biāo)異常率比較 患者中小于40歲、男性、IL-28B基因型CC、HCV RNA小于40 000 IU/mL、ALT>90 U/L、其他各項(xiàng)指標(biāo)處于正常參考范圍以外(異常)的患者比例見表2。cEVR患者中小于40歲、男性、IL-28B基因型CC、ALT>90 U/L比例顯著高于Non-cEVR患者。

表2 cEVR與Non-cEVR患者各項(xiàng)指標(biāo)異常率比較[n(%)]

2.3 與cEVR相關(guān)的獨(dú)立因素 以cEVR為因變量，患者中小于40歲、男性、IL-28B基因型CC、HCV RNA小于40 000 IU/mL、ALT大于90 U/L、其他各項(xiàng)指標(biāo)異常為自變量進(jìn)行Logistic條件回歸分析，只有IL-28B基因型CC和年齡小于40歲為發(fā)生cEVR的獨(dú)立相關(guān)因素。見表3。

表3 cEVR相關(guān)因素的多元Logistic條件回歸分析

3 討 論

目前針對CHC的標(biāo)準(zhǔn)治療方案為聚乙二醇干擾素(PEG-IFN)聯(lián)合利巴韋林(RBV)，但SVR的患者只有54%～63%，感染HCV基因型1的患者SVR率僅為40%～50%[1-2]。2006年一項(xiàng)根據(jù)早期病毒學(xué)應(yīng)答的差異而采用不同療程治療基因1型CHC的研究，在基因1型患者中,A組和B組的SVR分別只有28%和44%[4-6]。

以往的研究表明，PEG-IFN聯(lián)合RBV治療CHC的主要影響因素為HCV基因型，感染HCV基因型1的患者SVR顯著低于感染其他基因型的患者[1]。但在中國IL-28B基因多態(tài)性是影響治療效果的最重要因素，中國人感染HCV基因型1的患者SVR卻顯著高于歐美人群[5]。其原因是患者IL-28B基因rs129798600位點(diǎn)CC型CHC患者接受PEG-IFN聯(lián)合RBV治療時(shí)具有更高的SVR[4]，中國人CC型頻率顯著高于CT型頻率，而SVR最差的TT型在中國人群中比例極低[7]。即便IL-28B基因rs129798600位點(diǎn)CC型具有更高的SVR，仍然有相當(dāng)比例的HCV基因型1且rs129798600位點(diǎn)CC型的CHC患者無法產(chǎn)生SVR。鑒于cEVR是SVR非常重要的指標(biāo)，也是判斷治療是否有效的基本依據(jù)，本文分析了HCV基因型1患者接受PEG-IFN聯(lián)合RBV治療時(shí)cEVR與患者年齡、性別、rs129798600基因型、HCV RNA載量以及常規(guī)肝功能指標(biāo)的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)年齡和rs129798600基因型與cEVR獨(dú)立相關(guān)，這一結(jié)論與其他研究一致[5,8]。

本研究結(jié)果表明，rs129798600位點(diǎn)CT型患者，則可以考慮對年齡小于40歲的患者進(jìn)行PEG-IFN聯(lián)合RBV治療，對其他患者進(jìn)行三聯(lián)治療。然而，本研究結(jié)果僅僅是初步結(jié)果，這一方案是否具有臨床應(yīng)用價(jià)值還需要大量的臨床驗(yàn)證進(jìn)行支持。美國肝臟病學(xué)會(huì)于2011年的更新指南中推薦采用三聯(lián)療法進(jìn)行治療，即在PEG-IFN和RBV聯(lián)合治療的基礎(chǔ)上增加直接抗病毒治療[9]。即使采用三聯(lián)療法，IL-28B基因多態(tài)性仍然是影響治療效果的最重要因素[10]?？紤]到三聯(lián)療法的昂貴成本、不良反應(yīng)及可能出現(xiàn)的病毒耐藥，對HCV基因型1的患者在治療之前進(jìn)行分類，選擇合適的患者接受合適的治療方案，在臨床上具有重要意義。

總之，本研究結(jié)果初步表明，IL-28B基因多態(tài)性可以為感染HCV基因型1的CHC患者的治療方案提供進(jìn)一步的信息，對CHC患者的個(gè)性化治療具有重要參考價(jià)值。

[1]Fried MW,Shiffman ML,Reddy KR,et al.Peginterferon alfa-2a plus ribavirin for chronic hepatitis C virus infection[J].N Engl J Med，2002，347(13):975-982.

[2]Manns MP,McHutchison JG,Gordon SC,et al.Peginterferon alfa-2b plus ribavirin compared with interferon alfa-2a plus ribavirin for initial treatment of chronic hepatitis C:a randomized trial[J].Lancet，2001，358(9286):958-965.

[3]Ghany MG,Strader DB,Thomas DL,,et al.Diagnosis,management,and treatment of hepatitis C:an update[J].Hepatology，2009，49(4):1335-1374.

[4]Balagopal A,Thomas DL,Thio CL.IL-28B and the control of hepatitis C virus infection[J].Gastroenterology，2010，139(6):1865-1876.

[5]廖祥偉，凌云，李新華，等.宿主IL-28B基因型聯(lián)合病毒基因型對慢性丙型肝炎抗病毒療效的預(yù)測[J].中國病毒病雜志，2011，1(1):35-40.

[6]Civeira MP,Prieto J.Early predictors of response to treatment in patients with chronic hepatitis C[J].J Hepatol，1999，31(Suppl 1):237-243.

[7]Shi X,Pan Y,Wang M,et al.IL-28B genetic variation is associated with spontaneous clearance of hepatitis C virus,treatment response,serum IL-28B levels in Chinese population[J].PLoS One，2012，7(5):37054.

[8]Everhart JE,Wright EC.Association of γ-glutamyl transferase(GGT)activity with treatment and clinical outcomes in chronic hepatitis C(HCV)[J].Hepatology，2013，57(5):1725-1733.

[9]Ghany MG,Nelson DR,Strader DB,et al.An update on treatment of genotype 1 chronic hepatitis C virus infection:2011 practice guideline by the American Association for the Study of Liver Diseases[J].Hepatology，2011，54(4):1433-1444.

[10]Akuta N,Suzuki F,Hirakawa M,et al.Amino acid substitution in hepatitis C virus core region and genetic variation near the interleukin 28B gene predict viral response to telaprevir with peginterferon and ribavirin[J].Hepatology，2010，52(2):421-442.

Research of IL-28B gene rs129798600 polymorphism in the treatment of HCV genotype 1 patients with early response

XUJianping,KUANGYonghui

(YuanchengPeople′sHospitalHeyuanCity,Heyuan,Guangdong517000,China)

Objective To explore the prediction of sustained virological response(SVR)in the patients with hepatitis C virus(HCV)genotype 1 based on the polymorphism of IL-28B gene to provide scientific reference basis for the treatment of the patients.Methods the quantitative value of HCV was detected by fluorescence quantitative PCR method,and the genotype of rs129798600 was detected by gene sequencing method.Results The age in the patients with cevr was significantly lower than that in the patients with no cevr(Non-cEVR),while the male proportion and the level of ALT level were significantly higher than those in the latter; IL-28B genotype CC and age less than 40 years old were independent related factors of cEVR occurrence.Conclusion In the patients with HCV rs129798600 site CT genotype,it can be considered that the PEG-IFN combined RBV treatment is conducted in the patients aged less than 40 years old,while the other patients could be treated by the triple therapy.

HCV; polymorphism; interferon; ribavirin

許建平，男，主管技師，主要從事臨床分子檢驗(yàn)研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.018

A

1673-4130(2016)23-3288-03

2016-03-07

2016-05-25)