進展期胃癌No.12組淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測的臨床意義分析

陳維 張一帆 呂成余

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院/南京市第一醫(yī)院普外科，江蘇 南京 210006)

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·技術(shù)與方法·

進展期胃癌No.12組淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移檢測的臨床意義分析

陳維 張一帆 呂成余△

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院/南京市第一醫(yī)院普外科，江蘇 南京 210006)

目的 檢測進展期胃癌患者No.12組淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移，評估No.12組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及其臨床意義。方法 收集行D2胃癌根治術(shù)的進展期胃癌患者35例，每例患者均行No.12組淋巴結(jié)清掃。常規(guī)病理檢查陰性的No.12組淋巴結(jié)，經(jīng)連續(xù)切片行CK20抗體免疫組織化學(xué)方法檢測微轉(zhuǎn)移。 分析No.12組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與臨床病理參數(shù)以及各亞組之間的關(guān)系。結(jié)果 CK20抗體免疫組化染色法對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢出率顯著提高。不同年齡、性別、組織學(xué)類型及不同腫瘤部位的患者No.12淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；是否穿透漿膜、不同浸潤深度、TNM分期、Borrmann分型及不同腫瘤最大直徑的患者No.12淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著性差異(P<0.05)。No.12a的轉(zhuǎn)移率明顯高于No.12b和 No.12p(P<0.05)。 結(jié)論 采用CK20抗體免疫組織化學(xué)法進行胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的檢測，可明顯提高胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢出率。No.12組淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與否穿透漿膜、浸潤深度、TNM分期、Borrmann分型及腫瘤大小有關(guān)，與患者的年齡、性別、組織學(xué)類型和腫瘤部位無關(guān)。進展期胃癌根治術(shù)應(yīng)常規(guī)行No.12組淋巴結(jié)清掃，尤其是No.12a的清掃。

進展期胃癌； No.12組淋巴結(jié)； 微轉(zhuǎn)移； 免疫組織化學(xué)

胃癌淋巴轉(zhuǎn)移是判斷胃癌生物學(xué)行為及預(yù)后的重要參考指標之一。目前對于進展期胃癌淋巴清掃范圍以D2清掃術(shù)為標準[1]。No.12組淋巴結(jié)，即肝十二指腸韌帶淋巴結(jié)，為D2清掃術(shù)的重要組成部分。淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移是指通過傳統(tǒng)的病理學(xué)檢查不能發(fā)現(xiàn)或難以發(fā)現(xiàn)，<2 mm的淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移灶。美國癌癥聯(lián)合會(AJCC)發(fā)布的腫瘤分期系統(tǒng)第6版中將淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分為孤立的腫瘤細胞、微轉(zhuǎn)移和宏觀轉(zhuǎn)移[2]。本研究旨在檢測進展期胃癌患者No.12組淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移，評估No.12組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院胃腸外科2015年10月至2016年4月間行D2胃癌根治術(shù)的進展期胃癌患者35例，其中男26例，女9例；年齡46～85歲，平均66.8歲。所有患者臨床病理分期按照AJCC第7版胃癌TNM分期方案。所有病例術(shù)前均未行放化療。手術(shù)方式以及淋巴結(jié)的采集均參照日本胃癌學(xué)會制定的第14版日本胃癌規(guī)約進行[3]。每例患者均常規(guī)解剖裸露膽總管、肝動脈及門靜脈，以清除No.12a、12b和12p淋巴結(jié)，共取出60個No.12組淋巴結(jié)。

1.2 免疫組化及微轉(zhuǎn)移結(jié)果判定 術(shù)中取出No.12組淋巴結(jié)，標志后以10%甲醛固定24 h，然后經(jīng)脫水、透明、浸蠟及包埋，連續(xù)切片每個蠟塊各兩張，其中一張切片HE染色行常規(guī)病理學(xué)檢查，另一張以CK20抗體免疫組化染色法檢測，SP法操作,DAB 顯色。同一蠟塊連續(xù)切片經(jīng)HE染色診斷淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移，而免疫組化染色提示CK20陽性的，即判斷此標本存在淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。各數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗及Fisher確切概率法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 常規(guī)病理染色 在35例患者60個No.12組淋巴結(jié)中，3例患者的5個淋巴結(jié)經(jīng)常規(guī)病理檢查發(fā)現(xiàn)有轉(zhuǎn)移， No.12淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為8.6%(3/35)，淋巴結(jié)的檢出率為8.33%(5/60)。

2.2 免疫組化結(jié)果 CK20抗體免疫組化染色法(SP法)陽性為細胞質(zhì)內(nèi)見到棕黃色顆粒(圖1，圖2)。上述5個常規(guī)病理染色陽性淋巴結(jié)的連續(xù)切片，行CK20抗體免疫組化染色法檢測，結(jié)果均為陽性；同樣方法對其余常規(guī)病理染色陰性淋巴結(jié)進行檢測，有4例患者的6個淋巴結(jié)陽性表達，應(yīng)用CK20抗體免疫組化染色法檢測患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生總例數(shù)為7(3+4)例，發(fā)生率為20.0%(7/35)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移檢出總數(shù)為11(5+6)個，檢出率為18.3%(11/60)。本組患者常規(guī)病理檢查和CK20抗體免疫組化染色法兩種檢測方法對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移檢測結(jié)果有顯著差異(P<0.05)，后者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢出率高于前者。

2.3 No.12淋巴結(jié)總體轉(zhuǎn)移情況與臨床病理參數(shù)關(guān)系 不同年齡、性別、組織學(xué)類型及不同腫瘤部位的患者No.12淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；是否穿透漿膜、不同浸潤深度、TNM分期、Borrmann分型及不同腫瘤最大直徑的患者No.12淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著性差異(P<0.05) ,見表1。

表1 No.12組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.4 No.12組淋巴結(jié)各亞組轉(zhuǎn)移率結(jié)果 本組資料No.12a、12b和12p淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率分別為30.4%(7/23)、20.0%(4/20)及0(0/17)。No.12a的轉(zhuǎn)移率明顯高于No.12b和 No.12p(P<0.05)。

3 討 論

臨床中常發(fā)現(xiàn)病理檢查無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的進展期胃癌患者發(fā)生了早期轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，說明可能存在常規(guī)病理學(xué)檢查難以發(fā)現(xiàn)的微轉(zhuǎn)移灶[4]。存在淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的患者預(yù)后較無微轉(zhuǎn)移的患者差[5]。目前檢測胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的常用方法有連續(xù)切片法、免疫組織化學(xué)方法及分子生物學(xué)方法。免疫組化法靈敏度接近RT-PCR，且操作簡單，有助于提高淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的診斷率。因此本研究選用免疫組織化學(xué)方法檢測淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移。免疫組織化學(xué)法檢測胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的常用指標有CEA、EMA、CK等。細胞角蛋白(CK)在上皮組織中表達，在間葉組織無表達，在惡性轉(zhuǎn)化和腫瘤發(fā)生過程中CK持續(xù)存在于上皮細胞腫瘤內(nèi) ，檢測CK表達是免疫組化檢測微轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ) ，而其中CK20的特異性最強[6]。 所以本實驗選擇CK20作為抗體來檢測淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移。在本實驗中，No.12組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的陽性率為 20.0%(7/35)，No.12組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢出率為18.3%(11/60)。常規(guī)病理檢查分別為8.6%(3/35)和8.3%(5/60)。二者具有顯著性差異(P<0.05)，前者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢出率明顯高于后者。因此采用以CK20為抗體的免疫組織化學(xué)法進行No.12組淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的檢測，可明顯提高No.12組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢出率。

有相關(guān)文獻[7-8]提示，胃癌腫瘤部位、大小、浸潤深度及分化程度與No.12組淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移有一定關(guān)系，而本研究數(shù)據(jù)提示是否穿透漿膜、不同浸潤深度、TNM分期、Borrmann分型及不同腫瘤最大直徑的患者，No.12組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著性差異，與上述結(jié)論基本一致。本組資料中，不同腫瘤部位No.12組淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移無顯著性差異，提示即使不是胃下部癌，No.12組淋巴結(jié)的清掃仍有其必要性。No.12組淋巴結(jié)清掃是否徹底，決定了胃癌D2根治術(shù)的質(zhì)量。No.12組淋巴結(jié)徹底的清掃，不但可以提高淋巴結(jié)檢出率，而且也為術(shù)后準確地分期，制定治療方案創(chuàng)造條件[9]。本實驗結(jié)果No.12a的轉(zhuǎn)移率明顯高于No.12b和 No.12p，支持該指南規(guī)定。本組資料中，No.12b的轉(zhuǎn)移率雖然低于No.12a，但也有一定程度的轉(zhuǎn)移率，而No.12p轉(zhuǎn)移率極低，可能的原因是No.12a和No.12p通常是在脈絡(luò)化肝十二指腸韌帶內(nèi)結(jié)構(gòu)時整塊切除，切除后分別標記困難且存在偏差，從而影響到No.12p陽性例數(shù)。有研究[10]表明國人胃癌No.12p淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)危險因素包括腫瘤部位、腫瘤侵犯深度及Borrmann分型。綜上所述，我們認為進展期胃癌均應(yīng)常規(guī)行No.12組淋巴結(jié)清掃，尤其是No.12a的清掃。而對于胃下部癌、腫瘤穿透漿膜及直徑≥5cm者，應(yīng)考慮再清掃No.12b和No.12p淋巴結(jié)。

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