IL-12、IL-4、IL-8、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1及1,25-二羥基維生素D3在嬰幼兒喘息性支氣管炎表達(dá)水平及其臨床意義

徐建輝 黃祖輝

(1.啟東市第六人民醫(yī)院小兒內(nèi)科，江蘇 啟東 226211;2.啟東市人民醫(yī)院,江蘇 啟東 226200)

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IL-12、IL-4、IL-8、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1及1,25-二羥基維生素D3在嬰幼兒喘息性支氣管炎表達(dá)水平及其臨床意義

徐建輝1黃祖輝2

(1.啟東市第六人民醫(yī)院小兒內(nèi)科，江蘇 啟東 226211;2.啟東市人民醫(yī)院,江蘇 啟東 226200)

目的 探討IL-12、IL-4、IL-8、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1及1,25-二羥基維生素D3在嬰幼兒喘息性支氣管炎表達(dá)水平及其臨床意義。方法 選取2013年1月至2015年1月于我院接受治療的40例喘息性支氣管炎患兒為研究對(duì)象，設(shè)為喘息組；選取同一時(shí)期來我院健康中心接受體檢的嬰幼兒40名為研究對(duì)象，設(shè)為對(duì)照組。檢測(cè)兩組嬰幼兒1，25-(OH)D3及TGF-β1、IL-4、IL-8、IL-12表達(dá)水平。比較兩組嬰幼兒的1，25-(OH)D3、TGF-β1、IL-4、IL-8、IL-12水平及其相互關(guān)系。結(jié)果 喘息組1，25-(OH)D3、TGF-β1明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；喘息組患兒IL-4、IL-8水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；喘息組IL-12水平明顯低于對(duì)照組(P<0.05)；1，25-(OH)D3與TGF-β1呈正相關(guān)(r=0.749，P<0.05)；1，25-(OH)D3與IL-12呈正相關(guān)(r=0.802，P<0.05)；1，25-(OH)D3與IL-4呈負(fù)相關(guān)(r=-0.895，P<0.05)；1，25-(OH)D3與IL-8呈負(fù)相關(guān)(r=-0.736，P<0.05)。結(jié)論 1，25-(OH)D3、TGF-β1、IL-12降低及IL-4、IL-8升高與嬰幼兒喘息型支氣管炎發(fā)病有關(guān)，檢測(cè)1，25-(OH)D3、TGF-β1、IL-12、IL-4、IL-8表達(dá)水平可作為判斷嬰幼兒喘息型支氣管炎的重要指標(biāo)。

IL-12； IL-4； IL-8； 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1； 1,25-二羥基維生素D3； 嬰幼兒喘息性支氣管炎

喘息型支氣管炎是兒童常見的疾病之一，在兒童喘息性疾病中占有重要地位，近年來該病的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)[1]。喘息型支氣管炎主要臨床表現(xiàn)是喘息，支氣管發(fā)生炎癥，表現(xiàn)為氣促、胸悶、咳嗽，而且夜間加重[2]。為了探討IL-12、IL-4、IL-8、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)及1,25-二羥基維生素D3[1，25-(OH)D3]在嬰幼兒喘息性支氣管炎表達(dá)水平及其臨床意義，我院嘗試開展本研究，并取得了不錯(cuò)的效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2015年1月于我院接受治療的40例喘息性支氣管炎患兒為為觀察組。所有患兒均符合經(jīng)過X線胸片檢查、影像學(xué)檢查等，符合喘息性支氣管炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除：既往無心肺、肝腎等疾病，無過敏性疾病或其他變態(tài)反應(yīng)性疾病，無免疫性疾病史和慢性疾病史。另選取同一時(shí)期于我院健康中心接受體檢的健康嬰幼兒40名為設(shè)為對(duì)照組，所有對(duì)象既往無心肺、肝腎等疾病，無過敏性疾病或其他變態(tài)反應(yīng)性疾病，無免疫性疾病史和慢性疾病史。觀察組中，男16例，女24例，平均年齡(1.74±0.84)歲；對(duì)照組中，男15名，女25名，平均年齡(1.65±0.74)歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究方案報(bào)送醫(yī)療道德委員會(huì)批準(zhǔn)，所有參與此次研究的嬰幼兒監(jiān)護(hù)人、醫(yī)生以及護(hù)理人員均簽署知情同意書。

1.2 方法 于清晨7～9時(shí)，抽取所有嬰幼兒的空腹靜脈血5～10 mL，留取后在室溫中自然凝固。約1 h后進(jìn)行離心操作(離心頻率為3 000 r/min)，離心15 min后靜置分離取出血清，將其移至EP管中，置于-80 ℃環(huán)境下保存?zhèn)溆?，避免反?fù)凍融。選用美國(guó)R&D公司生產(chǎn)的試劑盒，按照操作說明檢測(cè)EP管中待測(cè)的1，25-(OH)D3及TGF-β1、IL-4、IL-8、IL-12。首先，標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣，然后溫育、配液、洗滌、加酶(除空白孔外每個(gè)孔加酶標(biāo)試劑50 μL)、再溫育、再洗滌、顯色(37 ℃避光顯色15 min)、終止(加終止液50 μL)、測(cè)定、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。在吸光值450 nm波長(zhǎng)依次測(cè)量各孔的吸光度(OD值)，測(cè)定時(shí)間應(yīng)在加終止液15 min以內(nèi)進(jìn)行，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組嬰幼兒血清1，25-(OH)D3、TGF-β1水平。比較兩組嬰幼兒血清IL-4、IL-8、IL-12水平。

2 結(jié) 果

2.1 兩組嬰幼兒血清1，25-(OH)D3、TGF-β1水平比較 喘息組血清1，25-(OH)D3、TGF-β1分別為(28.93±7.30) pmol/L、(3.86±0.80) ng/mL，明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

組別1，25?(OH)D3/(pmol/L)TGF?β1/(ng/mL)喘息組2893±730386±080對(duì)照組5320±978751±066t37141911P<005<005

2.2 兩組嬰幼兒血清IL-4、IL-8、IL-12水平比較 喘息組患兒IL-4、IL-8分別為(97.20±28.25) pg/mL、(13.22±3.78) pg/mL，對(duì)照組為(9.37±4.30) pg/mL、(6.82±2.30) pg/mL，喘息組IL-4、IL-8水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；而喘息組IL-12為(42.25±7.10) pg/mL，對(duì)照組為(57.29±16.36) pg/mL，喘息組IL-12水平明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

組別IL?4/(pg/mL)IL?8/(pg/mL)IL?12/(pg/mL)喘息組9720±28251322±3784225±710對(duì)照組937±430682±2305729±1636t973616421964P<005<005<005

2.3 血清1，25-(OH)D3與TGF-β1、IL-4、IL-8、IL-12之間的相關(guān)性 血清1，25-(OH)D3與TGF-β1呈正相關(guān)(r=0.749，P<0.05)；血清1，25-(OH)D3與IL-12呈正相關(guān)(r=0.802，P<0.05)；血清1，25-(OH)D3與IL-4呈負(fù)相關(guān)(r=-0.895，P<0.05)；血清1，25-(OH)D3與IL-8呈負(fù)相關(guān)(r=-0.736，P<0.05)。

3 討 論

喘息型支氣管炎是臨床上常見的小兒呼吸道疾病之一，主要是由于多種病毒和細(xì)菌感染引起，該病主要癥狀與哮喘相似，臨床表現(xiàn)為氣促、氣喘、呼吸困難等，都是呼吸道感染疾病，該病需要及時(shí)干預(yù)，如果未及時(shí)診斷干預(yù)，有可能轉(zhuǎn)化成小兒哮喘，嚴(yán)重影響兒童的健康和成長(zhǎng)。

IL-4是Th2分泌的主要因子，IL-4是Th2型最具有代表性的細(xì)胞因子，其主要作用包括刺激和活化B細(xì)胞，促進(jìn)體液免疫應(yīng)答，刺激Th0細(xì)胞增殖并進(jìn)一步分化成Th2型細(xì)胞，此外IL-4還能有效促進(jìn)IgE分泌型B細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化，進(jìn)而對(duì)嗜酸粒細(xì)胞發(fā)揮募集、趨化、浸潤(rùn)等作用[3]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[4]顯示，在小鼠哮喘模型中，與健康對(duì)照組相比，哮喘組血清IL-4明顯高于健康對(duì)照組。陳文靖等[5]研究發(fā)現(xiàn)，IL-4表達(dá)增強(qiáng)，可能與哮喘組織中的NF-κB的激活有關(guān)，而且是引起和促進(jìn)哮喘炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展的重要因素。研究[6]認(rèn)為IL-4與嬰幼兒喘息性疾病的發(fā)生存在密切聯(lián)系。而IL-12對(duì)Th2型細(xì)胞因子具有抑制作用，它可以直接抑制Th2型細(xì)胞因子，促進(jìn)Th0向Th1型細(xì)胞因子轉(zhuǎn)化，從而促進(jìn)Th1型細(xì)胞因子產(chǎn)生，因此，有學(xué)者[7]認(rèn)為IL-12是促進(jìn)T輔助細(xì)胞向Th1型細(xì)胞因子分化的始動(dòng)因素。有研究[8]顯示，IL-12在哮喘的發(fā)病過程中具有重要作用，其基因多態(tài)性和哮喘發(fā)病的危險(xiǎn)指數(shù)具有相關(guān)性。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)IL-12水平可以有效判斷支氣管哮喘病情的進(jìn)展，可作為判斷支氣管哮喘的重要指標(biāo)。

IL-8的來源和較為廣泛，機(jī)體內(nèi)多種免疫細(xì)胞及非免疫細(xì)胞均可以產(chǎn)生IL-8，在氣道中主要來源是肺泡巨噬細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞、EOS及其他肥大細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等[9]。IL-8自身活性較強(qiáng)，而且半衰期長(zhǎng)，可以作用于多種炎性細(xì)胞，發(fā)揮趨化作用，引起氣道炎癥和變態(tài)反應(yīng)。其作用機(jī)制如下：IL-8可以通過激活PMN并誘導(dǎo)其脫顆粒，促進(jìn)Ca2+濃度升高，形成氧自由基，進(jìn)而誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)發(fā)生。IL-8還能在免疫應(yīng)答中趨化和活化T淋巴細(xì)胞，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的再循環(huán)，影響對(duì)抗原的識(shí)別和殺傷[10]。IL-8可以直接作用于氣道，誘導(dǎo)支氣管平滑肌痙攣，還可提高氣道上皮ICAM-1的表達(dá)，促進(jìn)炎性細(xì)胞的粘附，此外它還能增加呼吸膜滲透性，被激活的PMN產(chǎn)生“呼吸爆發(fā)”，釋放O2、H2O2、OH-，促進(jìn)氣道上皮剝脫，血管通透性增強(qiáng)，黏膜水腫。研究[10]認(rèn)為，IL-8對(duì)于診斷兒童重癥肺炎具有重要意義。本研究中，喘息型支氣管炎患兒的IL-8水平明顯高于對(duì)照組，且IL-8與1，25-(OH)D3呈負(fù)相關(guān)。

TGF-β1是一種具有雙源雙鏈25 ku多肽的細(xì)胞因子，可反映哮喘患者氣道炎癥和結(jié)構(gòu)變化，而且其特異性較高。正常和轉(zhuǎn)化細(xì)胞分泌的TGF-β1的存在形式是活性前體，只有經(jīng)過活化才具有活性。其主要功能是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化，參與組織的發(fā)育以及組織受到損害后的修復(fù)過程，此外，TGF-β1具有刺激纖維細(xì)胞生長(zhǎng)和分泌膠原的作用。有研究[11]顯示，在哮喘患者中其水平會(huì)明顯升高，而且上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、纖維母細(xì)胞都可以直接或間接通過TGF-β1參與氣道炎癥。而且活性Th2細(xì)胞可分泌細(xì)胞因子IL-13，IL-13可促使嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、上皮細(xì)胞破壞，通過TGF-β1參與氣道重塑。本研究中1，25-(OH)D3與TGF-β1呈正相關(guān)，喘息組TGF-β1水平明顯低于對(duì)照組，提示TGF-β1與嬰幼兒喘息型支氣管炎有關(guān)。

有報(bào)道[12]指出，維生素D對(duì)人體非常重要，具有免疫調(diào)節(jié)作用，它不僅是骨代謝及鈣穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵調(diào)控因子，還是第二類固醇激素。血清1，25-(OH)D3，是維生素D在人體循環(huán)中的重要形式，通過檢測(cè)血清1，25-(OH)D3水平，可以衡量機(jī)體維生素D水平，因此維生素D與1，25-(OH)D3具有密切聯(lián)系，在正常生理狀態(tài)時(shí)，血清1，25-(OH)D3可以分化介導(dǎo)單核細(xì)胞，并促進(jìn)其成熟為吞噬細(xì)胞，從而用來維持人體正常的免疫功能。而機(jī)體一旦缺乏維生素D，血清1，25-(OH)D3水平會(huì)相應(yīng)地發(fā)生變化，呈現(xiàn)明顯的下降趨勢(shì)，而且隨之而來的還會(huì)伴隨多種疾病。還有研究認(rèn)為，維生素D缺乏與兒童哮喘具有重要關(guān)聯(lián)，但該論斷還需進(jìn)一步的證實(shí)。但已有研究[13]證實(shí)維生素D對(duì)于預(yù)防哮喘等過敏性反應(yīng)具有重要作用。一項(xiàng)針對(duì)產(chǎn)婦維生素D水平的研究顯示，產(chǎn)婦妊娠時(shí)期機(jī)體內(nèi)維生素D水平與兒童患喘息性疾病的發(fā)生率存在明顯正相關(guān)性。本研究結(jié)果為喘息組血清1，25-(OH)D3水平明顯低于正常對(duì)照組，提示喘息型支氣管炎可能與1，25-(OH)D3有關(guān)。

本研究中，1，25-(OH)D3與TGF-β1、IL-12呈正相關(guān)，與IL-4、IL-8呈負(fù)相關(guān)，印證了上述1，25-(OH)D3與TGF-β1、IL-4、IL-8、IL-12在嬰幼兒喘息型支氣管炎中的表達(dá)水平變化。因此，1，25-(OH)D3、TGF-β1、IL-12降低及IL-4、IL-8升高與嬰幼兒喘息型支氣管炎發(fā)病有關(guān)，可以將1，25-(OH)D3、TGF-β1、IL-12、IL-4、IL-8表達(dá)水平作為判斷嬰幼兒喘息型支氣管炎的重要指標(biāo)。

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xpression levels and its clinical significance of IL-12, IL-4, IL-8 and transforming growth factorβ1 and 1, 25-dihydroxy vitamin D3in infants and young children with asthmatic bronchitis

XuJianhui1,HuangZuhui2.

1.DepartmentofPediatrics,theSixthQidongCityPeople'sHospital,Qidong226211,China. 2.QidongCityPeople'sHospital,Qidong226200,China.

Objective T o investigate the IL-12, IL-4, IL-8, transforming growth factor β1 and 1, 25-two hydroxy vitamins D3 expression and its clinical significance in infants with asthmatic bronchitis. Methods 40 cases of children with asthmatic bronchitis methods from January 2013 to January 2015 in our hospital as the research object, for the wheezing group selected from the same period, the health center of our hospital for medical examination of the infant 40 cases as the research object, as the control group. Two groups were detected with 1, 25- (OH) D3and TGF-β1, IL-4, IL-8, IL-12 expression levels were compared between the two groups of infants. Results 1, 25-(OH) D3, TGF-β1, IL-4, IL-8, IL-12 and the level of each other the results of the wheezing group 1, 25-(OH) D3, TGF-β1 was significantly lower than the control group (P<0.05). Children with wheezing group IL-4, IL-8 was significantly higher than control group (P<0.05); the level of IL-12 in wheezing group was significantly lower than the control group (P<0.05).1,25- (OH) D3and TGF-β1 positive (r=0 .749,P<0.05); 1,25-(OH) D3and IL-12 was positively correlated (r= 0.802,P<0.05); 1,25-(OH) D3and IL-4 was negative correlation (r=-0.895,P< 0.05); 1,25-(OH) D3and IL-8 showed a negative correlation (r=-0.736,P<0.05). Conclusion 1,25-(OH) D3and TGF-β1, IL-12 decreased and IL-4, IL-8 increased with the pathogenesis of Infantile Asthmatic Bronchitis, detection of 1,25-(OH) D3, TGF-β1, IL-12, IL-4 and IL-8 expression level can be an important indicator of the as judged Infantile Asthmatic Bronchitis.

IL-12； IL-4； IL-8; Transforming growth factor β1； 1, 25-dihydroxy vitamin D3； Infants and young children with asthmatic bronchitis

R725.6

A

1000-744X(2016)11-1138-03

2016-08-23)