• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    惡性淋巴瘤診斷中熒光原位雜交分析基因狀態(tài)的研究

    2016-12-22 00:57:30沈小英亓崠東武鑫瑞屈悅張立英張玉萍許春偉吳繼華
    貴州醫(yī)藥 2016年11期
    關(guān)鍵詞:信號

    沈小英 亓崠東 武鑫瑞 屈悅 張立英 張玉萍 許春偉 吳繼華☆

    (1.解放軍306醫(yī)院病理科,北京 100101;2.大連大學附屬中山醫(yī)院腫瘤科,遼寧 大連 116001;3.北京新基永康基因科技有限公司,北京 100085;4.北京軍區(qū)總醫(yī)院病理科,北京 100700;5.山東省濰坊市人民醫(yī)院病理科,山東 濰坊 261041;6.軍事醫(yī)學科學院附屬醫(yī)院病理科,北京 100071)

    ?

    惡性淋巴瘤診斷中熒光原位雜交分析基因狀態(tài)的研究

    沈小英1亓崠東2武鑫瑞1屈悅3張立英4張玉萍5許春偉6△吳繼華1☆

    (1.解放軍306醫(yī)院病理科,北京 100101;2.大連大學附屬中山醫(yī)院腫瘤科,遼寧 大連 116001;3.北京新基永康基因科技有限公司,北京 100085;4.北京軍區(qū)總醫(yī)院病理科,北京 100700;5.山東省濰坊市人民醫(yī)院病理科,山東 濰坊 261041;6.軍事醫(yī)學科學院附屬醫(yī)院病理科,北京 100071)

    目的 探討惡性淋巴瘤中基因重排的特點。方法 回顧性分析87例惡性淋巴瘤組織樣本,利用熒光原位雜交技術(shù),分別檢測彌漫大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、Burkitt淋巴瘤和間變性大細胞淋巴瘤中BCL-6、BCL-2、MALT1、CCND1、C-MYC和ALK基因重排。結(jié)果 彌漫大B細胞性淋巴瘤中BCL-6基因重排的陽性率為29.03%(9/31),濾泡性淋巴瘤中BCL-2基因重排的陽性率為61.11%(11/18),黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤中MALT1基因重排的陽性率為47.37%(9/19),套細胞淋巴瘤中CCND1基因重排的陽性率為88.88%(8/9),Burkitt淋巴瘤中C-MYC基因重排的陽性率為100%(2/2)和間變性大細胞淋巴瘤中ALK基因重排的陽性率為75.00%(6/8)。結(jié)論 基因重排對惡性淋巴瘤的診斷具有重要的實際價值。

    淋巴瘤; BCL-6基因; BCL-2基因; MALT1基因; CCND1基因; C-MYC基因;ALK基因

    惡性淋巴瘤作為淋巴系統(tǒng)的原發(fā)的惡性腫瘤,由于其具有高度異質(zhì)性,因此其診斷一直是病理診斷的重點和難點[1]。目前惡性淋巴瘤的診斷根據(jù)WHO(2008版)造血和淋巴組織腫瘤分類需運用病理形態(tài)學、免疫組化、分子遺傳學和臨床特征四者有機結(jié)合來確診[2]。在病理形態(tài)學、免疫組化和臨床特征仍不能確診的病例,分子基因檢測顯得尤為重要。其中熒光原位雜交技術(shù)(fluorescence in situ hybridization,FISH)為一種敏感性高的檢測方法。惡性淋巴瘤分子病理診斷中熒光原位雜交的探針分為融合探針和斷裂探針,一般融合探針用于融合伙伴較少的基因,如彌漫大B細胞淋巴瘤的BCL-2/IGH融合探針和套細胞淋巴瘤的CCND1/IGH融合探針,其特異性較高,而斷裂探針主要用于融合伙伴較多的基因,如濾泡性淋巴瘤的BCL-6斷裂探針、黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤的MALT1斷裂探針、Burkitt淋巴瘤的C-MYC斷裂探針和間變性大細胞淋巴瘤的ALK斷裂探針[3-5]。本文運用熒光原位雜交分析上述惡性淋巴瘤中的基因重排情況,探討熒光原位雜交在惡性淋巴瘤診斷中的臨床應(yīng)用價值。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 樣本 收集2013年1月至2015年12月間解放軍306醫(yī)院、大連大學附屬中山醫(yī)院、北京軍區(qū)總醫(yī)院和山東省濰坊市人民醫(yī)院送檢進行熒光原位雜交的惡性淋巴瘤標本87例,其中彌漫大B細胞淋巴瘤(DLBCL)31例,濾泡性淋巴瘤(FL)18例,黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤(MALT)19例,套細胞淋巴瘤(MCL)9例,Burkitt淋巴瘤(BL)2例,間變性大細胞淋巴瘤(ALCL)8例。

    1.1.2 主要試劑 BCL-2/IgH融合探針、CCND1/IgH融合探針、BCL-6斷裂探針、C-MYC斷裂探針、MALT1斷裂探針和ALK斷裂探針及緩沖液均購自廣州安必平(LBP)醫(yī)藥科技有限公司。

    1.2 方法 熒光原位雜交(FISH)檢測步驟:4 μm石蠟薄切片,74 ℃烤箱中15 min,環(huán)保脫蠟劑脫蠟,酒精脫水,蒸餾水高壓水煮放氣后4 min。37 ℃ 0.01N HCl的胃蛋白酶中水浴消化60 min,加4 μL探針,85 ℃變性5 min,42 ℃雜交16 h,室溫下2× SSC/0.1%NP-40溶液中洗滌,10 μL的DAPT復(fù)染。以反應(yīng)性淋巴組織為正常對照,結(jié)果在熒光顯微鏡下觀察。以上過程從加探針開始需避光操作。熒光原位雜交(FISH)檢測判讀:(1)BCL-2/IGH融合探針:在正常細胞核中出現(xiàn)紅、綠信號各2個(2R2F),存在t(14,18)易位的細胞中出現(xiàn)1個紅色、1個綠色信號和1個融合的黃色信號(1R1G1F),或出現(xiàn)2個融合黃色信號(1R1G2F)。腫瘤細胞出現(xiàn)黃色信號>5%的確定為t(14,18)易位。(2)CCND1/IGH融合探針:在正常細胞核中出現(xiàn)紅、綠信號各2個(2R2F),存在t(14,18)易位的細胞中出現(xiàn)1個紅色、1個綠色信號和1個融合的黃色信號(1R1G1F),或出現(xiàn)2個融合黃色信號(1R1G2F)。腫瘤細胞出現(xiàn)黃色信號>15%的確定為t(11,14)易位。(3)BCL-6斷裂探針:正常細胞核中出現(xiàn)2個黃色信號(2F)。存在3q27重排時細胞中出現(xiàn)1個紅色、1個綠色信號的分離信號和1個黃色信號(1R1G1F);腫瘤細胞中出現(xiàn)1個紅色、1個綠色分離信號>10%的確定為有3q27重排。(4)C-MYC斷裂探針:正常細胞核中出現(xiàn)2個黃色信號(2F)。存在8q24重排時細胞中出現(xiàn)1個紅色、1個綠色信號的分離信號和1個黃色信號(1R1G1F)。腫瘤細胞中出現(xiàn)1個紅色、1個綠色分離信號>15%的確定為有8q24重排。(5)MALT1斷裂探針:正常細胞核中出現(xiàn)2個黃色信號(2F)。存在18q21重排時細胞中出現(xiàn)1個紅色、1個綠色信號的分離信號和1個黃色信號(1R1G1F)。腫瘤細胞中出現(xiàn)1個紅色、1個綠色分離信號>10%的確定為有18q21重排;(6)ALK斷裂探針:正常細胞核中出現(xiàn)2個黃色信號(2F)。存在2p23重排時細胞中出現(xiàn)1個紅色、1個綠色信號的分離信號和1個黃色信號(1R1G1F)。腫瘤細胞中出現(xiàn)1個紅色、1個綠色分離信號>15%的確定為有2p23重排。

    1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)分析,計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗及Fisher確切概率法,α=0.05為檢驗水準。

    2 結(jié) 果

    2.1 熒光原位雜交的結(jié)果 彌漫大B細胞淋巴瘤中BCL-6基因重排陽性率為29.03%(9/31),依據(jù)Hans模型[1]采用免疫組化方法標記CD10、BCL-6 和MUM1,將DLBCL分為生發(fā)中心細胞(Germinal center b-cell,GCB)[CD10+,BCL-6+/-,MUM1+/-或CD10-,BCL-6+,MUM1-]和非生發(fā)中心細胞(non-GCB)[CD10-,BCL-6+/-,MUM1+或CD10-,BCL-6-,MUM1-]起源,其中GCB起源占16.67%(2/12),non-GCB起源占36.84%(7/19)(圖1);濾泡性淋巴瘤中BCL-2基因重排陽性率為61.11%(11/18),分級方面其中5例Ⅰ級中BCL-2基因重排陽性率為22.22%(4/18),6例Ⅱ級中BCL-2基因重排陽性率為22.22%(4/18),Ⅲa級中BCL-2基因重排陽性率為11.11%(2/18),Ⅲb級中BCL-2基因重排陽性率為5.56%(1/18)(圖2);黏膜相關(guān)性淋巴組織淋巴瘤中MALT1基因重排陽性率為47.37%(9/19),其中10例胃腸道黏膜相關(guān)性淋巴組織淋巴瘤中MALT1基因重排陽性率為31.58%(6/19),9例非胃腸道黏膜相關(guān)性淋巴組織淋巴瘤中MALT1基因重排陽性率為15.79%(3/19)(圖3);套細胞淋巴瘤中CCND1基因重排陽性率為88.88%(8/9),除1例CD5陰性,CyclinD1陽性樣本外CCND1/IGH融合探針檢測均為陽性(易位)(圖4);Burkitt淋巴瘤中C-MYC基因重排陽性率為100%(2/2),且均為EBER原位雜交陰性(圖5);間變性大細胞淋巴瘤中ALK基因重排陽性率為75.00%(6/8),其中ALK蛋白陽性樣本均為陽性,ALK蛋白表達陰性樣本均為陰性(圖6)。

    2.2 不同性別惡性淋巴瘤患者基因的狀態(tài)情況 BCL-6基因重排在18例彌漫大B細胞淋巴瘤男性患者中的陽性率為27.78%(5/18),在13例女性患者中為30.77%(4/13),差異無統(tǒng)計學意義(P=0.856);BCL-2基因重排在11例濾泡性淋巴瘤男性患者中的陽性率為63.64%(7/11),在7例女性患者中為57.14%(4/7),差異無統(tǒng)計學意義(P=0.783);MALT-1基因重排在10例黏膜相關(guān)性淋巴瘤男性患者中的陽性率為40.00%(4/10),在9例女性患者中為55.56%(5/9),差異無統(tǒng)計學意義(P=0.498);CCND1基因重排在6例套細胞淋巴瘤男性患者中的陽性率為83.33%(5/6),在3例女性患者中為100%(3/3),差異無統(tǒng)計學意義(P=0.453);C-MYC基因重排均為2例Burkitt淋巴瘤男性患者;ALK基因重排在5例間變性大細胞淋巴瘤男性患者中的陽性率為60.00%(3/5),在3例女性患者中為100%(3/3),差異無統(tǒng)計學意義(P=0.206)。

    2.3 不同年齡群體惡性淋巴瘤患者基因的突變情況 BCL-6基因在3例青少年(<18歲)彌漫大B細胞淋巴瘤患者中的陽性率為33.33%%(1/3),在5例年輕患者(18~44歲)中為20.00%(1/5),在11例中年患者(45~59歲)中為27.27%(3/11),在12例老年患者(60~90歲)中為33.33%(4/12),差異無統(tǒng)計學意義(P=0.951);BCL-2基因在3例年輕濾泡性淋巴瘤患者(18~44歲)中的陽性率為66.67%(2/3),在9例中年患者(45~59歲)中為55.55%(5/9),在6例老年患者(60~90歲)中為66.67%(4/6),差異無統(tǒng)計學意義(P=0.890);MALT1基因在2例年輕黏膜相關(guān)性淋巴瘤患者(18~44歲)中的陽性率為50.00%(1/2),在7例中年患者(45~59歲)中為57.14%(4/7),在10例老年患者(60~90歲)中為40.00%(4/10),差異無統(tǒng)計學意義(P=0.782);CCND1基因在3例中年患者(45~59歲)中為100%(3/3),在6例老年患者(60~90歲)中為83.33%(5/6),差異無統(tǒng)計學意義(P=0.453);C-MYC基因重排在2例青少年Burkitt淋巴瘤患者(<18歲)中的陽性率為100%(2/2);ALK基因重排在4例年輕間變性大細胞淋巴瘤患者(18~44歲)中的突變頻率為100%(4/4),在1例中年患者(45~59歲)中為100%(1/1),在3例老年患者(60~90歲)中為33.33%(1/3),差異無統(tǒng)計學意義(P=0.153)。

    3 討 論

    惡性淋巴瘤作為常見腫瘤,近年來發(fā)病率和死亡率在全球范圍內(nèi)明顯增加,其中發(fā)病率占惡性腫瘤的4%~5%,居第6位,死亡率占惡性腫瘤的3%~4%,居第9位[6]。國內(nèi)惡性淋巴瘤發(fā)病率和病死率分別居所有惡性腫瘤的第11位和第7位[7]。惡性淋巴瘤可見于任何年齡組,好發(fā)于全身各處,但以原發(fā)淋巴結(jié)為多,結(jié)外發(fā)病以胃腸道為多[2,8]。惡性淋巴瘤由分化程度不同的淋巴細胞、組織細胞和網(wǎng)狀細胞組成,由于淋巴細胞的分類差異,以及與組織細胞和網(wǎng)狀細胞的比例、分布和分化程度的差異造成了惡性淋巴瘤組織學形態(tài)的多樣性,部分病例的診斷比較困難。免疫組織化學染色陽性對于鑒別惡性淋巴瘤各亞型以及與其他增殖性疾病有一定的幫助,不能總是有效地輔助診斷惡性淋巴瘤[9]。

    研究[9-11]表明彌漫大B細胞淋巴瘤中BCL-6基因重排,濾泡性淋巴瘤中BCL-2基因重排,黏膜相關(guān)性淋巴組織淋巴瘤中MALT1基因重排,套細胞淋巴瘤中CCND1基因重排,Burkitt淋巴瘤中C-MYC基因重排,間變性大細胞淋巴瘤中ALK基因重排這些遺傳學異??梢宰鳛榕袛鄲盒粤馨土鰜喰偷闹匾罁?jù)。 FISH是利用熒光標記的核酸分子作為探針,經(jīng)變性解鏈后,在適當條件下與細胞內(nèi)互補的核酸分子雜交,從而檢測后者存在的情況以及數(shù)量、結(jié)構(gòu)等變化的一種方法。運用FISH方法,彌漫大B細胞淋巴瘤中BCL-6基因重排陽性率為29.03%(9/31),濾泡性淋巴瘤中BCL-2基因重排陽性率為61.11%(11/18),黏膜相關(guān)性淋巴組織淋巴瘤中MALT1基因重排陽性率為47.37%(9/19),套細胞淋巴瘤中CCND1基因重排陽性率為88.88%(8/9),Burkitt淋巴瘤中C-MYC基因重排陽性率為100%(2/2),間變性大細胞淋巴瘤中ALK基因重排陽性率為75.00%(6/8)。因此,對于不典型或特殊的惡性淋巴瘤,運用FISH方法大部分能夠得到確診。

    綜上所述,惡性淋巴瘤因為種類繁多、分類龐大,臨床病史、形態(tài)學及免疫組化結(jié)合遺傳學特征具有重要診斷價值。

    (本文圖1~6見封三)

    [1] Roman E,Smith AG.Epidemiology of lymphomas[J].Histopathology,2011,58(1):4-14.

    [2] 吳永芳,許春偉,韓鴻雁,等.443例惡性淋巴瘤臨床病理特征分析[J].臨床與病理雜志,2015,35(7):1268-1275.

    [3] Akagi T,Motegi M,Tamura A,et al.A novel gene,MALT1 at 18q21,is involved in t(11;18) (q21;q21) found in low-grade B-cell lymphoma of mucosa-associated lymphoid tissue[J].Oncogene,1999,18(42):5785-5794.

    [4] Kramer MH,Hermans J,Wijburg E,et al.Clinical relevance of BCL2,BCL6,and MYC rearrangements in diffuse large B-cell lymphoma [J].Blood,2016,92(9):3152-3162.

    [5] Rezuke WN,Abernathy EC,Tsongalis G J.Molecular diagnosis of B-and T-cell lymphomas:fundamental principles and clinical applications[J].Clin Chem,1997,43(10):1814-1823.

    [6] Siegel RL,Miller KD,Jemal A.Cancer statistics,2016[J].CA Cancer J Clin,2016,66(1):7-30.

    [7] Chen W,Zheng R,Baade P D.Cancer statistics in China,2015[J].CA Cancer J Clin,2016,66(2):115-132.

    [8] Sergent F,Baron M,Le Cornec J B,et al.Malignant transformation of abdominal wall endometriosis:a new case report[J].J Gynecol Obstet Biol Reprod(Paris),2006,35(2):186-190.

    [9] Hsi AC,Hurley MY,Lee SJ,et al.Diagnostic utility of SOX11 immunohistochemistry in differentiating cutaneous spread of mantle cell lymphoma from primary cutaneous B-cell lymphomas[J].J Cutan Pathol,2016,43(4):354-361.

    [10] Schraders M,Jong D,Kluin P,et al.Lack of BCL-2 expression in follicular lymphoma may be caused by mutations in the BCL2 gene or by absence of the t(14;18) translocation[J].J Pathol,2005,205(3):329-335.

    [11] Zhang L,Gao L,Liu G,et al.Primary Burkitt′s lymphoma of the thyroid without Epstein-Barr virus infection:A case report and literature review[J].Oncol Lett,2014,7(5):1519-1524.

    Genetic status analysis of 87 cases in malignant lymphoma diagnosis fluorescence in situ hybridization

    ShenXiaoying1,QiDongdong2,WuXinrui1,QuYue3,ZhangLiying4,ZhangYuping5,XuChunwei6,WuJihua1.

    1.DepartmentofPathology, 306HospitalofPLA,Beijing100101,China. 2.DepartmentofOncology,ZhongshanHospital,DalianUniversity,Dalian116001,China. 3.BeijingXinjiYongkangGeneScienceandTechnologyCo.,Ltd.,Beijing100085,China. 4.DepartmentofPathology,TheMilitaryGeneralHospitalofBeijingPLA,Beijing100700,China. 5.DepartmentofPathology,ThePeople'sHospitalofWeifang,Weifang,Shandong261041,China. 6.DepartmentofPathology,AffiliatedHospitalofAcademyofMilitaryMedicalScience,Beijing100071,China.

    Objective To analyze the characteristics of gene rearrangement in malignant lymphoma. Methods A retrospective analysis of 87 cases of samples with malignant lymphoma, which were used to detect gene rearrangement by fluorescence in situ hybridization, and Subtypes of diffuse large B cell lymphoma with the BCL-6 gene rearrangement, follicular lymphoma with the BCL-2 gene rearrangement, the mucosa associated lymphoid tissue lymphoma with MALT1 gene rearrangement, mantle cell lymphoma with CCND1 gene rearrangement, Burkitt lymphoma with C-MYC gene rearrangement and anaplastic large cell lymphoma with ALK gene rearrangement, respectively. Results The positive rate of BCL-6 gene rearrangement was 29.03% (9/31) in diffuse large B cell lymphoma, the positive rate of BCL-2 gene rearrangement was 61.11% (11/18) in follicular lymphoma, the positive rate of MALT1 gene rearrangement was 47.37% (9/19) in mucosa associated lymphoid tissue lymphoma, the positive rate of CCND1 gene rearrangement was 88.88% (8/9) in mantle cell lymphoma, the positive rate of C-MYC gene rearrangement was 100% (2/2) in Burkitt lymphoma and the positive rate of ALK gene rearrangement was 75.00% (6/8) in anaplastic large cell lymphoma. Conclusion Gene rearrangement has an important practical value to the diagnosis of malignant lymphoma.

    Lymphoma; BCL-6 gene; BCL-2 gene; MALT1 gene; CCND1 gene; C-MYC gene; ALK gene

    R733.1

    A

    1000-744X(2016)11-1126-03

    2016-04-18)

    △☆通信作者,△E-mail:xuchunweibbb@163.com;☆E-mail:jh_02821@126.com

    猜你喜歡
    信號
    信號
    鴨綠江(2021年35期)2021-04-19 12:24:18
    完形填空二則
    7個信號,警惕寶寶要感冒
    媽媽寶寶(2019年10期)2019-10-26 02:45:34
    孩子停止長個的信號
    《鐵道通信信號》訂閱單
    基于FPGA的多功能信號發(fā)生器的設(shè)計
    電子制作(2018年11期)2018-08-04 03:25:42
    基于Arduino的聯(lián)鎖信號控制接口研究
    《鐵道通信信號》訂閱單
    基于LabVIEW的力加載信號采集與PID控制
    Kisspeptin/GPR54信號通路促使性早熟形成的作用觀察
    亚洲国产精品合色在线| 免费在线观看成人毛片| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 少妇熟女aⅴ在线视频| 中文字幕av成人在线电影| 亚州av有码| 91在线精品国自产拍蜜月| 久99久视频精品免费| 久久久a久久爽久久v久久| 91精品一卡2卡3卡4卡| 一级黄色大片毛片| 婷婷色综合大香蕉| 日本免费a在线| 国产中年淑女户外野战色| 成年av动漫网址| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产免费一级a男人的天堂| 男女下面进入的视频免费午夜| 我要搜黄色片| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲av成人精品一区久久| 美女脱内裤让男人舔精品视频 | 91久久精品国产一区二区成人| 韩国av在线不卡| 国产午夜精品一二区理论片| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 有码 亚洲区| 禁无遮挡网站| 成人美女网站在线观看视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲综合色惰| 一区二区三区免费毛片| 最近手机中文字幕大全| 国产成人影院久久av| 日韩在线高清观看一区二区三区| 99热这里只有是精品50| 搞女人的毛片| 中文资源天堂在线| 22中文网久久字幕| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲欧洲国产日韩| 我的女老师完整版在线观看| 偷拍熟女少妇极品色| 一边摸一边抽搐一进一小说| 色视频www国产| av黄色大香蕉| 亚洲三级黄色毛片| 少妇熟女aⅴ在线视频| 尾随美女入室| 日韩在线高清观看一区二区三区| 两个人的视频大全免费| 中文字幕免费在线视频6| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 麻豆一二三区av精品| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 久久久久国产网址| 天堂中文最新版在线下载 | 国产精品电影一区二区三区| 特级一级黄色大片| 全区人妻精品视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 免费电影在线观看免费观看| 国产精品精品国产色婷婷| 嫩草影院新地址| 国产伦理片在线播放av一区 | 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产高潮美女av| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 欧美精品国产亚洲| 久久久久久久午夜电影| 美女cb高潮喷水在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 久久99热6这里只有精品| 亚洲不卡免费看| 99久久精品一区二区三区| 国产伦一二天堂av在线观看| 高清午夜精品一区二区三区 | 午夜激情福利司机影院| 国产久久久一区二区三区| 一级毛片aaaaaa免费看小| 婷婷亚洲欧美| ponron亚洲| 久久久成人免费电影| 舔av片在线| 久久国内精品自在自线图片| 成年免费大片在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲综合色惰| 久久精品国产自在天天线| 国产一区二区三区av在线 | 免费观看人在逋| 卡戴珊不雅视频在线播放| 日本欧美国产在线视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产伦精品一区二区三区四那| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 简卡轻食公司| 又爽又黄a免费视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 精品不卡国产一区二区三区| 波多野结衣高清无吗| 久久精品国产清高在天天线| 精品免费久久久久久久清纯| 老司机影院成人| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 在线观看av片永久免费下载| 偷拍熟女少妇极品色| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产高清不卡午夜福利| 国产精品三级大全| 国产精品久久久久久久久免| av.在线天堂| 国产一区二区激情短视频| 美女 人体艺术 gogo| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲最大成人手机在线| 国产午夜精品论理片| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲五月天丁香| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲自拍偷在线| 男女视频在线观看网站免费| 十八禁国产超污无遮挡网站| 一区二区三区高清视频在线| av卡一久久| 久久精品夜色国产| 91狼人影院| avwww免费| 午夜福利视频1000在线观看| 欧美+日韩+精品| 色噜噜av男人的天堂激情| 69av精品久久久久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 99九九线精品视频在线观看视频| 又爽又黄a免费视频| 我的老师免费观看完整版| 久久久精品94久久精品| 欧美高清性xxxxhd video| 熟女电影av网| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 老司机福利观看| 波野结衣二区三区在线| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| www.av在线官网国产| 色噜噜av男人的天堂激情| 综合色丁香网| 黄色视频,在线免费观看| 国产黄a三级三级三级人| 99热网站在线观看| 美女国产视频在线观看| 哪里可以看免费的av片| 国产精品久久久久久av不卡| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 熟女电影av网| 亚洲自拍偷在线| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产精品三级大全| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 波野结衣二区三区在线| 只有这里有精品99| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 日韩欧美三级三区| 精品免费久久久久久久清纯| 在线免费十八禁| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产一区二区三区av在线 | 国产精品电影一区二区三区| 欧美一区二区精品小视频在线| 日韩三级伦理在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 麻豆国产av国片精品| 亚洲第一电影网av| 日韩国内少妇激情av| 国产三级在线视频| 国产视频首页在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 真实男女啪啪啪动态图| 婷婷精品国产亚洲av| 少妇被粗大猛烈的视频| 精品免费久久久久久久清纯| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产亚洲精品av在线| 只有这里有精品99| 欧美性感艳星| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 91精品一卡2卡3卡4卡| av天堂在线播放| 国产精品日韩av在线免费观看| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲欧美日韩东京热| 婷婷六月久久综合丁香| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产精品一区www在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 成人亚洲欧美一区二区av| 97超视频在线观看视频| 日韩欧美精品免费久久| 乱码一卡2卡4卡精品| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 我要搜黄色片| 国产又黄又爽又无遮挡在线| av在线亚洲专区| 日本五十路高清| 国国产精品蜜臀av免费| 天天一区二区日本电影三级| 大香蕉久久网| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产成人91sexporn| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产精品蜜桃在线观看 | .国产精品久久| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 国产一区二区在线观看日韩| 久久久久久久久大av| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲人成网站在线播| 欧美极品一区二区三区四区| 久久久久久久久中文| 边亲边吃奶的免费视频| 亚洲av成人av| 性色avwww在线观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产精品1区2区在线观看.| 在线观看一区二区三区| 亚洲无线在线观看| 激情 狠狠 欧美| 麻豆乱淫一区二区| 欧美潮喷喷水| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 免费电影在线观看免费观看| 日韩强制内射视频| 我要搜黄色片| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产伦在线观看视频一区| 网址你懂的国产日韩在线| www.色视频.com| 午夜精品在线福利| 国产在线男女| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲av熟女| 老女人水多毛片| 两个人的视频大全免费| 中文字幕熟女人妻在线| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲av一区综合| 人妻久久中文字幕网| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 久久这里只有精品中国| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久亚洲精品不卡| 亚洲真实伦在线观看| 久久久久久久久久久丰满| av在线亚洲专区| 日韩欧美三级三区| 少妇人妻精品综合一区二区 | 久久久午夜欧美精品| av视频在线观看入口| 99久久人妻综合| 永久网站在线| 青青草视频在线视频观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日韩人妻高清精品专区| 搡老妇女老女人老熟妇| 天堂网av新在线| 国产高潮美女av| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产成人精品一,二区 | 久99久视频精品免费| 一个人看视频在线观看www免费| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国模一区二区三区四区视频| 男女那种视频在线观看| 色综合色国产| 99热网站在线观看| 精品人妻熟女av久视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 色噜噜av男人的天堂激情| 高清毛片免费观看视频网站| 成人欧美大片| 黄片无遮挡物在线观看| av卡一久久| 成人美女网站在线观看视频| 午夜福利在线在线| 天天躁日日操中文字幕| 男女那种视频在线观看| 日日啪夜夜撸| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产免费一级a男人的天堂| a级毛片a级免费在线| 99热这里只有精品一区| 天堂中文最新版在线下载 | or卡值多少钱| 欧美成人一区二区免费高清观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 18+在线观看网站| 99久久精品热视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲性久久影院| 久久99热这里只有精品18| 午夜精品在线福利| 国产伦在线观看视频一区| 色吧在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 婷婷精品国产亚洲av| 97在线视频观看| 美女 人体艺术 gogo| 欧美人与善性xxx| 久久亚洲精品不卡| 一边摸一边抽搐一进一小说| 成人欧美大片| 少妇丰满av| 亚洲四区av| 尾随美女入室| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产真实乱freesex| 亚洲欧美日韩东京热| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产麻豆成人av免费视频| 色综合色国产| 精品久久国产蜜桃| 欧美极品一区二区三区四区| 1000部很黄的大片| 一区二区三区四区激情视频 | 国产精品,欧美在线| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产日本99.免费观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 午夜激情欧美在线| 久久99精品国语久久久| 成人鲁丝片一二三区免费| 2021天堂中文幕一二区在线观| 最近2019中文字幕mv第一页| 日本五十路高清| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 一本一本综合久久| 久久久久久九九精品二区国产| 国产片特级美女逼逼视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 毛片女人毛片| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲五月天丁香| 看十八女毛片水多多多| 欧美zozozo另类| 国内精品一区二区在线观看| 丝袜美腿在线中文| 三级经典国产精品| 午夜福利在线观看吧| 国产精品1区2区在线观看.| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美最新免费一区二区三区| 午夜老司机福利剧场| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 美女内射精品一级片tv| 一个人看的www免费观看视频| av视频在线观看入口| 国内精品一区二区在线观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 三级经典国产精品| 一边摸一边抽搐一进一小说| 永久网站在线| 一进一出抽搐动态| 久久99蜜桃精品久久| 青春草国产在线视频 | 亚洲va在线va天堂va国产| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 卡戴珊不雅视频在线播放| 婷婷精品国产亚洲av| 久久韩国三级中文字幕| 欧美日韩综合久久久久久| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| av福利片在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 边亲边吃奶的免费视频| 99热全是精品| 黄片无遮挡物在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产高清激情床上av| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品久久久久久精品电影| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产私拍福利视频在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久久久久久午夜电影| 伦精品一区二区三区| 欧美日韩乱码在线| 一个人看视频在线观看www免费| 校园人妻丝袜中文字幕| 色综合色国产| 春色校园在线视频观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 在现免费观看毛片| 中文字幕av成人在线电影| 欧美色欧美亚洲另类二区| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲精品自拍成人| 久久久久性生活片| 国产亚洲5aaaaa淫片| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲乱码一区二区免费版| 晚上一个人看的免费电影| 成人国产麻豆网| 别揉我奶头 嗯啊视频| 美女黄网站色视频| 免费一级毛片在线播放高清视频| 久久综合国产亚洲精品| 网址你懂的国产日韩在线| 日韩高清综合在线| 人妻夜夜爽99麻豆av| 午夜激情福利司机影院| 日韩欧美精品v在线| 99久国产av精品| 欧美日韩精品成人综合77777| 校园春色视频在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 看黄色毛片网站| 18禁在线播放成人免费| 欧美激情久久久久久爽电影| 日日干狠狠操夜夜爽| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久九九热精品免费| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 久久久久性生活片| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 中文字幕免费在线视频6| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 深夜精品福利| 国产精品不卡视频一区二区| 99久久无色码亚洲精品果冻| 不卡一级毛片| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 特大巨黑吊av在线直播| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 精品无人区乱码1区二区| 可以在线观看的亚洲视频| 午夜福利视频1000在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 综合色av麻豆| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产伦一二天堂av在线观看| eeuss影院久久| 日韩av在线大香蕉| 国产成人a区在线观看| 日韩av不卡免费在线播放| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 青春草国产在线视频 | 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产探花极品一区二区| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲高清免费不卡视频| av.在线天堂| av女优亚洲男人天堂| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 91精品国产九色| 国产 一区精品| 免费黄网站久久成人精品| av免费在线看不卡| 联通29元200g的流量卡| 久久精品影院6| 国产欧美日韩精品一区二区| 中国国产av一级| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 秋霞在线观看毛片| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 成人国产麻豆网| 中文在线观看免费www的网站| 国产av不卡久久| 欧美日本视频| 性插视频无遮挡在线免费观看| 免费观看在线日韩| 久久99热6这里只有精品| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 欧美日韩综合久久久久久| 好男人在线观看高清免费视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 97超视频在线观看视频| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲av第一区精品v没综合| 精品不卡国产一区二区三区| 精品人妻熟女av久视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产综合懂色| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲欧美成人精品一区二区| 欧美成人一区二区免费高清观看| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产成人91sexporn| 欧美潮喷喷水| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 欧美日韩精品成人综合77777| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 欧美日韩国产亚洲二区| 在线观看午夜福利视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产av不卡久久| 免费看光身美女| 男人的好看免费观看在线视频| 久久精品人妻少妇| 欧美极品一区二区三区四区| 国产黄a三级三级三级人| 内射极品少妇av片p| 插阴视频在线观看视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 久久久久久久久久久丰满| 国产精品一区二区三区四区久久| 色5月婷婷丁香| 国模一区二区三区四区视频| 久久精品人妻少妇| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲精品国产成人久久av| 婷婷亚洲欧美| 一级毛片久久久久久久久女| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲av免费高清在线观看| 色5月婷婷丁香| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产淫片久久久久久久久| 国产熟女欧美一区二区| 久久综合国产亚洲精品| 人人妻人人看人人澡| 99热只有精品国产| 欧美高清性xxxxhd video| 欧美日韩在线观看h| 免费看av在线观看网站| 日韩av不卡免费在线播放| 久久九九热精品免费| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产免费男女视频| 欧美日韩乱码在线| av在线亚洲专区| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产精品,欧美在线| 最近最新中文字幕大全电影3| 中文欧美无线码| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲精品自拍成人| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 男的添女的下面高潮视频| 麻豆成人午夜福利视频| 国产成人精品久久久久久| 男人的好看免费观看在线视频| 在线观看66精品国产| 成人性生交大片免费视频hd| 26uuu在线亚洲综合色| 欧美潮喷喷水| 一区二区三区免费毛片| 日日啪夜夜撸| 久久久久久久久久久丰满| 一级二级三级毛片免费看| 全区人妻精品视频| 人妻系列 视频| 国产精品久久久久久精品电影| 日韩一区二区视频免费看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲精品自拍成人| 国产高清三级在线| 搡老妇女老女人老熟妇| 国内精品美女久久久久久| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 成人特级av手机在线观看| av天堂中文字幕网| 国产中年淑女户外野战色| 日日撸夜夜添| 亚洲无线观看免费| 国产亚洲精品久久久com| 中文欧美无线码| 欧美潮喷喷水| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 青春草视频在线免费观看| 69av精品久久久久久| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产在视频线在精品| 在线观看美女被高潮喷水网站| 三级国产精品欧美在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲欧美精品专区久久| 免费看日本二区| av国产免费在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产单亲对白刺激|