寒凝證類痛經大鼠經穴左右紅外溫度及艾灸作用的研究

張偉，楊佳敏，張梅，劉珍珍，齊丹丹，章慶慶，羅麗，解秸萍，任曉暄，郭孟瑋，趙雅芳

北京中醫(yī)藥大學針灸推拿學院，北京 100029

寒凝證類痛經大鼠經穴左右紅外溫度及艾灸作用的研究

張偉，楊佳敏，張梅，劉珍珍，齊丹丹，章慶慶，羅麗，解秸萍，任曉暄，郭孟瑋，趙雅芳

北京中醫(yī)藥大學針灸推拿學院，北京 100029

目的 觀察寒凝證類痛經大鼠左右穴區(qū)及經穴連線艾灸前后紅外溫度，比較灸三陰交與關元效應差異。方法 陰道涂片法篩選動情間期大鼠48只，隨機分為正常組、模型組、三陰交組和關元組，每組12只。全身冷凍結合苯甲酸雌二醇注射法造模，治療組分別灸雙側三陰交和關元，3壯/穴。紅外熱成像儀動態(tài)監(jiān)測相關穴區(qū)及經絡連線左右艾灸前后紅外溫度。結果 與正常組比較，灸后5～30 min，模型組三陰交-血海經絡連線左右溫差顯著增加（P＜0.05）；灸后30 min，其他3組三陰交右側穴區(qū)溫度顯著降低（P＜0.01）。與模型組比較，灸后5～30 min，三陰交組三陰交-血海經絡連線左右溫差顯著降低（P＜0.05），關元組10～30 min連線左右溫差顯著降低（P＜0.05）；兩艾灸組比較，三陰交組對連線左右溫差影響早于關元組。結論 艾灸可顯著減小經絡連線左右溫差，緩解失衡狀態(tài)，且灸三陰交恢復失衡作用早于灸關元。

艾灸；紅外熱成像；寒凝證類痛經大鼠；三陰交；關元；大鼠

原發(fā)性痛經是婦科常見疾病，而寒凝證是原發(fā)性痛經中最常見證型之一[1]。中醫(yī)學認為，“血得熱則行，得寒則凝”“不通則痛”是寒凝證痛經主要發(fā)病機制。研究顯示，健康人體表溫度處于左右平衡狀態(tài)，疾病時體表溫度左右失去平衡，主要表現(xiàn)在與疾病相關的經絡與腧穴上，針刺可調節(jié)該失衡狀態(tài)[2]。本課題組前期已成功制備寒凝證類痛經大鼠模型，發(fā)現(xiàn)針刺可以調節(jié)其三陰交穴區(qū)左右溫度失衡狀態(tài)，引起相關經脈穴區(qū)溫度循經性動態(tài)變化[3-4]。為進一步觀察寒凝證痛經大鼠體表溫度經穴特性，探討艾灸對穴區(qū)及經脈溫度的影響，本研究采用紅外熱成像技術觀察大鼠雙側三陰交和血海穴區(qū)及脾經三陰交-血海經絡連線段體表溫度及艾灸后變化，比較灸本部三陰交和標部關元的效應差異。

1 材料與方法

1.1 動物

健康清潔級雌性SD大鼠，3月齡，性成熟未交配，體質量（230±20）g，中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院，合格證號SCXK（京）2004-007。大鼠置于清潔柜中，實驗室溫度（23±1）℃、濕度（45±5）%。

1.2 艾灸材料

艾炷直徑7.5 mm、高8.0 mm，底盤直徑12.0 mm、高3.0 mm，北京中研太和有限公司。

1.3 主要藥物、試劑與儀器

苯甲酸雌二醇注射液（寧波市三生藥業(yè)有限公司，批號120207），縮宮素注射液（上海禾豐制藥廠，批號120302）；自制美蘭染色溶液、20%烏拉坦。P640型紅外熱像儀（美國FLIR公司），BT223S電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），TX51顯微鏡（日本OLYMPUS公司），BC/BD-379HB臥式冰柜（青島海爾集團）。

1.4 動物篩選及分組

每日定時細棉簽蘸生理鹽水，濕潤后輕輕插入大鼠陰道約0.5 cm，轉動后取出，將細棉簽上陰道內容物均勻涂于載玻片。待在空氣中干燥后，染色10 min，然后鏡下觀察涂片組織學變化，篩選出有大量白細胞及少量上皮細胞和黏液的動情間期者。按隨機數(shù)字表法將動情間期48只大鼠隨機分為正常組、模型組、三陰交組、關元組，每組12只。

1.5 造模

參照文獻[5-6]苯甲酸雌二醇注射結合冷凍法造模。皮下注射苯甲酸雌二醇（第1、10日每只0.5 mg/d，第2～9日每只0.2 mg/d），連續(xù)10 d。第6日給藥后將大鼠放入-25 ℃低溫冷柜，間隔2 h后開蓋通氣5 s，持續(xù)受凍4 h左右；待出現(xiàn)寒顫畏寒喜暖、蜷縮少動、朦朧欲睡、反應遲鈍、呼吸微弱等癥狀和體征時取出，給藥后冷凍重復至第10日。

1.6 艾灸方法

除正常組外，其余各組第10日給藥1 h后腹腔注射縮宮素2 U/只，隨后關元組和三陰交組分別艾灸“關元”和雙側“三陰交”（固定大鼠后肢，止血鉗夾住艾炷底座使其恰好接觸穴區(qū)皮膚而不過于貼近，待灸炷燃剩1/4時，換取下一壯，連續(xù)3壯/穴）。模型組和正常組同時抓取，不予艾灸。

1.7 紅外溫度監(jiān)測

第10日注射苯甲酸雌二醇后，肌內注射烏拉坦0.7 mL/100 g麻醉大鼠，剃毛器備皮暴露雙側三陰交、血海穴區(qū)。再將大鼠固定于透明鼠板，被攝對象置于紅外攝像機鏡頭視野內，標記監(jiān)測穴區(qū)。先記錄各組大鼠灸前溫度，然后正常組腹腔注射等滲鹽水，其他組腹腔注射縮宮素后，對三陰交組、關元組施行艾灸，再記錄灸后5、10、20、30 min紅外溫度。實驗期間實驗室溫度保持在（23±1）℃、濕度（60±5）%。

1.8 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 艾灸對三陰交穴區(qū)紅外溫度的影響

重復測量分析顯示，各組間雙側穴區(qū)溫度變化差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。各組于監(jiān)測時間均對溫度有顯著影響（P＜0.05）。各組不同時點紅外溫度差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。灸后與灸前比較，除正常組外，其余3組灸后30 min三陰交右側穴區(qū)均比灸前溫度顯著降低（P＜0.01）；各時點組間左右溫差比較未見顯著差異（P＞0.05）。結果見表1。

2.2 艾灸對血海穴區(qū)紅外溫度的影響

重復測量分析結果同“2.1”項。各組雙側血海穴區(qū)灸后30 min均比灸前溫度顯著降低（P＜0.01）；各時點組間左右溫差比較均未見顯著差異（P＞0.05）。結果見表2。

2.3 艾灸對三陰交-血海連線紅外溫度的影響

重復測量分析結果同“2.1”項。灸后30 min各組雙側三陰交-血海連線均比灸前溫度顯著降低（P＜0.01）；左右溫差比較，灸前與正常組比較，模型組未見顯著差異，三陰交組三陰交-血海連線左右溫差顯著增加（P＜0.05）；灸后5～30 min，模型組連線左右溫差顯著大于正常組（P＜0.05）；灸后5 min時，三陰交組連線左右溫差顯著小于模型組（P＜0.05），但大于正常組（P＜0.05）；灸后10～30 min，三陰交組、關元組連線左右溫差均顯著小于模型組（P＜0.05），與正常組未見顯著差異。治療組間比較，三陰交組對連線左右溫差影響早于關元組。結果見表3。

表1 艾灸前后雙側三陰交穴區(qū)各組紅外溫度比較（s，℃，每組12只）

表1 艾灸前后雙側三陰交穴區(qū)各組紅外溫度比較（s，℃，每組12只）

注：與同組同側灸前比較，##P＜0.01

10 min 右 28.75±0.25 28.33±0.39 29.05±0.28 28.57±0.42左 28.27±0.35 27.22±0.33 28.92±0.28 28.35±0.34差 0.47±0.23 0.61±0.20 0.13±0.20 0.22±0.46 20 min 右 28.68±0.28 28.11±0.38 28.60±0.30 28.12±0.42左 28.08±0.40 27.51±0.33 28.53±0.20 28.04±0.34差 0.59±0.27 0.61±0.22 0.07±0.22 0.08±0.45 30 min 右 28.64±0.30 27.98±0.40##28.67±0.31##27.93±0.42##左 28.06±0.41 27.35±0.33 28.16±0.24 27.87±0.36差 0.58±0.29 0.64±0.20 0.11±0.20 0.06±0.43

表2 艾灸前后雙側血海穴區(qū)各組紅外溫度比較（±s，℃，每組12只）

表2 艾灸前后雙側血海穴區(qū)各組紅外溫度比較（±s，℃，每組12只）

注：與同組同側灸前比較，##P＜0.01

時點 部位 正常組 模型組 三陰交組 關元組灸前 右 31.13±0.35 31.15±0.36 31.21±0.49 31.71±0.27左 31.19±0.35 31.07±0.32 32.12±0.22 31.90±0.78差 -0.06±0.15 -0.02±0.17 -0.91±0.55 -0.19±0.18 5 min 右 30.67±0.01 30.59±0.36 30.57±0.35 30.78±0.29左 30.28±0.45 28.97±0.33 30.40±0.19 30.05±0.30差 -0.01±0.14 0.15±0.20 -0.88±0.42 -0.22±0.18 10 min 右 30.54±0.41 30.41±0.38 30.33±0.34 30.16±0.29左 30.55±0.42 30.22±0.33 31.13±0.22 30.65±0.28差 -0.01±0.15 0.20±0.22 -0.81±0.40 -0.10±0.22 20 min 右 30.36±0.44 30.18±0.40 29.93±0.33 30.16±0.30左 30.35±0.45 30.04±0.35 30.67±0.21 30.37±0.28差 0.01±0.15 0.14±0.17 -0.75±0.38 -0.21±0.18 30 min 右 30.28±0.46##29.94±0.45##29.62±0.30##29.90±0.32##左 30.28±0.45##29.87±0.33##30.40±0.19##30.05±0.34##差 0.00±0.18 0.07±0.23 -0.77±0.34 -0.14±0.17

表3 艾灸前后雙側三陰交-血海連線各組紅外溫度比較（±s，℃，每組12只）

表3 艾灸前后雙側三陰交-血海連線各組紅外溫度比較（±s，℃，每組12只）

注：與同組同側灸前比較，##P＜0.01；與正常組比較，△P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05；與三陰交組比較，▲P＜0.05

時點部位正常組 模型組 三陰交組 關元組灸前右30.74±026 30.57±0.29 31.35±0.24 31.37±0.34左30.60±0.26 30.41±0.28 31.71±0.16 31.46±0.24差 0.15±0.11 0.16±0.08 -0.37±0.20△*-0.09±0.18 5 min右30.26±0.29 30.06±0.30 31.00±0.20 30.34±0.34左30.10±0.29 29.74±0.30 31.29±0.16 30.42±0.28差 0.16±0.12 0.32±0.11△-0.28±0.17△*-0.09±0.18▲10 min右30.17±0.30 29.90±0.32 30.54±0.22 30.12±0.35左29.98±0.29 29.51±0.30 30.74±0.28 30.20±0.29差 0.19±0.13 0.39±0.10△-0.21±0.18*-0.08±0.19*20 min右30.03±0.33 29.64±0.35 30.04±0.24 29.79±0.35左29.76±0.33 29.20±0.32 30.21±0.20 29.88±0.31差 0.27±0.15 0.44±0.13△-0.17±0.19*-0.09±0.20*30 min右27.91±0.35##29.43±0.35##29.69±0.24##29.52±0.35##左29.68±0.34##29.02±0.30##29.81±0.22##29.62±0.33##差 0.24±0.18 0.41±0.14△-0.12±0.17*-0.10±0.20*

3 討論

熱學理論認為，動物和人都是熱輻射體，體表不同部位輻射出不同強度紅外線。當某一區(qū)域發(fā)生生理或病理改變時，該區(qū)域新陳代謝發(fā)生變化，其分子熱運動及紅外輻射也將發(fā)生相應變化。紅外熱像技術可利用光學掃描會聚、光電轉換及信號放大等系統(tǒng),接收、處理體表紅外信號，以圖像形式顯示體表溫度場分布。研究發(fā)現(xiàn)，經穴與體表其他部位表現(xiàn)為不同紅外輻射特性，皮膚經絡冷負荷處理后，經絡帶皮膚溫度變化較非經絡帶迅速；某些內臟疾病時體表相關穴位紅外溫度會上升或下降[5-6]。

有學者利用紅外技術觀察到體表存在基本符合十四經循行軌跡（包括高溫帶和低溫帶）的等強度紅外輻射分布圖，并處于動態(tài)變化中；正常狀態(tài)紅外熱成像圖呈左右基本對稱規(guī)律；并將兩側對應的同名穴位溫度差值過大作為經絡失衡的依據(jù)[7-9]。

本課題組前期發(fā)現(xiàn)，寒凝痛經大鼠疼痛狀態(tài)時，三陰交左右紅外溫度失衡，針刺三陰交、關元可緩解左右失衡[3-4]。但疾病狀態(tài)下2個穴位經絡連線左右溫差有何變化，目前未見相關報道。艾灸是靠藥物及溫熱作用防治疾病的外治方法，對于痛經鎮(zhèn)痛作用效果顯著。本研究再次采用紅外熱成像技術監(jiān)測相關穴區(qū)及經線左右的紅外溫度，觀察艾灸影響效應。結果顯示，灸前，三陰交組三陰交-血海經絡連線左右溫差顯著大于正常組和模型組；灸后5 min，三陰交組開始小于模型組，但仍大于正常組；灸后10～30 min，三陰交組、關元組均小于模型組，與正常組未見差異。而連續(xù)監(jiān)測30 min，三陰交和血海穴區(qū)左右溫差各組間均未見顯著差異?？梢姡幗?、血海單個穴區(qū)左右溫差未見顯著變化時，三陰交-血海經絡連線左右溫差出現(xiàn)灸前大于正常大鼠，而灸后10～30 min顯著減小的變化。分析認為，三陰交-血海連線為足太陰脾經下肢循行的一部分，痛經時單個穴區(qū)未出現(xiàn)失衡表現(xiàn)時，經脈上的穴位間連線左右溫差變化可反映脾經的失衡狀態(tài)。并且，三陰交為本經穴位，關元為任脈和足三陰經的交匯穴位，二穴均可對脾經經氣盛衰發(fā)揮調節(jié)作用；分別艾灸后連線左右溫差顯著減小，可以認為二穴均可緩解脾經左右失衡。兩治療組比較，三陰交組自5 min開始左右溫差減小，而關元組自10 min開始減小，可見三陰交穴對經線失衡恢復作用早于關元穴。從標本理論分析，三陰交屬本部穴，為經氣匯聚區(qū)域；關元屬標部穴，為經氣彌散區(qū)域；說明經氣匯聚處對經絡左右失衡調節(jié)作用強于經氣彌散處。從物理熱傳導看，灸局部三陰交溫熱傳導距離小于灸遠端關元，故三陰交恢復失衡作用要早于關元。灸后30 min，各組雙側血海穴區(qū)、三陰交-血海經絡連線、左側三陰交穴區(qū)紅外溫度均比灸前顯著下降，考慮由于大鼠麻醉及四肢展開的固定體位，影響其正常產熱散熱平衡，故溫度均下降。

綜上，寒凝證類痛經大鼠三陰交-血海經絡連線左右紅外溫差顯著增大，三陰交右側穴區(qū)溫度顯著降低。灸三陰交、關元可減小三陰交-血海經絡連線左右溫差，緩解經絡左右失衡狀態(tài)，且灸三陰交恢復失衡作用早于灸關元。

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Research on Temperature of Left and Right Points of Dysmenorrhea Rats with Cold

Stagnation Syndrome and Effects of Moxibustion Intervention

ZHANG Wei, YANG Jia-min,

ZHANG Mei, LIU Zhen-zhen, QI Dan-dan, ZHANG Qing-qing, LUO Li, XIE Jie-ping, REN Xiao-xuan, GUO Meng-wei, ZHAO Ya-fang (School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China)

Objective To observe the surface area temperature of dysmenorrhea rats with cold stagnation syndrome; To compare the different effects of Sanyinjiao (SP6) and Guanyuan (RN4). Methods Forty female SD rats were randomized into control group, model group, Sanyinjiao (SP6) group, and Guanyuan (RN4) group, 12 rats in each group. Whole body freezing method combined with estradiol benzoate injection was used to establish models. Sanyinjiao (SP6) group and Guanyuan (RN4) group received moxibustion at corresponding points for 3 times after modeling. Infrared thermal imaging was used to measure the skin temperature at the surface projection area of Sanyinjiao (SP6) and Xuehai (SP10) and Sanyinjiao-Xuehai lines before and after moxibustion. Results Compared with control group, the temperature gap between double sides of Sanyinjiao-Xuehai lines significantly increased in model group 5-30 min after moxibustion (P<0.05). 30 min after moxibustion, the temperature of right Sanyinjiao significantly decreased in other three groups (P<0.01). Compared with model group, the temperature gap between double sides of Sanyinjiao-Xuehai lines significantly decreased after 5-30 min in Sanyinjiao group (P<0.05), while Sanyinjiao-Xuehai lines significantly decreased after 10-30 min in Guanyuan group (P<0.05). Comparison between two moxibustion groups, the influence of Sanyinjiao group to temperature gap between double sides of Sanyinjiao-Xuehai lines was earlier than Guanyuan group (P<0.05). Conclusion Moxbustion can decrease the temperature gap between double sides of Sanyinjiao-Xuehai lines and ease the imbalance. And the influence of moxbustion SP6 to temperature gap between double sides of Sanyinjiao-Xuehai lines is earlier than moxibustion RN4.

moxibustion therapy; infrared thermal imaging; dysmenorrhea rats with cold stagnation syndrome; Sanyinjiao; Guanyuan; rats

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.04.018

R245

A

1005-5304(2016)04-0068-04

2015-07-23）

（

2015-08-12；編輯：華強）

國家中醫(yī)藥管理局第一批重點研究室建設項目（2009年）；北京中醫(yī)藥大學自主選題項目（2015-jxs-351）

解秸萍，E-mail：xiejieping@sina.com