囊胚培養(yǎng)在輔助生殖技術(shù)治療周期中應(yīng)用價(jià)值研究*

劉 芳 包俊華 金 銳 白 剛 唐大偉

(銀川市婦幼保健院生殖中心，寧夏回族自治區(qū) 銀川 750001)

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囊胚培養(yǎng)在輔助生殖技術(shù)治療周期中應(yīng)用價(jià)值研究*

劉 芳 包俊華 金 銳 白 剛 唐大偉

(銀川市婦幼保健院生殖中心，寧夏回族自治區(qū) 銀川 750001)

目的 探究囊胚培養(yǎng)在輔助生殖技術(shù)治療周期中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選取我中心2015年6月至2016年5月常規(guī)IVF/ICSI-ET周期D3(第3天)胚胎進(jìn)行回顧性分析，將D3卵裂期胚胎培養(yǎng)至囊胚，比較不同評(píng)分和卵裂球數(shù)胚胎的囊胚形成情況，并對(duì)妊娠結(jié)局進(jìn)行預(yù)測(cè)。結(jié)果 與其他組相比，評(píng)分3分以上且D3為6～9個(gè)細(xì)胞的胚胎的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率最高，達(dá)35.7%，差異顯著(P<0.05)；無(wú)囊胚形成者臨床妊娠率和胚胎種植率分別為15.2%、6.8%，有囊胚形成者為36.4%、41.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 囊胚培養(yǎng)能夠淘汰不良胚胎，篩選出具有發(fā)育潛力的優(yōu)質(zhì)胚胎，可間接預(yù)測(cè)妊娠結(jié)局，是選擇胚胎質(zhì)量的有效方式。

囊胚培養(yǎng)；輔助生殖技術(shù)；應(yīng)用價(jià)值

隨著生殖技術(shù)的不斷發(fā)展，目前臨床多將輔助生殖技術(shù)作為治療不孕不育的主要手段。大多生殖中心所采用的形態(tài)學(xué)評(píng)分對(duì)于胚胎的生命力和質(zhì)量并不能完全表達(dá)，同時(shí)對(duì)于囊胚的質(zhì)量也無(wú)法進(jìn)行準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)[1]。為此，本研究旨在探討囊胚培養(yǎng)在輔助生殖技術(shù)治療周期中的應(yīng)用價(jià)值，從而為臨床提供參考，現(xiàn)報(bào)告示下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我中心2015年6月至2016年5月常規(guī)IVF/ICSI-ET周期D3胚胎進(jìn)行回顧性分析，包括：(1)2PN來(lái)源的發(fā)育正常的胚胎；(2)評(píng)分較低或卵裂期發(fā)育延緩的胚胎；(3)受精異常的胚胎，包括1PN ( 單個(gè)原核)、 0PN(無(wú)原核) 胚胎。所有患者均與我中心簽署知情同意書，D3天移植、冷凍后剩余胚胎行囊胚培養(yǎng)，將優(yōu)質(zhì)囊胚冷凍保存。若有胚胎發(fā)育較為遲緩，可繼續(xù)培養(yǎng)至D4。

1.2 方法 根據(jù)卵裂球數(shù)目、形態(tài)以及胞漿碎片多少等參數(shù)將D3卵裂期胚胎分為4個(gè)等級(jí)，Ⅳ級(jí)(4分)：卵裂球大小均勻，胞質(zhì)均勻透亮，透明帶完整，胚胎無(wú)碎片或有少量(≤5%)碎片；Ⅲ級(jí)(3分)：卵裂球大小稍不均勻，碎片≤20%，透明帶完整；Ⅱ級(jí)(2分)：卵裂球大小不均，20%<碎片<50%，透明帶完整；Ⅰ級(jí)(1分)：卵裂球大小嚴(yán)重不均或無(wú)明顯卵裂球存在，觀察到大量無(wú)核碎片，碎片≥50%。(1)將入選胚胎隨機(jī)進(jìn)行培養(yǎng)：將發(fā)育遲緩(3分以上4～5個(gè)細(xì)胞)的培養(yǎng)至D4，如胚胎評(píng)分≥3分且繼續(xù)分裂則冷凍保存，評(píng)分較低或停止發(fā)育則丟棄。(2)將剩余胚胎行囊胚培養(yǎng)，如形成優(yōu)質(zhì)囊胚則冷凍保存，否則丟棄。并培養(yǎng)異常受精的胚胎。

1.3 觀察指標(biāo) 比較不同評(píng)分和卵裂球數(shù)胚胎的囊胚形成情況，并對(duì)妊娠結(jié)局進(jìn)行預(yù)測(cè)。

參考梁鑫等[2]報(bào)道的方法，將囊胚分為6級(jí):1級(jí)，囊胚腔體積<1/2囊胚總體積，為早期囊胚；2級(jí)，囊胚腔體積>1/2囊胚總體積；3級(jí)，囊胚腔將囊胚完全占據(jù)為完全擴(kuò)張型；4級(jí)，囊胚腔體積較早期囊胚明顯增大為擴(kuò)張型，且透明帶變?。?級(jí)，與透明帶破裂口處囊胚正在孵出，為正在孵化的囊胚；6級(jí)，于透明帶中完全脫出，為孵化出的囊胚。3～6級(jí)囊胚需對(duì)TE(滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞)和ICM(內(nèi)細(xì)胞)進(jìn)行評(píng)分。TE評(píng)分：A級(jí)，細(xì)胞分布于囊胚周圍，數(shù)目較多；B級(jí)，上皮細(xì)胞松散，細(xì)胞數(shù)目較少；C級(jí)，細(xì)胞數(shù)目極少。ICM 評(píng)分：A級(jí)，細(xì)胞結(jié)合緊密，數(shù)目多；B級(jí)，細(xì)胞數(shù)目少、結(jié)合松散；C級(jí)，細(xì)胞數(shù)目極少。優(yōu)質(zhì)囊胚：TE和ICM評(píng)分均高于B級(jí)，且分級(jí)>3級(jí)的囊胚。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，P≤0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 2PN胚胎評(píng)分、卵裂球數(shù)和囊胚形成的關(guān)系 各組囊胚形成率相比，無(wú)明顯差異(P>0.05)，但評(píng)分≥3分6～9細(xì)胞的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率明顯高于其他各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其他組間對(duì)比，無(wú)明顯差異(P>0.05)。見表1。

表1 囊胚形成和胚胎質(zhì)量關(guān)系 n(%)

2.2 囊胚形成對(duì)妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè) 進(jìn)行囊胚培養(yǎng)的138例患者中，有囊胚形成的43例，占31.2%，本研究選取有評(píng)分≥3分，D3為6～9個(gè)細(xì)胞，2PN的優(yōu)質(zhì)胚胎者的囊胚形成情況預(yù)測(cè)患者妊娠結(jié)局。無(wú)囊胚形成者臨床妊娠率和胚胎種植率分別為15.2%、6.8%，有囊胚形成者為36.4%(12/33)、41.9%(31/74)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2分別為3.882，24.814，P<0.05)。

3 討 論

臨床研究顯示[3-4]，D3胚胎質(zhì)量與囊胚質(zhì)量、囊胚形成率有關(guān)。孫迎利等[5]的研究表明，囊胚的形成與胚胎卵裂速率密切相關(guān)，D3細(xì)胞數(shù)為7～9個(gè)的囊胚形成率為41.9%，而>9或<7的胚胎，其囊胚形成率會(huì)明顯下降。王雅琴等[6]經(jīng)研究同樣得出質(zhì)量較差的胚胎很難發(fā)育成優(yōu)質(zhì)囊胚，而D3卵裂球數(shù)≥7個(gè)的優(yōu)質(zhì)胚胎則有更大的幾率發(fā)育成優(yōu)質(zhì)囊胚。本研究顯示，D3卵裂球數(shù)為6～9個(gè)的囊胚形成率為51.7%，與其他各組相比雖無(wú)明顯差異，但其優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為35.7%，明顯高于其他組，與上述結(jié)論相一致。并且部分質(zhì)量相對(duì)較差的胚胎也有可能形成囊胚，這與王珊珊等[7]研究結(jié)果相一致。提示為提高一次取卵周期的可用胚胎率，可將質(zhì)量較差的胚胎繼續(xù)培養(yǎng)至D5或D6，若有可用囊胚形成，則進(jìn)行冷凍保存。此外，D3胚胎評(píng)分對(duì)于胚胎的發(fā)育潛力無(wú)法進(jìn)行完全的預(yù)測(cè)，部分有發(fā)育潛力的胚胎很有可能被丟棄。采用囊胚培養(yǎng)可篩選出具有發(fā)育潛力的胚胎，在保證該周期內(nèi)有胚胎移植的情況下，將不良胚胎淘汰，能夠有效減少移植次數(shù)與液氮罐資源的占用，更容易被患者接受。同時(shí)本研究顯示，評(píng)分≥3分、D3為6～9個(gè)細(xì)胞、2PN的優(yōu)質(zhì)胚胎有囊胚形成的患者，其妊娠率為36.4%，明顯高于無(wú)囊胚形成者的15.2%，差異顯著(P<0.05)，說(shuō)明囊胚形成有利于提高患者妊娠率，能夠較好的預(yù)測(cè)妊娠結(jié)局。而有囊胚形成但未妊娠者，可對(duì)其黃體期支持、子宮內(nèi)膜容受性等因素進(jìn)行分析，找出妊娠失敗的關(guān)鍵原因，改進(jìn)下一周的治療方案，從而提升妊娠率。

綜上所述，囊胚培養(yǎng)能夠有效將質(zhì)量較差的胚胎淘汰，同時(shí)將優(yōu)質(zhì)胚胎篩選出，有利于提高患者一次取卵周期的受孕率，緩解患者的負(fù)面情緒，減輕經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，是一種有效選擇胚胎質(zhì)量的方式。

[1] 唐永梅，韋繼紅，姚春玲，等.非優(yōu)質(zhì)胚胎行囊胚培養(yǎng)337例分析[J].中國(guó)婦幼保健，2013，28(35):5853-5854.

[2] 梁鑫，單旭東，漆著，等.囊胚培養(yǎng)及廢棄胚胎臨床研究[J].中國(guó)婦幼保健，2015，30(34):6103-6106.

[3] 黃志輝，余敏，伍瓊芳，等.囊胚培養(yǎng)的相關(guān)因素分析[J].江西醫(yī)藥，2013，48(4):305-308.

[4] 張雪瑞.囊胚培養(yǎng)與囊胚移植的臨床應(yīng)用效果研究[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2016，10(6):85-86.

[5] 孫迎利，楊麗娟，劉淑娟，等.囊胚培養(yǎng)技術(shù)的改良及臨床應(yīng)用[J].現(xiàn)代診斷與治療，2015，26(19):4423-4424.

[6] 王雅琴，楊菁，徐望明，等.低等級(jí)胚胎囊胚培養(yǎng)及凍融周期移植后臨床結(jié)局分析[J].生殖醫(yī)學(xué)雜志，2015，24(3):220-224.

[7] 王珊珊，招霞，倪曉蓓，等.卵裂方式對(duì)胚胎發(fā)育潛能的影響[J].中國(guó)性科學(xué)，2015，24(11):94-97.

The study on application values of blastocyst culture in assisted reproductive technology treatment cycle

LIU Fang BAO Jun-hua JIN Rui BAI Gang TANG Da-wei

(The Maternal and Child Health Hospital of Yinchuan City,Yinchuan 750001,China)

Objective: To investigate the application values of blastocyst culture in assisted reproductive technology treatment cycle. Methods: The selected embryos of normal TVF/ICSI cycle of D3 (the third day) cultured in our center from June 2015 to May 2016 were retrospectively analyzed, and embryos in D3 cleavage stages were cultured to blastocysts. Different scores and the blastocysts formations of number of embryo blastomere were Compared. Meanwhile, the pregnancy outcomes were forecasted. Results: Compared with other groups, the formation rate of high-quality blastocysts with scores above 3 points and D3 for 6～9 cells was the highest, which was ups to 35.7%, and there was statistical significance (P<0.05); The clinical pregnancy rate and implantation rate of those without blastocyst formations were 15.2% and 6.8% respectively, and those with balstocyst formations were 36.4% and 41.9% respectively, and there was statistical significance (P<0.05). Conclusion: Blastocyst culture is able to weed out bad embryos, screen out high-quality embryos with developmental potentiality and indirectly forecast pregnancy outcomes, which is the effective way of selecting embryo quality.

blastocyst culture; assisted reproductive technology; application values

劉芳(1980—)，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事生殖醫(yī)學(xué)工作。

R717

A

1004-7115(2016)11-1233-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2016.11.010

2016-06-08)