LC-MS/MS法測(cè)定人尿液中他唑巴坦鈉濃度及其尿藥排泄動(dòng)力學(xué)研究Δ

任立玲，王源園，孫魯寧，張宏文，謝利軍，劉　云，王永慶1，#（1.南京醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，南京　1009；.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，南京　1009）

·臨床藥學(xué)與研究·

LC-MS/MS法測(cè)定人尿液中他唑巴坦鈉濃度及其尿藥排泄動(dòng)力學(xué)研究Δ

任立玲1＊，王源園2，孫魯寧2，張宏文2，謝利軍2，劉云2，王永慶1，2#（1.南京醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，南京210029；2.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，南京210029）

目的：建立測(cè)定人尿液中他唑巴坦鈉濃度的方法，并進(jìn)行尿藥排泄動(dòng)力學(xué)研究。方法：尿液樣品經(jīng)10%高氯酸沉淀后，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法測(cè)定尿液中他唑巴坦鈉的濃度。色譜柱為Hypersil GOLD C18，流動(dòng)相為甲醇-水（30∶70，V/V），流速為0.2 ml/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為5 μl；采用電噴霧離子源，以多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式進(jìn)行正離子掃描，用于定量分析的離子對(duì)為m/z 301→168。入組8名健康受試者，靜脈滴注注射用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉（6∶1，m/m）2.34 g，收集其給藥前和給藥后0～2、2～5、5～8、8～12和12～16 h的尿液研究其尿液排泄動(dòng)力學(xué)。結(jié)果：他唑巴坦鈉尿藥濃度在0.25～500 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝0.999 9），定量下限為0.25 μg/ml，批內(nèi)、批間RSD＜10%，方法回收率為93.8%～111.8%，提取回收率為93.9%～99.7%，介質(zhì)效應(yīng)為87.6%～107.2%。受試者用藥16 h后，他唑巴坦鈉的尿累積排泄量為（209.70±39.24）mg，累積排泄率為（61.7±11.5）%。結(jié)論：LC-MS/MS法用于人尿液中他唑巴坦鈉濃度的測(cè)定和排泄動(dòng)力學(xué)的研究簡便、快捷、靈敏度高；他唑巴坦鈉主要經(jīng)腎臟排瀉。

高相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；他唑巴坦鈉；尿液；尿藥濃度；排泄動(dòng)力學(xué)

頭孢噻肟鈉是第三代頭孢菌素類抗菌藥物，通過破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的合成來發(fā)揮廣譜抗菌作用，對(duì)革蘭氏陰性桿菌和革蘭氏陽性球菌均具有較強(qiáng)的抗菌活性。隨著臨床使用越來越廣泛，其耐藥率逐年遞增[1]。他唑巴坦鈉是舒巴坦的衍生物，為不可逆的β-內(nèi)酰胺酶競(jìng)爭性抑制劑。兩者組成的復(fù)方制劑可增強(qiáng)頭孢菌素類抗菌藥物對(duì)β-內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性，擴(kuò)大抗菌譜范圍，從而避免或減少耐藥性的發(fā)生，可用于各種敏感菌、多重耐藥菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）、銅綠假單胞菌、產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）的大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和陰溝腸桿菌引起的感染[2]。不同配比的頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉的殺菌作用明顯強(qiáng)于頭孢噻肟鈉單藥。前期體外抗菌研究表明，頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉具有較強(qiáng)的體外抗菌作用，綜合考慮藥物療效和不良反應(yīng)、生產(chǎn)和使用成本等多方面因素，6∶1（m/m，下同）為較合理的配方組合[3]。目前，國內(nèi)測(cè)定人尿液中他唑巴坦鈉主要采用高效液相色譜（HPLC）法[4-5]，但操作煩瑣、分析時(shí)間長。本研究建立了簡便、快速的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法，用于測(cè)定人體內(nèi)他唑巴坦鈉的尿藥濃度，并研究健康受試者使用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉（6∶1）后他唑巴坦鈉的尿藥排泄特征，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　材料

1.1儀器

TSQ Ultra EMR型三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀、Surveyor型HPLC系統(tǒng)（包括四元梯度泵、溫控自動(dòng)進(jìn)樣器和在線脫氣機(jī)）和Xcalibur V2.0軟件（美國Finnigan公司）；Milli-Q Gradient A10型超純水器（美國Millipore公司）；TGL-16G型低溫高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；BP-211D型電子天平（德國Storius公司）；LP2000-P2型恒速輸液泵（北京鑫禾豐醫(yī)療技術(shù)有限公司）；PCB-11型渦旋儀（德國Eppendorf公司）；30AK型氮吹儀（北京八方世紀(jì)科技有限公司）。

1.2藥品與試劑

注射用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉（6∶1）（南京信業(yè)醫(yī)藥技術(shù)有限公司，批號(hào)：20090802，規(guī)格：2.34 g）；他唑巴坦鈉對(duì)照品（齊魯制藥有限公司，批號(hào)：9030064JE，純度：92.0%）；甲醇為色譜純，高氯酸為分析純，水為純凈水?？瞻啄蛞河山】凳茉囌咛峁?/p>

2　方法

2.1色譜與質(zhì)譜條件

色譜柱：Hypersil GOLD C18（150 mm×2.1 mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（30∶70，V/V）；流速：0.2 ml/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5μl。

采用電噴霧離子源（ESI）；檢測(cè)方式：正離子檢測(cè)；掃描方式：多反應(yīng)選擇監(jiān)測(cè)（MRM）；噴霧電壓：4 500 V；金屬毛細(xì)管溫度：350℃；鞘氣（N2）壓力：25 Arb；輔助氣（N2）壓力：25 Arb；碰撞氣（Ar）壓力：1.5 mTorr；源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)解離（CID）電壓：2 V；用于定量分析的離子對(duì)：m/z 301→168（他唑巴坦鈉）。

2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱取他唑巴坦鈉對(duì)照品適量于量瓶中，用水溶解并定容，搖勻，配制成他唑巴坦鈉質(zhì)量濃度為5 000 μg/ml的貯備液。取上述貯備液適量，加水配制成質(zhì)量濃度分別為2.5、5、10、50、100、500、1 000和5 000 μg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3尿液樣品的處理

取尿液50μl，加入10%高氯酸25μl，加水450μl，渦旋混勻10 s，于4℃下以離心半徑3.5 cm、轉(zhuǎn)速15 000 r/min離心10 min，取上清液，經(jīng)0.2μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液5 μl進(jìn)樣分析。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1專屬性在“2.1”項(xiàng)色譜與質(zhì)譜條件下，他唑巴坦鈉的保留時(shí)間約為2.45 min。尿液中他唑巴坦鈉的色譜圖見圖1。2.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與定量下限的考察取空白尿液50 μl，分別加入相應(yīng)質(zhì)量濃度的他唑巴坦鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液各適量，渦旋混勻，配制成相當(dāng)于他唑巴坦鈉質(zhì)量濃度分別為0.25、0.5、1、5、10、50、100、500 μg/ml的含藥尿液樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以峰面積（As）為縱坐標(biāo)、待測(cè)物質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸（權(quán)重系數(shù)為w＝1/c），得回歸方程為As＝42 900c+1 520（r＝0.999 9）。結(jié)果顯示，他唑巴坦鈉尿藥濃度在0.25～500 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，定量下限為0.25 μg/ml。

2.4.3精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn)參照《化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[6]，分別配制他唑巴坦鈉低、中、高質(zhì)量濃度（0.5、10和500 μg/ml）的含藥尿液樣品各5份，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析；測(cè)定3個(gè)分析批，根據(jù)當(dāng)批標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣品的實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，考察方法的精密度和準(zhǔn)確度。結(jié)果顯示，批內(nèi)、批間RSD＜10%，方法回收率為93.8%～111.8%，詳見表1。

圖1　尿液中他唑巴坦鈉的色譜圖A.空白尿液；B.空白尿液+他唑巴坦鈉（10 μg/ml）；C.受試者靜脈滴注注射用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉5～8 h的尿液樣本；1.他唑巴坦鈉；2.空白尿液干擾峰Fig 1　Chromatograms of tazobactam sodium in urineA.blank urine；B.blank urine+tazobactam sodium（10 μg/m）；C.urine sample from healthy volunteers 5-8 h after intravenous drip of Cefotaxime sodium tazobactam sodium for injection；1.tazobactam sodium；2. interference peak of blank urine

表1　精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝5）Tab 1　Results of recovery and precision tests（±s，n＝5）

表1　精密度與準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝5）Tab 1　Results of recovery and precision tests（±s，n＝5）

加入質(zhì)量濃度，μg/ml方法回收率，% 0．5 10．500．批內(nèi)精密度實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，μg/ml 0．50±0．02 10．29±0．68 494．09±19．61 RSD，% 4．5 6．6 4．0批間精密度實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，μg/ml 0．51±0．03 10．73±0．57 493．62±17．06 RSD，% 5．7 5．3 3．5 99．9±4．5 102．9±6．6 98．8±4．0

2.4.4提取回收率試驗(yàn)分別配制他唑巴坦鈉低、中、高質(zhì)量濃度（0.5、10和500μg/ml）的含藥尿液樣品各5份，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣分析，記錄他唑巴坦鈉峰面積（B1）。取空白尿液50 μl，按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，得空白尿液提取液。分別取他唑巴坦鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（5、100和5 000 μg/ml）5μl于離心管中，于37℃水浴中以氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)眠m量空白尿液提取液復(fù)溶，渦旋混勻1 min，于4℃下以離心半徑3.5 cm、轉(zhuǎn)速15 000 r/min離心10 min，取上清液，經(jīng)0.2μm微孔濾膜濾過后，取續(xù)濾液5μl進(jìn)樣分析，記錄他唑巴坦鈉峰面積（A1），上述樣品分別配制5份（最終質(zhì)量濃度與前者對(duì)應(yīng)）。提取回收率（%）＝B1/A1×100%。結(jié)果顯示，各樣品的提取回收率為93.9%～99.7%。

2.4.5穩(wěn)定性考察分別配制他唑巴坦鈉低、中、高質(zhì)量濃度（0.5、10和500 μg/ml）的含藥尿液樣品各適量，考察各樣品在室溫放置2 h、4℃自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)放置24 h、冷凍（－70℃）保存15 d（經(jīng)歷凍融1次）、30 d（經(jīng)歷凍融2次）等條件下的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，各樣品在上述條件下穩(wěn)定性均良好，RSD＜8%。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見表2。

2.4.6介質(zhì)效應(yīng)取空白尿液和水各適量，分別按“2.3”項(xiàng)下方法操作后，得空白尿液提取液和水提取液。采用文獻(xiàn)[7]報(bào)道的方法，分別取他唑巴坦鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（5、100和5 000 μg/ml）5 μl于離心管中，于37℃水浴中以氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)每瞻啄蛞禾崛∫喝』蛩崛∫?25μl復(fù)溶，渦旋混勻1 min，于4℃下以離心半徑3.5 cm、轉(zhuǎn)速15 000 r/min離心10 min，取上清液，經(jīng)0.2μm微孔濾膜濾過后，取續(xù)濾液5μl進(jìn)樣分析，記錄他唑巴坦鈉峰面積（A2或B2），各質(zhì)量濃度分別配制5份。介質(zhì)效應(yīng)（%）＝A2/B2×100%。結(jié)果顯示，他唑巴坦鈉的介質(zhì)效應(yīng)為87.6%～107.2%，表明在本試驗(yàn)條件下，他唑巴坦鈉的測(cè)定不受介質(zhì)效應(yīng)的干擾[8]。

2.5尿藥排泄動(dòng)力學(xué)研究

2.5.1臨床試驗(yàn)方案本試驗(yàn)經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)、經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批同意，在藥物臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行。所有受試者簽署知情同意書后接受全面體檢，共入組健康受試者8例，其中男性和女性各4例，年齡20～38歲，身高156～178 cm，體質(zhì)量50～68 kg。受試者在給藥前一天晚上統(tǒng)一進(jìn)食清淡飲食后，禁食10 h，不禁水過夜。于次日單次靜脈滴注注射用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉2.34 g，以0.9%氯化鈉注射液250 ml為溶劑，采用恒速輸液泵給藥，滴注時(shí)間為60 min。用藥后2 h可進(jìn)水，進(jìn)食統(tǒng)一餐。試驗(yàn)期間受試者均住在病房內(nèi)，禁服濃茶、咖啡和其他含咖啡因及醇類的飲料。收集各受試者給藥前和給藥后0～2、2～5、5～8、8～12和12～16 h的尿液，記錄每個(gè)時(shí)間段尿量。

2.5.2計(jì)算方法采用Excel 2007計(jì)算：各時(shí)間段尿液樣品中的藥物濃度測(cè)定值與該時(shí)間段尿液體積相乘為該時(shí)間段藥物排泄量；各時(shí)間段藥物排泄量之和為藥物的累積排泄量，其與給藥劑量相比即得相應(yīng)時(shí)間內(nèi)的藥物累積排泄率。

2.5.3試驗(yàn)結(jié)果8例健康受試者單次給予注射用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉2.34 g后，尿液中他唑巴坦鈉的排泄量、累積排泄量和累積排泄率見表3，平均累積排泄量-時(shí)間曲線見圖2，平均累積排泄率-時(shí)間曲線見圖3。結(jié)果表明，他唑巴坦鈉在給藥后0～2 h的尿排泄量最大，8 h后基本排泄完全，16 h內(nèi)尿液中的累積排泄量為（209.70±39.24）mg，累積排泄率為（61.7±11.5）%。

表2　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝5）Tab 2　Results of stability tests（±s，n＝5）

表2　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（±s，n＝5）Tab 2　Results of stability tests（±s，n＝5）

加入質(zhì)量濃度，μg/ml 0．5 10．室溫放置2 h實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，μg/ml 0．53±0．02 10．93±0．43 RSD，% 3．8 3．9 4℃自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)放置24 h實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，μg/ml 0．51±0．03 10．85±0．32 RSD，% 5．9 2．9冷凍保存15 d（經(jīng)歷凍融1次）實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，μg/ml 0．54±0．02 10．88±0．58 RSD，% 3．7 5．3冷凍保存30 d（經(jīng)歷凍融2次）實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，μg/ml 0．52±0．04 9．77±0．48 RSD，% 7．7 4．9

表3　他唑巴坦鈉的排泄量、累積排泄量和累積排泄率（±s）Tab 3　Excretion amount，amount and accumulative excretion rate of tazobactam sodium（±s）

表3　他唑巴坦鈉的排泄量、累積排泄量和累積排泄率（±s）Tab 3　Excretion amount，amount and accumulative excretion rate of tazobactam sodium（±s）

參數(shù)排泄量，mg累積排泄量，mg累積排泄率，%時(shí)間段，h 0～2 164．12±51．50 164．12±51．50 48．3±15．2 2～5 41．96±29．09 206．09±38．99 60．6±11．5 5～8 3．11±2．62 209．19±39．15 61．5±11．5 8～12 0．43±0．25 209．62±39．24 61．7±11．5 12～16 0．09±0．07 209．70±39．24 61．7±11．5

圖2　他唑巴坦鈉的平均累積排泄量-時(shí)間曲線Fig 2　Average accumulative excretion amount-time curve of tazobactam sodium

3　討論

采用LC-MS/MS法測(cè)定人尿液中他唑巴坦鈉的質(zhì)量濃度已有文獻(xiàn)報(bào)道，但其中并無詳細(xì)的方法學(xué)考察過程及結(jié)果[9]。故本研究在已有文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)所建立的LC-MS/MS法進(jìn)行方法學(xué)考察。結(jié)果顯示，該方法特異性好、靈敏度高。與文獻(xiàn)報(bào)道的HPLC-紫外檢測(cè)法[4-5]比較，該方法分析時(shí)間更短（＜5 min）、線性范圍更寬（0.25～500 μg/ml）。此外，方法學(xué)考察結(jié)果還顯示，尿液中雜質(zhì)均不干擾樣本的測(cè)定，并可忽略介質(zhì)效應(yīng)的影響；批內(nèi)、批間RSD＜10%，提取回收率為93.9～99.7%；在室溫放置2 h、4℃自動(dòng)進(jìn)樣器內(nèi)放置24 h、冷凍保存15 d和30 d等條件下均穩(wěn)定，符合生物樣品定量分析的要求[7]，可用于人尿液中他唑巴坦鈉濃度的測(cè)定和尿藥排泄動(dòng)力學(xué)的研究。

他唑巴坦鈉在正離子條件下有較強(qiáng)且穩(wěn)定的質(zhì)譜效應(yīng)，故以正離子方式進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，以ESI為離子源，分子離子峰m/z 301和碎片離子峰m/z 168響應(yīng)較強(qiáng)，故將定量離子對(duì)確定為m/z 301→168。為選擇合適的鞘氣、輔助氣、碰撞氣和CID電壓，筆者分別對(duì)不同條件下他唑巴坦鈉離子對(duì)的響應(yīng)值進(jìn)行了比較，選擇了離子對(duì)響應(yīng)最強(qiáng)的條件為最終的試驗(yàn)條件。質(zhì)譜條件經(jīng)優(yōu)化后，他唑巴坦鈉離子對(duì)響應(yīng)強(qiáng)、靈敏度高。專屬性考察過程中，筆者發(fā)現(xiàn)在，空白尿液的色譜圖（見圖1A）中，2.25 min處有一干擾峰，疑似為空白尿液的內(nèi)源性物質(zhì)，但該峰保留時(shí)間與他唑巴坦鈉不同，且兩者基線分離。在進(jìn)行定量分析時(shí)，統(tǒng)一了積分參數(shù)，在此條件下標(biāo)準(zhǔn)曲線及各樣本的結(jié)果均在可接受的范圍內(nèi)，故該干擾峰對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響是可接受的。

本研究根據(jù)前期耐受性試驗(yàn)結(jié)果和Ⅱ期臨床試驗(yàn)可能采用的劑量，將受試者的給藥劑量確定為2.34 g。臨床試驗(yàn)結(jié)果表明，健康受試者單次使用頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉16 h后，他唑巴坦鈉累積排泄率為（61.7±11.5）%，且主要經(jīng)腎臟排泄，與文獻(xiàn)[5-6]的結(jié)果相似。頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉（6∶1）制劑尚未在腎功能不全的患者中進(jìn)行尿藥排泄動(dòng)力學(xué)研究，故在后續(xù)試驗(yàn)中，應(yīng)根據(jù)患者腎功能損害程度調(diào)整本制劑的給藥劑量和間隔時(shí)間，為臨床應(yīng)用提供參考。

（本研究經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)，臨床試驗(yàn)批件號(hào)：2005L02508）

[1]梅亞寧，童明慶.2011年度衛(wèi)生部全國細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)網(wǎng)報(bào)告：成年患者分離菌的耐藥監(jiān)測(cè)[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2014，30（2）：94.

[2]王霆，張春慧.頭孢噻肟鈉與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)方研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志，2010，19（5）：377.

[3]陳蘇婉，張守釵，王曉娟，等.不同配比的頭孢噻肟/他唑巴坦的體外抗菌作用[J].華西藥學(xué)雜志，2009，24（1）：38.

[4]孫路路，單愛蓮，呂媛.注射用頭孢他啶/他唑巴坦（3∶1）在中國健康人體的單劑量藥代動(dòng)力學(xué)研究[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2012，28（8）：584.

[5]孫路路，單愛蓮，呂媛.注射用頭孢他啶/他唑巴坦（5∶1）在中國健康人體的單次給藥的藥代動(dòng)力學(xué)[J].中國臨床藥理學(xué)雜志，2013，29（9）：669.

[6]國家食品藥品監(jiān)督管理局.化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[S].2005-03-18.

[7]葉顯撐，范國榮，祝德秋.LC-MS/MS法測(cè)定人尿液中舒巴坦鈉的濃度及其動(dòng)力學(xué)研究[J].中國藥房，2012，23（6）：531.

[8]國家藥典委員會(huì).中國人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：363-368.

[9]許羚，盛玉成，鄭青山.頭孢噻肟鈉他唑巴坦鈉注射液靜脈滴注在健康志愿者的臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究及其算法探討[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2005，10（11）：1 225.

（編輯：張?jiān)拢?/p>

Concentration Determination of Tazobactam Sodium in Human Urine by LC-MS/MS and Urinary Excretion Dynamics Study

REN Liling1，WANG Yuanyuan2，SUN Luning2，ZHANG Hongwen2，XIE Lijun2，LIU Yun2，WANG Yongqing1，（21. College of Pharmacy，Nanjing Medical University，Nanjing 210029，China；2.Dept.of Pharmacy，the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University，Nanjing 210029，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the concentration determination of tazobactam sodium in human urine，and to study urinary excretion pharmacokinetics.METHODS：The urine samples were extracted by 10%perchloric acid，and then determined by LC-MS/MS.The separation was performed on a Hypersil GOLD C18column with mobile phase consisted of ethanol-water（30∶70，V/V）at flow rate of 0.2 ml/min；the column temperature was set at 30℃，and sample size was 5 μl.ESI was used，and positive ion scanning was conducted in MRM mode；ion pair for quantitative analysis was m/z 301→168.8 healthy volunteers were given Cefotaxime sodium and tazobactam sodium for injection（6∶1，m/m）2.34 g intravenously，and then urine samples were collected before medication，0-2，2-5，5-8，8-12 and 12-16 h after medication.RESULTS：The linear range of tazobactam sodium was 0.25-500 μg/ml（r＝0.999 9）.The limit of quantitation was 0.25 μg/ml；RSDs of inter-batch and intra-batch were all lower than 10%；method recoveries were 93.8%-111.8%；extraction recoveries were 93.9%-99.7%；medium effect ranged 87.6%-107.2%.16 h after medication，accumulative excretion amount of tazobactam sodium in urine was（209.70±39.24）mg and accumulative excretion rate was（61.7±11.5）%.CONCLUSIONS：LC-MS/MS method can be used for the concentration determination of tazobactam sodium in human urine and excretion kinetics study.It is simple，rapid and sensitivity；tazobactam sodium mainly excrete viareral tissue.

LC-MS/MS；Tazobactam sodium；Urine；Urine concentration；Excretion pharmacokinetics

R969.1

A

1001-0408（2016）32-4501-04

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.32.12

國家自然科學(xué)基金（面上項(xiàng)目）（No.81673515）；國家自然科學(xué)基金（青年基金項(xiàng)目）（No.81503160）；江蘇省自然科學(xué)基金（青年科技人才專項(xiàng)資金）（No.BK20161591）；江蘇省“六大人才高峰”項(xiàng)目（No.2014-YY-001）；江蘇省衛(wèi)生廳面上科研課題（No.H201108）

＊碩士研究生。研究方向：臨床藥學(xué)。電話：025-86816192。E-mail：renliling6@126.com

主任藥師，博士。研究方向：臨床藥學(xué)和臨床藥理學(xué)。電話：025-68136984。E-mail：wyqjsph@163.com

（2016-03-08

2016-08-20）