紫外分光光度法測(cè)定槲皮素含量方法的建立

陳志剛，山光強(qiáng)，譚玉琴，李啟皓，雷紅宇，蘇建明

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410128)

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紫外分光光度法測(cè)定槲皮素含量方法的建立

陳志剛，山光強(qiáng)，譚玉琴，李啟皓，雷紅宇，蘇建明*

(湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410128)

為構(gòu)建一種簡(jiǎn)便、高效的槲皮素原料藥含量的測(cè)定方法，采用紫外分光光度法對(duì)槲皮素原料藥進(jìn)行含量測(cè)定，并進(jìn)行方法學(xué)考察。結(jié)果表明，紫外分光光度法在374nm處測(cè)定的槲皮素原料藥平均含量為97.97%，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.0074x-0.0067，R2=0.9997，在20.8μg～140μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為100.88%，RSD為0.96%(n=6)，其精密度較好，符合方法學(xué)要求。說明該法適用于槲皮素原料藥含量測(cè)定，是一種經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便與高效的質(zhì)量分析方法。

槲皮素；原料藥；含量；紫外分光光度法

槲皮素是一種黃酮類化合物，也被稱為櫟精、槲皮黃素，主要存在于槐米、桑寄生及仙鶴草等植物，具有抗癌、抗氧化、抗炎、抗菌與心血管系統(tǒng)保護(hù)作用等功能[1]。國(guó)內(nèi)研究的槲皮素制劑主要有亞微乳制劑[2]、固體脂質(zhì)納米粒[3]等。但目前對(duì)槲皮素原料藥的定量分析研究鮮見。藥物含量測(cè)定方法亦主要有高效液相色譜法、紫外分光光度法和薄層色譜法等。其中，盡管高效液相色譜法檢測(cè)限低、靈敏度高，但該方法檢測(cè)設(shè)備成本高、耗時(shí)、操作步驟繁雜[4]。而紫外分光光度法具有操作簡(jiǎn)單、成本低等特點(diǎn)。所以，本研究以此為切入點(diǎn)，采用紫外分光光度法對(duì)槲皮素原料藥進(jìn)行含量測(cè)定，并確定其測(cè)定方法的可行性，為槲皮素原料藥在制劑過程中的質(zhì)量分析與槲皮素原料藥在藥理研究中的定量分析提供一種簡(jiǎn)便、有效的分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 槲皮素原料藥、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品(HPLC≥98%，批號(hào)：Y26D5Y1)購(gòu)于上海源葉生物科技有限公司；無水乙醇、分析純；試驗(yàn)所用水為超純水。

1.1.2 儀器 202型電熱恒溫干燥箱為北京中興偉業(yè)儀器有限公司產(chǎn)品；AUW320電子分析天平為SHIMADZU公司產(chǎn)品；UV6000PC紫外可見分光光度計(jì)為上海元析儀器有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備 精密稱量槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品0.0208g，以700mL/L乙醇溶液溶解，定容于100mL容量瓶，得濃度為208μg/mL槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，冰箱4℃保存，備用。

1.2.2 槲皮素原料藥供試品溶液的制備 稱取0.0200g槲皮素原料藥，加入700mL/L的乙醇溶液，攪拌均勻，定容至100mL，得槲皮素原料藥供試品溶液，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 最大吸收波長(zhǎng)的確定 分別吸取槲皮素原料藥供試品溶液0.5mL與槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液1.0mL，以700mL/L乙醇溶液加至10mL，以700mL/L乙醇溶液為空白調(diào)零溶液，在300nm～600nm范圍內(nèi)掃描。根據(jù)槲皮素原料藥供試品溶液與槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的最大吸收波峰，確定測(cè)定槲皮素原料藥的最大吸收波長(zhǎng)。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 依次吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4mL和0.5mL槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液于10mL容量瓶中，700mL/L乙醇溶液加至10mL，700mL/L乙醇溶液為調(diào)零溶液，在確定的最大吸收波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度。以槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的槲皮素質(zhì)量x(μg)為橫坐標(biāo)，吸光度y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合線性回歸方程。

1.2.5 槲皮素含量測(cè)定 量取0.2mL供試品溶液至10mL容量瓶中，以700mL/L乙醇溶液補(bǔ)足至10mL，700mL/L乙醇溶液作為空白調(diào)零溶液，在確定的波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度，共平行3次。將測(cè)定的吸光度代入線性回歸方程，計(jì)算槲皮素原料藥的含量。

1.2.6 精密度試驗(yàn) 精密量取一定量槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液6份，按測(cè)定方法1.2.5項(xiàng)下方法分別測(cè)定吸光度，計(jì)算平均吸光度與RSD。

1.2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取測(cè)得含量的槲皮素原料藥供試品溶液6份各0.1mL于10mL容量瓶中，其中3份加入0.1mL槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，另外3份加入0.2mL槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，混勻，按測(cè)定方法1.2.5測(cè)定吸光度，計(jì)算加樣回收率、平均加樣回收率與RSD。

2 結(jié)果

2.1 最大吸收波長(zhǎng)的確定

紫外分光光度法的全波長(zhǎng)掃描結(jié)果見圖1，槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液在374nm處有最大吸收峰，槲皮素原料藥供試品溶液亦在374nm處有最大吸收峰。而且，宗淑梅等[5]在測(cè)定槲皮素含量時(shí)掃描得到最大吸收波長(zhǎng)同樣為374nm。可見紫外分光光度法適合槲皮素原料藥的含量測(cè)定，且最佳測(cè)定波長(zhǎng)為374nm。

圖1 槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品和供試品曲線
Fig.1 The standard and sample curves of quercetin

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

紫外分光光度法在374nm波長(zhǎng)下測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線見于圖2。線性回歸方程為y=0.0074x-0.0067，R2=0.9997。試驗(yàn)結(jié)果表明，槲皮素在20.8μg ～140μg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

圖2 槲皮素標(biāo)準(zhǔn)曲線
Fig.2 The standard curve of quercetin

2.3 槲皮素含量測(cè)定結(jié)果

稱取質(zhì)量為0.0206g槲皮素原料藥，溶解，定容于100mL，采用紫外分光光度法在374nm的波長(zhǎng)下測(cè)得槲皮素原料藥供試品溶液含量如表1所示。

表1 槲皮素原料藥含量測(cè)定Table 1 Determination of quercetin contents in raw drugs

2.4 精密度試驗(yàn)結(jié)果

精密度試驗(yàn)結(jié)果見表2，吸光度平均值為0.300，RSD為0.54%，符合精密度試驗(yàn)要求，說明該方法具有良好的精密度，結(jié)果準(zhǔn)確。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果Table 2 The results of precision experiments

2.5 加樣回收率

加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見表3。平均回收率為100.88%，RSD為0.96%，符合加樣回收率要求，說明該方法測(cè)定的結(jié)果數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度較好。

表3 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 3 The results of recovery test

3 討論

紫外分光光度法是一種依托可見-紫外分光光度計(jì)對(duì)某些物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。紫外分光光度法在原料藥的含量測(cè)定、原料藥在制劑成型過程中的含量測(cè)定以及制劑后的含量測(cè)定等藥物質(zhì)量控制環(huán)節(jié)中使用較多。徐長(zhǎng)舉等[4]研究表明，紫外分光光度法測(cè)定恩諾沙星原料藥含量，符合穩(wěn)定性、重復(fù)性等方法學(xué)考察要求。楊靜等[6]研究發(fā)現(xiàn)，紫外分光光度法測(cè)定ZLR-8原料藥，具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。白波等[7]采用紫外分光光度法建立了甲基丁香酚原料藥含量測(cè)定的方法。由于槲皮素原料藥作為主藥成分，含量高，雜質(zhì)所占比重小，對(duì)含量測(cè)定的紫外分光光度法產(chǎn)生的干擾作用較小。另外，槲皮素具有吸收紫外光的特性。而且，相較于高效液相色譜法等含量測(cè)定方法，紫外分光光度法操作簡(jiǎn)便、節(jié)省時(shí)間、儀器價(jià)格較低。本試驗(yàn)結(jié)果表明，紫外分光光度法在374nm下測(cè)定槲皮素原料藥含量時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.0074x-0.0067，R2=0.9997，測(cè)得其平均含量為97.97%，精密度及加樣回收率均良好，符合方法學(xué)考察要求。所以，選擇紫外分光光度法測(cè)定槲皮素原料藥具有一定的可行性，可為槲皮素原料藥的制劑以及藥理作用研究等提供定量的分析手段，便于槲皮素的深入研究與利用。

[1] 孫 涓，余世春．槲皮素的研究進(jìn)展[J]．現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2011，25(3)：85-88．

[2] 劉 蕓，趙 鵬，張麗華，等．槲皮素亞微乳的制備及特性表征研究[J]．中成藥，2014，36(5)：1077-1080．

[3] 李厚麗，翟光喜，祝偉偉，等．槲皮素固體脂質(zhì)納米粒的制備及小鼠口服吸收研究[J]．中國(guó)藥學(xué)雜志，2008，43(6)：435-438．

[4] 徐長(zhǎng)舉，楊雪峰，柳東陽(yáng)，等．紫外分光光度法測(cè)定恩諾沙星原料藥含量的試驗(yàn)[J]．黑龍江畜牧獸醫(yī)，2014(5)：191-193．

[5] 宗淑梅，王海英，沈麗霞．槐米中槲皮素的提取與含量測(cè)定[J]．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013，24(2)：308-309．

[6] 楊 靜，羅 俊，劉文英，等．紫外分光光度法測(cè)定氧氮供體型非甾體抗炎藥ZLR-8原料藥的含量[J]．西北藥學(xué)雜志，2014，29(6)：581-583．

[7] 白 波，江秀慧，付明哲，等．紫外分光光度法測(cè)定甲基丁香酚含量方法的建立[J]．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，32(11)：73-75．

Determination of Quercetin Content in Raw Drug by Ultraviolet Spectrophotometry

CHEN Zhi-gang,SHAN Guang-qiang,TAN Yu-qin,LI Qi-hao,LEI Hong-yu,SU Jian-ming

(CollegeofVeterinaryMedicine，HunanAgriculturalUniversity,Changsha,Hunan,410128，China)

In order to build a simple and efficient method to assay the quercetin content in raw,the ultraviolet spectrophotometry was used and its methodology is studied.The results showed that the average content of quercetin is 97.97%,and the standard curve and regression equation that is y=0.0074x-0.0067(r=0.9997) were established by the ultraviolet spectrophotometry.There is a good linear relationship between 20.8μg to 140μg.And the average recovery of the method is 100.88%,and RSD is 0.96%(n=6).The results of methodological study showed that the method meets the needs of the determination,which is a good analytical method the assay of quercetin content in raw drug.

quercetin；raw drug；content；ultraviolet spectrophotometry

2015-06-01

湖南省研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目(CX2015B257)；湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新基金項(xiàng)目

陳志剛(1992-)，男，湖南攸縣人，碩士研究生，主要從事天然植物功能成分研究。*通訊作者

O625.32

B

1007-5038(2016)01-0122-03