CXCL16、CD36與頸動脈易損斑塊并發(fā)腦梗死的關(guān)系

嵇繼宇，司慧麗，王宏

CXCL16、CD36與頸動脈易損斑塊并發(fā)腦梗死的關(guān)系

嵇繼宇，司慧麗，王宏△

目的探討血清巨噬細(xì)胞趨化因子配體16（CXCL16）及CD36水平與頸動脈粥樣硬化易損斑塊并發(fā)大動脈粥樣硬化（LAA）性腦梗死的關(guān)系。方法選取頸動脈粥樣硬化易損斑塊合并LAA性腦梗死的患者（腦梗組）50例、有頸動脈粥樣硬化易損斑塊者（斑塊組）50例；同期健康體檢者（對照組）50例。各組均接受頸動脈彩超檢查。計(jì)算各組體質(zhì)指數(shù)（BMI），同時檢測各組三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、空腹血糖（FBG），應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測定各組血清CXCL16及CD36水平。Logistic回歸分析頸動脈粥樣硬化易損斑塊發(fā)生LAA性腦梗死的影響因素。結(jié)果斑塊組和腦梗組BMI、TG、TC、LDL-C、FBG水平高于對照組，HDL-C水平低于對照組；腦梗組TG、TC、LDL-C、FBG水平高于斑塊組，BMI、HDL-C水平低于斑塊組（P＜0.05）。對照組、斑塊組及腦梗組的CXCL16和CD36水平均呈依次升高趨勢（P＜0.05）。多因素Logistic回歸分析顯示，高TG、LDL-C、FBG、CXCL16及CD36是頸動脈粥樣硬化易損斑塊合并LAA性腦梗死的危險因素。結(jié)論血清CXCL16、CD36水平可作為頸動脈易損斑塊的生物標(biāo)志物；聯(lián)合檢測血清CXCL16、CD36水平有助于預(yù)測LAA性腦梗死。

趨化因子，CXC；抗原，CD36；動脈粥樣硬化；腦梗死；趨化因子配體16；易損斑塊

動脈粥樣硬化性心血管疾?。╝therosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）本質(zhì)上是以脂質(zhì)代謝異常、炎癥反應(yīng)為特征的一種炎性疾?。?］。氧化的低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL）和巨噬細(xì)胞可通過促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積和泡沫細(xì)胞形成對動脈粥樣硬化的發(fā)生和進(jìn)展產(chǎn)生影響。研究顯示，CD36是人類巨噬細(xì)胞攝取ox-LDL的清道夫受體［2］。巨噬細(xì)胞趨化因子配體16（CXC chemokine ligand16，CXCL16）是炎癥性趨化因子超家族成員，可趨化白細(xì)胞遷移，同時也是ox-LDL的清道夫受體［3］。研究認(rèn)為，CXCL16可促進(jìn)斑塊的易損性［4］，但CXCL16、CD36和頸動脈粥樣硬化易損斑塊合并大動脈粥樣硬化（LAA）性腦梗死的關(guān)系尚少見報道。本研究旨在通過分析CXCL16和CD36在ASCVD中的不同作用，了解CXCL16和CD36能否成為反映斑塊易損性及患者進(jìn)展為腦梗死的生物標(biāo)志物，探討CXCL16和CD36與LAA性腦梗死的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象選取2015年11月—2016年6月就診于石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科具有頸動脈粥樣硬化易損斑塊合并LAA性腦梗死的患者（腦梗組）50例，均于發(fā)病72 h內(nèi)入院，符合2014年中國急性缺血性腦卒中診治指南動脈粥樣硬化性腦梗死的診斷標(biāo)準(zhǔn)；根據(jù)TOAST（the trial of org10172 in acute stroke treatment）病因分型確定為LAA性腦梗死。另取同期健康體檢并經(jīng)頸動脈彩超確診為有頸動脈粥樣硬化性易損斑塊者（斑塊組）50例，既往均無腦血管病病史。同期健康體檢正常者（對照組）50例。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）出血性卒中、心源性腦梗死。（2）有急性冠脈綜合征、心衰及其他周圍血管病。（3）有自身免疫性疾病及其他炎性疾病。（4）有腫瘤、嚴(yán)重肝腎功能損害等疾病。（5）3個月內(nèi)有手術(shù)及外傷史。各組性別、年齡、吸煙史構(gòu)成差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性，見表1。

Tab.1Comparison of general clinical data between three groups表1 各組基本資料比較

1.2 方法所有受試者于清晨空腹收集靜脈血3～5 mL，置于EDTA管中，室溫下自然凝固30 min后以3 000 r/min離心15 min，收集血清置于凍存管中，以-80℃保存。使用羅氏DPP-H7600全自動生化分析儀及配套的試劑盒測定三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、空腹血糖（FBG）。采用雙抗體夾心法測定血清CXCL16及CD36水平，按照酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒（上海西唐公司）說明書進(jìn)行操作。

頸動脈彩色多普勒超聲檢查：采用飛利浦IE33型彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率7～11 MHz，患者取平臥位，頭偏向一側(cè)，沿頸動脈走向，將探頭自上而下進(jìn)行連續(xù)的縱橫切面掃描雙側(cè)頸總、頸內(nèi)、頸外動脈，觀察斑塊形態(tài)及回聲特點(diǎn)。頸動脈粥樣硬化斑塊定義為內(nèi)膜中層不連續(xù)性、不均勻性增厚并凸入管腔，邊界光滑，病變厚度是鄰近部位內(nèi)-中層厚度的1.5倍或彩色多普勒顯示血管腔某處彩色血流缺損，缺損處面積≥10 mm2。斑塊分型方法：（1）內(nèi)膜不光滑，回聲增強(qiáng)、增厚，局部輕微隆起為扁平斑。（2）斑塊凸出管腔，回聲強(qiáng)弱不均，表面光滑連續(xù)為軟斑。（3）斑塊較大，基底較寬，表面出現(xiàn)凹凸，邊緣回聲較低為潰瘍斑。（4）斑塊高低不平，強(qiáng)回聲，后伴聲影為硬斑。將扁平斑、硬斑歸為穩(wěn)定斑塊，軟斑、潰瘍斑歸為易損斑塊。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間均數(shù)比較采用方差分析，組間多重比較用Bonferroni法；非正態(tài)分布的計(jì)量資料組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料采用例（%）表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)。腦梗死相關(guān)影響因素分析用Logistic回歸分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組一般生化指標(biāo)比較對照組、斑塊組和腦梗組的糖尿病和高血壓比例呈逐漸增加趨勢；斑塊組和腦梗組體質(zhì)指數(shù)（BMI）、TG、TC、LDL-C、FBG水平高于對照組，HDL-C水平低于對照組；腦梗組TG、TC、LDL-C、FBG水平高于斑塊組，BMI、HDL-C水平低于斑塊組（均P＜0.05），見表2。

Tab.2Comparison of BMI and other clinical data between three groups表2 各組糖尿病、高血壓、BMI及生化指標(biāo)比較（n=50，）

Tab.2Comparison of BMI and other clinical data between three groups表2 各組糖尿病、高血壓、BMI及生化指標(biāo)比較（n=50，）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與對照組比較，b與斑塊組比較，P＜0.05；表3同

組別對照組斑塊組腦梗組F或χ2糖尿?。劾?）］7（14）8（16）a 21（42）ab 13.377＊＊高血壓［例（%）］19（38）32（64）a 33（66）ab 9.903＊＊BMI（kg/m2）23.94±2.88 25.51±3.81a 25.50±3.96ab 3.158＊TG（mmol/L）1.36±0.50 1.70±0.52a 1.91±0.54ab 14.514＊＊組別對照組斑塊組腦梗組F或χ2 TC（mmol/L）3.99±0.68 4.39±0.85a 4.86±0.95ab 13.735＊＊LDL-C（mmol/L）2.40±0.78 3.08±0.79a 3.58±0.83ab 27.258＊＊HDL-C（mmol/L）1.08±0.36 0.96±0.26a 0.84±0.36ab 6.281＊＊FBG（mmol/L）4.84±0.63 5.39±1.32a 7.74±2.41ab 44.715＊＊

2.2 各組CD36、CXCL16水平比較對照組、斑塊組及腦梗組的CXCL16和CD36水平均呈依次升高趨勢（P＜0.05），見表3。

Tab.3Comparison of serum CXCL16 and CD36 concentrations between three groups表3 各組血清CD36與CXCL16水平比較（μg/L，）

Tab.3Comparison of serum CXCL16 and CD36 concentrations between three groups表3 各組血清CD36與CXCL16水平比較（μg/L，）

組別對照組斑塊組腦梗組F n 50 50 50 CD36 3.62±0.91 4.49±0.88a5.40±0.96ab47.611＊＊CXCL16 1.85±0.40 2.30±0.45a2.84±0.65ab45.782＊＊

2.3 腦梗死影響因素分析以斑塊組是否發(fā)生腦梗死（是＝1，否＝0）為因變量，以BMI、TG、TC、LDL-C、HDL-C、FBG、CXCL16、CD36為自變量，進(jìn)行多因素Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，高TG、LDL-C、FBG、CXCL16及CD36是頸動脈粥樣硬化易損斑塊合并LAA性腦梗死發(fā)生的危險因素，見表4。

3 討論

炎癥反應(yīng)可致不穩(wěn)定斑塊破裂并誘發(fā)血栓形成，導(dǎo)致急性缺血事件的發(fā)生［5］。易損斑塊的重要特征便是具有炎癥特性［6］。病理學(xué)研究顯示，在破裂的斑塊內(nèi)存在大量的炎癥細(xì)胞［7］。單核、巨噬細(xì)胞是在動脈粥樣硬化病變中被確認(rèn)的最早期的炎性細(xì)胞之一，同時也是巨噬細(xì)胞在脂質(zhì)條紋病變當(dāng)中的主要細(xì)胞類型。趨化因子、清道夫受體和黏附分子長久以來被認(rèn)為在動脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中起到了重要作用，并且與巨噬細(xì)胞有密切的關(guān)系［8］。

CD36是一個表達(dá)于單核巨噬細(xì)胞、微血管內(nèi)皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等多種細(xì)胞表面的跨膜糖蛋白，屬于B族清道夫受體家族［9］。CD36在致動脈粥樣硬化過程即泡沫細(xì)胞形成、炎癥介質(zhì)的釋放、巨噬細(xì)胞的俘獲和血栓形成中起到了重要的作用?！癳at me signal”正反饋機(jī)制、CD36和ox-LDL相互作用以及泡沫細(xì)胞引起的炎癥等均會誘導(dǎo)動脈狹窄，最終導(dǎo)致ASCVD［10］。研究已經(jīng)證實(shí)，CD36以伴隨血小板、單核巨噬細(xì)胞、脂肪細(xì)胞上脫落的微小顆粒的形式存在于循環(huán)血液中；通常情況下，CD36水平降低是內(nèi)源性過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPAR-γ）低活性的結(jié)果，血清CD36在細(xì)胞凋亡時可被釋放進(jìn)入循環(huán)血液中；并且血清CD36水平與胰島素抵抗呈正相關(guān)，因此，CD36可能是巨噬細(xì)胞激活、炎癥導(dǎo)致動脈粥樣硬化的一個標(biāo)志物［11］。Handberg等［12］研究顯示，血清CD36水平在頸動脈粥樣硬化患者中升高，并且其水平與斑塊易損性有關(guān)。本研究結(jié)果亦顯示，腦梗組及斑塊組血清CD36水平均較對照組升高，腦梗組血清CD36水平較斑塊組升高，表明在腦梗死患者循環(huán)血液中CD36釋放增加。Littlewood等［13］認(rèn)為泡沫細(xì)胞凋亡與斑塊易損、血栓形成以及繼而發(fā)展為急性缺血性事件有關(guān)，并推測滿載脂質(zhì)的巨噬細(xì)胞的凋亡可能是血清CD36釋放增加的原因。因此，結(jié)合本研究，筆者認(rèn)為，CD36有可能作為預(yù)測腦梗死的一個血清學(xué)指標(biāo)。

CXCL16是在2000年由Shimaoka等［14-15］發(fā)現(xiàn)的一種新型趨化因子。CXCL16也是在動脈粥樣硬化損傷部位由干擾素（interferon，IFN）-γ調(diào)控并介導(dǎo)ox-LDL吞噬的清道夫受體［3］。研究認(rèn)為，CXCL16參與動脈粥樣硬化的病理基礎(chǔ)主要為：（1）CXCL16在促炎性刺激物和脂質(zhì)攝取之間作為趨化因子及清道夫受體起到了橋梁作用。（2）CXCL16在血管的細(xì)胞黏附、增殖和遷移中作為黏附分子起到了重要作用［8］。另外，該研究認(rèn)為，細(xì)胞黏附和遷移是血管源性細(xì)胞最初滲透入損傷處的需要，細(xì)胞增殖對于決定動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性也起到了重要的作用［8］。因此，CXCL16可能參與了動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，腦梗組與斑塊組的血清CXCL16水平均高于對照組，并且腦梗組血清CXCL16水平高于斑塊組，與相關(guān)研究結(jié)果相近［16］；而Izquierdo等［4］認(rèn)為CXCL16在ASCVD的作用是有爭議的，CXCL16可能有抗動脈粥樣硬化作用，但是也可能會導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定，原因可能與CXCL16多向性功能有關(guān)。因此，CXCL16有促斑塊易損性的作用，但其在ASCVD中的作用仍需驗(yàn)證。Wong等［17］認(rèn)為，趨化因子可通過激活整合素增強(qiáng)CD36聚集，結(jié)合本研究中對照組、斑塊組及腦梗組CXCL16和CD36水平均呈依次升高趨勢，筆者認(rèn)為盡管CXCL16在結(jié)構(gòu)上與其他清道夫受體沒有同源性［3］，但CXCL16和CD36在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中可能存在共同通路。

目前，以CD36為靶點(diǎn)的抗動脈粥樣硬化治療藥物主要有匹伐他汀、阿托伐他汀等［18］，但同時以CD36和CXCL16為靶點(diǎn)的藥物尚未上市。筆者認(rèn)為，若有藥物在下調(diào)CD36表達(dá)的同時，能夠下調(diào)CXCL16的表達(dá)，清道夫受體表達(dá)就有可能明顯下調(diào)，從而降低巨噬細(xì)胞攝取ox-LDL水平，繼而對控制動脈粥樣硬化可能更加有效。另外，本研究多因素Logistic回歸分析顯示，除TG、LDL-C、FBG傳統(tǒng)影響因素外，高CXCL16及CD36水平也是頸動脈粥樣硬化易損斑塊合并LAA性腦梗死的獨(dú)立危險因素，提示CXCL16及CD36水平升高可作為頸動脈粥樣硬化斑塊易損性及腦梗死的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的一個炎性標(biāo)志。

綜上所述，CD36和CXCL16水平的升高，可能加重動脈粥樣硬化斑塊的易損性，繼而使患者發(fā)生血管終點(diǎn)事件。臨床在常規(guī)檢測患者血脂譜的同時，進(jìn)行CXCL16和CD36水平的檢測有助于了解高危人群動脈粥樣硬化易損斑塊的易損性。

［1］Viola J，Soehnlein O.Atherosclerosis-A matter of unresolved inflammation［J］.Semin Immunol，2015，27（3）：184-193.doi: 10.1016/j.smim.2015.03.013.

［2］Zheng H，Cui D，Quan X，et al.Lp-PLA2 silencing protects against ox-LDL-induced oxidative stress and cell apoptosis via Akt/mTOR signaling pathway in human THP1 macrophages［J］.Biochem Biophys Res Commun，2016，477（4）：1017-1023.doi:10.1016/j. bbrc.2016.07.022.

［3］Laugsand LE，?svold BO，Vatten LJ，et al.Soluble CXCL16 and risk of myocardial infarction:：The HUNT study in Norway［J］.Atherosclerosis，2016，244：188-194.doi：10.1016/j.atherosclerosis.2015.11.022.

［4］Izquierdo MC，Martin-Cleary C，F(xiàn)ernandez-Fernandez B，et al. CXCL16 in kidney and cardiovascular injury［J］.Cytokine Growth Factor Rev，2014，25（3）：317-325.doi：10.1016/j.cytogfr. 2014.04.002.

［5］Meng XJ，Xu J，Cheng AJ，et al.The expression of high mobility group box-1 in patients with acute coronary syndrome and the treatment of atorvastatin［J］.Tianjin Med J，2016，44（4）：497-500.［孟祥娟，許靜，程愛娟，等.急性冠脈綜合征患者血清高遷移率族蛋白B1的表達(dá)及阿托伐他汀干預(yù)治療的影響［J］.天津醫(yī)藥，2016，44（4）：497-500］.doi：10.11958/20150127.

［6］Aluganti Narasimhulu C，F(xiàn)ernandez-Ruiz I，Selvarajan K，et al. Atherosclerosis-do we know enough already to prevent it?［J］.Curr OpinPharmacol，2016，27：92-102.doi：10.1016/j.coph. 2016.02.006.

［7］Duivenvoorden R，Mani V，Woodward M，et al.Relationship of serum inflammatory biomarkers with plaque inflammation assessed by FDG PET/CT：the dal-PLAQUE study［J］.JACC Cardiovasc Imaging，2013，6（10）：1087-1094.doi：10.1016/j.jcmg. 2013.03.009.

［8］Sheikine Y，Sirsjo A.CXCL16/SR-PSOX-A friend or a foe in atherosclerosis?［J］.Atherosclerosis，2008，197（2）：487-495.doi：10.1016/j.atherosclerosis.2007.11.034.

［9］Febbraio M，Hajjar DP，Silverstein RL.CD36：a class B scavenger receptor involved in angiogenesis，atherosclerosis，inflammation and lipid metabolism［J］.J Clin Invest，2001，108：785-791.doi：10.1172/JCI14006.

［10］Park YM.CD36，a scavenger receptor implicated in atherosclerosis［J］.Exp Mol Med，2014，46：e99.doi：10.1038/emm.2014.38.

［11］Ra? M，Krzystolik A，Ra? M，et al.Is plasma-soluble CD36 associated with density of atheromatous plaque and ankle-brachial index in early-onset coronary artery disease patients?［J］.Kardiol Pol，2016，74（6）：570-575.doi：10.5603/KP.a2015.0238.

［12］Handberg A，Skjelland M，Michelsen AE，et al.Soluble CD36 in plasma is increased in patients with symptomatic atherosclerotic carotid plaques and is related to plaque instability［J］.Stroke，2008，39（11）：3092-3095.doi：10.1161/STROKEAHA.108. 517128.

［13］Littlewood TD，Bennett MR.Apoptotic cell death in atherosclerosis［J］.Curr Opin Lipidol，2003，14：469-475.doi：10.1097/01. mol.0000092618.86399.71.

［14］Shimaoka T，Kume N，Minami M，et al.Molecular cloning of a novel scavenger receptor for oxidized low density lipoprotein，SRPSOX，on macrophages［J］.J Biol Chem，2000，275（52）：40663-40666.doi：10.1074/jbc.C000761200.

［15］Matloubian M，David A，Engel S，et al.A transmembrane CXC chemokine is a ligand for HIV-coreceptor Bonzo［J］.Nat Immun，2000，1（4）：298-304.doi：10.1038/79738.

［16］Ma A，Pan X，Xing Y，et al.Elevation of serum CXCL16 level correlates well with atherosclerotic ischemic stroke［J］.Arch Med Sci，2014，10（1）：47-52.doi：10.5114/aoms.2013.39200.

［17］Wong HS，Jaumouillé V，F(xiàn)reeman SA，et al.Chemokine signaling enhancesCD36responsivenesstowardoxidizedlow-density lipoproteins and accelerates foam cell formation［J］.Cell Rep，2016，14（12）：2859-2871.doi：10.1016/j.celrep.2016.02.071.

［18］Jin WY，Cheng H.CD36 and Atherosclerosis［J］.Chinese Journal of Arteriosclerosis，2010，18（7）：582-585.［靳文英，陳紅.CD36與動脈粥樣硬化［J］.中國動脈硬化雜志，2010，18（7）：582-585］.

（2016-07-27收稿2016-09-13修回）

（本文編輯陸榮展）

Correlation between serum chemokine CXCL16,CD36 and vulnerable carotid plaques with cerebral infarction

JI Jiyu,SI Huili,WANG Hong△
Department of Neurology,the First Affiliated Hospital,Shihezi University School of Medicine,Shihezi 832000,China△

ObjectiveTo investigate the relationship between serum chemokine CXCL16 and CD36 in vulnerable carotid atherosclerosis plaques with large artery atherosclerosis(LAA)-stoke.MethodsFifty patients with LAA-cerebral infarction and carotid vulnerable plaque(infarction group),50 patients with carotid vulnerable plaque(plaque group)and 50 healthy subjects in the same period(control group)were included in this study.The cervical vascular color ultrasonic inspection was performed in three groups.Data of body mass index(BMI)were calculated in three groups.Levels of triglyceride(TG),total cholesterol(TC),low density lipoprotein cholesterol(LDL-C),high density lipoprotein cholesterol (HDL-C)and fasting blood glucose(FBG)were also detected in three groups.The enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)was used to detect the serum levels of CXCL16 and CD36 in three groups.Logistic regression analysis was used to analyse the influence factors of LAA-cerebral infarction.ResultsLevels of BMI,TG,TC,LDL-C and FBG were higher, and the level of HDL-C was lower in infarction group and plaque group than those in control group.Levels of TG,TC,LDLC and FBG were significantly higher in infarction group than those of plaque group,and levels of BMI and HDL-C were significantly lower in infarction group than those in plaque group(P＜0.05).Both serum levels of CXCL16 and CD36 showed significantly increased trend in control group,plaque group and infarction group.Multivariate Logistic regression analysis showed that the higher levels of TG,LDL-C,FBG,CXCL16 and CD36 were the independent risk factors for large artery atherosclerotic cerebral infarction.ConclusionSerum chemokine CXCL16 and CD36 can be used as a clinical marker of vulnerable carotid plaques.Joint detection of CXCL16 and CD36 can predict the occurrence of LAA-cerebral infarction.

chemokines,CXC;antigens,CD36;atherosclerosis;brain infarction;CXC chemokine ligand16;vulnerable plaque

R543.4

A

10.11958/20160745

新疆石河子，石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科（郵編832000）

嵇繼宇（1990），男，碩士在讀，主要從事腦血管病的基礎(chǔ)研究

△通訊作者E-mail:wang832000@sina.com