鹽酸普拉克索緩釋微丸膠囊的制備及有關物質檢測

戈文蘭，張根元（江蘇省藥物研究所有限公司，南京 210009）

鹽酸普拉克索緩釋微丸膠囊的制備及有關物質檢測

戈文蘭＊，張根元（江蘇省藥物研究所有限公司，南京 210009）

目的：制備鹽酸普拉克索緩釋微丸膠囊，建立其有關物質的檢測方法。方法：采用流化床空氣懸浮包衣法制備載藥丸芯，以乙基纖維素水分散體（Surelease?）進行包衣，制成鹽酸普拉克索緩釋微丸，裝入膠囊即可。采用高效液相色譜（HPLC）法檢測緩釋微丸中有關物質，色譜柱為Capcell PAK MG-ⅡC18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；梯度洗脫，流動相A為甲酸銨緩沖液（pH 5.0），流動相B為甲醇；流速為1.0 ml/min；二極管陣列檢測器，檢測波長為240、262、326 nm；進樣量為80 μl。結果：該色譜條件下，鹽酸普拉克索能與7種有關物質完全分離，且空白輔料不干擾測定，7種有關物質檢測質量濃度的線性范圍均為0.2～2 μg/ml（r＞0.999 0），檢測限為0.5～1.8 ng，定量限為1.7～5.9 ng，平均回收率為98.93%～102.0%（RSD為1.90%～0.24%，n＝9），精密度和穩(wěn)定性試驗的RSD均小于1.0%（n＝5）。所制得的鹽酸普拉克索緩釋微丸膠囊中僅檢測出1種有關物質。結論：成功制得鹽酸普拉克索緩釋微丸膠囊；所建立的HPLC法可用于其有關物質的檢測。

鹽酸普拉克索；緩釋微丸；膠囊；制備；高效液相色譜法；有關物質；檢測

鹽酸普拉克索為非麥角堿類D2和D3受體激動藥，能高度選擇性地刺激多巴胺受體，從而改善患者癥狀。它是優(yōu)于麥角類衍生物的新一代抗帕金森?。≒D）藥物，也是目前美國神經病學會、運動障礙學會以及各國PD治療指南推薦的一線治療藥物。臨床上鹽酸普拉克索主要用于治療PD，能有效地緩解PD患者伴發(fā)的抑郁癥[1-3]。鹽酸普拉克索片（商品名：Mirapex IR）首先由德國勃林格殷格翰（Boehringer-Ingehelm）公司開發(fā)，于1997年5月首先在美國上市，每天需服藥3～4次。將鹽酸普拉克索制成緩釋片可增強其藥效，減少服藥次數(shù)，降低藥品不良反應，便于老年患者長期服藥[4]。國外已有鹽酸普拉克索緩釋片（商品名：Mirapex ER）上市，已獲批進口，并在中國上市。緩釋微丸膠囊除具有緩釋片的特點外，其安全性更高，在胃腸道分布廣，且不受胃腸道pH變化等因素的影響。本研究擬將鹽酸普拉克索制備成緩釋微丸膠囊，并建立其有關物質的檢查方法，以期為其新藥的研制和質量標準的制訂提供科學依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1260 series高效液相色譜儀（美國Agilent公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸普拉克索對照品（批號：20140101，純度：99.50%）、鹽酸普拉克索緩釋微丸膠囊（批號：20140601、20140604、20140607，規(guī)格：每粒0.375 mg）均由江蘇省藥物研究所有限公司提供；羥丙甲纖維素E5（HPMC E5）、乙基纖維素水分散體（Surelease?）均購自上?？房倒荆豢瞻淄栊荆ǖ聡鳭RS公司，規(guī)格：30～35目）；雜質a對照品（Rac-trans-7-hydroxy pramipexole，批號：H952145，純度：97%）、雜質b對照品（Pramipexole C-N dimer impurity，批號：H952140，純度：98%）、雜質c對照品（Rac-7-oxo-pramipexole，批號：A630480，純度：96%）、雜質d對照品（Rac N-propyl-2-cyanimidopyrrolidine-5-acetic acid，批號：P835150，純度：98%）、雜質e對照品[N-（aminothioxomethyl）-5-oxo-1-propyl-2-pyrrolidineacetamide，批號：O858940，純度：98%）、雜質g對照品（2-aminobenzothiazole，批號：A593500，純度：98%）均購自上海致化化學科技有限公司；雜質f對照品（1，3-benzoxazol-2-amine，美國Santa Cruz Blotechnology公司，批號：SC-273567，純度：100%）；甲醇為色譜純，甲酸銨為分析純。

2 方法與結果

2.1 制備工藝

2.1.1 素丸 將30～35目的空白丸芯加入流化床中，預熱10 min。包衣條件：噴嘴直徑1 mm，進風溫度55℃，霧化壓力0.4 MPa，物料溫度（40±2）℃，流化風量0.15 m3/min，噴液速度1～3 g/min。分次交替噴入2.5%鹽酸普拉克索水溶液，依法反復操作，直至達到規(guī)定的藥物含量。包衣溶液噴完后再流化干燥30 min。

2.1.2 隔離層包衣 稱取處方量的HPMC E5，加入蒸餾水放置溶解，制成5%HPMC E5溶液，再加入10%聚乙二醇4000，磁力攪拌溶解，即配成隔離層包衣液。取鹽酸普拉克索素丸包衣，直至包衣增質量約3%。包衣條件同“2.1.1”項。

2.1.3 緩釋微丸 將包了隔離層的素丸置于流化床中，噴入10%Surelease?包衣液。包衣條件：噴嘴直徑1 mm，流化風量0.15 m3/min，霧化壓力0.6 MPa，包衣溫度（40±2）℃，噴液速度0.7～1.0 ml/min。如此反復，直至緩釋微丸的釋放度符合規(guī)定，取出，裝入膠囊即可。

2.2 有關物質的檢查

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Capcell PAK MG-ⅡC18（150 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相A：pH 5.0甲酸銨緩沖液（取甲酸銨31.5 g，加水溶解并稀釋至1 000 ml，用甲酸調節(jié)pH至5.0），流動相B：甲醇，梯度洗脫（0～5 min 99%A，5～38 min 99%～44%A，38～40 min 44%～99%A，40～50 min 99%A），流速：1.0 ml/min；采用二極管陣列檢測器，主藥的檢測波長：262 nm，雜質d、f的檢測波長：240 nm，雜質a、b、e、g的檢測波長：262 nm，雜質c的檢測波長：326 nm；溫度：室溫；進樣量：80 μl。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品的內容物適量，研細，精密稱取細粉適量（約相當于鹽酸普拉克索1 mg），置于5.0 ml量瓶中，加適量甲酸銨緩沖液（pH 5.0，下同），超聲使鹽酸普拉克索溶解，放冷，用甲酸銨緩沖液稀釋至刻度，10 000 r/min（離心半徑3 cm）離心10 min，用0.45μm的濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

糯福鄉(xiāng)有“綠色寶石”之美譽，綠色、生態(tài)、民族、邊疆是糯福的鮮明特點。全鄉(xiāng)轄9個村民委員會，91個村民小組，有國土面積879.67平方公里，占全縣總面積的1/10，是瀾滄縣國土面積第三大鄉(xiāng)。耕地52147畝，其中：水田14185畝，旱地37692畝。

2.2.3 混合對照品溶液的制備 精密稱取雜質a、b、c、d、e、f、g對照品適量，用甲酸銨緩沖液溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含1 μg的混合對照品溶液。

2.2.4 空白輔料溶液 按處方量制備不含鹽酸普拉克索的空白緩釋微丸膠囊內容物適量，按“2.2.2”項下方法制備成空白輔料溶液。

2.2.5 系統(tǒng)適用性試驗 分別取混合對照品溶液、供試品溶液、空白輔料溶液適量，按“2.2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜。結果顯示，鹽酸普拉克索峰保留時間約為15 min，待測成分峰與溶劑及其他雜質峰分離良好，空白輔料對其測定無干擾。色譜圖見圖1（圖中1為雜質a，2為雜質b，3為普拉克索，4為雜質d，5為雜質e，6為雜質f，7為雜質g，8為雜質c）。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.2.6 專屬性試驗 取本品內容物適量，研細，精密稱取細粉適量（約相當于鹽酸普拉克索1 mg），共6份，分別置于5 ml量瓶中，對其中5份進行酸、堿、熱、氧化及光照破壞后，制備成供試品溶液，剩余1份作未破壞對照。取上述6份供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定。結果顯示，本品經堿、酸破壞后未見明顯降解產物；氧化、熱、光照破壞后均產生了明顯的降解產物，且各降解產物與已知雜質及主峰分離良好，表明本方法專屬性好，能夠滿足有關物質的檢查要求。

2.2.7 線性關系考察 分別精密稱取雜質a、b、c、d、e、f、g對照品適量，按“2.2.3”項下方法制備成0.1～3 μg/ml的線性對照溶液，分別進樣測定，記錄峰面積。以各雜質峰面積（y）為縱坐標、質量濃度（x）為橫坐標進行線性回歸分析，以信噪比3和10計算檢測限和定量限。結果表明，各雜質與峰面積的線性關系良好，回歸方程、線性范圍、檢測限和定量限的檢測結果見表1。

表1 回歸方程、線性范圍、檢測限和定量限的檢測結果Tab 1 Results of regression equations，linear range，limit of detection and limit of quantitation

2.2.8 加樣回收率試驗 取本品內容物細粉適量（約相當于鹽酸普拉克索1 mg），9份，分別置于5 ml量瓶中，分別加入0.5%的各雜質對照品溶液0.8、1.0、1.2 ml，制成低、中、高3個質量濃度的加樣回收溶液，進樣測定峰面積，計算加樣回收率。結果顯示，雜質a、b、c、d、e、f、g的平均加樣回收率分別為99.10%（RSD＝0.20%）、100.5%（RSD＝0.20%）、98.93%（RSD＝0.23%）、102.0%（RSD＝0.21%）、99.71%（RSD＝1.9%）、102.0%（RSD＝0.40%）、100.5%（RSD＝0.24%），n＝9，表明雜質檢測準確度較好，方法符合定量分析的要求。

2.2.9 精密度試驗 取混合對照品溶液80μl，連續(xù)進樣5次，記錄色譜圖，計算各雜質峰面積的RSD。結果顯示，雜質a、b、c、d、e、f、g峰面積的RSD分別為0.15%、0.18%、0.11%、0.11%、0.16%、0.36%、0.14%（n＝5），表明儀器的進樣精密度良好。

2.2.10 穩(wěn)定性試驗 按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別于0、2、4、6、8 h進樣測定，記錄峰面積，考察主成分及各雜質的變化。結果顯示，鹽酸普拉克索和雜質a峰面積的RSD分別為0.10%、2.0%（n＝5），表明二者在8 h內穩(wěn)定。

2.2.11 樣品中有關物質測定 取鹽酸普拉克索緩釋微丸膠囊，按“2.2.2”項下方法制備成供試品溶液，進樣測定，記錄峰面積。將檢出雜質按外標法計算其相當于鹽酸普拉克索標示量的百分含量。結果顯示，3批樣品僅檢出雜質a（約為0.04%），其他雜質均未檢出，具體見表2。

3 討論

預試驗時，筆者選用了Surelease?[5-6]和Eudragit?NE30D[7-8]作為緩釋微丸的包衣材料。Eudragit?NE30D包衣時無需外加增塑劑，但通常需要加入抗黏劑（如滑石粉），包衣完成后還需對微丸進行熱處理。Surelease?是一種全配方的乙基纖維素水性分散體，無需外加增塑劑和抗黏劑，包衣完成后無需對微丸進行熱處理。通過處方篩選，兩者均能達到同樣的釋藥效果，最終選擇操作更簡便的Surelease?為緩釋微丸的包衣材料。

表2 鹽酸普拉克索緩釋微丸膠囊的有關物質檢測結果Tab 2 Results of related substances in Pramipexole dihydrochloride sustained-release pellets capsules

筆者曾考察了隔離層對微丸釋放的影響，通過相似因子f2比較，發(fā)現(xiàn)有無隔離層的緩釋微丸的釋放曲線基本一致。由此可知，隔離層對微丸的釋放沒有影響，但可以防止水溶性藥物向緩釋衣膜遷移，增加緩釋微丸的穩(wěn)定性。

針對本品中可能存在的雜質、潛在雜質及降解雜質較多，筆者進行了色譜條件的選擇及優(yōu)化。筆者曾采用甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸鹽緩沖液、甲醇-醋酸鹽緩沖液系統(tǒng)進行等度洗脫，后期也參考過文獻[9-10]的色譜條件，但都存在各雜質與主成分不能全部分開、主峰峰形不佳、拖尾較嚴重等問題。經流動相多次優(yōu)化試驗，最終采用本文的梯度洗脫法進行有關物質的檢測；因各雜質在不同的波長處有最大吸收，為確保檢測靈敏度及準確度，故采用不同吸收波長進行雜質檢測。

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（編輯：鄒麗娟）

Preparation of Pramipexole Dihydrochloride Sustained-release Pellets Capsules and Related Substances Determination

GE Wenlan，ZHANG Genyuan（Jiangsu Provincial Institute of Materia Medica Co.，Ltd.，Nanjing 210009，China）

OBJECTIVE：To prepare Pramipexole dihydrochloride sustained-release pellets capsules and to establish a method for the determination of related substances.METHODS：Drug loaded core was prepared by fluid bed air suspension coating method，and pramipexole dihydrochloride pellets were prepared using Surelease?as coating materials and put into capsules.HPLC method was used to determine related substance in sustained-release pellets；the determination was performed on Capcell PAK MG-ⅡC18column（150 mm×4.6 mm，5 μm）with mobile phase A consisted of ammonium formate buffer solution（pH 5.0）and mobile phase B consisted of methanol for gradient elution at flow rate of 1.0 ml/min；diode array detector was used with detection wavelength of 240，262，326 nm and injection volume of 80 μl.RESULTS：Pramipexole dihydrochloride and 7 kinds of related substances were separated by the established HPLC conditions.The blank excipient did not interfere with the assay of the related substances.The linear ranges of 7 related substances were 0.2-2 μg/ml（r＞0.999 0）；the limit of detection ranged 0.5-1.8 ng，and the limit of quantitation ranged 1.7-5.9 ng；average recovery ranged 98.93%-102.0%（RSD were 1.90%-0.24%，n＝9）.RSD of precision and stability test were all lower than 1.0%（n＝5）.Only one related substance was found in prepared Pramipexole dihydrochloride pellets capsules.CONCLUSIONS：Pramipexole dihydrochloride pellets capsules are prepared successfully.Established HPLC method can be used for the determination of its related substances.

Pramipexole dihydrochloride；Sustained-release pellets；Capsules；Preparation；HPLC method；Related substances；Determination

R943

A

1001-0408（2016）31-4433-03

2016-01-21

2016-04-22）

＊副研究員。研究方向：藥物新劑型的研究與開發(fā)。電話：025-58139406。E-mail：gwlan@sina.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.31.33