牡荊素的鎮(zhèn)痛及抗炎免疫作用研究

程建忠黃金華*

（1 南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇 南通 226001；2 南通大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南通 226001）

牡荊素的鎮(zhèn)痛及抗炎免疫作用研究

程建忠1黃金華2*

（1 南通大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇 南通 226001；2 南通大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南通 226001）

目的 旨在探討牡荊素鎮(zhèn)痛作用和抗炎免疫調(diào)節(jié)作用的機(jī)制。方法 應(yīng)用熱板法測(cè)定痛閾值，以研究牡荊素的鎮(zhèn)痛效果。通過(guò)對(duì)角叉菜膠誘發(fā)大鼠足趾腫脹試驗(yàn)，來(lái)觀察牡荊素抗炎作用；利用醋酸影響小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的方法，觀察牡荊素的免疫清除作用。結(jié)果 牡荊素大劑量組痛閾提高值的百分率（%）最大達(dá)（40.3±14.8），比同期對(duì)照組的（5.9±1.8）有顯著差異（P＜0.01）；和模型組比較，牡荊素各劑量組在致炎后1、2、3、5 h均有不同程度的足趾腫脹抑制（P＜0.05），其中牡荊素大劑量組大鼠（200 mg/kg）在致炎后1 h開(kāi)始到3 h達(dá)到最高值（45.3±14.8）；與對(duì)照組比較差異更為顯著（P＜0.01）；與對(duì)照組比較，牡荊素大劑量組對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的吸收度A明顯低于對(duì)照組，差異有顯著性意義（P＜0.01）。結(jié)論 牡荊素具有較好的鎮(zhèn)痛效果，抗炎作用明顯；并能明顯增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力。

牡荊子；鎮(zhèn)痛；抗炎

牡荊子為馬鞭草科植物牡荊的帶宿萼的果實(shí)。主產(chǎn)于我國(guó)長(zhǎng)三角流域及其浙江福建地區(qū)；作為民間驗(yàn)方常用于小兒哮喘發(fā)作的治療。牡荊素是從牡荊子中提取的主要有效成分，近來(lái)發(fā)現(xiàn)在治療小兒哮喘的同時(shí)也具有止咳祛痰和止痛等其他功效。本實(shí)驗(yàn)旨在對(duì)牡荊素抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用做進(jìn)一步深入研究，以期探明其內(nèi)在的藥理活性和作用機(jī)制。

1　材料與方法

1.1藥物和試劑：牡荊素：中國(guó)生物制品檢定所；阿司匹林片：南通精華制藥，批號(hào)：20140128；角叉菜膠：蘇北藥業(yè)公司；安乃近針劑：尼克美制藥有限公司，批號(hào)：20150221。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠、SD大鼠，SPF級(jí)，雌雄各半；均由南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SYXK（蘇）2012-0031。

1.3主要儀器：GJ-8402熱板測(cè)痛儀和大鼠足趾容積測(cè)定儀，成都醫(yī)療儀器廠生產(chǎn)；分光光度計(jì)，上海醫(yī)療器械廠生產(chǎn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPss115.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，采用單因素方差分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，以（P＜0.05）為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異意義。

2　方 法[1-2]

2.1鎮(zhèn)痛作用：取體質(zhì)量18～25 g雌性小鼠，逐只放于（55.0±0.5） ℃熱板儀上，記錄小鼠放入后到舔后足反應(yīng)所需時(shí)間作為小鼠的痛閾值；將經(jīng)過(guò)預(yù)先篩選，符合痛閾值小于30S的小鼠50只，隨機(jī)分為陽(yáng)性對(duì)照組即安乃近組（10 mg/kg）；空白對(duì)照組用等體積生理鹽水；牡荊素大、中、小劑量3組（灌胃給藥，劑量為牡荊素50、100、200 mg/kg）。分別在給藥前和給藥后的30、60、90、120 min測(cè)定痛閾值。痛閾提高值的百分率（%）=（給藥后平均痛閾-給藥前平均痛閾）/給藥前平均痛閾×100%。

表1　牡荊素對(duì)小鼠熱板痛閾的影響（，n=10）

表1　牡荊素對(duì)小鼠熱板痛閾的影響（，n=10）

注：與對(duì)照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01

組別　　劑量(mg/kg)　　痛閾提高值的百分率(%)給藥后30 min　60 min　90 min　120 min對(duì)照組　-　5.6±1.6　5.8±1.7　5.9±1.8　6.0±1.8安乃近組　10　21.5±10.8*　32.7±12.6**　41.9±15.6**　36.8±11.8*牡荊素小劑量　50　14.3±3.7　19.8±5.06*　22.7±8.9*　20.6±9.7*牡荊素中劑量　100　18.3±8.2*　24.0±10.2*　29.6±12.9**　28.3±9.4**牡荊素大劑量　200　21.0±9.2*　29.1±11.2**　40.3±14.8**　37.1±12.2**

表2　牡荊素對(duì)角叉菜膠所致大鼠足腫的影響（，n=10）

表2　牡荊素對(duì)角叉菜膠所致大鼠足腫的影響（，n=10）

注：和對(duì)照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01

組別　　劑量(mg/kg)足趾腫脹率(%)致炎后給藥1 h　3 h　5 h　7 h對(duì)照組　-　0.2±0.04　0.17±0.02　0.21±0.08　0.25±0.09安乃近組　10　31.5±12.8*　42.7±12.6**　46.9±15.6**　37.8±11.8**牡荊素小劑量　50　24.3±7.7　29.8±9.06*　32.7±10.9*　29.6±10.7牡荊素中劑量　100　27.3±8.2*　34.0±10.2**　39.6±12.9**　29.3±9.4*牡荊素大劑量　200　29.0±9.2*　39.1±11.2**　45.3±14.8**　37.1±12.2**

2.2抗炎作用：取180～220 g體質(zhì)量的SD大鼠50只，雌雄各半。每組10只，隨機(jī)分為5組，既模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥對(duì)照組即阿司匹林組（30 mg/kg），牡荊素大、中、小劑量3組（灌胃給藥，劑量為牡荊素50、100、200 mg/kg）。對(duì)照組給予等體積生理鹽水（灌胃給藥量均為0.2 mL/100 g），連續(xù)灌胃給藥9 d，于末次給藥1 h后，在每只大鼠左后足跖皮下注射0.1 mL的1%角叉菜膠生理鹽水液，用游標(biāo)尺測(cè)量各組致炎前和致炎后1、3、5、7 h足跖厚度，計(jì)算足趾腫脹率。足趾腫脹率（%）=（致炎后平均足趾腫脹厚度-致炎前平均足趾腫脹厚度）/致炎前平均足趾腫脹厚度×100%。

2.3對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響：取昆明小鼠50只，雌雄各半，分組方法和給藥方式同2.1。每天灌服給藥1次，第7天給藥0.5 h后。尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)溶液（0.1 mL/20 g）、馬上隨即腹腔注射0.6%的新配制的醋酸生理鹽水溶液（0.1 mL/10 g），20 min后脫臼處死，剪開(kāi)腹腔，用6 mL生理鹽水多次沖洗腹腔，再用吸管充分吸出沖洗液于刻度試管中，合并后加生理鹽水定容到8 mL。采用3000 r/min離心5 min后，取上清液作樣品液；將樣品液在波長(zhǎng)596 nm處測(cè)吸收度A值。抑制率=（空白組的吸收度-用藥組吸收度）/空白組的吸收度× 100%。

3　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1鎮(zhèn)痛作用：熱板法對(duì)小鼠痛閾的測(cè)定 空白對(duì)照組小鼠由于對(duì)熱的耐受性，對(duì)痛閾有一定延長(zhǎng)，但前后沒(méi)明顯差異。與對(duì)照組比較，牡荊素小劑量組對(duì)小鼠在給藥后的30 min痛閾就開(kāi)始延長(zhǎng)，牡荊素中劑量組、大劑量組對(duì)小鼠在給藥后的各時(shí)間段均可顯著延長(zhǎng)小鼠的痛閾（*P＜0.05，**P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2抗炎作用。對(duì)角叉菜膠所致大鼠足趾腫脹的影響：和模型組比較，牡荊素劑量組在致炎后1、2、3、5 h均有不同程度的足趾腫脹率差異（P＜0.05），其中大小劑量組均在3、5 h達(dá)到藥效高點(diǎn)，之后作用開(kāi)始減退。牡荊素大劑量組大鼠（200 mg/kg）在致炎后1 h就開(kāi)始明顯作用，其足趾腫脹率為（29.0±9.2），與對(duì)照組比較出現(xiàn)差異（P＜0.05），3 h達(dá)到最高值（45.3±14.8）與對(duì)照組比較差異更為顯著（P＜0.01）；而且作用穩(wěn)定，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)；結(jié)果見(jiàn)表2。

3.3對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響：與對(duì)照組比較，牡荊素大、中劑量組對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性吸收度明顯少于對(duì)照組，差異有顯著性意義（P＜0.01）；結(jié)果顯示能明顯增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬伊文思藍(lán)的能力。見(jiàn)表3 。

表3　對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響（n=10）

4　討 論

炎癥是一種損傷和修復(fù)的對(duì)立統(tǒng)一的防御反應(yīng)：一方面損傷因子直接或間接造成組織和細(xì)胞的損傷，另一方面炎癥通過(guò)充血滲出反應(yīng)，以稀釋、殺滅和包圍損傷因子，并通過(guò)間質(zhì)細(xì)胞的再生，使被破壞的組織得以修復(fù)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：牡荊素能顯著延長(zhǎng)小鼠的熱板痛閾值，減低大鼠角叉菜膠所致的足趾腫脹度和腫脹率，同時(shí)能顯著增強(qiáng)吞噬伊文思藍(lán)的能力，減少醋酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管的炎性滲出，具有顯著的鎮(zhèn)痛和抗炎免疫作用。牡荊素的作用機(jī)制可能于減少細(xì)胞的損傷，促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞的再生，修復(fù)炎癥組織有關(guān)[3-5]。

臨床上小兒的支氣管炎癥和哮喘的治療使用的甾體和非甾體抗炎藥物，都有一定的不良反應(yīng)；牡荊素提取于植物中藥[6]，不良反應(yīng)較小且具有良好的藥理作用，值得進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。

[1]李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,2006: 764-771.

[2]國(guó)家中醫(yī)藥管理局.中華本草[M].上海:上?？萍汲霭嫔?1999: 6058.

[3]韋桂寧,劉智生,周軍,等.炎見(jiàn)寧片抗菌、抗炎及鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥藥理與臨床,2009,31(12):1873-1875.

[4]肖國(guó)珍,羅宗銘.牡荊子乙醇提取物抗氧化活性的研究[J].廣東工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2006,23(3):32-33.

[5]宋妍,楊雪,許伯慧,等.牡荊素抗豚鼠哮喘活性研究[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2014,30(6):18-19.

[6]黃敬耀,徐彭,朱家谷,等.牡荊子平喘作用的藥理實(shí)驗(yàn)研究[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,14(4):13-14.

R282.710.5

B

1671-8194（2016）31-0029-02

南通市科技項(xiàng)目（AS2011019）；江蘇省高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目（PAPD2013028）

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