氣相色譜法測定三氯乙腈中有關(guān)物質(zhì)含量的研究

戴根來，陸玉明，施伶俐

(1 合肥久諾醫(yī)藥科技有限公司，安徽 合肥 230031；2 安徽新華學(xué)院藥學(xué)院，安徽 合肥 230088)

?

氣相色譜法測定三氯乙腈中有關(guān)物質(zhì)含量的研究

戴根來，陸玉明，施伶俐

(1 合肥久諾醫(yī)藥科技有限公司，安徽 合肥 230031；2 安徽新華學(xué)院藥學(xué)院，安徽 合肥 230088)

采用氣相色譜法測定三氯乙腈中有關(guān)物質(zhì)含量，采用AgilentDB-624毛細(xì)管柱(30 m×0.53 mm×3.0 μm)，氫火焰離子檢測器，程序升溫，進(jìn)樣口溫度160 ℃，檢測器溫度250 ℃，載氣為氮?dú)?。通過專屬性試驗(yàn)、線性關(guān)系、精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)和耐用性試驗(yàn)考察，表明本法操作簡便、專屬性強(qiáng)、分離度好、準(zhǔn)確度高，具有良好的重復(fù)性和耐受性，可作為三氯乙腈有關(guān)物質(zhì)的測定方法。

三氯乙腈；有關(guān)物質(zhì)；氣相色譜法

藥物中任何影響其純度的物質(zhì)統(tǒng)稱為雜質(zhì)，而其中的有機(jī)雜質(zhì)一般與活性成分結(jié)構(gòu)相似或具有淵源關(guān)系，稱為有關(guān)物質(zhì)。有關(guān)物質(zhì)的測定與控制對藥物質(zhì)量的安全性和可控性具有重要意義[1]。三氯乙腈是合成很多活性化合物的重要原料之一，筆者在研究鹽酸美金剛的合成工藝中，三氯乙腈作為合成路線中的關(guān)鍵物料，其含量和純度會直接影響到終產(chǎn)品的質(zhì)量。三氯乙腈原料中的有關(guān)物質(zhì)主要包括一氯乙腈、二氯乙腈等[2]。

藥物中有關(guān)物質(zhì)的分析方法很多，其中氣相色譜法具有分離效率高、分析速度快、樣品用量少、檢測靈敏度高、選擇性好等優(yōu)點(diǎn)[3-5]。氣相色譜法要求樣品能夠氣化且具有熱穩(wěn)定性，根據(jù)鹵代腈的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，對于鹵代腈的檢測方法多采用氣相色譜法[6-8]。故本研究采用氣相色譜法，建立三氯乙腈中有關(guān)物質(zhì)含量測定方法，為合成高純度鹽酸美金剛奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試劑

儀器：GC1890氣相色譜儀，上海惠普分析儀器有限公司；AB135-S電子天平，瑞士梅特勒公司；超聲波清洗器，天津市鑫洲科技有限公司。

試劑：甲醇、乙腈均為色譜純；一氯乙腈、二氯乙腈、三氯乙腈，自制并提純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品溶液制備

乙腈對照品單標(biāo)溶液：取乙腈對照品100.0 mg，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含10 mg的溶液，作為乙腈單標(biāo)溶液。

一氯乙腈對照品單標(biāo)溶液：取一氯乙腈對照品100.0 mg，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含10 mg的溶液，作為一氯乙腈單標(biāo)溶液。

二氯乙腈對照品單標(biāo)溶液：取二氯乙腈對照品100.0 mg，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含10 mg的溶液，作為二氯乙腈單標(biāo)溶液。

三氯乙腈對照品單標(biāo)溶液：取三氯乙腈對照品1000.0 mg，精密稱定，加甲醇溶解并稀釋制成每1 mL含100 mg的溶液，作為三氯乙腈單標(biāo)溶液。

混合溶液：取乙腈100 mg、一氯乙腈100 mg、二氯乙腈100 mg、三氯乙腈1000 mg，精密稱定，置已盛有適量甲醇的10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品溶液。

供試品溶液：直接進(jìn)樣。

2.2 色譜條件

色譜柱為AgiLentDB-624毛細(xì)管柱(30 m×0.53 mm×3.0 μm)；檢測器為氫火焰離子化檢測器(FID)；柱溫為初溫80 ℃保持5 min，10 ℃/min升溫到200 ℃后保持20 min；進(jìn)樣口溫度為60 ℃；檢測器溫度為250 ℃；氮?dú)饬髁繛?0 mL/min；氫氣流量為30 mL/min；空氣流量為300 mL/min。

2.3 專屬性試驗(yàn)

分別取空白溶劑、混合對照溶液、各單標(biāo)溶液、供試品溶液各1 μL直接進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，計(jì)算各組分峰的分離度R，結(jié)果見表1和圖1。表1和圖1表明，空白溶劑無干擾，最小分離度R=18.71，各組分均達(dá)到基線分離。

表1 混合樣品氣相色譜圖信息

圖1 混合樣品氣相色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取乙腈對照品5.0129 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為乙腈對照品貯備液；精密稱取一氯乙腈對照品5.0151 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為一氯乙腈對照品貯備液；精密稱取二氯乙腈對照品4.9931 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為二氯乙腈貯備液。

分別精密量取貯備液1、3、5、8、10 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。以各雜質(zhì)對照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程(圖2)。乙腈線性方程為A=8217C+842.79(r=0.9997)，在2.01～20.05 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；一氯乙腈線性方程為A=6373.7C-1008.6(r=0.9999)，在2.01～20.06 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；二氯乙腈線性方程為A=4760.1C-119.49(r=0.9999)在2.00～19.97 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.5 精密度試驗(yàn)

取線性關(guān)系考察項(xiàng)下各對照品溶液，精密量取1 μL，注入氣相色譜儀，測定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果見表2。表2表明精密度良好。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同批號三氯乙腈供試品6份，精密量取1 μL直接進(jìn)樣，分別注入氣相色譜圖中，記錄色譜圖，采用面積歸一化法計(jì)算，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。表3表明重復(fù)性良好。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 耐用性試驗(yàn)

參照中國藥典要求，在不同的色譜條件下取三氯乙腈1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。以分離度為主要考察指標(biāo)，考察方法的耐用性。結(jié)果見表4，當(dāng)柱溫、流速等進(jìn)行微小調(diào)整時(shí)，主峰與前后雜質(zhì)分離度均滿足分析要求，說明本方法耐用性較好。

表4 耐用性試驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品測定

取三氯乙腈供試品，精密量取1 μL，直接進(jìn)樣，記錄色譜圖，以面積歸一化法計(jì)算，結(jié)果見表5。 表5表明此方法測定的三氯乙腈有關(guān)物質(zhì)結(jié)果符合規(guī)定。

表5 樣品測定結(jié)果

3 結(jié) 論

通過方法學(xué)考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用氣相色譜法測定三氯乙腈有關(guān)物質(zhì)，在選定的色譜條件下測定，三氯乙腈各雜質(zhì)間能夠完全分離，空白溶劑無干擾，各組分均達(dá)到基線分離。

選定的氣相色譜條件能夠有效檢出雜質(zhì)，乙腈、一氯乙腈、二氯乙腈在一定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，儀器精密度良好，樣品的重復(fù)性良好。在該方法的耐用性實(shí)驗(yàn)考察中，對柱溫、流速等進(jìn)行微小調(diào)整后，主峰與前后雜質(zhì)分離度均能夠滿足分析要求，表明該方法耐用性較好。采用建立的測定方法對三氯乙腈樣品中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了測定，結(jié)果各雜質(zhì)含量均在限度范圍內(nèi)，符合規(guī)定。

本文建立的三氯乙腈中有關(guān)物質(zhì)的含量測定方法切實(shí)可行，操作簡單、專屬性強(qiáng)、分離度好、準(zhǔn)確度高，可為建立三氯乙腈中有關(guān)物質(zhì)的限量標(biāo)準(zhǔn)，從而控制合成終產(chǎn)品藥物的質(zhì)量提供一定的依據(jù)。

[1] 金祥飛,沈衛(wèi)陽,黨柱.藥物中有關(guān)物質(zhì)的色譜分析研究近況[J]. 藥學(xué)進(jìn)展, 2009, 33(12):542-548.

[2] 孫勇.三氯乙腈的合成、應(yīng)用與市場[J].中國氯堿,2007(10):103-104.

[3] 張義.氣相色譜法及其在藥物分析中的應(yīng)用[J].河北化工,2012,35(8):85-88.

[4] 張紅印,馬麗卿.氣相色譜法與液相色譜法的比較及應(yīng)用[J].肉類工業(yè),2000(10):38-39.

[5] 李娜.色譜質(zhì)譜技術(shù)在化學(xué)藥物雜質(zhì)研究中的應(yīng)用[D]. 上海:第二軍醫(yī)大學(xué),2014.

[6] 李海青,蔡燁.氣相色譜-質(zhì)譜法測定飲用水中消毒副產(chǎn)物鹵代腈[J].環(huán)境監(jiān)測管理與技術(shù), 2014, 26(5):37-39.

[7] 周洪柱,崔云彪.氣相色譜法測定乙腈廢水中乙腈含量[J].云南化工,2005,32(5):42-43.

[8] 陳安群,何詠梅,羅延谷.氣相色譜法測定反應(yīng)液中氯乙腈含量[J].現(xiàn)代農(nóng)藥,2011, 10(1):33-35.

Determination for Related Substances of Trichloroacetonitrile by Gas Chromatography

DAIGen-lai1,LUYU-ming1,SHILing-li2

(1 Hefei Jiunuo Medicine & Technology Co.,Ltd., Anhui Hefei 230031; 2 College of Pharmacy,Anhui Xinhua University, Anhui Hefei 230088, China)

A determination method for related substances of trichloroacetonitrile by Gas Chromatography was established. The related substances were determined on the GC instrument with a FID detector using a AgilentDB-624 column(30 m×0.53 mm×3.0 μm)，programmed temperature, the temperature of injection port was 160 ℃，the temperature of FID detector was 250 ℃，the carry gases was nitrogen. Through the specificity test, linear relationship, precision test, reproducibility test and serviceability test, results showed that the method was simple, sensitive and accurate. It can be used for determination of trichloroacetonitrile and its related substances.

trichloroacetonitrile; related substances; gas chromatography

戴根來(1974-)，男，理學(xué)學(xué)士，主管中藥師，主要研究方向?yàn)樗幬镄轮苿┘百|(zhì)量研究。

R917

A

1001-9677(2016)022-0092-03