CEACAM-1和VEGF在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及臨床意義

馬 賽， 安 峰*， 胥愛文， 王 芹， 劉 博， 張 利， 李立恒

(1河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔頜面外科, 張家口 075000; 2河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科； *通訊作者,E-mail:yfyanfeng@163.com)

?

CEACAM-1和VEGF在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及臨床意義

馬 賽1， 安 峰1*， 胥愛文1， 王 芹1， 劉 博2， 張 利1， 李立恒1

(1河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔頜面外科, 張家口 075000;2河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科；*通訊作者,E-mail:yfyanfeng@163.com)

目的 探討癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子-1(CEACAM-1)和VEGF在涎腺腺樣囊性癌(SACC)中的表達(dá)及其與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。 方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)CEACAM-1和VEGF在40例SACC和40例癌旁正常涎腺組織中的表達(dá)情況，分析二者的陽(yáng)性表達(dá)與SACC 臨床病理因素的關(guān)系及其在SACC 病變中的相關(guān)性。 結(jié)果 SACC組中CEACAM-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為62.50%，明顯高于正常涎腺組織的12.50%；SACC組中VEGF蛋白陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常涎腺組織，差異顯著(72.50%vs17.50%,P<0.001)；SACC組中中低分化者CEACAM-1和VEGF 陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于高分化病者，Ⅲ+Ⅳ期的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Ⅰ+Ⅱ期，伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)組的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無肺轉(zhuǎn)移和無脈管浸潤(rùn)者(P<0.05)；而不同性別、年齡及病變部位的CEACAM-1和VEGF陽(yáng)性表達(dá)率則無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；且CEACAM-1和VEGF在SACC中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.545，P<0.001)。 結(jié)論 CEACAM-1和VEGF與SACC的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，二者可能在SACC的演進(jìn)中存在協(xié)同作用，相互影響。

涎腺腺樣囊性癌； CEACAM-1； VEGF

涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma，SACC)系常見的涎腺惡性腫瘤之一，病理類型以腺癌居多，侵襲性生長(zhǎng)，惡性度較高，早期即可出現(xiàn)局部擴(kuò)散或血行轉(zhuǎn)移，因而預(yù)后較差[1,2]。癌胚抗原相關(guān)黏附分子-1(CEACAM-1)系癌胚抗原家族重要成員之一，屬于免疫球蛋白一族，大量文獻(xiàn)顯示CEACAM-1可介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞黏附，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、分化，參與腫瘤血管、淋巴管生成過程，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移，抑制免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷[3,4]。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是迄今發(fā)現(xiàn)體內(nèi)特異性最高的血管內(nèi)皮分裂原，能刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤微血管形成，是腫瘤生長(zhǎng)、侵襲、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過程中重要的物質(zhì)基礎(chǔ)與關(guān)鍵環(huán)節(jié)[5]。目前，國(guó)內(nèi)關(guān)于CEACAM-1在SACC組織表達(dá)的相關(guān)報(bào)道較少，其在SACC組織中的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移機(jī)制并不明確，本實(shí)驗(yàn)以CEACAM-1在SACC病變的關(guān)系為中心，通過免疫組化檢測(cè)CEACAM-1和VEGF在SACC組織中的表達(dá)及與臨床病理特征之間的關(guān)系，并分析二者的相關(guān)性，為臨床精準(zhǔn)診療提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料來源

收集2010-06～2015-06河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔頜面醫(yī)學(xué)科手術(shù)切除的SACC組織40例，癌組織取自癌灶中心處，另取切緣經(jīng)病理證實(shí)為癌旁正常組織40例。依據(jù)2005年WHO關(guān)于SACC病理分型及TNM分期，篩孔型15例，實(shí)體型11例，管狀型14例；TNMⅠ+Ⅱ期23例，Ⅲ+Ⅳ期17例；小涎腺12例，大涎腺28例。所有患者均為原發(fā)性腫瘤，其中男 ∶女為26 ∶14,年齡40-62(52±2.7)歲。

1.2 免疫組化染色方法及試劑

兔抗人單克隆濃縮型CEACAM-1抗體、VEGF抗體均購(gòu)于Santa Cruz公司, DAB顯色試劑盒購(gòu)于博士德公司。

石蠟包埋、切片，3%甲醇-H2O2室溫孵育10 min，滅活內(nèi)源性過氧化物酶，PBS沖洗，滴加10%正常山羊血清封閉游離的結(jié)合位點(diǎn)，滴加一抗、二抗，37 ℃孵育30 min，PBS沖洗，滴加辣根酶HRP標(biāo)記鏈霉卵白素工作液，PBS洗3次，DAB顯色、復(fù)染、梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.3 CEACAM-1、VEGF陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)

CEACAM-1和VEGF均以細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，根據(jù)染色程度及染色細(xì)胞百分率進(jìn)行評(píng)定和分析。染色程度：基本不著色為0分，著色淡為1分，著色適中為2分，著色深為3分；染色細(xì)胞百分率：無為0分，<25%為1分，25%-50%為2分，>50%為3分。染色程度得分與染色細(xì)胞百分率得分各自相乘：0-1分為陰性(-)，2-3分為(+)，4-6分為(++)，6分以上為(+++)[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析整理數(shù)據(jù)，用百分率表示計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)分析 CEACAM-1和VEGF的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，相關(guān)性分析采用Spearmen檢驗(yàn)，設(shè)P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CEACAM-1和VEGF在SACC組織中的表達(dá)及相關(guān)性

SACC 組中的CEACAM-1和VEGF陽(yáng)性表達(dá)高于癌旁正常組(見圖1)。SACC 組中的CEACAM-1陽(yáng)性表達(dá)率為62.50%(25/40)，明顯高于癌旁正常組的12.50%(5/40)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.934，P<0.001)；SACC 組中的VEGF陽(yáng)性表達(dá)率為72.50%(29/40)，明顯高于癌旁正常組的17.50%(7/40)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=19.271，P<0.001)。

圖1 免疫組化檢測(cè)腮腺組織中CEACAM-1、VEGF蛋白的陽(yáng)性表達(dá) (SP,×200)Figure 1 Expression of CEACAM-1 and VEGF in parotid tissues of SAAC and normal tissues by immunohistochemistry (SP,×200)

2.2 CEACAM-1和VEGF的表達(dá)與SACC臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

CEACAM-1和VEGF在中/低分化組織中的表達(dá)率高于高分化者，在Ⅲ+Ⅳ期的陽(yáng)性率高于Ⅰ+Ⅱ期，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移組織中的陽(yáng)性表達(dá)率遠(yuǎn)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無肺轉(zhuǎn)移者，在伴脈管浸潤(rùn)組織中的陽(yáng)性率遠(yuǎn)高于無脈管浸潤(rùn)者，以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05，見表1)，而二者在性別、年齡及腫瘤部位中的表達(dá)則無明顯差異(均P>0.05，見表1)。

2.3 SACC組中CEACAM-1和VEGF表達(dá)的相關(guān)性

SAAC組中CEACAM-1和VEGF共同陽(yáng)性者21例，共同陰性7例，符合一致率為70.00%(28/40)兩者呈明顯正相關(guān)(r=0.545，P<0.001，見表2)，表明CEACAM-1和VEGF在SAAC病變的發(fā)生、進(jìn)展過程中具有協(xié)同作用。

表1 CEACAM-1和VEGF陽(yáng)性表達(dá)與SACC臨床病理參數(shù)的關(guān)系 例(%)

Table 1 Positive expression of CEACAM-1and VEGF in SACC tissue and its correlation with clinical pathological features cases(%)

臨床病理參數(shù)nCEACAM-1表達(dá)VEGF表達(dá)陽(yáng)性χ2P陰性χ2P性別1.1050.3061.5420.203 男2616(61.54)19(73.07) 女149(64.26)10(71.43)年齡1.4550.2131.1760.301 ≥50歲2416(66.67)18(75.00) <50歲169(56.25)11(68.75)腫瘤部位1.0710.3982.9470.106 小涎腺127(58.33)8(66.67) 大涎腺2818(64.29)21(75.00)病理分級(jí)10.8470.0009.6220.002 中/低分化2522(88.00)23(92.00) 高分化153(50.00)6(40.00)TNM分期5.1790.0227.2580.006 Ⅰ+Ⅱ2311(47.83)13(56.52) Ⅲ+Ⅳ1714(82.35)16(94.12)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移6.2590.0146.2810.013 有1412(85.71)13(92.86) 無2613(50.00)16(61.54)肺轉(zhuǎn)移6.6340.0127.8170.005 有76(85.71)7(100.00) 無3319(57.58)22(66.67)脈管浸潤(rùn)7.0460.0078.6500.003 有98(88.89)9(100.00) 無3117(54.84)22(70.97)

表2 SACC組中CEACAM-1和VEGF表達(dá)的相關(guān)性

Table 2 Correlation of CEACAM-1 and VEGF in SACC tissues

CEACAM-1VEGF+-合計(jì)rP+214250.5450.000-8715合計(jì)291140

3 討論

CEACAM-1系癌胚抗原家族中最保守的基因，位于染色體19q13.2區(qū)域，由9個(gè)外顯子，11個(gè)亞型構(gòu)成，其中多數(shù)亞型內(nèi)含CEACAM1-L和CEACAM1-S2個(gè)亞組，前者內(nèi)含72-74個(gè)氨基酸殘基，后者內(nèi)含12-14個(gè)氨基酸殘基[7，8]。CEACAM1-L內(nèi)含2個(gè)免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)，能通過磷酸化參與多個(gè)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，發(fā)揮其抑制下游信號(hào)的作用，而CEACAM1-S內(nèi)含原肌球蛋白、鈣調(diào)蛋白及肌動(dòng)蛋白的結(jié)構(gòu)域，對(duì)維系細(xì)胞骨架有重要的調(diào)節(jié)作用[9]。CEACAM-1廣泛表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、各類粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中，除以少數(shù)分泌形式分布于體液中外，大多數(shù)以跨膜形式表達(dá)于細(xì)胞中。研究表明：CEACAM-1在乳腺癌、肝癌、大腸癌、泌尿系腫瘤等惡性腫瘤中的表達(dá)明顯降低，其沉默或下調(diào)在惡性腫瘤發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用，因而CEACAM-1屬抑癌基因，能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖[10,11]；但近年來相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道CEACAM-1在胃癌、肺癌、甲狀腺癌、黑色素瘤等惡性腫瘤中呈高表達(dá)，且與腫瘤的惡性生物學(xué)行為呈正相關(guān)[12-14]，從這方面考慮，CEACAM-1系致癌基因，因而目前認(rèn)為CEACAM-1在腫瘤發(fā)生、進(jìn)展中有雙重作用。

VEGF作為一種特異性極高血管內(nèi)皮分裂原，能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞變形、遷移，分化和增殖，通過與VEGF-3等受體結(jié)合引起一系列信號(hào)傳導(dǎo)，釋放FGF、EGF等因子來誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞生成新生血管[15]。

本研究結(jié)果表明，CEACAM-1和VEGF在SACC組織中的陽(yáng)性表達(dá)遠(yuǎn)高于癌旁正常組織，因而CEACAM-1在SACC的病變過程中發(fā)揮致癌作用。且其在中、低分化組織中的表達(dá)明顯高于高分化組織，其與SACC的TNM分期、肺轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管浸潤(rùn)等均具有一定相關(guān)性，進(jìn)一步分析顯示二者在SACC病變中呈正相關(guān)。CEACAM-1能夠促進(jìn)腫瘤新生血管的形成，Zhu等[16]研究顯示：在腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞中CEACAM-1表達(dá)異常增高，而在成熟的各類血管中幾無表達(dá)，且通過外源性CEACAM-1刺激腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞后，腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、浸潤(rùn)及微血管腔形成的能力均有明顯提高，考慮在促血管生成的機(jī)制中CEACAM-1是VEGF一個(gè)極其重要的效應(yīng)分子，即CEACAM-1通過某種信號(hào)傳導(dǎo)可誘導(dǎo)VEGF表達(dá)上調(diào)，從而促進(jìn)血管生成。Kilic等[17]研究顯示：CEACAM-1的高表達(dá)會(huì)引起VEGF、VEGFR-2、Tie-2、angiopoietin-1、IL-8等血管形成因子表達(dá)上調(diào)，且CEACAM-1高表達(dá)能促進(jìn)微血管內(nèi)皮細(xì)胞向血管生成表型轉(zhuǎn)化。而Najjar等[18]應(yīng)用CEACAM-1抗體封閉血管內(nèi)皮細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)，微血管的生成轉(zhuǎn)化過程幾乎停滯。

總之，CEACAM-1的異常表達(dá)參與SACC的發(fā)生、進(jìn)展，并與血行浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為相關(guān)，其誘導(dǎo)VEGF的過表達(dá)可能是促進(jìn)其發(fā)展的重要途徑之一，因而，對(duì)二者作用機(jī)制的深入探討將有望為SACC精準(zhǔn)化診療提供科學(xué)依據(jù)。

[1] 王芹,馬賽,安峰,等.分化抑制蛋白-1和基質(zhì)金屬蛋白酶2在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志,2016,32(15):61-64.

[2] 付兆臣,關(guān)呈超,吳迪,等.涎腺腺樣囊性癌中血管生成擬態(tài)結(jié)構(gòu)的研究[J].實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志,2013,29(2):228-230.

[3] Huang J,Ledford KJ,Pitkin WB,etal.Targeted deletion of murine CEACAM 1 activates PI3K-Akt signaling and contributes to the expression of (Pro)renin receptor via CREB family and NF-kappaB transcription factors[J].Hypertension,2013,62(2):317-323.

[4] Aqil M,ElsethKM,Arjunakani A,etal.A549 cells adapted to high nitric oxide show reduced surface CEACAM expression and altered adhesion and migration properties[J].Tumour Biol,2015,36(3):1871-1879.

[5] 武雪亮,王立坤,薛軍,等.DNA結(jié)合分化抑制蛋白1和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)及其與腫瘤微血管生成的相關(guān)性研究[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志,2016,32(5):430-436.

[6] 張果,項(xiàng)峰,安峰,等.STAT3、VEGF蛋白在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)及對(duì)血管生成的影響[J].天津醫(yī)藥,2012,40(6):563-565.

[7] Ortenberg R,Sapir Y,Raz L,etal.Novel immunotherapy for malignant melanoma with amonoclonal antibody that blocks CEACAM1 homophilic interactions[J].Mol Cancer Ther,2012,11(6):1300-1310.

[8] Beauchemin N,Arabzadeh A.Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecules(CEACA Ms)in cancer progression and metastasis[J].Cancer Metastasis Rev,2013,32(3/4):643-671.

[9] Sato Y,Tateno H,Adachi J,et al.Generation of a monoclonal antibody recognizing the CEACAM glycan structure and inhibiting adhesion using cancer tissue-originated spheroid as an antigen[J].Sci Rep,2016,6:24823.

[10] 申寶鳴,畢永珺,劉福山.血清CEACAM-1和CEA聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌早期診斷的臨床意義[J].中國(guó)現(xiàn)代普外科雜志,2013,16(11):846-849.

[11] 許剛柱,李文,張鵬,等.RNA干擾技術(shù)下調(diào)CEACAM-1基因表達(dá)對(duì)膠質(zhì)瘤血管生成的影響[J].實(shí)用腫瘤學(xué)雜志,2014,28(6):514-518.

[12] Zhou MQ,Du Y,Liu YW,etal.Clinical and experimental studies regarding the expression and diagnostic value of carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1 in non-small-cell lung cancer[J].BMC Cancer，2013,13N:359.

[13] 孫健,羅玉鳳,曹金伶,等.S100A4及CEACAM-1蛋白與甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2010,26(6):696-700.

[14] Markel G,Ortenberg R,Seidman R,etal.Systemic dysregulation of CEACAM-1 in melanoma patients[J].Cancer Immunol Immunother,2010,59(2):215-230.

[15] Meng W,Li X,Bai Z,etal.Silencing alpha-fetoprotein inhibits VEGF and MMP-2/9 production in human hepatocellular carcinoma cell[J].PLoS One,2014,9(2):e90660.

[16] Zhu J,Yang Y,Ma C,etal.CEACAM-1 cytoplastic expression is closely related to tumor angiogenesis and poorer relapse-free survival after curative resection of hepatocellular carcinoma[J].World J Surg,2011,35(10):2259-2265.

[17] Kilic N,Oliveira-Ferrer L,Wurmbach JH,etal.Pro-angiogenic signaling by the endothelial presence of CEACAM-1[J].J Biol Chem,2005,280(3):2361-2369.

[18] Najjar SM,Ledford KJ,Abdallah SL,etal.Ceacam1 deletion causes vascular alterations in large vessels[J].Am J Physiol Endocrinol Metab,2013,305(4):E519-529.

Expression of CEACAM-1 and VEGF in salivary adenoid cystic carcinoma and its clinical significance

MA Sai1, AN Feng1*, XU Aiwen1, WANG Qin1, LIU Bo2,ZHANG Li1, LI Liheng1

(1DepartmentofOralMaxillofacialSurgery,FirstAffiliatedHospitalofHebeiNorthUniversity,Zhangjiakou075000,China;2DepartmentofPathology,FirstAffiliatedHospitalofHebeiNorthUniversity；*Correspondingauthor，E-mail:yfyanfeng@163.com)

ObjectiveTo investigate the expression of CEACAM-1 and vascular endothelial growth factor(VEGF) in salivary adenoid cystic carcinoma(SACC) and its relationship with invasion and metastasis.MethodsThe expression of CEACAM-1 and VEGF in 40 cases of SACC and 40 cases of tumor adjacent normal tissues were detected by immunohistochemical method. The relationships between their expression and clinicopathologic features in SACC were analyzed.ResultsThe positive expression rate of CEACAM-1 was significantly higher in SACC tissues than those in tumor adjacent normal tissues(62.5%vs12.5%,P<0.001).The positive expression rate of VEGF was significantly higher in SACC tissues than that in tumor adjacent normal tissues (72.5%vs17.5%,P<0.001).The positive expression rates of CEACAM-1 and VEGF in patients with lymph node metastasis and lung metastasis were higher than those in patients without metastasis, respectively(P<0.05).The positive expression rates of CEACAM-1 and VEGF were significantly higher in stage Ⅲ+Ⅳ patients than those in stage Ⅰ+Ⅱ patients(P<0.05),higher in middle-low differentiation patients than those in high differentiation patients(P<0.05), and also higher in vascular invasion patients than those in non-vascular invasion patients(P<0.05).There was no significant difference in positive expression of CEACAM-1 and VEGF among different gender, age and tumor size.There was a positive correlation beween the positive expression of CEACAM-1 and VEGF in SACC tissues(r=0.545,P<0.001).ConclusionThe expression of CEACAM-1 and VEGF may be closely correlated to the invasion and metastasis of SACC, and they may both paly important roles in the progression of SACC.

salivary adenoid cystic carcinoma; CEACAM-1; VEGF

河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題資助項(xiàng)目(20150059)；河北省政府資助臨床醫(yī)學(xué)優(yōu)秀人才培養(yǎng)和基礎(chǔ)課題研究項(xiàng)目(361009);河北張家口市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃資助項(xiàng)目(1421128D)

馬賽，男，1984-09生，碩士，主治醫(yī)師

2016-09-28

R739.8

A

1007-6611(2016)11-1022-04

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.11.016