川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠作用的研究

潘媛， 彭成， 劉建林

(成都中醫(yī)藥大學，成都 610075)

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DOI:10.11984/j.issn.1000-7083.20150364

川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠作用的研究

潘媛， 彭成*， 劉建林

(成都中醫(yī)藥大學，成都 610075)

目的 觀察川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠的作用。方法 將60只SD大鼠隨機分為正常對照組、模型組、佐米曲普坦組(0.83 mg每千克體質量)、川芎定痛顆粒高劑量組(1.75 g浸膏粉每千克體質量)、中劑量組(0.88 g浸膏粉每千克體質量)、低劑量組(0.44 g浸膏粉每千克體質量)6組，灌胃給予相應藥物5 d后，除正常對照組外，對大鼠皮下注射硝酸甘油每千克體質量10 mg，建立偏頭痛大鼠模型，通過ELASA方法檢測大鼠血漿中5-羥色胺(5-HT)、內皮素(ET)、去甲腎上腺素(NE)和腦組織中5-HT、多巴胺(DA)、NE的含量。結果 與正常對照組比較，模型組血漿中5-HT與ET含量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，川芎定痛顆粒高、中劑量組可明顯升高其含量，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，佐米曲普坦組、川芎定痛顆粒低劑量組有升高的趨勢；NE含量明顯降低，正常對照組與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，川芎定痛顆粒高劑量組可明顯升高其含量，而佐米曲普坦組、川芎定痛顆粒中、低劑量組則是含量降低，與模型組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與正常對照組比較，模型組腦組織內5-HT含量差異雖無統(tǒng)計學意義，但降低趨勢明顯，且川芎定痛顆粒高劑量組能明顯升高其含量，與模型組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，佐米曲普坦組、中、低劑量亦有升高的趨勢；與正常對照組比較，模型組腦組織內NE含量明顯升高，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，川芎定痛顆粒高、中劑量組能明顯降低其含量，與模型組比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；與正常對照組比較，模型組腦組織中DA含量降低，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，川芎定痛顆粒高、中劑量組能升高其含量，具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論 川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠有治療作用，其機制可能與調節(jié)模型大鼠血漿及腦組織內單胺類神經(jīng)遞質5-HT、NE、ET、DA含量有關。

川芎定痛顆粒; 偏頭痛; 單胺類神經(jīng)遞質

偏頭痛是一種間斷性反復發(fā)作的、以一側頭痛為主的搏動性頭痛疾病?，F(xiàn)代醫(yī)學之偏頭痛在中醫(yī)學中多屬內傷頭痛，屬于中醫(yī)“頭風”“腦風”“偏頭痛”“厥頭痛”等疾病范疇。川芎定痛顆粒為中藥復方制劑，主要由川芎、白芷、延胡索、鉤藤等藥組成，功效有活血鎮(zhèn)痛、平肝潛陽。皮下注射硝酸甘油所致的大鼠偏頭痛模型動物所出現(xiàn)的耳紅、震顫、前肢頻繁撓頭、煩躁不安、爬籠次數(shù)增多等現(xiàn)象與肝陽上亢證、風火上擾證的偏頭痛類似(王玲玲，范吉平，2007)。本文通過研究川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠的作用，探討其治療偏頭痛的效果及可能存在的機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗藥物 川芎定痛顆粒浸膏粉由奧康藥物研究所提供，每克浸膏粉相當于生藥5.6 g；陽性藥物：佐米曲普坦(國藥集團川抗制藥有限公司，生產(chǎn)批號100701)；硝酸甘油注射液(河南潤弘制藥股份有限公司，生產(chǎn)批號1202251)。

1.1.2 實驗動物 SD大鼠60只，雌雄各半，體質量200 g±20 g，由成都中醫(yī)藥大學實驗動物研究中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(川)2008-11，實驗動物使用許可證號：SYXK(川)2008-049。

1.1.3 主要試劑 大鼠5-羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒，批號201203；大鼠多巴胺(DA)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒，批號201203；大鼠去甲腎上腺素(NE)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒，批號201203；大鼠內皮素(ET)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒，批號201203。

1.1.4 主要儀器 多功能酶標儀(美國Thermo公司，Varioskan型)，冷凍離心機(美國Thermo公司，型號Legend Micro 17R)，電子恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司，型號DZKW-4)，分析天平(上海舜宇恒平科學儀器有限公司，型號JA1003)；低溫冰箱(日本三洋電器集團)。

1.2 方法

1.2.1 分組與給藥 待大鼠適應環(huán)境1周后，按體質量隨機分為6組，分別為模型組、正常對照組、川芎定痛顆粒高、中、低劑量組和佐米曲普坦組，每組10只。川芎定痛顆粒高、中、低劑量組分別灌胃給予川芎定痛顆粒浸膏粉1.75 g、0.88 g、0.44 g每千克體質量(分別相當于人臨床服用劑量的20倍、10倍、5倍)，佐米曲普坦組灌胃給予佐米曲普坦片0.83 mg每千克體質量(相當于人臨床推薦劑量5 mg的10倍)，模型組、正常對照組給予蒸餾水灌胃，各組給藥容積均為10 mL·kg-1，每日1次，連續(xù)灌胃5 d。

1.2.2 造模 除正常對照組外，各組在給藥第5天灌胃前1 h皮下注射硝酸甘油注射液，10 mg每千克體質量。正常對照組皮下注射等體積生理鹽水。

1.2.3 標本的采集與處理 于第5天造模4 h后，分別取大鼠動靜脈混合血5 mL于抗凝劑為10%EDTA-Na2的采血管和抗凝劑中。4 ℃ 3 000 rpm離心10 min，分離血漿，于低溫冰箱中-20 ℃儲存?zhèn)溆?。取血后，斷頭取腦，在0 ℃～4 ℃的生理鹽水中分離含腦干、丘腦、下丘腦區(qū)域的腦組織約300 mg，稱重，放入預先編號的錫箔紙中，置于-20 ℃低溫冰箱儲存，備用。按照試劑盒要求，測定血漿中5-HT、NE、ET含量，測定腦組織中5-HT、NE、DA含量。

2 結果

除正常對照組外，各組于皮下注射硝酸甘油后5～10 min，大鼠均出現(xiàn)搖頭、震顫、前肢頻繁撓頭、頭頸部抽動、煩躁不安，爬籠次數(shù)增多等反應。模型組大鼠的上述反應持續(xù)1.5 h后逐漸消失，大鼠表現(xiàn)為靜臥不動；給藥組大鼠的上述反應持續(xù)0.5 h后逐漸消失，大鼠表現(xiàn)為靜臥不動。

2.1 川芎定痛顆粒對偏頭痛大鼠血管活性物質的影響

與正常對照組比較，模型組血漿中5-HT與ET含量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，川芎定痛顆粒高、中劑量組可明顯升高其含量，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，佐米曲普坦組、川芎定痛顆粒低劑量組有升高的趨勢；NE含量明顯降低，正常對照組與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，川芎定痛顆粒高劑量組的含量明顯升高，而佐米曲普坦組、川芎定痛顆粒中、低劑量組則是含量降低，與模型組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表1)。

2.2 川芎定痛顆粒對偏頭痛大鼠腦組織神經(jīng)遞質的影響

與正常對照組比較，模型組腦組織內5-HT含量差異雖無統(tǒng)計學意義，但模型組含量降低趨勢明顯，且川芎定痛顆粒高劑量組的含量明顯升高，與模型組比較有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，佐米曲普坦組、川芎定痛顆粒中、低劑量組含量亦有升高的趨勢；與正常對照組比較，模型組腦組織內NE含量明顯升高，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，川芎定痛顆粒高、中劑量組的含量明顯降低，與模型組比較有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；與正常對照組比較，模型組腦組織內DA含量降低，有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，川芎定痛顆粒高、中劑量組的含量升高，與正常對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表2)。

表1 川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠血漿中活性物質含量的影響

表2 川芎定痛顆粒對硝酸甘油致偏頭痛大鼠腦組織內神經(jīng)遞質含量的影響

3 討論

5-HT又名血清素，是一種自體活性物質，約90%合成和分布于腸嗜鉻細胞，通常與ATP等物質一起儲存于細胞顆粒內。趙斌等(2008)以經(jīng)顱多普勒超聲檢查40例偏頭痛患者和30例正常者的顱內多條動脈的平均血流速度，高效液相色譜紫外光法測定患者血漿內5-HT含量來研究偏頭痛患者腦血流動力學與血漿內5-HT含量關系時發(fā)現(xiàn)，偏頭痛患者雙側大腦中動脈、雙側椎動脈以及基底動脈的血流速度與血漿內5-HT含量存在明顯正相關。本實驗在造模前預防給予川芎定痛顆粒，能明顯升高偏頭痛大鼠血漿中5-HT含量，推測川芎定痛顆?？赡苡姓{節(jié)偏頭痛前驅期5-HT大量從血小板釋放或發(fā)作期5-HT過度耗竭的作用，而具體是在哪個環(huán)節(jié)發(fā)揮作用還有待于進一步的研究。另外，模型大鼠腦組織內5-HT含量較正常組顯著下降，而提前給予川芎定痛顆?？梢燥@著升高偏頭痛大鼠腦組織內的5-HT含量，考慮可能與5-HT是一種痛調制遞質，調節(jié)中樞內5-HT含量可以防止偏頭痛發(fā)作期5-HT含量的過度減少所導致丘腦的痛閾值降低，疼痛敏感性增強(郭宇博，2010)。

NE、ET、DA也是與偏頭痛的發(fā)生密切相關的單胺類神經(jīng)遞質。有國外資料表明，偏頭痛病人血漿內DβH的活性較高，而DβH可以催化DA產(chǎn)生NE(Fettesetal,1985)。國內也有學者研究了偏頭痛患者的NE變化。謝煒等(1999)對20例無先兆偏頭痛患者進行了發(fā)作期和間歇期血漿以及血小板內NE含量的比較，結果發(fā)作期偏頭痛患者血漿中NE含量低于對照組，與本研究結果吻合。川芎定痛顆粒提高偏頭痛發(fā)作期血管中NE的含量可能還有利于對抗由于5-HT的大量耗竭而致使的血管擴張，減輕頭痛癥狀。硝酸甘油致偏頭痛大鼠腦組織內的NE含量較正常組高，與血漿內相反，預防給予川芎定痛顆粒能降低偏高的NE水平，有利于緩解頭痛。在偏頭痛發(fā)病過程中，DA是除5-HT外最重要的神經(jīng)遞質，但對其作用機制認識還較少(Masciaetal.,1998)。本研究中，川芎定痛顆粒預防給藥能升高硝酸甘油致偏頭痛大鼠腦組織內較低的DA水平。中外學者大量研究表明，ET可能通過血管收縮、增加微血管通透性及調節(jié)痛覺感知等參與了偏頭痛發(fā)作的病理生理過程，臨床上也檢測到偏頭痛患者在發(fā)作期和間歇期血漿內ET含量高于正常對照組(任旭，牛爭平，2005)。但本研究中硝酸甘油致偏頭痛大鼠血漿內ET含量低于正常對照組，與國內一些實驗研究結果相似(姚干，2002)。川芎定痛顆粒預防給藥可以升高偏頭痛大鼠血漿內降低的ET水平。實驗研究和臨床研究為什么會出現(xiàn)相悖的結果需要進一步的探討研究。

此外，本研究中僅檢測了5-HT、DA、NE、ET幾個對于偏頭痛比較重要的實驗指標。其他如降鈣素相關基因肽(CGRP)、一氧化氮(NO)、P物質、β-內啡肽、組織胺等重要的指標尚未檢測，未來的工作需要進一步完善，以進一步探索川芎定痛顆粒治療偏頭痛的機制。

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Study of the Effect of the Chuanxiong Dingtong Grains on the Rats with Migraine

PAN Yuan, PENG Cheng*, LIU Jianlin

(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China)

Objective To investigate the effect of Chuanxiong Dingtong grains (CXDT grains) on the rats with migraine. Method A total of 60 rats were randomly divided into 6 groups including the normal control group, the model control group, the zolmitriptan control group (0.83 mg·kg-1), the high-dose (1.75 g powdered extract per kg), the medium-dose (0.88 g powdered extract per kg) and the low-dose group (0.44 g powdered extract per kg). Five days after intragastric administration of appropriate drugs, except the normal control group, the rats were subcutaneously injected with nitroglycerin (10 mg·kg-1) to establish migraine rat model. The content of 5-hydroxytryptamine (5-HT), norepinephrine (NE), endothelin (ET) in the plasma and 5-HT, NE, dopamine (DA) in the brain were tested by ELASA. Results Compared with the normal control group, the contents of 5-HT, NE, and ET were significantly decreased (P<0.05) in the plasma of the migraine model rats, and the content of 5-HT in brain tissue showed a decreasing trend, the content of NE was significantly increased (P<0.05), and the content of DA was significantly decreased (P<0.05). Therefore, CXDT grains can significantly improve the active substance in rat plasma and brain neurotransmitter content of migraine rat model. Conclusion CXDT grains had a positive effect on the rats with migraine by adjusting the levels of the brain neurotransmitters.

Chuanxiong Dingtong grains; migraine; monoamine neurotransmitters

2015-11-18 接受日期：2016-01-30 基金項目:國家支撐計劃項目(2009BAI84B00)

潘媛(1987—), 女, 博士研究生, 助理實驗師, 研究方向: 中藥藥效與毒理學, E-mail:panyuan1129@163.com

*通信作者Corresponding author, E-mail:pengchengchengdu@126.com

Q95-33

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1000-7083(2016)02-0252-04