蟻獅多糖對(duì)小鼠炎癥模型影響的實(shí)驗(yàn)研究

王穎娟, 張培, 李子忠

(1. 興義民族師范學(xué)院，民族藥用生物資源研究與開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)室，貴州興義562400; 2. 貴州大學(xué)，貴陽(yáng)550025)

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DOI:10.11984/j.issn.1000-7083.20150269

蟻獅多糖對(duì)小鼠炎癥模型影響的實(shí)驗(yàn)研究

王穎娟1, 張培1, 李子忠2

(1. 興義民族師范學(xué)院，民族藥用生物資源研究與開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)室，貴州興義562400; 2. 貴州大學(xué)，貴陽(yáng)550025)

目的 研究蟻獅多糖對(duì)小鼠不同炎癥模型的抗炎抑制作用。方法 將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、西藥對(duì)照組和蟻獅多糖高、中、低劑量組(500 mg·kg-1、250 mg·kg-1、125 mg·kg-1)，建造不同類(lèi)型的小鼠炎癥模型，各種炎癥模型均設(shè)5組試藥組灌胃給藥，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后考察小鼠耳廓腫脹度、毛細(xì)血管通透性、肉芽腫濕重、足跖腫脹度等不同炎癥模型的檢驗(yàn)指標(biāo)。結(jié)果 與對(duì)照組相比，蟻獅多糖對(duì)小鼠耳廓腫脹、瓊脂性肉芽組織增生、足跖腫脹有極顯著的抑制作用，對(duì)實(shí)驗(yàn)性腹膜炎的抑制作用顯著，顯著降低小鼠的扭體反應(yīng)。結(jié)論 蟻獅多糖具有顯著的抗腫脹性炎癥、抗?jié)B出性炎癥、抗增生性炎癥以及鎮(zhèn)痛作用。

蟻獅多糖；炎癥；抑制作用

蟻獅(antlion)別名地牯牛、沙猴、倒退蟲(chóng)、沙牛等，隸屬脈翅目Neuroptera蟻蛉科Myrmeleontidae，是一種重要的藥用昆蟲(chóng)(藥用動(dòng)物志協(xié)作組，1983；周漢輝，楊集昆，2000)。其性味咸、辛、溫，歸肝、腎、膀胱經(jīng)，解熱，鎮(zhèn)痛，化療毒，祛瘀散結(jié)等，可用于沙淋、瘧疾、骨髓炎、脈管炎、泌尿系結(jié)石、膽結(jié)石等癥(吳德鄰，1994)，尤其對(duì)骨髓炎、脈管炎有奇效(王華明，王華新，1993；王啟民，1991；吳鈞俊，2003)。蟻獅作為一種傳統(tǒng)的藥用昆蟲(chóng)，為全蟲(chóng)入藥，藥用成分不明確，目前尚未見(jiàn)對(duì)蟻獅藥用活性成分的相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定蟻獅多糖對(duì)小鼠幾種炎癥模型的影響，以期為蟻獅的有效藥用成分的確定提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)KM小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量20 g±2 g, 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(黔)2012-0001，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(黔)2012-0001，購(gòu)于貴州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.2 藥品及試劑 萘丁美酮片，中美史克制藥有限公司。西米替丁，山西省大同市利群藥業(yè)有限公司。伊文思藍(lán)(Evan’s blue)，北京百泰克生物技術(shù)有限公司進(jìn)口分裝。無(wú)水乙醇、醋酸、二甲苯均購(gòu)于成都化學(xué)試劑廠。

蟻獅多糖按照優(yōu)化的多糖提取工藝(另文發(fā)表)自制，配制為高、中、低3個(gè)劑量組，受試物劑量均折算為原動(dòng)物生藥劑量，分別為500 mg·kg-1、250 mg·kg-1、125 mg·kg-1。

1.2 方法

1.2.1 急性毒性試驗(yàn) 小鼠隨機(jī)分為4組，每組12只，小鼠給藥前隔夜禁食不禁水，編號(hào)后將提取物一次性經(jīng)口灌胃給藥。受試物分4個(gè)劑量組，高劑量組為提取原液，按1∶0.8設(shè)組間間距。給藥2 h后進(jìn)食。連續(xù)觀察小鼠灌胃14 d后的毒性反應(yīng)，計(jì)算半致死數(shù)量(LD50)。處死小鼠后解剖，觀察各臟器變化。

1.2.2 對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹作用和毛細(xì)血管通透性改變的影響 小鼠隨機(jī)分為5組，每組12只。各組均灌胃給藥，對(duì)照組給予生理鹽水0.1 mL/10 g體質(zhì)量，每天1次，連續(xù)4 d。末次灌胃2 h后，尾靜脈注射Evan’s blue 50 mg·kg-1，于小鼠右耳雙面涂二甲苯(25 L每面，20 min后拉頸處死，沿耳廓基線(xiàn)剪下雙耳，用7.5 mm的打孔器分別在雙耳同一部位打下耳片，稱(chēng)重，計(jì)算腫脹度。兩耳片剪碎，分別置于3 mL丙酮-生理鹽水(V/V=7∶3)中浸泡24 h，離心15 min取上清，于610 nm波長(zhǎng)處用分光光度計(jì)比色，計(jì)算毛細(xì)血管通透性。

1.2.3 對(duì)小鼠瓊脂性肉芽組織增生的影響 沿小鼠背部中線(xiàn)皮下注射無(wú)菌2%瓊脂每只0.5 mL。24 h后隨機(jī)分為5組，每組12只。各組均經(jīng)口灌胃給藥，對(duì)照組給予生理鹽水0.1 mg/10 g體質(zhì)量。每天1次，連續(xù)7 d，末次灌胃后24 h拉頸處死。剪開(kāi)背部皮膚，剝離肉芽腫瓊脂塊，用分析天平迅速稱(chēng)量肉芽腫濕重。

1.2.4 對(duì)雞蛋清致小鼠足跖腫脹的影響 小鼠隨機(jī)分為5組，每組12只。均經(jīng)口灌胃給藥或給予生理鹽水，每天1次，連續(xù)4 d。末次灌胃30 min后麻醉小鼠，于每只小鼠右后足跖皮下注射新配成的10%濃度的雞蛋清0.1 mL。觀察腫脹達(dá)到高峰時(shí)間和消退時(shí)間，計(jì)算與0 h時(shí)足跖厚度的差值，用以表示腫脹度。當(dāng)抑制率>30%且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)，則可評(píng)定有抗炎作用。

1.2.5 對(duì)小鼠醋酸性扭體反應(yīng)的影響 小鼠隨機(jī)分為5組，每組12只。各組均經(jīng)口灌胃給藥或給予生理鹽水，每天1次，連續(xù)4 d。末次灌胃2 h后，尾靜脈注射2% Evan’s blue 0.1 mL，10 min后，腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL。觀察20 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)，計(jì)算抑制率。

1.2.6 對(duì)實(shí)驗(yàn)性腹膜炎小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響 小鼠隨機(jī)分為5組，每組12只。各組均經(jīng)口灌胃給藥或給予生理鹽水，每天1次，連續(xù)4 d。末次灌胃2 h后，尾靜脈注射2%Evan’s blue 0.1 mL，10 min后，腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 mL，造成實(shí)驗(yàn)性腹膜炎模型。20 min后處死，剪開(kāi)腹腔，用2 mL生理鹽水沖洗腹腔，沖洗3次，吸取腹腔洗出液，混勻后取1滴于細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)白細(xì)胞量，余液離心15 min后取上清液，于590 nm波長(zhǎng)處用分光光度計(jì)比色，測(cè)得的吸光度值表示腹腔毛細(xì)血管通透性，計(jì)算抑制率。

1.2.7 對(duì)小鼠醋酸燒灼性胃潰瘍、無(wú)水乙醇胃粘膜損傷的抑制作用 小鼠隨機(jī)分為10組，每組12只，各組均經(jīng)口灌胃給藥或給予生理鹽水，每日1次，連續(xù)4 d。從第2天給藥后開(kāi)始禁食48 h。于末次灌胃2 h后，分組灌胃1%醋酸、無(wú)水乙醇0.6 mL，1 h后處死，結(jié)扎幽門(mén)和賁門(mén)。取出胃，胃內(nèi)注射生理鹽水0.5～1 mL，置于10%福爾馬林溶液中固定10 min后，沿胃大彎切開(kāi)。觀察并評(píng)定潰瘍指數(shù)。潰瘍指數(shù)評(píng)定方法：胃腺區(qū)出現(xiàn)條索狀損傷的長(zhǎng)度大于1 mm者，測(cè)量其長(zhǎng)度，每mm計(jì)1分，寬度大于1 mm者計(jì)分加倍，長(zhǎng)度和寬度均小于1 mm者，計(jì)0.5分，計(jì)分相加即為小鼠的潰瘍指數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 蟻獅多糖的急性毒性試驗(yàn)

給藥后，連續(xù)觀察14 d未見(jiàn)小鼠死亡，小鼠生長(zhǎng)良好，外觀、行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、飲食、大小便及顏色、皮膚和皮毛等均未見(jiàn)異常，給藥14 d后，體質(zhì)量均有增加。處死小鼠后解剖，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等各種內(nèi)臟器官，與未給藥小鼠相比均無(wú)異常改變。受試物L(fēng)D50大于3000 mg·kg-1，表明受試物無(wú)急性中毒的危險(xiǎn)性，屬于基本無(wú)毒的化學(xué)物。

2.2 對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹作用和毛細(xì)血管通透性改變的影響

對(duì)照組小鼠右耳與左耳相比明顯腫脹，耳片增厚，血管擴(kuò)張，Evan’s blue在整個(gè)右耳炎癥組織中均有分布，蓄積程度增高明顯，耳片呈現(xiàn)出藍(lán)色，蟻獅多糖高、中劑量組小鼠右耳的炎癥反應(yīng)明顯較弱，對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹和毛細(xì)血管通透性增加的抑制率均大于30%；與對(duì)照組相比，蟻獅多糖高、中、低劑量組小鼠的毛細(xì)血管通透性明顯降低(P<0.01，P<0.01，P<0.01)；與萘丁美酮效果相近。提示蟻獅多糖有降低炎癥滲出、水腫的作用，有利于減輕急性炎癥時(shí)臟器水腫、阻塞的病理改變(表1)。

表1 蟻獅多糖對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹作用和毛細(xì)血管通透性改變的影響

2.3 對(duì)小鼠瓊脂性肉芽組織增生的影響

對(duì)照組小鼠肉芽腫周?chē)軘U(kuò)張、出血明顯；其余各組小鼠肉芽腫周?chē)^干凈，無(wú)出血、紅腫情況。蟻獅多糖各劑量組對(duì)小鼠瓊脂性肉芽組織增生均有一定程度的抑制作用，抑制作用的大小存在差異(表2)。蟻獅多糖高、中劑量組能明顯抑制小鼠瓊脂性肉芽組織增生，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，P<0.05)。提示蟻獅多糖抗慢性增生性炎癥的作用與劑量相關(guān)。

表2 蟻獅多糖對(duì)小鼠瓊脂性肉芽組織增生的抑制作用

2.4 對(duì)雞蛋清致小鼠足跖腫脹的影響

各組均在注射雞蛋清后60 min達(dá)到腫脹高峰，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3)。高劑量蟻獅多糖在抑制雞蛋清致小鼠足跖腫脹中有非常明顯的作用，表現(xiàn)為達(dá)到腫脹高峰時(shí)腫脹度最低，說(shuō)明在藥物的作用下，小鼠對(duì)致炎因子的致炎作用敏感性降低；腫脹消退時(shí)間短，90 min后足跖厚度基本恢復(fù)到正常水平。

表3 蟻獅多糖對(duì)雞蛋清致小鼠足跖腫脹的抑制作用

2.5 對(duì)小鼠醋酸性扭體反應(yīng)的抑制作用

與對(duì)照組比較，蟻獅多糖各劑量組能顯著降低小鼠的扭體反應(yīng)(P<0.01或P<0.05)(表4)。說(shuō)明蟻獅多糖具有一定的鎮(zhèn)痛作用。

2.6 對(duì)實(shí)驗(yàn)性腹膜炎小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的抑制作用

與對(duì)照組比較，蟻獅多糖高、中劑量組對(duì)實(shí)驗(yàn)性腹膜炎小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高有明顯抑制作用(P<0.05)；蟻獅多糖低劑量組與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表5)。說(shuō)明蟻獅多糖對(duì)急性滲出炎癥具有一定的抑制作用。

2.7 對(duì)小鼠醋酸燒灼性胃潰瘍和無(wú)水乙醇胃粘膜損傷的抑制作用

蟻獅多糖各劑量組小鼠2種類(lèi)型胃潰瘍的潰瘍指數(shù)與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表6)，表明蟻獅多糖對(duì)小鼠醋酸性胃潰瘍和無(wú)水乙醇胃粘膜損傷沒(méi)有抑制作用。

3 討論

炎癥是人類(lèi)疾病中一種最常見(jiàn)的病理過(guò)程，是具有血管系統(tǒng)的活體組織對(duì)損傷因子所發(fā)生的防御反應(yīng)，可以發(fā)生在機(jī)體的任何部位或組織，以血管反應(yīng)為主要特征和防御的中心環(huán)節(jié)(歐陽(yáng)學(xué)農(nóng)等，2006；孟慶龍等，2011；李偉平等，2012)。骨髓炎是由細(xì)菌侵入機(jī)體而致的一種化膿性感染病，是整個(gè)骨組織，包括骨膜、骨皮質(zhì)、骨髓均受感染而產(chǎn)生的一系列病變，并不是人們通常所理解的單純骨髓發(fā)炎。在感染的急性期，病變區(qū)有滲出性改變，骨髓腔內(nèi)有滲出液和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，引起骨組織炎癥發(fā)生，骨壞死和局部感染擴(kuò)散，可穿過(guò)骨皮質(zhì)播散至骨膜下并形成皮下膿腫，嚴(yán)重會(huì)造成死骨、死腔、竇道的形成。骨髓炎一般伴隨炎癥的發(fā)生。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的急、慢性化膿性骨髓炎在中醫(yī)上稱(chēng)為附骨疽(張麗華等，1999)。多種醫(yī)書(shū)記載蟻獅具有治療骨髓炎作用，郭永來(lái)(2010)在《杏林集葉》記載了以蟻獅為君藥的處方，療效獨(dú)特；蟻獅也被廣西某醫(yī)院用于治療骨髓炎的主藥，治療效果達(dá)90%以上(吳鈞俊，2003)。

表4 蟻獅多糖對(duì)小鼠醋酸性扭體反應(yīng)的抑制作用

表5 蟻獅多糖對(duì)醋酸性小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的抑制作用

表6 蟻獅多糖對(duì)小鼠醋酸性燒灼型胃潰瘍、無(wú)水乙醇致胃粘膜損傷的抑制作用

本文進(jìn)行了蟻獅多糖抗炎藥效學(xué)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，以期用實(shí)驗(yàn)證據(jù)證明其是否具有抗炎作用。實(shí)驗(yàn)考察了蟻獅多糖對(duì)小鼠不同炎癥模型的抑制作用，結(jié)果顯示蟻獅多糖具有顯著的抗腫脹性炎癥、抗?jié)B出性炎癥、抗增生性炎癥以及鎮(zhèn)痛的作用，對(duì)確定蟻獅藥用的有效成分有重要意義。

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Effecets of Antlion Polysaccharide on Different Inflammation Models of Mice

WANG Yingjuan1, ZAHNG Pei1, LI Zizhong2

(1. Key Laboratory on Research and Development of Ethnic Medicinal Biological Resources, Xingyi Normal University for Nationalities, Xingyi, Guizhou Province 562400, China; 2. Guizhou University, Guiyang 550025, China)

Objective To investigate the anti-inflammatory effects of antlion polysaccharide on different inflammation mice models. Methods To construct different inflammation mice models, mice were randomly divided into control group, western medicine control group, low-dose group (treated with antlion polysaccharide at concentration of 125 mg·kg-1), medium-dose group (treated with antlion polysaccharide at concentration of 250 mg·kg-1), and high-dose group (treated with antlion polysaccharide at concentration of 500 mg·kg-1). Subsequently, 5 groups of mice were treated with intragastric administration followed by measuring the test indices such as the swell of mice's auricle, capillary permeability, wet weight of granuloma, and swelling degrees of foot metatarsus. Results Antlion polysaccharide had extremely significant inhibition on the swell of mice's auricle, the agaroid proliferation of granuloma and the swell of foot metatarsus, and can significantly inhibit the experimental peritonitis and reduce body torsion reaction of mice. Conclusions Antlion polysaccharide had significant inhibition on swelling inflammation, exudative inflammation, proliferative inflammation and pain.

antlion polysaccharide; inflammation; inhibition

2015-09-05 接受日期：2015-11-21 基金項(xiàng)目:貴州省科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目: 黔科合J字[2012]2323號(hào); 貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開(kāi)發(fā)專(zhuān)項(xiàng): 黔科合中藥字[2013]5038號(hào); 黔科合人才團(tuán)隊(duì)字[2013]30

王穎娟, 女, 博士, 副教授, 從事藥用昆蟲(chóng)資源的研究與開(kāi)發(fā), E-mail:wangyj1982@126.com

Q95-33

A

1000-7083(2016)02-266-04