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    CPE在膽囊膽固醇結(jié)石患者肝臟的表達(dá)水平

    2016-12-12 05:52:07何志偉甘躍力
    肝臟 2016年11期
    關(guān)鍵詞:膽汁膽固醇膽囊

    何志偉 甘躍力

    ?

    ·臨床與基礎(chǔ)研究·

    CPE在膽囊膽固醇結(jié)石患者肝臟的表達(dá)水平

    何志偉 甘躍力

    目的 研究羧肽酶E(CPE)在膽囊膽固醇結(jié)石患者肝臟的表達(dá)水平,探討兩者之間的相關(guān)性。方法 選取我院2012年6月到2015年6月期間收治肝膽手術(shù)患者術(shù)中留取肝標(biāo)本39例,以其中膽囊膽固醇結(jié)石患者24例作為觀察組,以未患膽囊膽固醇結(jié)石患者15例作為對(duì)照組。分別測(cè)定血清甘油三酯和總膽固醇,膽汁中膽汁酸、磷脂和膽固醇含量和膽固醇飽和指數(shù),并檢測(cè)肝臟CPE表達(dá)水平。結(jié)果 觀察組血清甘油三酯、總膽固醇,膽汁中膽汁酸、磷脂與對(duì)照組相比,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t≤1.479,均P>0.05)。觀察組膽汁膽固醇含量(11.42±1.24 mmol/L)和膽固醇飽和指數(shù)(1.31±0.14)明顯高于對(duì)照組(8.72±1.05 mmol/L和1.06±0.12),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t≥13.421,均P<0.05)。觀察組肝臟CPE表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-58.341,P<0.05)。相關(guān)性分析表明,肝臟CPE表達(dá)水平與膽汁中膽固醇含量(r=-0.532)和膽固醇飽和指數(shù)(r=-0.614)具有顯著負(fù)相關(guān)(均P<0.05)。結(jié)論 膽囊膽固醇結(jié)石的主要影響因素在于患者膽汁膽固醇含量和飽和度,肝臟CPE表達(dá)水平下降與膽囊膽固醇結(jié)石的形成有關(guān),其作用機(jī)制可能是肝臟CPE表達(dá)水平的變化對(duì)膽汁膽固醇含量和飽和度的改變。

    膽囊;膽固醇結(jié)石;肝臟;羧肽酶E

    膽囊結(jié)石是臨床上常見(jiàn)的膽囊良性疾病,隨著近年來(lái)生活水平的提高和生活方式的改變,膽囊膽固醇結(jié)石的發(fā)病率在膽囊結(jié)石中的比例不斷上升[1]。膽囊膽固醇結(jié)石的發(fā)病機(jī)理十分復(fù)雜,包括環(huán)境因素、遺傳因素及其復(fù)合作用,具有多個(gè)易感基因,包括膽固醇合成、轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因如ABG5/8、NPC1l1、LXR等,膽囊膽固醇成核相關(guān)基因如MUC5AC等,胰島素抵抗基因RBP4等[2]。羧肽酶E(CPE)是一種多功能的蛋白,對(duì)內(nèi)分泌和神經(jīng)系統(tǒng)具有重要的調(diào)節(jié)作用。研究表明肝臟CPE表達(dá)水平可能與膽囊膽固醇結(jié)石的形成有密切的關(guān)系[3]。本研究對(duì)膽囊膽固醇結(jié)石患者肝臟CPE表達(dá)水平進(jìn)行研究,現(xiàn)報(bào)道如下。

    資料和方法

    一、一般資料

    選取我院2012年6月到2015年6月期間收治的肝膽手術(shù)患者術(shù)中留取肝標(biāo)本39例。以其中膽囊膽固醇結(jié)石患者24例作為觀察組,以未患膽囊膽固醇結(jié)石患者15例作為對(duì)照組(主要為肝臟良性腫瘤、外傷等患者)。其中觀察組(n=24例)男13例,女11例,平均年齡53.65±8.38歲,平均體質(zhì)量指數(shù)(BMI)為23.24±2.79 kg/m2;對(duì)照組(n=15例)男8例,女7例,平均年齡55.43±9.25歲,平均BMI為22.87±2.65 kg/m2。兩組患者性別、年齡、BMI等一般資料比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05),具有可比性。

    二、檢測(cè)方法

    (一)血脂檢測(cè) 抽取患者空腹血,離心取血清,采用酶法測(cè)定血清甘油三酯和總膽固醇。

    (二) 膽汁檢測(cè) 膽汁抽取后,采用酶法測(cè)定膽汁中膽汁酸、磷脂和膽固醇含量,并計(jì)算膽汁中膽固醇飽和指數(shù)(CSI)

    (三)肝臟中CPE表達(dá)水平檢測(cè) 提取肝臟組織的總蛋白,采用免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)肝臟CPE的表達(dá)水平。操作步驟如下:SDS-聚丙烯酰胺凝膠(PAGE)電泳分離提取的總蛋白并以濕轉(zhuǎn)法進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,轉(zhuǎn)膜后的PVDF膜于5%脫脂奶粉溶液中封閉1 h,置于稀釋的一抗中4℃孵育過(guò)夜,然后以辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記二抗室溫下孵育2 h,與暗室中進(jìn)行顯影,以內(nèi)參對(duì)比,通過(guò)灰度掃描法計(jì)算肝臟CPE的相對(duì)表達(dá)水平。

    結(jié) 果

    一、兩組患者血清和膽汁指標(biāo)比較

    兩組患者血清和膽汁生化指標(biāo)比較如表1。觀察組血清甘油三酯、血清總膽固醇、膽汁膽汁酸、膽汁磷脂與對(duì)照組相比,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t≤1.479,均P>0.05)。觀察組膽汁膽固醇含量(11.42±1.24 mmol/L)和膽固醇飽和指數(shù)(1.31±0.14)明顯高于對(duì)照組(8.72±1.05 mmol/L和1.06±0.12),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t≥13.421,均P<0.05)。

    表1 兩組患者血清和膽汁生化指標(biāo)比較(±s)

    注:*與對(duì)照組相比,P<0.05

    二、兩組肝臟CPE表達(dá)水平比較

    兩組肝臟CPE表達(dá)水平比較如圖1。觀察組肝臟CPE表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-58.341,P<0.05)。相關(guān)性分析表明,肝臟CPE表達(dá)水平與膽汁中膽固醇含量(r=-0.532)和膽固醇飽和指數(shù)(r=-0.614)具有顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(均P<0.05)。

    注:*與對(duì)照組相比,P<0.05

    討 論

    膽囊膽固醇結(jié)石形成的主要誘因在于膽汁中膽固醇含量過(guò)高,達(dá)到過(guò)飽和的情況而從膽汁中析出,從而形成膽囊結(jié)石[4]。肝臟是膽汁分泌的源頭,目前對(duì)于肝臟中影響膽汁分泌的基因和蛋白對(duì)膽囊結(jié)石影響的研究是熱點(diǎn)之一。郭嵩等[5]綜述了膽囊結(jié)石的易感基因,其認(rèn)為肝臟中包括脂類(lèi)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)脂類(lèi)轉(zhuǎn)運(yùn)器、脂類(lèi)調(diào)節(jié)酶、脂蛋白受體等多種基因均是膽囊結(jié)石的易感基因,其表達(dá)水平的不同對(duì)膽囊結(jié)石的形成有重要影響。CPE是一種多功能的蛋白,其對(duì)內(nèi)分泌具有重要的作用,并具有作為腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的生物標(biāo)志物的潛力[6-7]。最新研究表明,肝臟CPE表達(dá)水平與膽囊膽固醇結(jié)石的形成有密切的關(guān)系,CPE表達(dá)水平與膽囊收縮素(CCK)顯著正相關(guān),其可能是CPE影響膽汁中的膽固醇含量變化并進(jìn)而形成膽囊膽固醇結(jié)石的主要機(jī)制之一[8]。

    本研究中,觀察組血清甘油三酯、血清總膽固醇、膽汁膽汁酸、膽汁磷脂與對(duì)照組相比,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t≤1.479,均P>0.05)。觀察組膽汁膽固醇含量(11.42±1.24 mmol/L)和膽固醇飽和指數(shù)(1.31±0.14)明顯高于對(duì)照組(8.72±1.05 mmol/L和1.06±0.12),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t≥13.421,均P<0.05)。說(shuō)明膽囊膽固醇結(jié)石的主要影響因素在于患者膽汁膽固醇含量和膽汁中膽固醇飽和程度,而血清血脂和膽汁膽汁酸、磷脂則無(wú)明顯影響。本研究結(jié)果與楊士勇等[9]對(duì)膽囊膽固醇結(jié)石患者血清和膽汁分析結(jié)果一致,其認(rèn)為肝臟中易感基因的LRH-1及其調(diào)控基因的高水平表達(dá)造成膽汁中膽固醇含量升高并形成膽囊膽固醇結(jié)石的主要影響因素。此外,本研究中觀察組肝臟中CPE表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-58.341,P<0.05)。說(shuō)明膽囊膽固醇結(jié)石患者肝臟中CPE的表達(dá)水平較普通患者低,其可能是膽囊膽固醇結(jié)石形成的相關(guān)因素。

    膽汁代謝是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,林晶等[10]對(duì)膽囊膽固醇結(jié)石的發(fā)生與膽汁代謝相關(guān)調(diào)節(jié)蛋白的關(guān)系進(jìn)行了研究,其認(rèn)為膽汁代謝相關(guān)調(diào)節(jié)蛋白對(duì)膽汁分泌的影響在膽囊膽固醇結(jié)石發(fā)生中具有重要的意義。而CPE具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的功能,其可能對(duì)肝臟膽汁分泌和其中的膽固醇含量產(chǎn)生一定的影響[11]。相關(guān)性分析表明,肝臟中CPE表達(dá)水平與膽汁中膽固醇含量(r=-0.532)和膽固醇飽和指數(shù)(r=-0.614)具有顯著負(fù)相關(guān)(均P<0.05)。肝臟CPE表達(dá)水平的下降提高了患者膽汁中的膽固醇含量和飽和度,肝臟CPE表達(dá)水平的變化對(duì)膽汁分泌的影響可能是導(dǎo)致膽囊膽固醇結(jié)石的發(fā)生重要作用機(jī)制。

    綜上所述,膽囊膽固醇結(jié)石的主要影響因素在于患者膽汁膽固醇含量和飽和度,肝臟CPE表達(dá)水平的下降與膽囊膽固醇結(jié)石的形成有關(guān),其作用機(jī)制可能是肝臟CPE表達(dá)水平的變化對(duì)膽汁膽固醇含量和飽和度的改變。

    [ 1 ] 尹純林, 項(xiàng)和平, 洪磊,等. 脂聯(lián)素、胰島素抵抗在膽囊膽固醇結(jié)石形成中的作用. 肝膽胰外科雜志, 2012, 24:96-98.

    [ 2 ] 劉姍, 許國(guó)強(qiáng). 膽囊膽固醇結(jié)石癥易感基因的研究進(jìn)展. 國(guó)際消化病雜志, 2014, 34:182-183.

    [ 3 ] 楊士勇, 韓天權(quán), 蔣兆彥,等. 基因芯片法檢測(cè)膽囊膽固醇結(jié)石病人肝臟羧肽酶E的表達(dá). 外科理論與實(shí)踐, 2006, 11:212-216.

    [ 4 ] 林晶, 陳進(jìn)宏. 膽汁代謝相關(guān)調(diào)節(jié)蛋白與膽囊膽固醇結(jié)石. 外科理論與實(shí)踐, 2013, 18:493-496.

    [ 5 ] 郭嵩, 曹紅勇, 楊士勇. 膽囊結(jié)石致石基因的研究進(jìn)展. 外科理論與實(shí)踐, 2013, 18:94-98.

    [ 6 ] 譚金鳳, 尚建紅, 沈宏偉,等. 羧肽酶E——腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移的潛在標(biāo)志物. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志, 2015, 31:1362-1364.

    [ 7 ] 周坤,姜曉峰,梁紅艷. 羧肽酶E的高表達(dá)與腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移相關(guān). 實(shí)用腫瘤學(xué)雜志, 2012, 26:158-161.

    [ 8 ] 戴樹(shù)龍, 楊士勇, 潘超,等. 膽囊膽固醇結(jié)石患者肝臟羧肽酶E表達(dá). 江蘇醫(yī)藥, 2015, 41:265-267.

    [ 9 ] 楊士勇, 楊坤興, 陳毛冰,等. 膽囊膽固醇結(jié)石患者肝臟LRH-1及調(diào)控基因蛋白表達(dá)差異. 浙江臨床醫(yī)學(xué), 2013, 15:1281-1283.

    [10] 劉換新, 周東, 游娟,等. 羧基肽酶E(CPE)在人乳腺腺癌中的表達(dá)和功能. 復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2013, 40:523-528.

    (本文編輯:易玲)

    200040 上海 上海郵電醫(yī)院外科

    何志偉,Email:hezhiweiwv@163.com

    2016-06-20)

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