液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜直接進(jìn)樣法測(cè)定人尿中的沙丁胺醇

申利景晶于璦旗張力思徐友宣董穎何根業(yè)

1國(guó)家體育總局反興奮劑中心（北京 100029）2北京體育大學(xué)（北京100084）

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜直接進(jìn)樣法測(cè)定人尿中的沙丁胺醇

申利1景晶1于璦旗2張力思1徐友宣1董穎1何根業(yè)1

1國(guó)家體育總局反興奮劑中心（北京 100029）2北京體育大學(xué)（北京100084）

沙丁胺醇（salbutamol）為世界反興奮劑機(jī)構(gòu)（WADA）頒布的《禁用清單》中的閾值物質(zhì)，興奮劑檢測(cè)工作需要對(duì)其進(jìn)行定量測(cè)定。尿樣加入內(nèi)標(biāo)后用5%醋酸鉛溶液沉淀蛋白并稀釋尿樣，無需其它前處理步驟，直接進(jìn)樣于高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜儀（HPLC-MS/MS）進(jìn)行分析，使用ZORBAX SB-aq柱進(jìn)行分離，使用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式進(jìn)行測(cè)定，建立了閾值物質(zhì)沙丁胺醇的定量檢測(cè)方法并進(jìn)行了方法驗(yàn)證。尿中定量限為0.02 μg/ml，線性范圍（r2＞0.99）為0.02～10 μg/ml，實(shí)驗(yàn)的日內(nèi)精密度和日間精密度（CV）分別為2.67%和3.02%，測(cè)量不確定度為5.36%。閾值濃度時(shí)的定量偏差均小于10%。尿樣無需水解和提取，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確。該方法可應(yīng)用于常規(guī)檢測(cè)和WADA外部質(zhì)量評(píng)估計(jì)劃。

沙丁胺醇；禁用清單；閾值物質(zhì)；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；直接進(jìn)樣

沙丁胺醇（salbutamol）屬于β2激動(dòng)劑，是臨床上應(yīng)用很廣泛的藥物，主要用于治療和預(yù)防哮喘發(fā)作，近年來有研究發(fā)現(xiàn)伴隨其支氣管擴(kuò)張作用的同時(shí)，大劑量的使用此藥具有促進(jìn)蛋白合成、脂肪分解的蛋白同化作用[1-4]，因而WADA將其列入禁用清單中。由于有些運(yùn)動(dòng)員確實(shí)需要治療哮喘，因而WADA規(guī)定允許運(yùn)動(dòng)員用于治療目的吸入沙丁胺醇（最大吸入量1600 mg/ 24 hr），而口服沙丁胺醇則構(gòu)成違規(guī)[5]。文獻(xiàn)表明口服或吸入給藥后，24%～33%的沙丁胺醇以原型形式經(jīng)尿排泄，48%左右以硫酸酯形式在尿中存在[6,7]。WADA技術(shù)文件規(guī)定沙丁胺醇為閾值物質(zhì)，尿中閾值為1.0 μg/ml。明確規(guī)定實(shí)驗(yàn)室只須對(duì)游離和葡萄糖醛酸結(jié)合的沙丁胺醇進(jìn)行定量，超過閾值檢測(cè)限濃度1.2 μg/ml時(shí)報(bào)告陽性結(jié)果[8]。2004年奧運(yùn)會(huì)期間雅典興奮劑檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)認(rèn)為尿中葡萄糖醛酸結(jié)合的沙丁胺醇在興奮劑檢測(cè)工作中可以忽略不計(jì)[9]。提示作為興奮劑檢測(cè)定

量方法，直接測(cè)定游離沙丁胺醇濃度即可達(dá)到WADA技術(shù)文件要求?，F(xiàn)階段，北京興奮劑檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室采用酶解后液液萃取，TMS衍生化后進(jìn)行GC-MS分析的方法進(jìn)行定量，工作中存在前處理步驟繁瑣、分析時(shí)間較長(zhǎng)、結(jié)果重現(xiàn)性較差、回收率較低（＜40%）、不確定度較高等問題。

近年來隨著液相色譜-質(zhì)譜儀靈敏度的增高，越來越多的研究工作采用直接稀釋進(jìn)樣的方法檢測(cè)不同基質(zhì)中包括禁用物質(zhì)在內(nèi)的各類化合物[9-13]，但多采用水稀釋樣品并使用我實(shí)驗(yàn)室不具備的UPLC-MS/MS方法，不適用于我實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有儀器設(shè)備。工作中我們使用文獻(xiàn)中直接用水稀釋尿樣的方法進(jìn)樣于實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有儀器（Agilent 6410 Triple Quad），發(fā)現(xiàn)定量結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)偏差較大，結(jié)果重現(xiàn)性不好，不能滿足WADA技術(shù)文件的要求。我實(shí)驗(yàn)室在刺激劑類禁用物質(zhì)定性檢測(cè)中使用醋酸鉛沉淀尿中蛋白直接稀釋進(jìn)樣方法，目前已進(jìn)行了約萬例尿樣的常規(guī)檢測(cè)，效果良好，且未發(fā)現(xiàn)對(duì)質(zhì)譜造成不良影響。本工作擬通過醋酸鉛沉淀法對(duì)尿樣進(jìn)行簡(jiǎn)單的前處理，利用實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有儀器開發(fā)人尿中沙丁胺醇的HPLC-MS/MS定量檢測(cè)方法并應(yīng)用于興奮劑檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的日常工作中，保證實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單易行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 試驗(yàn)部分

1.1儀器設(shè)備

6410 Triple Quad液相色譜質(zhì)譜儀：美國(guó)Agilent公司；色譜柱：ZORBAX SB-aq，3.5 μm×2.1 mm×150 mm美國(guó)Agilent公司；電子天平：瑞士Mettler Toledo公司；Dri-block DB-3D氮?dú)獯蹈裳b置：美國(guó)Techne公司；低速離心機(jī)：美國(guó)Thermo公司；低溫恒溫液浴循環(huán)兩用槽：杭州雪中炭恒溫技術(shù)有限公司；超純水機(jī)：美國(guó)Millipore公司；振蕩器：德國(guó)Gmbh&Co.KG公司；Finnpipette系列取液器：美國(guó)Thermo-Finnpipette公司。

1.2試劑與材料

沙丁胺醇（salbutamol）標(biāo)準(zhǔn)品：中國(guó)藥品生物制品檢定所。沙丁胺醇?xì)忪F劑：葛蘭素史克制藥（重慶）有限公司；硫酸沙丁胺醇片劑：石家莊康力藥業(yè)有限公司；沙丁胺醇D3（salbutamol D3，內(nèi)標(biāo)，100 ng/μL丙酮溶液）：Dr.Ehrenstofer GmbH.德國(guó)；乙腈、甲醇、甲酸胺、甲酸（色譜純）：DIKMA TECHNOLOGY Inc.美國(guó)；β-Glucuranidase from Escherichia Coli：SIGMA ALDRICH .美國(guó)；醋酸鉛（PbAc2）：國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭Ｉ扯“反缄栃阅颍篧ADA提供及實(shí)驗(yàn)室2013年組織受試。

1.3試劑，標(biāo)準(zhǔn)溶液、控制尿樣的配制及陽性尿的采集

5%醋酸鉛溶液：5 g分析純醋酸鉛溶于100 ml水。準(zhǔn)確稱取沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品1.0 mg，加入1.0 ml甲醇配制成1.0 mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，再倍比稀釋成10 ng/μL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。配制兩份平行的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液用于方法驗(yàn)證。

準(zhǔn)確量取1.0 ml沙丁胺醇D3標(biāo)準(zhǔn)品溶液，加入9. 0 ml甲醇配制成10 ng/μl的內(nèi)標(biāo)溶液備用。

取不同量的沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，吹干，加入空白尿溶解即為控制尿樣。

陽性尿：陽性尿1：WADA提供的受試樣品，陽性尿2：成年男性（體重65 kg）一次性吸入沙丁胺醇?xì)忪F劑0.2 mg后按時(shí)間段留取尿樣；陽性尿3：同一志愿者每天吸入沙丁胺醇?xì)忪F劑0.2 mg，連續(xù)7天后按時(shí)間段（最后一次給藥為0 h）留取尿樣。陽性尿4：同一志愿者一次性口服沙丁胺醇片劑2片（含沙丁胺醇4.0 mg）后按時(shí)間段留取的尿樣。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1前處理方法

尿樣0.5 ml，加50 μl內(nèi)標(biāo)溶液（沙丁胺醇D3，10 ng/μl），加入0.5 ml 5%的醋酸鉛溶液，渦旋振蕩30秒后3000 rpm下離心5分鐘，取上清液400 μl入進(jìn)樣瓶，進(jìn)行HPLC-MS/MS分析。

1.4.2色譜條件

采用ZORBAX SB-aq，3.5 μm×2.1 mm×150 mm液相色譜柱；柱溫40℃；流動(dòng)相采用pH 3.5的甲酸銨緩沖液（A）和乙腈（B）進(jìn)行梯度洗脫；洗脫梯度：0～3 min：95%A～5%B，3～5 min：0%A～100%B；5～10 min：0%A～100%B。流速0.3 ml/min，運(yùn)行10 min，平衡6 min；進(jìn)樣量10 μl。

1.4.3質(zhì)譜條件

多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)（MRM）；離子化方式：電噴霧（ESI）；離子極性：正離子模式；毛細(xì)管電壓：4000 V；干燥器溫度：330℃；干燥器流速：10.0 L/min；采用240. 4→148.2，240.4→166.2，240.4→240.4為定性分析離子對(duì)（圖1）。定量分析采用離子對(duì)240.4→166.2（沙丁胺醇）和243.5→169.3（沙丁胺醇D3）進(jìn)行比較，錐孔電壓均為100V，碰撞電壓分別為10 V和17 V。其MRM離子流圖見圖2。

圖1 沙丁胺醇陽性尿（上）和空白尿（下）定性MRM離子流圖

2 結(jié)果與討論

2.1分析條件的選擇

根據(jù)藥物的結(jié)構(gòu)特征，選擇正離子模式。通過分別優(yōu)化錐孔電壓和碰撞電壓產(chǎn)生碎片進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜掃描，選擇豐度較高且無干擾的離子對(duì)240.4→166.2（沙丁胺醇）和243.5→169.3（沙丁胺醇D3）作為定量檢測(cè)離子。

沙丁胺醇分子極性大，在樣品初篩使用ZORBAX Eclipse XDB C18色譜柱進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間短，色譜峰拖尾，對(duì)稱性不好。實(shí)驗(yàn)中比較了Agilent ZORBAX SB-C18，ZORBAX Eclipse XDB C18，ZORBAX Eclipse XDB CN，Pursuit PFP，Agilent Zorbax SB-aq等液相色譜柱，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)比較，綜合了保留時(shí)間、響應(yīng)信號(hào)和峰形對(duì)稱性等多種因素，選擇了Agilent Zorbax SB-aq，3. 5 μm×2.1 mm×150 mm色譜柱，以乙腈/水作為流動(dòng)相體系，在流動(dòng)相中添加緩沖鹽調(diào)節(jié)系統(tǒng)的pH值。通過不同的洗脫梯度比較，確定了乙腈的起始濃度為5%、最終濃度為100%、運(yùn)行時(shí)間為10 min的梯度洗脫條件，能得到較好的分析結(jié)果。由圖2可見，沙丁胺醇和沙丁胺醇D3的MRM譜圖離子響應(yīng)良好，峰形對(duì)稱，在保留時(shí)間段無干擾。

2.2尿樣前處理方法的選擇

科隆實(shí)驗(yàn)室研究表明口服沙丁胺醇后尿中存在大約3%的葡萄糖醛酸結(jié)合物[13]。為了比較酶水解對(duì)定量結(jié)果的影響，首先需要研究酶水解的效率以確定適合的水解條件。由于我實(shí)驗(yàn)室沒有沙丁胺醇葡萄糖醛酸結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品，因而使用口服后8小時(shí)的受試尿樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。各取尿樣0.5 ml，3份為1組，共4組，同時(shí)取校準(zhǔn)曲線控制尿樣（0.3，0.6，1.2，2.0，3.0 μg/ml）各0.5 ml，加0.5 ml水，加50 μl內(nèi)標(biāo)（沙丁胺醇D3，10 ng/μl）甲醇溶液，加入1 ml磷酸鹽緩沖液（0.1 mol/L Na2HPO4和0.1 mol/L NaH2PO4水溶液，pH=6.8）及50 μl β-Glucuranidase（約2500 Units），每組分別在55℃水浴中水解1小時(shí)，2小時(shí)，4小時(shí)及過夜（約24小時(shí)）。冷卻后加入1g碳酸鹽固體緩沖劑（NaHCO3：K2CO3=3：2，w/ w，pH=9.5）和3ml提取液（乙醚/異丙醇=9/1，v/v）萃取，留取有機(jī)相于60℃氮?dú)饬飨麓蹈?，用初始流?dòng)相溶解定容至500 μL，進(jìn)行HPLC-MS-MS分析。尿中沙丁胺醇測(cè)定值分別為1.868±0.121、1.853±0.116、1.874± 0.133、1.866±0.150 μg/ml。說明55℃水解1小時(shí)即可視為完全水解。同樣取一次性吸入后1.0、3.3、5.0、9.0小時(shí)尿樣，連續(xù)7天吸入后1、2.5、5.5、9.0小時(shí)尿樣，口服后1.7、3.5、8.0、22.0小時(shí)尿樣各3份和校準(zhǔn)曲線樣品經(jīng)上述方法酶水解2小時(shí)后進(jìn)行提取檢測(cè)，再取另一份同樣的樣品加入內(nèi)標(biāo)后不經(jīng)過水解，加入碳酸鹽固體緩沖劑和提取液萃取后吹干、定容，進(jìn)樣10 μl于HPLC-MS/MS。酶水解后液液萃取和直接液液萃取后的定量結(jié)果見表1。

表1 水解后提取、直接提取與直接稀釋進(jìn)樣的定量結(jié)果

吸入給藥的部分?jǐn)?shù)值可能已超出方法的線性范圍，但測(cè)定濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于閾值，不會(huì)對(duì)興奮劑違規(guī)造成影響。強(qiáng)制過原點(diǎn)繪制校準(zhǔn)曲線后計(jì)算同一尿樣的測(cè)定值，是否水解的測(cè)定值未見顯著性差異，與文獻(xiàn)[9]描述相符，尿液中沙丁胺醇的葡萄糖醛酸結(jié)合物含量與游離形式相比可以忽略不計(jì)。在閾值濃度時(shí)上述液液萃取方法的回收率約為40%，工作曲線和定量結(jié)果令人滿意，但需要較多的前處理步驟，耗時(shí)耗力。

本實(shí)驗(yàn)還比較了液液萃取和直接稀釋進(jìn)樣結(jié)果。有研究表明使用水稀釋樣品直接進(jìn)樣的LC-MS方法進(jìn)行麻黃堿類禁用物質(zhì)定量檢測(cè)時(shí)誤差較大，原因可能為尿中蛋白類等物質(zhì)的干擾[15]。因此，本研究采用直接稀釋進(jìn)樣法比較了使用初始流動(dòng)相（甲酸銨緩沖液/乙腈=95/5，v/v）2倍稀釋、10倍稀釋，使用純水2倍稀釋、10倍稀釋以及使用5%醋酸鉛溶液2倍稀釋、10倍稀釋后的定量結(jié)果，所有稀釋方法的校準(zhǔn)曲線均可達(dá)到0.99以上的相關(guān)系數(shù)，但在測(cè)定不同人的尿樣配置的質(zhì)量控制樣品和WADA外部質(zhì)量評(píng)估計(jì)劃樣品（靶值為1.482 μg/ml）時(shí)得到不同的定量結(jié)果，見表2。綜合工作曲線的相關(guān)系數(shù)、目標(biāo)化合物質(zhì)譜響應(yīng)豐度及基質(zhì)干擾、質(zhì)控樣品及WADA外部質(zhì)量評(píng)估計(jì)劃樣品測(cè)定的準(zhǔn)確度及精密度等情況，確定了尿樣直接加入等量5%醋酸鉛溶液（相當(dāng)于2倍稀釋）的方法為最終定量檢測(cè)方法。采用此方法分析不同給藥方式獲得的陽性尿的定量結(jié)果見表1。3組數(shù)據(jù)相關(guān)性好，對(duì)同一尿樣測(cè)定值的相對(duì)偏差均小于10%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在興奮劑檢測(cè)工作中可以無需水解步驟，直接檢測(cè)其游離藥物濃度即可滿足WADA技術(shù)文件[8]要求。

表2 不同方法直接稀釋進(jìn)樣的定量結(jié)果

3 方法驗(yàn)證

3.1定量限

配制較低濃度的沙丁胺醇控制尿樣，依實(shí)驗(yàn)方法直接稀釋后進(jìn)行分析檢測(cè)，選擇240.4→166.2信噪比大于10∶1的最低濃度，得到尿中沙丁胺醇的定量限（LOQ）為0.02 μg/ml。

3.2線形

配制濃度分別為0.02、0.20、0.60、1.5、3.0、6.0、10 μg/ml的一系列控制尿樣，依實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)，以尿中待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值為橫坐標(biāo)、待測(cè)物的濃度為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。用最小二乘法進(jìn)行線性回歸分析（r2＞0.99），依WADA技術(shù)文件要求，強(qiáng)制過原點(diǎn)后繪制校準(zhǔn)曲線，結(jié)果見圖2，表明沙丁胺醇在0.02～10.0 μg/ml的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

3.3閾值濃度時(shí)測(cè)定的準(zhǔn)確度、精密度與回收率

選用濃度為1.0 μg/ml的沙丁胺醇10份，使用兩份標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備溶液配制兩條校準(zhǔn)曲線尿樣，與控制尿樣一起同時(shí)加入內(nèi)標(biāo)依實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，通過定量離子峰面積比值得到實(shí)測(cè)值，其中一條校準(zhǔn)曲線的定量結(jié)果分別為1.015、0.965、0.982、1.030、0.938、1.010、0.942、1.005、1.016、0.950 μg/ml，使用另一條校準(zhǔn)曲線得到的結(jié)果為：1.022、0.972、0.989、1.030、0.944、1.017、0.948、1.012、1.023、0.957 μg/ml，相對(duì)偏差均小于10%。符合WADA技術(shù)文件的要求。

濃度為1.0 μg/ml控制尿樣10份，同樣依實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定（同人，同設(shè)備），得到定量值分別為1.066、1.001、0.989、0.986、1.011、0.994、1.013、1.041、0.982、1.027 μg/ml，計(jì)算日內(nèi)精密度為2.67%。

按照日內(nèi)精密度的操作方法，每天操作1次，使用不同操作者、不同設(shè)備，共3次，測(cè)定值分別為1.066、1.001、0.989、0.986、1.011、0.994、1.013、1.041、0.982、1.027μg/ml（第1天），1.022、0.972、0.989、1.030、0.944、1.017、0.948、1.012、1.023、0.957 μg/ml（第2天），0.982、1.032、0.959、1.013、0.968、1.041、1.022、1.000、1.015、0.966 μg/ml（第3天），比較所有數(shù)據(jù)，計(jì)算得到日間精密度為3.02%。

根據(jù)濃度為1.0 μg/ml控制尿樣3天共40份尿樣的測(cè)定值，計(jì)算方法回收率為99.98%±3.09%。

按照WADA提供的不確定度計(jì)算公式[14]，得到在閾值濃度時(shí)沙丁胺醇測(cè)定的不確定度（Uc）為5.36%。

3.4穩(wěn)定性

配制濃度為1.0 μg/ml的沙丁胺醇控制尿樣和WADA提供的陽性尿（靶值濃度為1.482 μg/ml，實(shí)驗(yàn)室第1次定量結(jié)果為1.471±0.044 μg/ml）一起于－20℃和55℃水浴反復(fù)凍融3次后，分別取5份尿樣與新配置的校準(zhǔn)曲線尿樣一起依前述方法進(jìn)行分析，沙丁胺醇測(cè)量值為0.998±0.020 μg/ml和1.469±0.031 μg/ml（n=5）；尿樣于4℃保存60天，同樣得到測(cè)量值為0.989±0.014 μg/ml和1.473±0.028 μg/ml（n=5）。與第1次檢測(cè)時(shí)的數(shù)值相比相對(duì)偏差均小于±2%。說明尿樣冷凍保存反復(fù)解凍及在冷藏保存60天以內(nèi)穩(wěn)定性良好，未對(duì)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生不良影響。

4 結(jié)論

本研究利用我實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的儀器設(shè)備，建立了直接進(jìn)樣于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定WADA禁用物質(zhì)沙丁胺醇的定量方法并進(jìn)行了方法驗(yàn)證。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程無需水解和萃取步驟，更是免除了GC-MS方法必需的衍生化反應(yīng)，最大限度地減少了樣品的前處理步驟，大大降低了前處理過程中引入誤差的可能，縮短了檢測(cè)周期，降低了檢測(cè)成本。定量結(jié)果的精密度得到了提高。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方法重現(xiàn)性好，精確度高，無干擾，定量結(jié)果準(zhǔn)確可靠，完全滿足WADA技術(shù)文件的要求。配制的控制尿樣可長(zhǎng)期冷凍保存。

目前本方法已應(yīng)用于我實(shí)驗(yàn)室WADA的外部質(zhì)量評(píng)估計(jì)劃中沙丁胺醇的定量檢測(cè)，在兩次WADA外部質(zhì)量評(píng)估計(jì)劃中，使用此方法與原有GC-MS方法及其他實(shí)驗(yàn)室的定量結(jié)果比較，數(shù)值相關(guān)性好，結(jié)果令人滿意，完全可以達(dá)到WADA的技術(shù)文件要求。

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Dilute and shoot Method for the Quantification of Salbutamol in Human Urine through Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

Shen Li1，Jing Jing1，Yu Aiqi2，Zhang Lisi1，Xu Youxuan1，Dong Ying1，He Genye1
1 China Anti Doping Agency，Beijing，China 100029 2 Beijing Sports University，Beijing，China 100084 Corresponding Author：Shen Li，Email：shenli@chinada.cn

Objective To introduce a dilute and shoot method for quantification and validation of salbutamol.Methods The urine samples were diluted with 5%lead acetate solution and then injected their supernatant into HPLC/MS/MS directly.Results After determination of the series of spiked urine samples，the LOQ，linear ranges（r2＞0.99），intra-and inter-day precisions（CV），and measurement uncertainty of salbutamol in urine were respectively 0.02 μg/mL，0.2～10.0 μg/mL，2.67%and 3.02%，and 5.36%.The analytical biases at threshold concentration were less than 10%.Conclusion This dilute and shoot quantitative method has been successfully applied to the routine analysis and the External Quality Assessment Scheme of WADA in our laboratory.

salbutamol，WADA，threshold substance，HPLC-MS/MS，lead acetate，dilute and shoot

2015.06.25

國(guó)家體育總局重點(diǎn)研究領(lǐng)域課題（2013B002）

申利，Email：shenli@chinada.cn